魏立新；邹和群；詹林达
目的 了解武汉地区肺炎链球菌的红霉素耐药机制.方法 收集152株肺炎链球菌,琼脂稀释法测定抗菌药物低抑菌浓度,红霉素-克林霉素双纸片扩散法检测耐药表型,聚合酶链式反应检测红霉素耐药基因ermB和mefA.结果 152株肺炎链球菌红霉素耐药率达84.21%(128/152),耐药表型主要为cMLSB (98.44%), 2株菌(1.56%)为M表型耐药.128株红霉素耐药肺炎链球菌ermB基因总检出率98.44%(126/128),其中40株菌(31.25%)同时检出ermB和mefA基因,2株菌(1.56%)仅检出mefA基因.结论 武汉地区红霉素耐药肺炎链球菌的发生率高,ermB基因是主要的耐药机制,介导cMLSB表型耐药,双纸片扩散法对此耐药表型的检测有很好的预见性.
作者：张璟；孙自镛 刊期： 2007年第02期
目的 研究外源性基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)抑制剂强力霉素在肺缺血再灌注损伤中的保护作用.方法 建立大鼠肺缺血再灌注模型,通过明胶酶谱法测定肺泡灌洗液(BAL)中明胶酶即MMP-2、MMP-9活性,免疫组化法测定肺组织中MMP-2、MMP-9的分布及含量,考马斯亮蓝比色法测定BAL中总蛋白的含量, 测定肺组织湿干重比值,观察肺组织病理学改变.结果 肺缺血再灌注后,MMP-2、MMP-9分泌及激活有显著提高,应用强力霉素30 mg/(kg·d)后,MMP-2、MMP-9分泌及激活被显著抑制,BAL中总蛋白含量显著降低,肺组织的病理改变显著减轻.结论 强力霉素通过抑制明胶酶的分泌及激活,降低基底膜的降解,减轻肺水肿,达到肺保护作用.
作者：罗海燕；孙宗全；蒋雄刚；冯汉萍；孙图成；陈新忠；冯剑锷；江萍 刊期： 2007年第02期
目的 快速纯化tau蛋白,制备tau 蛋白的多克隆抗体.方法 依次使用差速离心、热失活、离子交换层析的方法纯化体外重组的人tau蛋白;用此纯化的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,用Western blot检测组织来源的样品,确定所制备抗体的特异性和效价.结果 采用上述方法成功获得人类全长tau蛋白--tau40;同时,所制备的tau蛋白多克隆抗体效价高,特异性好.结论 本方法所获得的tau抗体效价高,特异性好,可以用于进一步的科学研究.
作者：王群；胡茂琼；张蕲；张永杰；徐雅飞；王建枝 刊期： 2007年第02期
目的 研究鼠神经干细胞在二维自组装多肽凝胶支架材料表面生长及分化情况,证明多肽凝胶可作为神经组织工程支架材料.方法 取新生1周内乳鼠的大脑皮质,机械分离出神经干细胞,无血清培养液(DMEM/F12+bFGF+EGF+B27)培养,免疫组化SABC法对神经干细胞进行鉴定;然后,将其接种到凝胶支架材料表面(实验组)及多聚赖氨酸包被的盖玻片表面(对照组),倒置相差显微镜观察干细胞的生长及分化情况.结果 免疫组化法鉴定:培养的细胞为神经干细胞, Nestin(+).神经干细胞可分化为神经元及星形胶质细胞,NSE(+),GFAP(+).倒置相差显微镜观察:实验组中,接种的神经干细胞生长良好,7 d后可分化为有突起神经细胞;对照组中,7 d后未发现长出突起神经细胞.结论 二维自组装多肽凝胶对神经干细胞有良好细胞相容性,可作为神经组织工程支架材料.
