毛张凡；孙宗全；杜心灵
目的 研究氧自由基诱导豚鼠耳蜗微血管内皮细胞凋亡及其可能机制.方法 以黄嘌呤氧化酶作用于黄嘌呤而产生氧自由基.不同浓度氧自由基作用于豚鼠耳蜗微血管内皮细胞,用流式细胞术检测凋亡细胞的百分比;用免疫细胞化学法检测Bax及Bcl-2蛋白表达;用RT-PCR方法检测Bax及Bcl-2 mRNA的表达.结果 氧自由基作用后,与空白对照组相比,各个浓度的氧自由基作用组豚鼠耳蜗微血管内皮细胞凋亡率均明显升高(均P<0.01),同时,BaxmRNA及蛋白的表达均显著增强(P<0.05或P<0.01),Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显减弱(均P<0.01).结论 氧自由基可诱导豚鼠耳蜗微血管内皮细胞发生凋亡,其发生机制与其调节Bax/Bcl-2 mRNA及蛋白的表达有关.
作者：艾伟；孔维佳 刊期： 2009年第03期
目的 观察莲房原花青素和银杏内酯联用对小鼠学习记忆能力的影响.方法 采用Morris水迷宫筛选空间学习记忆能力相近的昆明种雄性小鼠50只,随机分为5组,即正常对照组、模型组、低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组,每组10只;行为学测试开始前10 min腹腔注射东莨菪碱,建立小鼠记忆获得障碍模型;3个治疗组分别灌胃50 mg/kg莲房原花青素+10 mg/kg银杏内酯、100 mg/kg莲房原花青素+20 mg/kg银杏内酯、150 mg/kg莲房原花青素+30 mg/kg银杏内酯;其余两组灌胃生理盐水.喂养30 d后以行为学实验(Morris水迷宫法、跳台法)为指标观察莲房原花青素和银杏内酯的联合作用.结果 在东莨菪碱所致小鼠记忆障碍模型中,莲房原花青素和银杏内酯联用在Morris水迷宫中可缩短潜伏期,减少游泳距离;在跳台实验中可以延长平台停留期,显著减少错误次数.结论 莲房原花青素和银杏内酯联用能够改善东莨菪碱所致小鼠学习记忆障碍.
作者：张丽；许继取；荣爽；谢笔钧；孙智达；张允建；刘烈刚 刊期： 2009年第03期
目的 构建起搏基因质粒pIRES2-EGFP-mHCN2并转染到大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),检测其在MSCs中核酸和蛋白水平是否表达.方法 采用密度梯度离心法分离获得MSCs.EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切质粒pGH-mH-CN2和pIRES2-EGFP,回收目的 片段,T4DNA连接酶连接.转化筛选阳性菌落,酶切和测序鉴定mHCN2是否插入pIRES2-EGFP中.脂质体转染质粒pIRES2-EGFP-mHCN2至MSCs,荧光显微镜下鉴定,并采用RT-PCR方法和Western blot方法分别检测转染质粒pIRES2-EGFP-mHCN2对mHCN2 mRNA和蛋白表达的影响.结果 酶切鉴定和测序结果均证明mHCN2片段插入质粒plRES2一EGFP.荧光显微镜下可见转染了质粒的MSCs发出绿色荧光.已转染质粒MSCs的mHCN2 mRNA的平均相对表达量是未转染MSCs的5.31倍(P<0.05),mHCN2蛋白是未转染MSCs的7.55倍(P<0.05).结论 成功构建质粒pIRES2-EGFP-mHCN2,证明了目的 基因mHCN2在MSCs中mR-NA和蛋白均有表达,为进一步研究生物起搏器奠定了基础.
作者：马金；林立；全小庆；王国强；张存泰 刊期： 2009年第03期
目的 探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)和DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)在人膀胱癌组织和人膀胱癌细胞系BIU-87中的表达及意义.方法 用免疫组织化学法分别检测DNMT1和DNMT3b蛋白在24例膀胱癌组织和10例正常膀胱组织中的阳性表达率;用RT-PCR和Western blot分别检测DNMT1和DNMT3b基因在人膀胱癌细胞系BIU-87中mRNA表达水平和蛋白表达水平.结果 在24例膀胱癌组织中,DNMT1阳性表达率为(75.29±2.51)%,而在10例正常膀胱组织中的阳性表达率为(12.61±1.57)%,二者之间的差异具有显著性意义(P<0.05);DNMT3b在24例膀胱癌组织中的阳性表达率为(70.91±2.86)%,在10例正常膀胱组织中的阳性表达率仅为(10.16±1.22)%,二者差异亦具有显著性意义(P<0.05);在人膀胱癌细胞系BIU-87中,通过RT-PCR和Western blot均检测到DNMT1和DNMT3b基因mRNA和蛋白的表达.结论 在膀胱癌组织中,DNMT1和DNMT3b蛋白的表达较正常膀胱组织明显增加,说明DNMT1和DNMT3b的高表达可能与膀胱癌的发生发展有关;DNMT1和DNMT3b在人膀胱癌细胞系BIU-87中存在表达.
