藤黄酸抑制NF-кB信号通路阻滞Raji细胞周期进程

间充质干细胞构建组织工程瓣膜的生物力学性能研究

目的 采用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)联合间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)构建组织工程心脏瓣膜(tissue engineered heart valve,TEHV),并对其生物力学性能进行研究.方法 分离培养大鼠MSCs,进行细胞鉴定后种植于去细胞瓣叶支架上.将瓣叶置于含5 ng/ml bFGF的培养液中,分别培养7 d和14 d作为实验组A和实验组B.实验组C除培养液中不添加bFGF外,其余同实验组B.对照组为大鼠肌成纤维细胞构建的TEHV.对各组TEHV进行形态学观察,生化检测和生物力学测试.结果 MSCs表达CD29(94.82%)和CD44(93.59%).各组TEHV具有相似的形态结构,DNA和羟脯氨酸含量、大负荷、大应力、大应变和弹性模量的差异无统计学意义(P>0.05).结论 采用MSCs和肌成纤维细胞构建的TEHV具有相同的生物力学性能,而采用bFGF联合MSCs体外构建TEHV能在更短的时间内获得相同的生物力学性能.

作者：洪昊；苏伟；董念国；史嘉玮 刊期： 2009年第02期

二硫代氨基甲酸吡咯烷对兔肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对体外培养的兔肺动脉平滑肌细胞(RPASMCs)增殖的影响及其作用机制.方法 体外培养RPASMCs,经不同浓度的PDTC作用不同时间后,应用MTT法观察细胞增殖情况;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR法检测RPASMCs细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA表达水平.结果 PDTC能显著抑制10%FBS刺激下的RPASMCs生长.呈浓度、时间依赖性;细胞周期分析显示,PDTC作用24 h后,RPASMCs生长周期受到明显阻滞;RT-PCR检测显示,PDTC可呈浓度依赖性地抑制RPASMCs Cyclin D1 mRNA的表达.结论 PDTC能明显抑制血清诱导的RPASMCs增殖以及阻滞细胞周期进程,而下调细胞周期蛋白Cyclin D1 mRNA表达可能是其机制之一.

作者：石瑶；孟浦；郑孝清 刊期： 2009年第02期

过表达解偶联蛋白-2基因加重原代肝细胞急性损伤

目的 研究解偶联蛋白-2(uncoupling protein-2,UCP-2)基因在肝细胞急性损伤过程中的作用.方法 构建小鼠UCP-2基因过表达慢病毒载体;二步胶原酶灌注法分离培养小鼠原代肝细胞;慢病毒感染肝细胞,使肝细胞中UCP-2基因表达上调;荧光显微镜镜检确定感染效率.Real time PCR检测UCP-2表达;肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作用于病毒感染肝细胞24 h后.检测细胞上清液中谷丙转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;碘化丙啶(PI)染色流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡因子Caspase 3的活化.结果 Real time PCR检测证实目的 细胞中UCP-2表达上调;TNF-α作用后病毒感染的实验组上清液中ALT和LDH水平、细胞凋亡率、凋亡因子Caspase 3活化程度均高于对照组(均P<0.05).结论 UCP-2基因过度表达可加重肝细胞急性损伤.

作者：万赤丹；程锐；王春友；王宏博；王帅；刘涛 刊期： 2009年第02期

Livin靶向siRNA对结肠癌细胞的抑制作用

目的 构建Livin靶向siRNA重组表达载体,研究其对人结肠癌细胞生长的抑制作用.方法 构建Livin靶向siRNA重组表达载体并转染结肠癌细胞,通过RT-PCR和Western blot方法检测Livin的表达.结果 经酶切鉴定和测序结果证实Livin靶向siRNA重组表达载体构建成功,它对结肠癌细胞Livin mRNA和蛋白的表达抑制率分别为30.18%和28.88%.结论 Livin靶向siRNA重组表达载体构建成功并能显著抑制Livin基因的表达.