作者：庄正陵；郑启新；宋玉林；郭晓东；吴永超；肖锋 刊期： 2007年第02期
目的 构建含日本血吸虫相对分子质量为26 000的抗原(Sj26GST)基因的膜锚定表达DNA疫苗,观察其免疫BALB/c小鼠后的免疫应答效应.方法 用RT-PCR法,以血吸虫成虫RNA为模板,扩增获得Sj26的全长基因.利用重组PCR技术,在Sj26基因的5′端加上编码IL-2的信号肽核苷酸序列,3′端加上编码胎盘碱性磷酸酶的膜锚定序列,然后将其克隆入pIRES载体中,构建一个膜锚定型真核表达质粒pIRES-Sj26.将重组质粒转染HeLa细胞,通过RT-PCR及间接免疫荧光技术检测目的基因的表达.用构建的pIRES-Sj26疫苗肌肉注射免疫BALB/c小鼠后,以ELISA试剂盒检测小鼠血清中的总IgG抗体浓度,脾细胞培养法检测脾淋巴细胞培养上清的干扰素γ(INF-γ)含量,淋巴细胞刺激指数(SI)反映淋巴细胞增殖能力,流式细胞术检测脾细胞CD4/CD8亚群.结果 经过酶切鉴定、PCR及测序证实重组质粒pIRES-Sj26构建成功,经转染HeLa细胞及免疫荧光检测证明质粒pIRES-Sj26能在体外进行表达.免疫小鼠后检测结果表明pIRES-Sj26组的血清总IgG抗体浓度、INF-γ的含量明显高于空白对照组和空载体组(均P＜0.01);其脾SI高于空白对照组和空载体组(P＜0.05);CD8+细胞百分比高于空白对照组和空载体组 (均P＜0.05), CD4+细胞百分比没有显著变化(P＞0.05).结论 成功构建日本血吸虫膜锚定表达DNA疫苗pIRES-Sj26, 表达的Sj26蛋白大部分锚定在细胞膜上.pIRES-Sj26疫苗能增强BALB/c 小鼠的免疫应答反应.
作者：杨平；戴五星；刘朔捷；郭萍；马彦彬；唐成武；程继忠 刊期： 2007年第02期
目的 探讨血管内皮细胞衰老与细胞生物学特征变化的关系.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,通过传代形成细胞的衰老模型.光镜下观察各代细胞的形态结构;流式细胞术检测细胞周期分布和细胞内自发荧光产物的变化;线粒体膜电位特异染色法检测线粒体膜电位的演变.结果 随着细胞传代次数的增加,血管内皮细胞结构逐步退化,细胞分裂减缓,细胞周期趋向停滞于G0/G1期.处于G0/G1期的细胞由第2次传代细胞的74.17%增加至第8次传代细胞的88.80%.细胞自发荧光有显著性增加,线粒体膜电位则有显著性降低.结论 在血管内皮细胞复制性衰老过程中,伴随着细胞形态退化,细胞周期分布异常,细胞内线粒体功能降低,脂质过氧化反应增强.
作者：赵海梅；杨彬；成蓓 刊期： 2007年第02期
目的 为终揭示大鼠背根神经节神经元上天然瞬时外向钾通道的结构与功能调节提供依据.方法 采用双极电压钳技术记录非洲爪蟾卵母细胞上表达的Kv4.2电流,用全细胞膜片钳技术记录大鼠背根神经节神经元上瞬间外向钾电流(IA),并对二者进行动力学特征的比较.结果 背根神经节神经元上IA和Kv4.2通道电流①均具有明显的A型电流特征;②半数大激活电位分别为(-29.5±3.1) mV和(-3.9±1.0) mV;③半数大失活电位分别为(-78.5±3.4) mV和(-48.5±0.6) mV;④失活后再激活恢复时间常数(τ)分别为(32.0±4.8) ms和(71.4±13.2) ms.结论 Kv4.2通道电流可能是背根神经节神经元上IA电流的主要成分, 但不是唯一成分.
