学术投稿

人乳头瘤病毒16型E7抗原表达模型的构建

李辉;伍欣星

关键词:人乳头瘤病毒, 表达载体, 基因转染
摘要:目的:构建pEGFP-HPV16E7表达载体,并观察其在肝癌细胞中的瞬时和稳定表达及小鼠肝癌细胞皮下成瘤情况,为建立表达HPV16E7的实体瘤动物模型奠定基础.方法:应用基因重组技术,构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)与HPV16E7的融合表达载体,经限制性内切酶酶切鉴定和PCR分析,用脂质体转染技术将其转入小鼠肝癌细胞,24 h 后RT-PCR检测HPV16E7 mRNA的生成,荧光显微镜观察EGFP-HPV16E7融合蛋白的表达,将转染细胞接种小鼠皮下,观察成瘤及成瘤后融合蛋白的表达情况.结果:酶切鉴定和PCR分析证实重组质粒中插入目的基因片段及载体DNA大小、方向和插入位点均正确,在转染的小鼠肝癌细胞中检测到HPV16E7 mRNA的生成和绿色荧光蛋白的表达,接种的转染细胞在小鼠皮下可成瘤且可检测到HPV16E7 mRNA的生成.结论:pEGFP-HPV16E7表达载体便于观察转染细胞中EGFP-HPV16E7融合蛋白的表达情况,小鼠肝癌细胞接种小鼠皮下可成瘤,成瘤后可检测到HPV16E7 mRNA的转录.
武汉大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 三叉神经节细胞电压门控通道研究中的钙电流振荡活动

    目的:探讨三叉神经节细胞电压门控性钙通道电流特性.方法:在急性分离的三叉神经节细胞膜上,阻断电压门控性延迟整流钾通道和电压门控性钠通道,在-70 mV 的钳制电位下,给予10 mV 步幅递增、80 ms 步宽的去极化脉冲刺激,进行全细胞膜片钳记录.结果:在仅阻断电压门控性延迟整流钾通道时,-10 mV 的去极化脉冲刺激激活了三叉神经节细胞膜上继快钠电流之后的慢内向电流,呈重复开闭的振荡特性;同时阻断电压门控性延迟整流钾通道和电压门控性钠通道,在-20 mV 的去极化脉冲刺下,也可记录到呈振荡特性的慢内向电流.振荡电流可被细胞外喷射的1 mmol·L-1尼福地平所阻断.结论:三叉神经节细胞膜上高电压激活的重复开闭慢内向电流可能为电压门控性钙电流,其振荡特性可能与感觉信息中枢传入的初级加工有关.

    作者:尹世金;刘向明;陈素;马全顺;黎莉 刊期: 2004年第01期

  • 枸杞多糖对大鼠生殖系统保护作用的机制探讨

    目的:探讨枸杞多糖(LBP)对大鼠生殖系统保护作用的可能机制.方法:36只雄性Wistar大鼠,按给予枸杞多糖的不同剂量分组(0剂量对照组、0剂量阳性对照组、10,50,100,200 mg*kg-1*d-1剂量组),每组6只.14 d 后以温水浴构造大鼠睾丸损伤模型,测定血清性激素水平、睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及观察睾丸组织形态学改变.结果:大鼠血清性激素水平、SOD活性低于LBP组;MDA含量则高于LBP组,佳剂量为LBP 10 mg*kg-1*d-1;LBP能降低高温引起的生精细胞损伤、促进睾丸生殖细胞正常发育.结论:LBP对大鼠生殖系统具有保护作用,其机制可能是通过抗氧化作用及调节下丘脑-垂体-性腺轴实现的.

    作者:黄晓兰;杨明亮;吴晓旻;闫俊;罗琼 刊期: 2004年第01期

  • Fas蛋白在鼠急性脊髓组织损伤中分布特点的初步研究

    目的:探讨大白鼠急性脊髓损伤后损伤区Fas蛋白的表达及其分布特点.方法:Wistar雌性大鼠42只,使用改良Allen氏法制作急性脊髓损伤模型36只,采取HE、Nissl染色和免疫组化方法,检测损伤后1,4,8,24,72 h 及7 d 的脊髓组织.结果:在损伤后4 h,损伤段灰质可见Fas阳性细胞,8 h 表达达高峰.正常组未见Fas阳性细胞表达.高倍镜观察,阳性细胞具有凋亡细胞的特征.结论:Fas蛋白可能在诱导脊髓损伤后神经细胞凋亡的过程中,发挥着重要作用.