作者：蔡明；王国斌；陶凯雄；蔡昌学 刊期： 2009年第02期

Ad-HBx的构建及在肾小球足细胞系的表达

目的 构建携带HBx基因的非复制型重组腺病毒载体,并感染小鼠肾小球足细胞株MPC5,使目的 基因HBx在该细胞株有效表达.方法 由质粒PCI-neo-HBx中扩增目的 基因HBx.插入至pShuttle-CMV(-)穿梭质粒中,而后再与pAdxsi质粒酶切连接为重组腺病毒质粒pAd-HBx,经酶切及测序鉴定正确后,以Pac Ⅰ酶切线性化转染293细胞进行包装扩增得到Ad-HBx.以Ad-HBx感染MPC5细胞,Western blot检测感染后目的 蛋白HBx的表达.结果 重组腺病毒载体经限制性内切酶酶切、电泳和基因测序鉴定,证实Ad-HBx构建成功;当MOI=50时.MPC5细胞即可100%被重组腺病毒感染,且持续至感染后72 h仍有较强水平的表达;感染Ad-HBx的MPC5细胞可稳定表达HBx蛋白.结论 成功构建了Ad-HBx,并能在MPC5细胞中稳定表达,为进一步研究HBx基因在乙型肝炎病毒相关性肾炎发病中的作用奠定了基础.

作者：张瑜；周建华 刊期： 2009年第02期

超声造影对脂肪肝背景下肝脏局灶性病变的诊断价值

目的 评价实时超声造影对脂肪肝背景下肝脏局灶性病变(FLL)的诊断价值.方法 采用低机械指数实时谐波超声造影技术,对常规超声不能确诊的脂肪肝背景下的69个局灶性病变进行了超声造影检查,将超声造影结果同增强CT、增强MRI及病理诊断进行对比,分析超声造影检查的诊断价值.结果 超声造影检查后,1例肝紫癜被误诊,1例肝血管瘤被误诊.超声造影对恶性FLL的敏感性、特异性、诊断符合率分别为100%(9/9)、96.7 %(58/60)、97.1%(67/69).结论 超声造影可作为脂肪肝背景下FLL鉴别诊断的重要方法.

作者：邓远；李开艳；罗鸿昌；陈云超 刊期： 2009年第02期

肼屈嗪与丙戊酸对胆管癌细胞QBC939中P16、RASSF1A基因表达的协同作用

目的 探讨利用甲基化酶抑制剂(肼屈嗪)和组蛋白脱乙酰化酶抑制剂(丙戊酸)干预胆管癌细胞后,对P16和RASSFIA基因表达的影响.方法 将胆管癌细胞QBC939分为4组,丙戊酸组、肼屈嗪组、两药合用组以及空白组,分别以相应药物(终浓度10 mmol/L)作用48 h.空白组加入等量的含10%血清的RPMI 1640培养液.利用PCR、Westernblot和甲基化特异性PCR检测处理后的P16、RASSF1A基因及蛋白的表达和它们启动子区甲基化状态.结果 空白组P16基因及蛋白微量表达,RASSF1A基因及蛋白无表达;单用丙戊酸不能使两基因mRNA及蛋白表达增加,而单用肼屈嗪可以增加两基因mRNA及蛋白表达,两种药物合用使两基因mRNA及蛋白表达量明显高于单用一种药物组(均P<0.01);单用肼屈嗪、两药合用分别可使P16基因和RASSF1A基因启动子区部分和完全去甲基化,而单用丙戊酸无此效果.结论 两种药物在恢复沉默抑癌基因表达上有协同作用,有望成为胆管癌治疗的新选择.

