蛋白质组学在自身免疫性疾病中的应用

无创性肢体缺血预适应对大鼠缺血再灌注损伤心肌基质金属蛋白酶的影响

目的 观察大鼠无创性肢体缺血预适应(LIP)对心肌缺血再灌注损伤后心肌形态学、梗死面积和心肌MMP-2、MMP-9和TIMP-1的影响.方法 通过连续3 d每天1次3个循环的下肢无创性5 min缺血、5 min再灌建立LIP模型.大鼠随机分成3组,心肌缺血再灌注组(I/R)、心肌缺血预适应组(CIP)和LIP组.以HE染色法观察心肌形态学改变;红四氮唑染色法确定心肌梗死范围,IS=IA/AAR×100%;免疫组化法测定心肌MMP-2、MMP-9和TIMP-1水平.结果 缺血30 min再灌注120 min后,I/R组IS为(44.5±8.1)%;与I/R组比较,CIP和LIP均能明显改善心肌损伤的形态学改变,降低心肌细胞的肿胀、减少间质出血和炎性细胞的浸润.CIP使IS降低35.7%,缺血区心肌MMP-2降低42.1%,MMP-9降低43.3%,TIMP-1水平增加40.O%;LIP使IS降低42.9%,缺血区心肌MMP-2降低41.2%,MMP-9降低46.6%,TIMP-1水平增加53.8%.结论 LIP不仅能改善缺血再灌注损伤大鼠心肌形态学改变、减少心肌梗死面积,而且能降低心肌细胞基质的损伤,起到保护心肌的作用.

作者：李淑娟；吴艳娜；康毅；尹永强；高卫真；刘艳霞；娄建石 刊期： 2007年第12期

左氧氟沙星延长离体豚鼠乳头肌的动作电位时程

目的 观察左氧氟沙星(LVFX)对豚鼠心肌动作电位的影响,并以司帕沙星(SPX)为阳性对照物比较二者对心肌的毒性作用.方法 微电极记录豚鼠右心室乳头肌动作电位.结果 刺激频率为1 Hz时,各浓度的SPX均显著性延长APD50和APD90,而LVFX浓度超过10μmol/L时明显延长APD50和APD90.结论 LVFX和SPX均引起APD延长,前者效应较后者弱,仅在大剂量时有导致QT间期延长的潜在毒性.

作者：尚曙玉；韩圣娜；景莹；成树模；韦迎娜；乔鹏；张朝 刊期： 2007年第12期

牛磺酸抑制糖尿病大鼠坐骨神经雪旺细胞凋亡

目的 观察牛磺酸对糖尿病大鼠坐骨神经雪旺细胞凋亡的影响,探讨其神经保护作用机制.方法 用链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病模型.牛磺酸治疗8周后应用化学比色法测定坐骨神经组织中丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量;用免疫组化法、RT-PCR和TUNEL法检测坐骨神经中活化的caspase-3蛋白和mRNA表达,以及雪旺细胞凋亡的情况.结果 牛磺酸能降低坐骨神经中MDA水平,提高GSH水平(均P＜0.05).在正常鼠坐骨神经中,未见活化的caspase-3蛋白表达和细胞凋亡;Caspase-3 mRNA有极少量表达.模型对照组上述表达均增加,牛磺酸干预后其表达均较模型组表达明显减少(P＜0.05).结论 牛磺酸抑制caspase-3 mRNA的转录与caspase-3的活化,减少细胞凋亡,与调节机体内的氧化应激状态有关,从而达到神经保护作用.

作者：叶仁群；陈泽奇；林国彬；李玉红；贺钰磊；凌江红；申定珠 刊期： 2007年第12期

丹参酮ⅡA通过阻断MAPK抑制糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的 研究丹参酮ⅡA(TSN)对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的作用及与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导通路的关系.方法 培养糖尿病大鼠血管平滑肌细胞,BrdU掺人DNA的ELISA法测定细胞内DNA合成水平,同位素示踪法测定MAPK活性.结果 原代培养的大鼠VSMCs内MAPK活性较高,使用TSN和U0126后,可明显抑制细胞的增殖和MAPK活性.结论 TSN对糖尿病VSMCs内DNA的合成具有明显抑制作用,其机制可能是阻断了MAPK信号传导通路.