    作者:刘世清;周华;彭昊;周月容;赵东明;李皓桓;卫爱林 刊期: 2004年第01期

  • 早期肠内营养对急性胰腺炎的肠源性细菌移位及免疫应答功能的影响

    目的:探讨早期肠内营养在减缓急性胰腺炎细菌及内毒素移位以及改善宿主免疫应答功能中的作用.方法:将80只SD大鼠分4组,60只用胆胰管注射法制成急性胰腺炎模型,其中30只行肠造瘘进行肠内营养,30只行肠外营养;余20只分别不形成急性胰腺炎模型,各用10只行肠内外营养;检测的血内毒素水平,外周血、脾、肠系膜淋巴结CD4、CD8淋巴细胞亚群,并进行肠系膜淋巴结细菌培养.结果:与AP/TPN组相比,AP/EN组回肠绒毛高度比AP/TPN组明显高,P<0.05;内毒素水平AP/TPN组为(0.489±0.162)EU*ml-1,比AP/EN组的(0.112±0.008 )EU*ml-1明显高,P<0.05;AP/TPN及AP/EU中细菌种属无差别,均为肠内细菌,但与AP/TPN组相比AP/EN组细菌量显著减少;肠系膜淋巴结、脾及外血中CD4/CD8比率AP/EN组比AP/TPN组明显高,P<0.05,差异有显著性.结论:AP中早期肠内营养能很好耐受,EN可维持正常肠结构从而减少细菌及内毒素移位,并可维持宿主的免疫应答功能.

    作者:冯茂辉;薛新波;朱彤;夏穗生 刊期: 2004年第01期

  • 高浓度花生四烯酸诱导ECV304细胞凋亡

    目的:探讨花生四烯酸是否能诱导人膀胱癌细胞ECV304凋亡及其可能机制.方法:噻唑蓝 (MTT) 法检测细胞存活率, 比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率,硫代巴比妥酸法测定细胞脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量,Hoechst 33258染色观察凋亡细胞核形态变化.结果:ECV304细胞在80~160 μmol*L-1花生四烯酸作用24 h 后,细胞存活率明显下降,LDH释放率和细胞MDA含量显著增加(P<0.01).经160 μmol*L-1花生四烯酸处理24 h 后的ECV304细胞呈现典型的凋亡核固缩表现,琼脂糖凝胶电泳显示DNA凋亡梯带.结论:80~160 μmol*L-1的高浓度花生四烯酸能诱导ECV304细胞凋亡,脂质过氧化作用参与了花生四烯酸致ECV304细胞损伤及凋亡过程.

    作者:陈志桥;王韵;许喜泳;张冀;陈丽达 刊期: 2004年第01期

  • 急性胰腺炎患者尿胰蛋白酶原激活肽的动态变化及其意义

    目的:观察急性胰腺炎(AP)患者尿中胰蛋白酶原激活肽(TAP)的动态变化特点及其临床意义.方法:出现首发症状后48 h 内入院的急性胰腺炎患者41例及对照组患者11例,入院时、24、48及72 h 取尿样.运用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TAP浓度.结果:入院时,重症组尿TAP中位值(95 nmol*L-1)显著高于轻型组(20 nmol*L-1;P<0.01)及对照组(15 nmol*L-1;P<0.01).24,48 h 重症组仍然显著高于轻型组及对照组(P<0.05),72 h 各组间差异无显著性.轻型组与对照组各时相差异均无显著性(15 nmol*L-1;P<0.01).结论:急性胰腺炎患者早期胰腺间质和血中胰蛋白酶原的暴发激活可能是重症急性胰腺炎(SAP)发病的关键环节.早期动态检测TAP有助于对病情和预后的判断.

    作者:江从庆;刘志苏;孙权;江应安;钱群;艾中立 刊期: 2004年第01期

  • 当归对大鼠局灶性缺血脑组织细胞凋亡的作用

    目的:应用大鼠局灶性脑缺血模型观察当归对脑缺血损伤的治疗作用及其机制.方法:TTC染色计算脑缺血梗塞灶体积.原位末端标记法观察细胞凋亡并计算凋亡率和凋亡指数.免疫组化观察凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax蛋白表达的变化.结果:①与单纯缺血再灌组相比,当归治疗组TTC染色显示当归治疗组脑缺血梗塞区体积缩小(P<0.05),凋亡率和凋亡指数较单纯缺血再灌组有明显下降(P<0.01),Bcl-2蛋白表达与单纯缺血再灌组无差异(P>0.05),而Bax蛋白表达显著减少(P<0.01).②缺血2 h 再灌48 h 组较缺血2 h 再灌24 h 组,凋亡细胞明显减少(P<0.01).结论:①当归能抑制Bax蛋白的表达,减少脑缺血区细胞凋亡的发生,这是当归治疗大鼠局灶性脑缺血损伤的可能机制之一.②缺血2 h 再灌48 h,脑缺血神经细胞迟发性损伤已开始减轻.