作者：李宏；陈绍勤；舒艺；陈勇军；邹声泉 刊期： 2009年第02期

线粒体ATP敏感钾通道对哮喘大鼠气道平滑肌细胞表型转化的影响

目的 研究线粒体ATP敏感钾通道(mitoKATP)对哮喘气道平滑肌细胞(ASMCs)表型转化的影响.方法 腹腔注射和雾化吸人制备哮喘大鼠模型.取哮喘及正常大鼠ASMCs,分为以下6组进行干预:正常对照组;正常+mi-toKATP开放剂diazoxide组;正常+mitoKATP阻断剂5-HD组;哮喘对照组;哮喘+diazoxide组;哮喘+5-HD组.激光共聚焦显微镜检测各组ASMCs R-123荧光强度以反映线粒体膜电位(△ψm),Western blot法检测各组细胞α一肌动蛋白(ractin)表达量.结果 ①与正常对照组比较.哮喘对照组R-123荧光强度明显增强,α-actin表达明显下调(均P<0.05).②diazoxide干预ASMCs 24 h后.正常及哮喘ASMCs R-123荧光强度均明显增强(均P<0.05);正常ASMCs α-actin表达量无明显变化(P>0.05).但哮喘ASMCs α-actin表达量明显增加(P<0.05).结论 diazoxide引起mitoKATP开放,并逆转哮喘ASMCs由收缩型向合成型发生的表型转化.

作者：赵建平；叶永军；高敏；胡伟华；周志刚 刊期： 2009年第02期

电压门控钠通道亚型Nav1.5在乳腺癌细胞中的表达及与细胞体外转移的关系

目的 观察电压门控钠通道(voltage-gated sodium channels,VGSCs)亚型在乳腺癌细胞中的表达及其与细胞体外转移的关系.方法 通过RT-PCR,Western blot,MTT及Transwell小室迁移和侵袭实验,检测乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中VGSCs的表达及VGSCS特异性阻断剂河豚毒素(TTX)对细胞的毒性、迁移和侵袭特性的影响.结果 在MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞中同时存在NaV1.1,NaV1.4和NaV1.8的高表达;而在MDA-MB-231细胞中发现NaV1.3和NaV1.5、NaV1.6的表达量较MCF-7细胞中明显升高,尤其是NaV1.5的表达具有功能性意义.体外应用1μmol/L和30μmol/L TTX处理细胞后,与对照组相比,MDA-MB-231细胞的体外侵袭性分别下降了(12.50±0.19)%和(53.58±1.03)%.而MCF-7细胞的体外侵袭性却没有发生明显变化.结论 乳腺癌细胞MDA-MB-231中存在高表达的NaV1.5,TTX阻断VGSCs后显著抑制其体外侵袭力.

作者：高瑞；王静；沈怡；雷鸣；王泽华 刊期： 2009年第02期

黑质内注射脂多糖对小胶质细胞MHC Ⅱ表达的影响

目的 观察黑质内注入脂多糖(LPS)后对黑质小胶质细胞主要组织相容性复合物Ⅱ(MHC Ⅱ)表达的影响.方法 采用立体定向技术向大鼠单侧黑质内注入LPS建立帕金森病动物模型.分别于注药后1、7、14、60 d时采用免疫组化法检测MHC Ⅱ阳性细胞;Western blot检测黑质小胶质细胞MHC Ⅱ蛋白的表达;双标荧光染色法检测p47phox(NADPH氧化酶标志物)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在MHC Ⅱ阳性小胶质细胞的表达.结果 注射LPS后I d.注射侧黑质区始出现MHC Ⅱ阳性细胞,7 d时达高峰,14 d时减少,60 d时仅见少量的阳性细胞.Western blot检测结果也有类似的趋势.双标荧光染色法检测到p47phox和iNOS在MHCⅡ阳性小胶质细胞均有表达.结论 黑质内单次注射LPS可激活黑质小胶质细胞并表达MHC Ⅱ;LPS可诱导MHC Ⅱ阳性小胶质细胞同时表达iNOS和NADPH氧化酶.