作者：李艳平；保春华 刊期： 2007年第12期

强力霉素降低哮喘小鼠肺血管通透性

支气管哮喘是常伴有血管通透性和血浆渗漏增加的慢性气道炎症性疾病.血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor,VEGF)是一种促进血管形成和引起强烈炎症反应的、多功能的细胞因子,可暂时性增加血管的通透性和血管内皮细胞的移行.近年来实验研究表明,VEGF对支气管炎症形成和支气管壁重塑有着非常重要的作用,对哮喘的治疗有重要的研究价值[1].本研究主要探讨在小鼠哮喘模型中强力霉素对VEGF水平和肺血管通透性的影响.

作者：李良昌；秦向征；金东洙；李光昭 刊期： 2007年第12期

血栓靶向性超声微泡治疗犬急性冠脉血栓

目的 探讨自制血栓靶向超声微泡造影剂对犬急性冠脉血栓的溶栓作用.方法 建立犬心脏左前降支急性血栓模型,经下肢股静脉恒速注射自制脂质血栓靶向微泡(TMB)或白蛋白微泡(AMB),同时予1 MHz、2.0 W/cm2超声(US)照射,记录前降支血流量变化;分别用图像分析及硝基四氮唑蓝染色的方法检测管腔残存血栓面积和心肌梗死范围.结果 TMB+US组血管再通时间及相应的残余血栓和梗死面积均显著小于AMB+US(P＜0.05);但仍然稍大于尿激酶(UK)组;而TMB+UK+US组上述指标则明显优于单纯UK组.结论 在1 MHz超声作用下,自制血栓靶向性微泡对急性冠脉血栓的溶解作用显著优于人血白蛋白微泡.

作者：陈小敏；区文超；孙德胜；宫琳；刘俐；王双双 刊期： 2007年第12期

Survivin特异小干扰RNA表达载体构建及对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 测定Survivin特异小干扰RNA(siRRA)表达载体对肺腺癌细胞A549 Survivin基因表达的抑制及对增殖和凋亡的影响.方法 构建Survivin特异性小干扰RNA表达载体,转染A549细胞,筛选出稳定表达的细胞株.用荧光实时定量反转录聚合酶链反应法、Western blot和免疫组化法检测Survivin基因mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果 经测序鉴定证实成功构建Survivin-siRRA表达载体.Survivin基因mRNA表达量下降76.4%,Western blot显示蛋白表达下降84.5%,免疫组化法也显示Survivin蛋白表达下降.MTT法测定细胞增殖较对照组减慢(P＜0.01),细胞凋亡率较对照组增加8.95%(P＜0.01).结论 Survivin特异siRRA表达载体下调Survivin基因表达,抑制A549细胞的增殖,促进凋亡.

作者：刘黎明；陈昌杰；陈正徐；段光军；胡华成 刊期： 2007年第12期

促血小板生成素对骨髓c-Kit+ Lin-细胞体外扩增的影响

目的 探讨在无血清条件下,血小板生成素(TPO)对c-Kit+ Lin-细胞增殖的影响.方法 经免疫磁珠分离小鼠骨髓c-Kit+ Lin-细胞,研究在干细胞因子(SCF)、FLt-3配基(FL)和白血病抑制因子(LIF)组合中添加不同浓度的TPO,7 d后检测细胞总数,c-Kit+ Lin-细胞扩增倍数,并采用Annexin-V检测各组细胞凋亡率.结果 各组均能显著扩增c-Kit+ Lin-细胞,扩增倍数为4～7倍不等.当SCF+FL+LIF中加入50μg/L TPO时,c-Kit+ Lin-细胞及细胞总数扩增为7.07倍和40.19倍,比未加时明显增多,而凋亡率无明显差异.但随剂量加大,c-Kit+ Lin-细胞扩增下降,细胞凋亡率上升,200μg/L TPO组凋亡率为33.49%,c-Kit+ Lin-细胞扩增倍数仅为4.11倍.结论 TPO可协同SCF+FL+LIF使c-Kit+ Lin-细胞增殖,但过高剂量会诱导其分化和凋亡,以50μg/L浓度扩增效果佳.