    作者:杨静薇;田峻;邹凡;廖维靖;杨万同 刊期: 2004年第01期

  • 复元活血汤部分药理作用研究

    目的:对复元活血汤进行药理学研究.方法:采用多种疼痛、炎症动物模型,观察复元活血汤抗炎及镇痛作用;采用微循环实验,观察复元活血汤对微循环的影响.结果:复元活血汤可不同程度提高小鼠热板痛阈值,延长扭体潜伏期,减少扭体次数;抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀,降低腹腔毛细血管通透性;扩张小鼠耳廓微动脉和微静脉.结论:复元活血汤有镇痛、抗炎及改善微循环作用.

    作者:石米扬;段礼新;易吉萍 刊期: 2004年第01期

  • 睡眠监测压力滴定在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的应用

    目的:应用睡眠监测压力滴定来了解阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)围手术期的情况.方法:治疗组为资料完整的48例进行睡眠压力滴定的OSAHS患者,在患者入院的第1 d 用纤维喉镜与Müller检查法相结合测量上气道平面的阻塞程度,并进行多导睡眠呼吸监测7 h,观察患者的血氧饱和度、睡眠呼吸暂停低通气指数及血压、心率等情况,在第2 d 再将多导睡眠监测仪与呼吸机联机监测7 h,除观察上述指标变化外,还观察CPAP呼吸机的工作压力和面罩压力情况.对照组为未进行睡眠压力滴定的76例OSAHS患者.结果:Müller试验中治疗组有40 例为Ⅱ型,8例为Ⅳ型,对照组中61例为Ⅱ型,1例为Ⅲ型,10例为Ⅳ型.治疗组第1 d 和第2 d 90%以下氧减饱和度指数和AHI均有高度显著性差异(P<0.01),这两天的血压也有显著性差异(P<0.05),但心率之间无显著性差异(P>0.05);持续正压通气(CAPA)压力分布范围及面罩压力分布范围分别为(11.00±5.18),(9.41±4.28)cmH2O;治疗组有1例行气管切开,对照组有26例行气管切开.结论:让患者术前配戴1周CPAP,进行围手术期处理,可以改善患者的缺氧状态,提高患者对麻醉及手术的耐受力,从而降低术中、术后的风险.

    作者:罗志宏;曹永茂;黄静;蔡林利 刊期: 2004年第01期

  • 实验性动脉粥样硬化中PDGF-B的表达

    目的:探讨动脉粥样硬化(AS)的体内机制.方法:建立兔动脉粥样硬化模型.将雄性大耳白兔(体重1.5~2 kg)12只随机分为2组:空白对照组(NC组,n=6)和动脉粥样硬化组(AS组,n=6)于第1,3,5,7周酶法测血清总胆固醇、甘油三脂.7周后主动脉苏丹Ⅳ染色测AS斑块面积/总面积,HE染色观察主动脉形态学改变.用原位杂交法测血小板生长因子β(PDGF-B)的表达程度.结果:主动脉粥样硬化斑块面积NC组低于AS组(P<0.05).PDGF-B的表达NC组低于AS组(P<0.05).结论:PDGF-B可能是促使VSMC增生、AS进展的主要原因.

    作者:桂乐;曹茂银;任江华 刊期: 2004年第01期

  • 熊果酸对人舌鳞癌细胞株TSCCa的抑制作用及其机制探讨

    目的:研究女贞叶有效成分熊果酸对TSCCa细胞增殖的影响,探讨其中可能的机制.方法:用MTT法研究熊果酸对TSCCa增殖的影响;用原位杂交的方法检测熊果酸对TSCCa细胞浆中核转录因子mRNA原位表达的影响.结果:熊果酸抑制TSCCa细胞增殖,对TSCCa细胞的半数生长的抑制剂量约为12.5 μmol·L-1,在24 h 内表现为一定的量效关系;原位杂交显示熊果酸对TSCCa细胞的抑制作用与抑制核转录因子的原位表达有关.结论:熊果酸可能通过抑制TSCCa细胞的增殖来发挥抗肿瘤作用,其作用机制可能与抑制细胞浆中核转录因子mRNA的表达有关.