作者：王普清；孙圣刚；张允健；乔娴 刊期： 2009年第02期

波前像差引导的准分子激光原位角膜磨镶术后视觉质量评价

目的 比较波前引导的准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)与标准LASIK治疗近视眼的术后视觉质量.方法 选取接受Zyoptix波前引导LASIK手术的近视患者80例(149只眼)作为试验组,并选取同期行标准LASIK手术的近视患者100例(176只眼)作为对照组,观察对比2组术后视觉质量.结果 ①视力变化:术后6个月,试验组佳矫正视力较术前提高1行以上的患眼为76眼(50.1%),明显高于对照组的53眼(30.1%,P<0.01);裸眼视力高于术前矫正视力的患眼为53眼(35.6%),明显高于对照组的31眼(17.6%,P<0.01).②屈光度变化:术后3个月对照组开始出现屈光度回退呈轻微欠矫,而试验组回退很少,基本趋于正视状态.③对比敏感度变化:术后1个月,2组对比敏感度较术前均下降,尤其以中频和高频下降明显,术后3个月,2组对比敏感度较1个月时略有增加,试验组增加明显.术后6个月,试验组对比敏感度较术前有提高,而对照组趋于术前水平.④高阶像差变化:术后2组的高阶像差均方根值(RMS)均较术前增加,但试验组较对照组增加值明显减小(P<0.05).结论 Zyoptix波前引导LASIK治疗近视的术后视觉质量优于标准LASIK手术.

作者：刘苏冰；王丽娅；聂晓丽；买志彬；马恩普 刊期： 2009年第02期

NTF2对视网膜新生血管的抑制作用

目的 体外实验研究核转运因子2(NTF2)对视网膜新生血管的抑制作用.方法 以血管内皮生长因子(VEGF)刺激体外培养人视网膜血管内皮细胞,并分为转染重组腺相关病毒2-NTF2(rAAV2-NTF2)的实验组和转染等量空白rAAV2的对照组,利用流式细胞仪和Boyden小室观察NTF2对激活状态的人视网膜血管内皮细胞增殖和迁徙的作用.结果 流式细胞仪检测结果显示实验组在G1期的细胞比例为(49.57±0.43)%,对照组为(27.21±0.86)%,两者差异有统计学意义(P<0.05)./30yden小室实验检测迁徙细胞数,实验组和对照组分别为(13.85±1.5)和(34.6±2.5)(n=6,P<0.05),说明NTF2能抑制人视网膜血管内皮细胞的增殖和迁徙.结论 NTF2对视网膜新生血管具有抑制作用.

作者：李斌；赵敏红；李贵刚；徐玲娟；向艳；毛晓春 刊期： 2009年第02期

烟酰胺对体外培养兔椎间盘细胞凋亡及能量代谢相关基因表达的影响

目的 观察烟酰胺(Nia)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的体外培养的退变兔椎间盘组织内细胞凋亡及能量代谢相关基因表达的影响.方法 构建兔椎间盘组织凝胶培养模型,分为正常对照组(不加入药物),烟酰胺组(加入0.5 mg/ml烟酰胺),退变组(加入10 ng/ml IL-1β)和治疗组(加入10 ng/ml IL-1β及0.5 mg/ml烟酰胺).培养2周后对各组标本分别行TUNEL染色,Fas、Caspase 3、Bcl-2、HIF-1α、GLUT-1及VEGF免疫组化染色.结果 TUNEL染色示治疗组阳性细胞染色率较退变组有所下降.Fas、Bcl-2染色示治疗组阳性细胞率均与退变组接近(均P>0.05).Caspase 3染色示治疗组阳性细胞率较退变组明显降低(P<0.05).HIF-1α、VEGF染色示治疗组阳性细胞率较退变组均明显降低(均P<0.01).GLUT-1染色示治疗组阳性细胞率较退变组轻微下降(P>0.05).结论 烟酰胺可以抑制IL-1β诱导的椎间盘细胞凋亡,改善IL-1β导致的椎间盘能量代谢障碍.

作者：徐蔚蔚；邵增务；熊蠡茗；杨述华；俞旭东；郭兵；谢卯 刊期： 2009年第02期

获得性双眼旋转性斜视的治疗与转归

目的 探讨双眼旋转性斜视发病病因、临床特点、治疗效果及预后.方法 用同视机、双马氏杆等检查诊断双眼旋转性斜视患者10例,根据病因不同采用不同治疗方法.结果 2例由颅内病变引起者转至相应科室治疗原发病;8例脑外伤引起者,4例经药物及物理保守治疗,半年后基本恢复正常双眼单视功能;3例经保守治疗半年后行双上斜肌矢状移位术;1例因种种原因未能进一步治疗.结论 近年来该病发病有增多趋势,加强对该病的认识很有必要;部分患者经药物和物理等治疗可以临床治愈;双上斜肌矢状移位术也可取得令人满意效果.