作者：张守华；廖彩仙；张春兴；苏俊；赖勇强；周杰 刊期： 2007年第12期

人脂联素基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达

目的 利用杆状病毒表达系统探讨人脂联素(ADPN)基因在Sf9昆虫细胞中的高效表达.方法 利用PCR方法扩增人脂联素基因,与pFastBac1质粒连接,转化入含有穿梭载体bacmid的大肠杆菌DH10Bac中,筛选发生转座作用的重组穿梭载体 Bacmid-ADPN并转染Sf9昆虫细胞,使其表达重组杆状病毒,经SDS-PAGE、Western blot检测表达产物.结果 重组杆状病毒感染的Sf9细胞形态变化明显,能够表达出与脂联素多克隆抗体相结合的蛋白,蛋白分子质量约为30 ku.结论 人脂联素基因在真核细胞中成功得到表达,为进一步研究其生物学活性和作用机制奠定基础.

作者：刘德敏；丁玉静；孙颖；张捷 刊期： 2007年第12期

CRP促进THP-1来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1的表达

目的 探讨C反应蛋白(CRP)对单核细胞株(THP-1)来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)蛋白和mRNA的表达及相关信号转导通路的影响.方法 用佛波醇脂诱导THP-1分化为巨噬细胞.用不同浓度CRP在体外干预,分别采用RT-PCR和细胞酶联免疫测定干预后巨噬细胞LOX-1抗原蛋白和mRNA的表达.同时观察当NF-κB、AP-1和MARK信号通路抑制剂存在时,CRP对LOX-1抗原和mRNA表达的影响.结果 CRP促进巨噬细胞LOX-1蛋白和mRNA表达增加.NF-κB的抑制剂BAY11-7085能抑制CRP对LOX-1蛋白和mRNA表达的诱导作用.结论 CRP能在转录及转录后水平诱导THP-1来源的巨噬细胞表达LOX-1,这种调节作用可能是通过NF-κB信号传导通路实现的.

作者：王悦；陈连凤；王晋峰；方全；严晓伟 刊期： 2007年第12期

内源性硫化氢抑制高肺血流大鼠肺动脉弹力蛋白的表达

目的 探讨内源性硫化氢(H2S)对高肺血流所致肺血管重构大鼠肺动脉弹力蛋白的调节作用.方法 将雄性SD大鼠随机分为4组:分流组、分流+炔丙基甘氨酸(PPG)组、假手术组和假手术+PPG组,每组8只.分流组及分流+PPG组大鼠经腹主动脉-下腔静脉穿刺建立高肺血流动物模型.4周后,测定大鼠肺动脉平均压(mPAP),显微镜下观察肺血管结构变化;用免疫组化方法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)、弹力蛋白、转化生长因子-β(TGF-β)和结缔组织生长因子(CTGF)在肺动脉平滑肌细胞的表达.结果 分流+PPG组mPAP较分流组和假手术组明显升高(P＜0.05);在分流组,小型肺动脉中肌型动脉和部分肌型动脉所占百分比明显高于假手术组(均P＜0.05),非肌型动脉所占百分比明显低于假手术组(P＜0.01);在分流+PPG组,小型肺动脉中肌型动脉所占百分比明显高于分流组(P＜0.01),非肌型动脉所占百分比明显低于分流组(P＜0.01).分流组肺中,小型肺动脉平滑肌细胞α-SM-actin、弹力蛋白、TGF-β和CTGF含量明显高于假手术组(均P＜0.01),分流+PPG组上述指标明显高于分流组(均P＜0.01).结论 内源性硫化氢可能通过抑制高肺血流大鼠肺动脉弹力蛋白的表达,调节其肺血管结构重构.