作者：吴振启；张旭；刘毅；徐华；史涛平；权伟合；李虎宜；张有顺 刊期： 2009年第03期
目的 探讨主动脉夹层(AD)的临床特点、诊断方法、治疗及预后,提高对本病的认识.方法 对2002年1月至2008年5月在随州市中心医院确诊为主动脉夹层的42例患者的临床资料进行回顾性分析.结果 42例患者确诊后其中20例Stanford B型主动脉夹层行覆膜支架植入均取得成功,6例行外科主动脉置换术,16例内科保守治疗.住院存活39例,死亡3例.结论 主动脉夹层以突发剧烈疼痛为主要症状,CT对本病的诊断意义重大.控制血压、心率是治疗的关键,进行介入或外科治疗可降低病死率,对Stanford B型夹层应用覆膜支架行腔内隔绝治疗是安全有效的方法.
作者：姚维；钱进；蒋从清；张振建；操传斌；蒋守涛 刊期： 2009年第03期
目的 观察碘油羟基磷灰石纳米粒(nHAP)经肝动脉灌注对兔VX2肝肿瘤生长、微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 100只新西兰白兔肝内肿瘤种植后2周,随机分为5组,每组20只,兔上腹正中开腹,胃十二指肠动脉插管固定,经肝动脉灌注给药,实验设生理盐水组(A组)、nHAP组(B组)、单纯碘油组(C组)、阿霉素碘油组(D组)及碘油nHAP组(E组).治疗后1周及2周,采用CT检测并计算肿瘤的生长率,治疗后2周,病理观察肿瘤坏死率,免疫组化方法测定瘤区的MVD及VEGF表达强度.记录各组实验兔治疗后的存活期.结果 治疗后1、2周,碘油nHAP组肿瘤体积及生长率明显小于其它各组(均P<0.05).治疗后2周,碘油nHAP组肿瘤坏死率大于单纯碘油组及阿霉素碘油组(均P<0.05),分别为(80.8±12.5)%、(68.2±10.4)%、(75.3±11.6)%.单纯碘油组及阿霉素碘油组栓塞后,残余肿瘤区的MVD升高,两者分别为(33.6±7.3)和(34.9±7.7),高于生理盐水组的(22.6±6.5)(均P<0.05);两组的VEGF表达强度分别为(0.184±0.018)和(0.180±0.017),高于生理盐水组的(0.140±0.008)(均P<0.05);碘油nHAP组残余瘤区的MVD减低,VEGF表达减弱,两者分别为(16.5±3.6)和(0.104±0.003).和其它组相比,碘油nHAP组治疗后兔的生存期明显延长(均P<0.05).结论 碘油nHAP可抑制肿瘤的生长,增加肿瘤的坏死率,抑制肿瘤血管新生,降低栓塞后残瘤VEGF表达,延长瘤兔的生存时间.
作者：孙振纲；董胜利；李高鹏；陈孝平；穆拉德；黄志勇；关键；胡道予 刊期： 2009年第03期
目的 总结23例婴儿完全性肺静脉异位连接(total anomalous pulmonary venous connection,TAPVC)的外科治疗经验.方法 全组均在中度低温体外循环下进行手术,其中急诊手术6例.患儿平均年龄(5.7士3.6)个月,平均体重(5.85±1.5)kg.心上型11例采用双房径路矫治并结扎垂直静脉,用可吸收缝线吻合肺静脉共干与左心房后壁切口;心内型12例,仔细辨认合并三房心畸形,避免损伤传导系统.均采用心包补片修补扩大的房间隔缺损.结果 手术早期死亡2例(死亡率8.7%).18例随访2个月～3年,患儿心功能明显改善,生长发育正常.结论 TAPVC可由超声心动图确诊,应尽早手术矫治.对于新生儿或婴儿期反复出现肺炎、低氧血症、心衰等患儿,在临床症状相对改善的情况下应急诊手术;同时加强体外循环和监护室的密切协作,完善术后处理方法.