作者：聂辉；张玉芹；李享元；余文静；罗加烈；胡霞敏；李之望 刊期： 2007年第02期
目的 研究依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨其对脑出血后脑组织损害的保护作用.方法 36只SD大鼠随机分为依达拉奉组、脑出血组和假手术组,每组12只.用尾状核注射自体血法建立脑出血模型;检测丙二醛(MDA)含量,以TUNEL法及免疫组化法检测神经细胞凋亡数及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化.结果 出血组脑组织MDA含量、细胞凋亡数和Bcl-2、Bax蛋白表达水平均明显高于假手术组;与出血组相比,依达拉奉组MDA含量、细胞凋亡数与Bax蛋白表达水平均下降,而Bcl-2蛋白表达水平显著增高.结论 依达拉奉可抑制出血后神经细胞凋亡,此作用可能与其减轻氧化应激、上调Bcl-2和下调Bax蛋白表达水平有关.
作者：陈吉相；季艳梅；孙圣刚；徐芳 刊期： 2007年第02期
目的 研究丙酮酸乙酯(EP)对缺血/再灌注(I/R)心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨其抑制缺血/再灌注心肌细胞凋亡的可能机制.方法 应用Langendorff主动脉逆行灌流的体外大鼠缺血/再灌注心脏模型,24只雄性大鼠随机分为3组(每组各8只):对照组,K-H液持续灌流120 min;缺血/再灌注组,平衡灌流30 min,全心停灌30 min,再灌60 min;EP组,实验程序与缺血/再灌注组相同,平衡15 min后和再灌注期间灌流使用含2 mmol/L EP的K-H液.检测心肌丙二醛(MDA)含量,分别以缺口末端标记法(TUNEL法)及免疫组化法检测心肌细胞凋亡指数(AI)及Bcl-2、Bax蛋白表达的变化.结果 缺血/再灌注组MDA含量,AI和Bcl-2、Bax蛋白表达水平均明显高于对照组(均P＜0.05);与缺血/再灌注组比较,EP组MDA含量,AI与Bax蛋白表达水平均下降,而Bcl-2蛋白表达水平显著增高(均P＜0.05).结论 EP可抑制缺血/再灌注后心肌细胞凋亡,此作用可能与其减轻氧化应激、上调Bcl-2和下调Bax蛋白表达水平有关.
作者：郭家龙；张凯伦；蒋雄刚；夏家红；孙宗全 刊期： 2007年第02期
目的 应用腺病毒介导的转基因技术,研究过表达线粒体融合素基因-2(mitofusin-2,Mfn2)对WKY大鼠主动脉血管平滑肌细胞(rVSMCs)凋亡的影响并探讨其相关的信号通路.方法 体外培养rVSMCs,感染含有Mfn2基因的腺病毒载体(Adv-Mfn2-GFP).通过免疫组化染色显示细胞凋亡的形态学特征;采用琼脂糖凝胶电泳,Cell Death ELISA观察过表达Mfn2基因对细胞凋亡的影响;用Western blot检测感染Mfn2基因后不同时间点的磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)水平的变化.结果 rVSMCs感染Adv-Mfn2-GFP后能有效表达出相应蛋白;过表达Mfn2基因能明显促进rVSMCs凋亡,并抑制ET-1诱导的Akt活化和ERK活化,此作用显示出时间依赖性,且Akt活化受到的抑制更明显.结论 过表达Mfn2基因能明显促进WKY大鼠主动脉血管平滑肌细胞凋亡,其分子机制是抑制Ras信号途径的活化,分子作用靶点可能是Ras-PI3K-Akt信号通路.