作者：王聪；刘文莉；王海英；涂家红；李晓惠；赵斌；杜军保 刊期： 2007年第12期

高表达人淀粉样前体蛋白降低SH-SY5Y细胞M胆碱受体结合

目的 观察阿尔茨海默病致病相关基因淀粉样前体蛋白(APP)基因的高表达致高度生成,对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性及M和N胆碱受体功能的影响,探讨β-淀粉样肽(Aβ)生成增加对细胞胆碱功能的作用.方法 采用Lipofectamine 2000试剂盒将携带野生型人APP基因的pCMV695质粒转染至人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中.以ELISA方法测定Aβ生成量.取稳定高表达Aβ细胞的克隆,用放射免疫法测定ChAT的活性;放射配基结合测定M、N乙酰胆碱受体结合.结果 与未转染APP的SH-SY5Y细胞相比,当Aβ生成量为对照的2～2.6倍时,SH-SY5Y-APP细胞中未观察到明确的细胞毒性形态学改变;ChAT活性无明显变化,但细胞M受体结合降低18.5%～21.8%(P＜0.05);N受体结合未出现明显变化.结论 单纯Aβ产生增加就可通过影响M受体结合功能而引起脑内胆碱能功能障碍.

作者：阮灿军；王抒；孙兰；杜冠华 刊期： 2007年第12期

定性资料统计分析错误辨析与释疑

通过揭示大量的生物医学科研中出现的定性资料统计分析方面的错误案例,说明重视识别定性资料列联表的类型、检查前提条件和考虑统计分析目的,对于合理选用定性资料统计分析方法是至关重要的.

作者：胡良平 刊期： 2007年第12期

短期运动对大鼠缺血/再灌注心肌的保护作用

目的 研究短期中等强度运动训练对大鼠缺血/再灌注(I/R)心肌的保护作用及与蛋白激酶C(PKC)激活的相关性.方法 40只Wistar大鼠随机分为4组(每组10只):对照组(CON组)、运动组(EXE组)、运动+PKC抑制剂组(E+C组)和PKC抑制剂组(CHE组).应用Langendorff离体心脏I/R模型,观察各组大鼠心脏再灌注期间心律失常的发生情况、心功能指标恢复率及心肌梗死范围.结果 EXE组大鼠LVDP(再灌注30、60 min)和RPP(再灌注20、30、60 min)恢复率高于CON和E+c组(P＜0.05或P＜0.01),心肌梗死范围显著低于CON和E+C组(P＜0.01).CON、CHE组上述各指标无差异.结论 短期中等强度运动训练对I/R心肌有保护作用,保护作用与PKC的激活有关.

作者：侯云英；范秀珍；马志勇 刊期： 2007年第12期

端锚酶和端粒酶反义寡核苷酸联合作用对人肺腺癌细胞 A549 端粒的影响

目的 探讨端锚酶及端粒酶反义寡核苷酸联合作用对A549细胞端粒相关蛋白表达和翻译及对端粒缩短和细胞周期的作用.方法 将A549细胞随机分组为空白对照、sTANKS、shTERT、asTANKS、ashTERT 和 asTANKS+ashTERT组,经不同处理,检测 hTERT mRNA、端粒酶及端锚酶活性、端粒平均长度及A549 细胞寿命.结果 ashTERT能抑制hTERT mRNA表达及蛋白质活性;asTANKS不影响hTERT mRNA表达,却能抑制端锚酶活性.asTANKS或ashTERT均可致A549端粒长度缩短,asTANKS+ashTERT则缩短更为明显,其减少A549细胞平均传代数的作用也明显大于asTANKS或ashTERT.结论 asTANKS对A549端粒长度的抑制有别于端粒酶途径,不仅能通过影响端锚酶活性缩短肿瘤细胞 A549 端粒的平均长度,而且可与端粒酶抑制剂协同作用明显缩短肿瘤细胞的生存周期,这可能成为抗癌作用的新靶点.