作者：胡志伟；董念国；孙宗全；张凯伦；肖诗亮；杜心灵；蒋雄刚；刘成硅 刊期： 2009年第03期
过敏性紫癜(HSP)是一种过敏性系统性坏死性小血管炎,过敏性紫癜性肾炎(HSPN)是仅次于狼疮性肾炎的一种常见继发性肾炎,常表现为血尿、蛋白尿,部分患者可伴有消化道症状、关节痛、高血压和肾功能不全.HSPN患者可因致敏原性质不同、个体反应差异及血管炎累及的器官和病变程度不同,在临床和肾脏病理学上呈现不同的改变,对治疗的反应和预后也有较大差异.
作者：李秋月；杨柳；张莉；周静 刊期： 2009年第03期
目的 检测转化生长因子β1、β2(transforming growth factorβ1、β2,TGF-β1、TGF-β2)在分泌性中耳炎(secre-tory otitis media,SOM)动物模型鼓室黏膜中的表达,探讨TGF-β1、TGF-β2在SOM发病机制中的作用及意义.方法 应用灭活肺炎链球菌注入豚鼠中耳腔,制作SOM动物模型,采用免疫组织化学方法检测致病鼠鼓室黏膜上皮在注入细菌后6 h、1 d、3 d、7 d、14 d及30 d后TGF-β1、TGF-β2的表达.结果 SOM动物模型的鼓室黏膜上皮中TGF-β1、TGF-β2早期就有表达.TGF-β1在术后7 d表达明显增强,第30天时达高峰,TGF-β2在术后24 h即有表达,14 d时达高峰.结论 灭活肺炎链球菌致SOM中,TGF-β1、TGF-β2在鼓室黏膜中出现过度表达,TGF-β1可能与SOM慢性迁延有关,TGF-β2在SOM早期起主导作用.
作者：袁琨；张帆；喻慧岭；贺海霞；向芳；郑婕 刊期： 2009年第03期
目的 研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因型和等位基因频率分布,探讨MTHFR基因多态性与湖北地区汉族人冠心病发病的关系.方法 采用病例-对照研究方法,选取冠心病病例和与之年龄、性别匹配的对照各942例.应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time PCR)技术检测基因型,同时检测研究对象的空腹血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、血压、身高、体重及腰围(WC)等临床参数,并计算体重指数(BMI).结果 冠心病组MTHFR(C677T)基因CC基因型频率为36.0%、CT基因型频率为45.0%、TT基因型频率为19.0%;正常对照组的3种基因型频率分别为36.7%、43.3%和20.0%.冠心病组MTHFR(C677T)基因各基因型分布频率与正常对照组相比差异均无统计学意义(均P>0.05).Logistic回归分析结果提示,在吸烟者、活动少、有高血压史、糖尿病史和冠心病家族史的人群中患冠心病的危险性增加,反之则危险性降低.结论 MTHFR(C677T)基因多态性与中国湖北地区汉族人患冠心病的危险性无关,可能不是冠心病遗传危险因素之一.
作者：吴晓芬；程龙献；何美安；邬堂春；张存泰 刊期： 2009年第03期
目的 探讨黏蛋白MUC5AC在慢性阻塞性肺疾病(COPD)缓解期气道中的表达及其临床意义.方法 病例分3组,即COPD组,吸烟对照组及正常对照组.取胸外科手术切除的肺叶并分离出气道,分离和培养上皮细胞,采用ELISA定量检测培养上清中的MUC5AC,同时采用RT-PCR检测培养气道上皮细胞中的MUC5AC mRNA水平.结果 正常对照组气道上皮细胞MUC5AC蛋白水平较低,吸烟对照组和COPD组比正常对照组明显升高(P<0.05),同时COPD组也高于吸烟对照组(P<0.05);正常对照组气道上皮MUC5AC mRNA水平较低,吸烟对照组和COPD组比正常对照组明显升高,同时COPD组也高于吸烟对照组(均P<0.05).结论 吸烟和COPD可导致气道上皮MUC5AC的蛋白及mRNA水平明显升高,并且COPD患者稳定期也存在MUC5AC的高分泌状态,MUC5AC黏蛋白的过度分泌是COPD慢性进行性发展的一个重要因素.