    作者:樊明文;王茜;边专;范兵 刊期: 2004年第01期

  • 青皮注射液联合亚低温治疗局灶脑缺血再灌注损伤的实验研究

    目的:观察青皮注射液联合亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注的脑保护作用.方法:采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,32只大鼠随机分为对照组、青皮组、亚低温组及二者联合治疗组;观察各组神经功能缺失体征评分、脑梗死体积.结果:亚低温、青皮注射液及二者联合治疗组神经功能缺失体征评分(P<0.05)、脑梗死体积(P<0.01)均明显低于对照组;二者联合应用脑梗死体积低于单独应用组(P<0.05).结论:亚低温、青皮注射液对局灶性脑缺血再灌注大鼠有明显脑保护作用,二者联合应用效果更佳.

    作者:刘传玉;李承晏;曾庆杏 刊期: 2004年第01期

  • 当归注射液对全脑缺血后神经再塑影响的实验研究

    目的:研究全脑缺血后海马区的神经再塑及当归注射液的影响.方法:60只健康沙土鼠,双侧颈总动脉夹闭10 min 制作全脑缺血再灌注模型,分为治疗组和对照组,前者经腹腔给予当归注射液,后者给予生理盐水,另选6只沙土鼠作为正常组.于术后16 h,1,2,3,6 d 采用免疫组织化学方法检测海马区生长相关蛋白(growth-associated protein, GAP-43)、微管相关蛋白(microtubule-associated protein,MAP-2)和突触素(synaptophysin,SYN)表达的变化.结果:全脑缺血10 min 再灌注16 h 至6 d,动物脑组织各区尚未见明显形态学变化,而MAP-2已随再灌注时间的延长表达水平逐渐降低,至再灌注3 d 达到低,再灌注6 d 又轻度上升;GAP-43和SYN的表达水平则随再灌注延长而不断上升,至再灌注6 d 达到高;在各时间点,治疗组MAP-2、GAP-43和SYN的表达水平均高于对照组(P<0.05).结论:全脑缺血后海马区有明显的神经再塑和结构重建,活血化瘀药当归可加速这一过程.

    作者:邹凡;杨万同;田峻;邓子牛;廖维靖 刊期: 2004年第01期

  • 双抗体夹心法检测血清S-100蛋白及其临床意义

    目的:为研究血清中S-100蛋白与脑组织病变的关系.方法:采用S-100蛋白单克隆抗体为包被抗体和抗S-100多克隆抗体为检测抗体的双抗体夹心ELISA方法,检验神经系统损伤及脑肿瘤组与正常对照组(无神经系统损伤、无肿瘤)的血清中S-100的含量.结果:神经系统损伤患者S-100蛋白大多>0.15 μg*L-1,正常对照组<0.15 μg*L-1,差别有显著性.结论:S-100蛋白可作为衡量脑组织病变(脑损伤、脑肿瘤)的一个临床指标,尤其在脑损伤累及神经胶质细胞后.

    作者:裴惠临;郭清莲 刊期: 2004年第01期

  • 白细胞介素18与黄芪注射液对病毒性心肌炎的疗效对比

    目的:比较白细胞介素18(IL-18)与黄芪注射液对病毒性心肌炎(VMC)的疗效.方法:用柯萨奇病毒B3m(CVB3m)感染Balb/c小鼠制备VMC小鼠模型,然后分别给予IL-18及黄芪注射液治疗8 d,观察小鼠发病情况,并在不同时段检测心肌组织病毒滴定度、心肌病理积分,并进行比较.结果:IL-18治疗组及黄芪治疗组较心肌炎对照组症状减轻,生存率提高(P<0.05),病毒滴定度降低,病理改变减轻,具有显著性差异(P<0.01);IL-18组与黄芪组比较,前者生存率较高,但无显著性差异(P>0.05),病毒滴定度和病理积分均低于后者,有显著性差异(P<0.01).结论:IL-18与黄芪注射液对VMC均有治疗作用,前者疗效更优于后者.

    作者:刘文春;黄星原 刊期: 2004年第01期

  • 内热式综合治疗仪联合药物治疗生殖器尖锐湿疣临床观察

    生殖器尖锐湿疣是生殖器皮肤和粘膜的瘤状良性病变,由人类乳头瘤毒(HPV)引起的一种生殖道性传播疾病,发病率为16.73/10万人,占我国性传播疾病的第2位,已越来越引起人们重视.