作者：卢宏达；黄涛；申雯竹；甄燕；孔庆志 刊期： 2007年第12期

三七总皂甙抑制兔血管平滑肌细胞增殖及促进C-MYC基因表达

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的异常增殖与凋亡在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)病理生理过程中起核心作用[1～3].三七总皂甙(panax notoginsengsaponins,PNS)具有抗AS的作用.本研究观察PNS对VSMCs增殖周期、细胞凋亡过程及凋亡相关基因C-MYC表达的影响,探讨其作用机制.

作者：张延斌；周永兰；潘德锋；杨煜；陈清枝 刊期： 2007年第12期

宫颈癌中RASSF1A基因微卫星的不稳定性

Ras相关区域家族1A(ras association domain family 1A,RASSF1A)基因是新近克隆出来的一种肿瘤抑制基因[1],其在调节细胞周期和细胞凋亡方面具有重要作用.RASSF1A基因失表达见于多种人类肿瘤中.本研究选择RASSF1A基因内的两个微卫星多态标记,对110例宫颈组织进行微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)的检测和分析;同时检测标本中人乳头瘤病毒16(human papillomavirus 16,HPVl6)的感染状态,分析其与RASSF1A基因MSI之间的关系,旨在探讨RASSF1A基因在宫颈癌发生、发展过程中的作用.

作者：燕杰；赵富玺；刘润花；王喜英；刘丽华 刊期： 2007年第12期

人sTNFR1真核表达载体构建及体外抑制TNF-α细胞毒效应

目的 构建人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因(sTNFR1)的真核表达载体,研究sTNFR1对TNF-α细胞毒效应的抑制作用.方法 以HeLa细胞的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增人sTNFR1全编码区基因片段,构建含有目的片段的T载体克隆及真核表达载体pcDNA3.1(-)重组质粒亚克隆,用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1(-).sTNFR1瞬时转染QSG7701细胞,半定量PT-PCR法检测sTNFR1 mRNA的表达,MTT法检测sTNFR1对TNF-α细胞毒效应的抑制作用.结果 人sTNFR1基因被正确克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-);通过与3-磷酸甘油醛(GAPDH)比较,pcDNA3.1(-)-sTNFR1转染的QSG7701细胞中sTNFR1 mRNA表达量明显高于空载体对照组和空细胞对照组(P＜0.05);pcDNA3.1(-)-sTNFR1瞬时转染QSG7701细胞,TNF-α对其细胞毒性作用受到抑制,当TNF-α浓度为100μg/L时pcDNA3.1(-)-sTNFR1/QSG7701的细胞毒性较QSG7701下降64.8%.结论 成功地构建真核表达质pcDNA3.1(-)-sTNFR1,TNF-α对瞬时转染pcDNA3.1(-)-sTNFR1/QSG7701的细胞株细胞毒性作用受到抑制.

作者：傅蕾；彭仕芳；谭德明 刊期： 2007年第12期

关于ECV304细胞使用的启示

作者： 刊期： 2007年第12期

艰难梭菌细胞毒素B功能区的原核表达及免疫原性

目的 纯化已表达艰难梭菌(CD)细胞毒素B羧基末端受体结合区(CD3)的基因,并检测其免疫原性.方法 PCR克隆目的基因到表达载体pET22b(+),重组质粒转化到E. coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,利用金属螯合色谱层析方法纯化后,SDS-PAGE方法对纯化蛋白进行分析.并检测其免疫反应性.结果 成功表达的是分子质量约为71.3 ku的重组蛋白,占菌体总蛋白的34%,可溶性表达占上清的22.7%,包涵体占沉淀的25.7%.重组蛋白纯化后可溶性蛋白浓度为0.781 g/L.并与抗毒素B抗体具有良好的免疫原性.结论 成功克隆了CD3基因,构建的重组质粒可高效表达CD3重组蛋白,为CD相关性疾病的诊断及后期制备疫苗,提供了有力的保障.

作者：刘红升；张清华；蒋知新；姜泊 刊期： 2007年第12期