作者：赖异；李雯 刊期： 2009年第03期
目的 探讨获得足够数量和较高纯度大鼠胰岛的分离和纯化方法.方法 采用V型胶原酶灌注消化法分离成年大鼠胰岛,Ficoll 400非连续密度梯度法纯化胰岛.双硫腙(DTZ)染色鉴定培养的胰岛细胞,锥虫蓝染色检测细胞活性.葡萄糖刺激胰岛素释放试验评价胰岛细胞的功能.结果 分离纯化后大鼠胰岛平均收获量为(480±30)IEQ,纯度大于90%,活性大于90%.在低糖和高糖刺激下,胰岛素分泌量分别为(12.28±0.89)mIU/L、(19.01±1.49)mlU/L,二者相比较.差异有统计学意义(P<0.05),刺激指数为(1.55±0.01).结论 胶原酶V逆行灌注消化胰腺和Ficoll400非连续密度梯度纯化法,可获得高纯度高活率的大鼠胰岛.
作者：侯凌；尹注增；向莹；李俊华；陈实；陈刚；罗小平 刊期： 2009年第03期
目的 研究五甲基槲皮素(PMQ)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致大鼠心肌肥厚和细胞凋亡的作用及机制.方法 30只SD大鼠随机分为5组.试验持续21 d.①空白组:每晨生理盐水灌胃;②PMQ组:每晨PMQ 50 mg/kg灌胃;③AngⅡ组:于第15天开始皮下注射AngⅡ 288μg/(kg·d);④PMQ+Ang Ⅱ组:PMQ和AngⅡ处理同前;⑤溶剂+AngⅡ组:每晨溶剂灌胃,AngⅡ处理同前.于第22天处死大鼠.测量心脏指数、左心指数,心肌超氧化物歧化物(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量,实时荧光定量(real time)PCR检测脑钠素(BNP)mRNA的表达,TUNEL法测心肌凋亡,免疫组化测Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果 PMQ能明显抑制Ang Ⅱ所致的心肌肥厚[左心指数,(2.02±0.16)vs(2.34±0.10)mg/g]及BNP mRNA表达上调;抑制心肌细胞凋亡[凋亡指数,(0.72±0.18)vs(1.28±0.27)%]及凋亡相关蛋白Bax表达[平均吸光度(0.037 3±0.007 3)vs(0.054 0±0.006 8)]和Bax/Bcl-2的提高[(0.17±0.03)vs(0.25±0.04)].并降低SOD活力、增加MDA含量.结论 PMQ能对抗AngⅡ引起的心肌肥厚及细胞凋亡.此效应可能与其抗氧化作用有关.
作者：毛张凡；孙宗全；杜心灵 刊期： 2009年第03期
目的 研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在糖尿病周围血管病患者内皮祖细胞(EPC)中的表达及其意义.方法 将36例糖尿病患者分为周围血管病组(A组)和无周围血管病组(B组)各18例.对照组(C组)14例为来院体检的健康人.分离培养外周血EPC,采用MTT法检测EPC增殖率,RT-PCR法检测HIF-1α的基因表达,Western blot法检测其蛋白表达,并加以比较.结果 A组和B组EPC增殖率[分别为(13.3±5.1)%和(17.7±4.8)%]低于C组(23.7±5.2)%,差异均具有统计学意义(均P<0.05),而A组低于B组,差异具有统计学意义(P<0.05).HIF-1α的mRNA水平由低到高分别为A组、C组和B组[其mRNA相对表达强度分别为(0.57±0.12)、(0.925±0.15)和(1.25±0.21)],差异具有统计学意义(均P<0.05).A组与B组HIF-1α蛋白表达水平均高于C组,且A组低于B组,差异具有统计学意义(均P<0.05).结论 HIF-1α表达减低可能在糖尿病周围血管病的发生中起一定作用.