作者：王平；宋琳；李贵刚 刊期： 2009年第02期

增强型绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞移植对帕金森病大鼠模型的治疗作用

目的 探讨骨髓问充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植对帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠的疗效及其在脑内存活、迁徙、分化规律.方法 将造模成功的PD大鼠随机分为两组,将增强型绿色荧光蛋白(en-hanced green fluorescent protein,EGFP)标记的MSCs及PBS分别移植入两组PD模型纹状体.术后每周进行旋转试验,第1周和第9周行脑神经元特异性核蛋白(Neun)、胶质细胞源性蛋白(GFAP)及酪氨酸羟化酶(TH)的免疫组化鉴定,第9周行Western blot检测两组模型纹状体内TH的表达.结果 移植前MSC组及PBS组旋转次数分别为(8.2±0.6)、(8.3±0.6)圈/min,差异无统计学意义(P>0.05);术后第3周分别为(7.5±0.5)、(8.1±0.6)圈/min,差异有统计学意义(P<0.05),并持续至术后第9周.移植后第1周MSCs主要分布于针道附近.第9周则迁徙至两侧大脑半球,以移植侧半球为主.远迁徙至胼胝体的末端.小脑及脑于未见移植细胞.全脑未见畸胎瘤的形成.术后第1周免疫组化染色仅见GFAP和Neun表达.第9周GFAP、Neun仍有表达,以GFAP居多,同时在纹状体内还可见少量TH表达,提示MSCs在脑内主要分化为胶质细胞.部分为神经元.少数分化为多巴胺能神经元(dopaminergic neuron.DN).PBS组免疫组化染色未见上述蛋白的表达.Western blot检测仅MSCs组大鼠纹状体有TH的表达.结论 MSCs移植入纹状体后可分化为DN,从而改善PD症状,其移植治疗PD大鼠模型可能是安全有效的.

作者：胡琦；康慧聪；刘晓艳；许峰；李巷；朱遂强 刊期： 2009年第02期

反义ERK2基因对结缔组织生长因子诱导肾小管上皮细胞向间充质转化的调控效应

目的 研究细胞外信号调节激酶2(ERK2)信号转导通路对结缔组织生长因子(CTGF)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)向间充质细胞转化的调控效应.方法 腺病毒介导的反义ERK2基因(Adanti-ERK2)按感染强度50、100、200转染HK-2细胞,确定适感染强度.按作用因素的不同将HK-2细胞分为对照组、Ad-LacZ组、CTGF组和Adanti-ERK2组.免疫组织化学检测E-Cadherin和Vimentin的表达,Western blot法检测E-Cadherin、Vimentin及ERK2的表达变化;细胞接种Boyden小室1、3、5 d时检测各组HK-2细胞迁移数目的 变化.结果 ①Adanti-ERK2转染HK-2细胞适感染强度为100.②HK-2细胞在CTGF刺激下E-Cadherin蛋白表达明显减少,Vimentin表达增加,同时细胞内的ERK2蛋白表达显著增加;而Adanti-ERK2组E-Cadherin和Vimentin表达变化不明显,ERK2蛋白表达较对照组明显减少.③接种5 d,HK-2细胞在CTGF刺激下细胞运动能力显著高于其他各组,而Adanti-ERK2组与对照组和Ad-LacZ组相比差异无显著性意义.结论 以反义ERK2基因治疗可以有效阻断CTGF诱导的肾小管上皮细胞向间充质转化.提示ERK2信号转导通路在该转化中发挥重要作用.