作者：刘成；陈莉莉；王剑明；曹文静；陈光慧；郭小梅 刊期： 2007年第02期
目的 探讨高浓度氧暴露对早产大鼠肺组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1(ND1)表达的影响.方法 早产SD新生大鼠生后1 d随机分为高氧组和空气组,高氧组持续暴露于≥85%氧气中,空气组置于同一室内常压空气中.分别取两组大鼠高氧或空气暴露后1、4、7、10和14 d肺组织标本,采用免疫组织化学和Western blot 方法检测ND1蛋白的表达,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测ND1 mRNA的表达.结果 ①高氧组和空气组各时间点均有ND1蛋白表达;与空气组相比,高氧组在1、4和7 d ND1 蛋白表达增高,随后其表达下降.②与同时间点空气组相比,高氧暴露后1、4和7 d ND1 mRNA表达显著增高(P＜0.05),其后ND1 mRNA表达逐渐下降,10 d和14 d时低于空气组,但两者相比差异无显著性意义(P＞0.05).③ ND1蛋白的表达变化趋势与ND1 mRNA的表达变化趋势一致.结论 高氧导致早产大鼠肺组织ND1表达改变,提示ND1可能参与了高氧肺损伤的病理生理过程.
作者：彭琼玲；常立文；卢红艳；李文斌；蔡成；姜娜 刊期： 2007年第02期
目的 将促黏附分子RGD肽(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)固定于胶原材料,检测其对细胞黏附性的影响.方法 实验分4组(n=12):耦联组采用化学交联剂Sulfo-LC-SPDP,使含RGD肽的GRGDSPC肽与胶原支架结合;混合组将GRGDSPC肽与胶原直接混合后涂层;以及单纯胶原涂层组和未涂层孔板组.采用X射线光电子能谱法(XPS)对材料作表面分析.MTT试验检测种植于材料表面的大鼠肌成纤维细胞的细胞黏附效率.结果 耦联组的XPS谱图检测到硫元素,证明已将RGD肽化学结合于胶原材料表面.MTT法检测显示,耦联组RGD肽固定胶原后细胞黏附效率明显高于其它各组,且呈时间和肽浓度依赖性.结论 RGD肽对胶原的表面修饰,可提高生物源性支架的细胞黏附性,促进组织工程心脏瓣膜构建.
作者：史嘉玮；董念国；孙宗全 刊期： 2007年第02期
目的 探讨褪黑素( melatonin, MT)对谷氨酸(glutamate,Glu)致痫大鼠海马cGMP水平的影响.方法 将健康SD雄性大鼠随机分为A、B、C、D 4组,每组10只,分别为对照组、Glu组、MT+Glu组和Luzidole+MT+Glu组.观察并记录动物行为学及脑电图(EEG)改变,应用放射免疫方法检测各组动物脑内cGMP水平.结果 行为学观察和EEG显示,B组和D组大鼠均出现痫性发作,并出现频发性痫性放电,C组大鼠痫性发作不明显,无频发性痫性放电出现;放射免疫分析结果显示,与A组比较,B、C、D组海马cGMP含量显著升高(均P＜0.05);C组较B组和D组cGMP水平明显降低(P＜0.05).结论 MT对Glu致痫有抑制作用,此作用可能是通过MT受体作用于cGMP实现的.
作者：周厚纶；袁远；卢敏；魏瑛 刊期： 2007年第02期
目的 检测人卵和胚胎中线粒体基因组的表达,探讨线粒体基因表达水平与卵母细胞发育潜能的关系.方法 收集临床常规体外授精(IVF)和单精子卵胞浆内注射(ICSI)不受精的成熟卵母细胞以及不适合移植和冷冻保存的胚胎,单个细胞裂解液制备单个卵母细胞或胚胎总RNA,半定量逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)检测线粒体DNA(mtDNA)编码的5个呼吸链蛋白基因的mRNA含量.结果 在所有未受精人卵和胚胎中都检测到了线粒体5种基因的mRNA;未受精人卵ND2、ND5、COⅡ、Cytb、ATP酶6的mRNA含量分别为:(0.38±0.16)、(0.75±0.31)、(0.49±0.22)、(0.74±0.30)、(0.53±0.24),明显低于胚胎中相应5种基因mRNA的含量,其分别为(2.16±0.41)、(3.40±0.53)、(2.40±0.40)、(3.26±0.46)、(2.32±0.42),与胚胎的mRNA含量相比,均P＜0.01;三原核胚胎和发育阻滞胚胎的5种基因mRNA水平差异没有显著性意义.结论 线粒体基因表达下降可能参与卵母细胞不受精的机制,并与卵母细胞的发育潜能有关.