作者：赵湜；王红祥；毛红；李亚蓉；丁胜；王利 刊期： 2009年第03期
目的 建立适合中国人群特点的常见染色体非整倍体疾病快速产前诊断技术.方法 收集89例妊娠16～21周,羊水穿刺进行胎儿细胞培养染色体核型分析孕妇的羊水,采用定量荧光PCR(quantitative fluorescence PCR,QF-PCR)技术对21、18、13、X/Y染色体上杂合度较高的短串联重复序列(short tandom repeat,STR)位标进行扩增检测,与染色体核型分析的结果进行对照分析;并分析正常核型胎儿21、18、13、X/Y染色体上的STR的多态信息含量(PIC).结果 89例未培养羊水标本经过QF-PCR检测,发现4例21三体,2例18三体,1例13三体,1例性染色体三体,与细胞培养染色体核型分析结果一致.1例21三体结果难以判定,染色体核型分析证实为嵌合体,嵌合比例为32%.其余80例正常,与染色体核型分析结果一致.中国人21、18、13、X/Y染色体上STR:D21S11、D21S1435、D21S1270、D21S1411、D18S391、D18S978、D18S386、D18S499、D13S742、D13S634、D13S628、D13S305、XHPRT和X22的PIC分别为0.761、0.845、0.952、0.893、0.721、0.848、0.926、0.904、0.912、0.787、0.918、0.946、0.890、0.826.结论 本研究所选STR位标在中国人群中呈现较高的遗传多态性,符合Hardy-Weinberg平衡定律;多重定量荧光PCR技术适用于快速产前诊断常见染色体非整倍体疾病.
作者：邓玉清；肖晓素；刘晓翌；张静媛；雷桔红 刊期： 2009年第03期
目的 评价3%氯普鲁卡因用于老年患者泌尿外科手术硬膜外阻滞的效果.方法 ASA Ⅰ～Ⅱ级无脊柱畸形的泌尿外科手术老年患者120例,随机分为两组,Ⅰ组为氯普鲁卡因组,硬膜外麻醉所用的局麻药为3%氯普鲁卡因,Ⅱ组为利多卡因组,所用局麻药为2%利多卡因,根据泌尿外科手术部位的需要,选择L2～3间隙行硬膜外穿刺,向头侧置管,试验量为3 ml,5 min后追加至麻醉平面满足手术要求.记录镇痛起效时间、运动阻滞起效时间、镇痛持续时间、运动阻滞持续时间,采用针刺法测定痛觉消失高平面,采用改良Bromare分级评价下肢运动神经阻滞大程度.结果 两组老年泌尿外科手术患者年龄、体重、性别差异无统计学意义(均P>0.05).Ⅰ组镇痛起效、运动阻滞起效明显快于Ⅱ组,运动阻滞持续时间显著短于Ⅱ组(均P<0.05),两组痛觉消失高平面、运动阻滞大程度、镇痛持续时间比较差异无统计学意义(均P>0.05).Ⅰ组对循环功能无明显影响,Ⅱ组有一过性降低收缩压(SBP)的作用(P<0.05).结论 3%氯普鲁卡因用于老年患者泌尿外科手术硬膜外阻滞具有起效快,镇痛完善,肌松满意,血流动力学稳定等优点,可作为老年患者泌尿外科手术硬膜外阻滞的首选局麻药.
作者：甘亚倩；肖向锋；丁浩；吴俊林 刊期： 2009年第03期
目的 探讨磷酸酯酶活性降低致tau过度磷酸化与细胞凋亡的关系.方法 稳定表达人tau eDNA的鼠成神经瘤细胞(N2a/tau)分3组.对照组不处理;十字孢碱(staurosporine,STP,凋亡诱导剂)处理6 h为STP组;用磷酸酯酶PP-2A的抑制剂冈田酸(okadaic acid,OA)处理4 h,再用STP处理6 h为OA+STP组.流式细胞仪检测凋亡率,免疫印迹检测Ser396位点磷酸化tau(Ser396 p-tau)和总tau的表达,免疫荧光双标检测Ser396 p-tau的阳性产物与活化的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase-3)阳性产物的共定位关系.结果 ①凋亡率:对照组为(4.37±1.47)%,STP组为(19.84±3.25)%,OA+STP组为(12.12±2.46)%;②免疫印迹:OA+STP组Ser396 p-tau的表达明显高于另两组,总tau表达组间无差异;③免疫荧光双标:进一步印证免疫印迹结果,且3组均显示活化的Caspase-3和Ser396 p-tau阳性产物大多不共定位于相同细胞.结论 PP-2A活性降低所致tau Ser396位点的过度磷酸化可抑制细胞凋亡,结合前期的实验进一步明确特殊位点过度磷酸化的tau可抑制细胞进入快速的凋亡程序.