作者：丁召；陈知水；宫念樵；陈曦林；蔡明；郭晖 刊期： 2009年第02期

腹腔镜胆囊切除术中嵌顿性胆囊结石的处理策略

目的 探讨腹腔镜胆囊切除术(LC)中嵌顿性胆囊结石的处理方法.方法 回顾性分析腹腔镜手术治疗胆囊颈和壶腹部结石嵌顿患者456例的临床效果及并发症发生情况.结果 450例顺利完成腹腔镜胆囊切除术,6例中转开腹,患者均痊愈出院.结论 胆囊颈和壶腹部结石嵌顿行腹腔镜胆囊切除术是安全可行的.术前详细评估、明确诊断、熟练的腹腔镜操作技术、选择恰当的处理策略是关键.

作者：俞亚红；张先林；陈忠；丁志强；秦仁义；卢兴培 刊期： 2009年第02期

人乳头瘤病毒16型E5对人宫颈癌SiHa细胞恶性潜能的影响及其机制探讨

作者： 刊期： 2009年第02期

靶向Mcl-1的shRNA重组质粒的构建及其对HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 设计以髓细胞白血病基因-1(Mcl-1)为靶点的短发夹状RNA(shRNA).构建携带此shRNA的重组质粒,探讨脂质体转染该重组质粒对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响.方法 设计3对针对Mcl-1基因不同位点的shRNA片段的真核表达载体psiRNA-hHlneo-Mcl,用阳离子脂质体法将重组质粒转染至人肝癌细胞株HepG2中,通过RT-PeR及Western blot方法检测转染前后Mcl-1 mRNA及蛋白表达情况,筛选能高效抑制Mcl-1基因表达的shRNA重组质粒并应用MTT和流式细胞仪分析转染后细胞增殖和凋亡变化的情况.结果 成功构建含shRNA片段的重组质粒,依次命名为pMclsi-1、pMclsi-2、pMclsi-3.经测序证实.插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致.重组质粒转染HepG2细胞后,Mcl-1基因的mRNA水平及蛋白水平明显下调,其中以pMclsi-1重组质粒下调效应强.MTT检测显示pMclsi-1可明显抑制HepG2细胞增殖,流式细胞仪测定转染后24 h细胞凋亡率为6.5%,48 h细胞凋亡率为15.6%,显著高于对照组(3.9%,P<0.05).结论 采用RNAi技术可特异阻断Mcl-1基因的表达,Mcl-1基因有促进细胞增生及抑制凋亡的作用.

作者：余琴；陈琼；黄焕军；宋宇虎；常莹；田德安；林菊生 刊期： 2009年第02期

少弱精子症患者睾丸组织中NOSTRIN的表达及其与eNOS的相关性研究

目的 通过测定少弱精子症患者睾丸组织中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial nitric oxide syn-thase traffic inducer,NOSTRIN)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的表达,探讨其与少弱精子症发病的相关性.方法 采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测11例严重少弱精子症患者(病例组)和7例正常男性(正常组)睾丸组织中NOSTRIN mRNA的表达;分光光度法测定睾丸组织中eNOS的活性;应用硝酸还原酶法测定睾丸组织上清液中NO代谢产物NO2-/NO3-水平.结果 病例组患者睾丸组织中NOSTRIN mRNA呈弱表达(0.312±0.076),明显低于正常组(0.793±0.082,P<0.01);病例组患者睾丸组织eNOS活性[(33.73±3.58)U/mg]与正常组[(17.69±3.84)U/mg]比较显著增强(P<0.01);病例组患者睾丸中NO2-/NO3-水平为(48.56±8.49)μmol/L,较正常组(25.37±9.61)μmol/L显著升高(P<0.01)f病例组睾丸组织中NOSTRIN表达水平与eNOS活性呈负相关(r=-0.57,P<0.01),与NO代谢产物NO2-/NO3-同样呈负相关(r=-0.61,P<0.01).结论 少弱精子症患者睾丸组织中NOSTRIN表达水平降低,eNOS活性增强,NO2-/NO3-水平升高,可能与少弱精子症的发生有着相关性.

作者：相文佩；水丽君；温子娜；胡廉；熊承良 刊期： 2009年第02期