作者：黄睿；李涛；黄敏珍；张敏芳；庄广伦 刊期： 2007年第02期
目的 观察在大鼠肾病综合征模型中使用3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂洛伐他汀(Lovastatin)治疗对肝脏低密度脂蛋白(LDL)受体表达的影响,探讨他汀类药治疗肾病综合征高脂血症的机制.方法 大鼠2次尾静脉注射阿霉素建立肾病综合征大鼠模型;采用灌胃法给予大鼠洛伐他汀治疗2周.采用Western blot和RT-PCR技术分别检测LDL受体蛋白和其mRNA在肝脏的表达,同时检测大鼠相关血生化指标.结果 肾病综合征大鼠洛伐他汀治疗2周后,血清总胆固醇、LDL胆固醇和三酰甘油以及尿蛋白均显著降低(均P＜0.05),血清白蛋白显著升高(P＜0.05),血肌酐在各组间差异无显著性意义(P＞0.05);肝脏LDL受体蛋白较肾病综合征组显著增加(P＜0.01);肝脏LDL受体mRNA水平在各组间差异无显著性意义.结论 肾病综合征大鼠经洛伐他汀治疗后,其肝脏LDL受体缺乏得到明显改善,伴随的高脂血症也得到明显改善.
作者：魏立新；邹和群；詹林达 刊期： 2007年第02期
目的 探讨儿童非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma, NHL)病理组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)的表达,以及两者表达间的相关性.方法 免疫组织化学SP染色方法检测47例NHL病理切片中的EMMPRIN和MMP-9的表达,采用Spearman等级相关分析方法分析EMMPRIN表达与MMP-9的相关性,同时分析其与临床分期及预后的关系.结果 ①EMMPRIN在儿童NHL的表达阳性率为81%(38/47),其中T细胞型NHL的强阳性率为76%(19/25),B细胞型NHL的强阳性率为36%(8/22),两者强阳性表达率差异有极显著性意义(P＜0.01).② MMP-9在儿童NHL中的表达阳性率为79%(37/47),其中T细胞型NHL的强阳性率为72%(18/25),B细胞型NHL的强阳性率为23%(5/22),两者强阳性表达率差异有极显著性意义(P＜0.01).③ EMMPRIN的表达与MMP-9有显著正相关性(rs=0.913,P＜0.05).④Ⅲ期+Ⅳ期组以及存活时间＜5年组EMMPRIN、MMP-9的强阳性表达率均分别高于Ⅰ期+Ⅱ期组和存活时间≥5年组.结论 儿童NHL细胞高表达EMMPRIN和MMP-9,且T细胞型NHL的表达明显高于B细胞型,两者表达强度与临床分期及预后有关,可能作为NHL预后判断指标之一.
作者：刘爱国；胡群；陶红芳；张柳清；周晟；胡迎 刊期： 2007年第02期
目的 研究神经元型一氧化氮合酶(nNOS)在2～7月龄正常人胎脑大脑皮质和海马结构的表达情况.方法 采用免疫组织化学技术,光镜下观察nNOS在不同月龄正常人胎脑大脑皮质和海马结构的表达情况;利用计算机图像分析技术测量不同月龄额叶皮质和海马结构内嗅区皮质nNOS表达的平均吸光度.结果 光镜下2月龄时人胎脑大脑皮质和海马结构中没有nNOS表达,3月龄时上述部位开始出现nNOS阳性产物的表达,阳性产物主要存在于神经细胞的胞质和突起,胞核不着色.4月龄时阳性产物增多(P＜0.05),5月龄与4月龄之间相比变化不明显(P＞0.05),6、7月龄nNOS表达持续增强(P＜0.05).结论 nNOS在3～7月龄的人胎脑大脑皮质和海马结构中有表达,其表达与胎脑神经细胞的发育规律一致,表明其产物一氧化氮(NO)与人胎脑的发育密切相关.