作者：沈建英；徐桂香；左斌；甘辉；肖娟娟；张敏海；汪薇曦；李宏莲 刊期： 2009年第03期
目的 观察转染RECK基因对人骨肉瘤细胞MG-63的MMP-2活化及细胞侵袭力的影响.方法 以脂质体LipofectamineTM2000介导的方法将含RECK全长基因的真核重组表达质粒pcDNA3-RECK转染入MG-63细胞,RT-PCR、流式细胞术检测目的 基因的表达,明胶酶谱法、Matrigel侵袭实验分别检测MG-63细胞MMP-2活化比例及细胞侵袭力变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和细胞生长曲线法观察转染质粒DNA对细胞的毒性作用.结果 转染后RECK基因在MG-63细胞Mrna和蛋白水平分别有稳定高表达;明胶酶谱显示重组质粒转染组MMP一2的活化比例均明显低于正常对照组、空载质粒转染组(均P<0.01),Matrigel侵袭实验显示重组质粒转染组穿透Matrigel的细胞数目均明显低于正常对照组、空载质粒转染组(均P<0.05);而MTT法测重组质粒转染组细胞生长曲线与正常对照组、空载质粒转染组无明显差异(均P>0.05).结论 RECK基因过表达可显著减少骨肉瘤细胞MG-63的MMP-2活化及其侵袭能力,RECK基因可能成为肿瘤治疗的新靶点.
作者：徐亮；郭君红；郭向飞；刘冠军；杨述华 刊期： 2009年第03期
目的 通过对食管鳞状细胞癌癌前病变及其癌组织标本中P63及转化生长因子受体Ⅱ型(T13R-Ⅱ)蛋白表达的研究,探讨两者表达与食管鳞状细胞癌的关系.方法 应用免疫组织化学技术检测P63及TβR-Ⅱ蛋白在正常食管黏膜鳞状上皮和轻、中、重度非典型增生鳞状上皮以及鳞状细胞癌组织共162例中的表达.结果 在食管正常鳞状上皮、非典型增生鳞状上皮及其癌组织中P63蛋白表达的阳性率呈递增趋势(P<0.01),TβR-Ⅱ蛋白表达的阳性率则呈递减趋势(P<0.01).P63和TβR-Ⅱ蛋白的表达与性别无关(均P>0.05),但与癌组织分化程度、浸润深度和淋巴结转移均显著相关(均P<0.05).Spearman等级相关分析结果显示P63和TβR-Ⅱ蛋白的表达与食管鳞状上皮各级病变呈负相关(rs=-0.498,P<0.05).结论 P63和TβR-Ⅱ蛋白的异常表达可能与食管鳞状细胞癌癌变及其生物学行为密切相关,联合检测二者表达可作为判断食管鳞状细胞癌发生、发展和预测转移潜能的生物学指标.
作者：董彩红；敖启林；冯笑山；郝曙光；吴丽娟 刊期： 2009年第03期
目的 构建针对富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2(LRIG2)基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,建立稳定转染的细胞株,观察其对目的 基因表达的影响.方法 根据GenBank中LRIG2基因序列设计2条RNA干扰序列,命名LRIG2-shRNA1、LRIG2-shRNA2,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照.据此设计合成各自的寡核苷酸链,退火后连接入pGenesil 2载体,转化扩增后进行序列测定.用不同浓度的G418作用于GL15细胞,得到G418对于GL15细胞的筛选浓度.3种重组表达载体转染胶质瘤细胞系GL15细胞,用G418筛选后挑单克隆后扩增获得稳定株.逆转录RT-PCR和Western印迹法分别在mRNA和蛋白水平上检测LRIG2的表达.结果 3种重组表达载体(pGenesil 2-LRIG2-shRNA1、pGenesil 2-LRIG2-shRNA2和pGenesil 2-negative shRNA)经限制性酶切及DNA测序分析证明序列插入正确.G418对于GLl5细胞的筛选浓度为600μg/ml,筛选出稳定转染三种质粒的GL15细胞,转染pGenesil 2-LRIG2-shRNA2组细胞LRIG2 mRNA和蛋白表达明显低于转染pGenesil 2-LRIG2-shRNA1、pGenesil 2-negative shRNA组.结论 成功构建了针对LRIG2基因的shRNA表达载体(pGenesil 2-LRIG2-shRNA2),转染细胞后可抑制LRIG2基因表达,为研究LRIG2基因的功能提供了基础.
作者：王宝峰；蔡明俊；陈如东；韩林；郭东生；雷霆 刊期： 2009年第03期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