    作者:李汉华;王燕;李庆桂 刊期: 2004年第01期

  • 自体冷冻下颌骨复合髂骨移植的动物实验

    目的:论证冷冻自体下颌骨复合髂骨移植的可行性.方法:20只健康雄性大耳白兔实施冷冻自体下颌骨复合髂骨移植并与对侧的新鲜髂骨移植相比较.分别在术后2,4,8,12周各处死5只动物,获取整块下颌骨标本作大体观察、X线检查和组织学评价.结果:复合移植组术后2周时冷冻骨以移植骨残余吸收为主,髂骨表层可见新骨生成,深部主要为非活性骨;4周时冷冻骨及髂骨均发生活跃成骨;12周时冷冻骨及髂骨皮质形成较成熟的板层骨.新鲜髂骨移植组:愈合过程与复合移植组基本相似,只是在早期软骨增生异常活跃.结论:冷冻自体下颌骨复合髂骨移植骨性愈合可靠,证明冷冻自体病变下颌骨复合髂骨移植修复下颌骨大范围肿瘤性缺损是可行的.

    作者:奂忠平;李祖兵;杨学文 刊期: 2004年第01期

  • 脑卒中发生的相关时间规律性临床研究

    目的:研究两型脑卒中即缺血性脑卒中和出血性脑卒中发生与季节时间的相关规律性关系.方法:发病季节按春(3~5月)、夏(6~8月)、秋(9~11)、冬(12~2) 分四季,昼夜以每4 h 为1时段分为6个时段,分别统计分季节及时段的发病人数.结果:冬季为出血性脑卒中高发期,夏季为缺血性脑卒中高发时期,与其它季节相比均存在显著的差异性(P<0.05 or P<0.01),周六与周日为脑出血性脑卒中高发日,而周一周二为缺血性脑卒中高发日,与其它周时比较有统计学差异(P<0.05 or P<0.01),8∶00~12∶00间为缺血性脑卒中发病高峰期,与其它时段比较存在统计学差异(P<0.05),而16∶00~20∶00是出血性脑卒中的高发时段,且与其它时段相比差异有显著性(P<0.05),在0∶00~4∶00时段国人睡眠时段发生脑卒中的人数明显少于其它时段(P<0.05).结论:脑卒中其类型的不同其发病也存在着不同的特征,缺血性脑卒中多发于夏季及上午,而出血性脑卒中多发病于秋季及下午,睡眠中脑卒中的发生远低于清醒状态时,其发病的基础是血压变化、血管舒缩及血液流变学的异常,了解脑卒中的各自特点有助于我们采取相应对策预防,减少脑卒中的发生率.

    作者:刘庆宪;宋永建 刊期: 2004年第01期

  • 凹形龈缘基桩的镍铬合金全冠的边缘适合性研究

    目的:考察凹形龈缘和肩台龈缘种植体基桩的镍铬合金冠在粘接后的边缘适合性.方法:通过精密机床技术加工凹形龈缘和肩台龈缘基桩的有机玻璃代型24个,分别用氧化锌丁香酚水门汀和磷酸锌水门汀粘接基桩和各自的镍铬合金全冠,通过片切法在体视显微镜下测量全冠的边缘适合性.结果:在使用氧化锌丁香酚水门汀时,凹形龈缘组金属全冠的边缘浮出量(52.67 μm)与肩台龈缘组(57.88 μm)之间的差别无统计学意义,但均显著低于使用磷酸锌时的边缘浮出量;在使用磷酸锌水门汀时,凹形龈缘组的边缘浮出量(122.71 μm)显著小于肩台龈缘组(159.08 μm).结论:氧化锌丁香酚水门汀引起的金属全冠的边缘适合差异显著低于磷酸锌水门汀.金属全冠在使用氧化锌丁香酚水门汀时的边缘适合性受预备体龈缘形态的影响很小,而在使用磷酸锌水门汀时受到显著影响,凹形龈缘比肩台龈缘更有利于全冠的边缘封闭.

    作者:夏海斌;王贻宁;程祥荣;施斌 刊期: 2004年第01期

  • 亚砷酸失活恒牙牙髓时间与效果的临床观察

    不可复性牙髓炎,无论是采用干尸治疗或根管治疗,首先必须进行牙髓失活.

    作者:刘春利;朱友家 刊期: 2004年第01期

武汉大学学报(医学版)杂志

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主管:中华人民共和国教育部

主办:武汉大学