作者：李洪英；董大翠；张艳 刊期： 2007年第02期
目的 检测胆管癌和癌旁胆管组织中Survivin蛋白和mRNA的表达,探讨其在胆管癌发生发展中的作用.方法 应用免疫组化SP法检测48例胆管癌和其中30例癌旁胆管组织中Survivin蛋白的表达,同时应用RT-PCR技术检测这些组织标本中Survivin mRNA的表达,并与临床病理资料进行相关性分析.结果 48例胆管癌组织中,Survivin蛋白阳性表达率为79.2%(38/48), 在癌旁胆管组织中Survivin蛋白阳性表达率6.7%(2/30),两者比较差异有显著性意义(P＜0.05).48例胆管癌组织中,有30例Survivin mRNA的表达高于配对正常组织, 胆管癌组织中Survivin mRNA的表达水平(2.18±1.21)明显高于正常对照组织(1.01±1.03) (P＜0.05).临床病理资料的相关性分析显示,胆管癌组织中Survivin蛋白和mRNA的表达分布与临床病理特征无相关性.结论 Survivin基因转录和蛋白表达可能参与胆管癌的发生发展过程,检测Survivin表达可能有助于阐明胆管癌的发生机制.
作者：左克强；艾开兴；郭兴军；宋自芳；陈立波；郑启昌 刊期： 2007年第02期
目的 研究5-氟尿嘧啶(5-FU)纳米磁性颗粒在荷瘤裸鼠体内的靶向性分布.方法 制备荷瘤小鼠异位肝癌模型(荷瘤鼠),随机分3组,每组8只.A组:5-FU原液治疗组;B组:单纯5-FU纳米磁性颗粒治疗组,无磁场应用;C组:实验组,在肿瘤内部建立300高斯(GS)的磁场,药物应用同B组.采用高效液相色谱(HPLC)分析法检测离体组织中5-FU药物浓度,原子吸收光谱法(AAS)测定荷瘤鼠组织中的铁浓度,磁共振成像(MRI)检测5-FU纳米磁性颗粒在荷瘤鼠体内组织分布.结果 在肿瘤组织内建立内磁场后,尾静脉注射5-FU纳米磁性颗粒(250 mg/kg),与无磁场的相同药物治疗组及单纯5-FU对照组比较,HPLC检测荷瘤鼠的肿瘤组织中5-FU浓度显著增加(P＜0.01),AAS检测肿瘤组织中铁浓度也显著增加,肿瘤组织MRI的T2加权像发生变化,呈现低信号.结论 在磁场引导下,5-FU纳米磁性颗粒中磁性载体和所载药物在荷瘤鼠体内具有肿瘤靶向性分布.
作者：郑建伟；徐戎；唐滔；王剑明；曾繁典；邹声泉 刊期： 2007年第02期
目的 研究表面活性蛋白B(SP-B)、甲状腺转录因子1(TTF-1)在新生儿肺透明膜病中的表达与分布,并分析SP-B基因结构变化,探讨SP-B在肺透明膜病中的作用.方法 回顾性研究28例新生儿肺透明膜病尸检病例,应用免疫组织化学方法检测SP-B、TTF-1在肺泡Ⅱ型上皮细胞中的表达;通过PCR-SSCP方法检测SP-B基因第4外显子是否有突变.结果 免疫组织化学染色显示SP-B、TTF-1表达显著减少,PCR-SSCP结果未见SP-B第4外显子突变.结论 新生儿肺透明膜病与肺泡Ⅱ型上皮细胞SP-B表达减少有关,SP-B下调可能与TTF-1低表达相关.
作者：李敏才；时燕；李娜萍；吴人亮；王曦 刊期： 2007年第02期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
