学术投稿

小鼠早期胚胎的体外培养研究

肖文伍;邹亚芬;刘登华;傅新巧;张苏明

关键词:小鼠, 2-细胞阻滞, 胚胎培养, 培养基
摘要:目的寻求一种体外稳定培养早期胚胎的方法.方法比较了不同培养基(M1 6、G1、CZB)从受精卵到囊胚的培养效果,并对CZB做了加糖与不加糖、加BSA与15%FBS的比较研究.对体外形成的囊胚做细胞记数以评估胚胎的质量.结果CZB无论加糖还是不加糖,均能有效克服2-细胞阻滞(70.0%~84.6%),加糖CZB囊胚形成率(46.1%~50.0%)更高.受精卵一直在无糖CZB中培养与第3 d后转入加糖CZB培养的桑椹胚和囊胚形成率无显著性差异.CZB中加BSA和15%FBS的培养效果相当.体外培养形成的囊胚较体内发育有迟滞现象,但是细胞记数无显著性差异.结论对于昆明小鼠早期胚胎的体外培养,CZB是较M16、G1更适合的培养基,且CZB中从一开始就应该加糖.CZB中加BSA足可取代FBS,其培养的胚胎无明显异常.
华中科技大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 一氧化氮合酶在门脉高压脾脏及脾静脉中的分布

    目的探讨一氧化氮(NO)在门脉高压发病机制中的作用.方法运用还原型辅酶Ⅱ-黄递酶(NADPH-d)组织化学法对门脉高压患者及动物模型的脾脏及脾静脉中一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)进行定位研究,并以正常大鼠及外伤性脾破裂脾切除患者作为对照.结果门脉高压组脾脏及脾静脉内NOS阳性细胞较对照组明显增多,染色增强,计算机图像半定量分析示两组灰度及光度值具显著性差异(P<0.01).结论NO在门脉高压发病中具有一定作用.

    作者:王天才;张欣;唐望先;梁扩寰 刊期: 2003年第06期

  • 重组人表皮细胞生长因子在小儿Ⅱ度烧伤创面的应用

    目的观察小儿Ⅱ度烧伤创面应用重组人表皮细胞生长因子(rhEGF)的效果.方法对100例小儿烧伤患者采用随机自身对照法,试验组加用rhEGF,对照组不加,同时观察创面愈合情况、局部刺激、全身毒性反应等.结果试验组浅Ⅱ度、深Ⅱ度创面愈合时间分别为(8.9±2.1)d、(15.7±3.4)d;对照组愈合时间分别为(12.7±4.3)d、(20.9±3.1)d,两组间差异均有显著性意义(均为P<0.01),试验组未见不良反应.结论rhEGF有促进小儿Ⅱ度烧伤创面愈合的作用,无不良反应.

    作者:郑中柱;刘杰锋;谢卫国;吴荣宗;周和平;宛士勇 刊期: 2003年第06期

  • 汉坦病毒H8205株G1-人源IL-2融合基因的克隆与表达

    目的构建融合基因pcDNA3.1/His B-IL-2 G1,为进一步研究汉坦病毒新型裸DNA疫苗奠定基础.方法采用PCR从含有人源IL-2的质粒中扩增出IL-2片段,将人源IL-2插入真核表达载体pcDNA3.1/His-B中,构建的质粒命名为pcDNA3.1/His-B-IL-2.同样采用PCR扩增汉坦病毒H8205株G1基因片段,将回收的G1片段经双酶切插入到pcDNA3.1/His-B-IL-2,构建成新的质粒pcDNA3.1/His-B-IL-2-G1.采用脂质体介导包裹,转入NIH3T3细胞中进行瞬时表达;采用原位杂交观察细胞内的基因表达,SDS-PAGE法作重组质粒pcDNA3.1/His-B-IL-2-G1瞬时表达产物的鉴定.结果融合基因可转录并表达一分子量为78 kD左右的蛋白,对照组则未见电泳条带出现.结论成功构建pcDNA3.1/His-B-IL-2-G1融合基因,融合基因能在真核细胞中瞬时表达.

    作者:孙辉;关武祥;黄汉菊 刊期: 2003年第06期

  • 谷氨酸和白细胞介素-1β致痫大鼠海马cAMP含量的变化

    目的研究谷氨酸和白细胞介素1β(interkukin-1β,IL-1β)致痫大鼠海马组织cAMP含量的变化.方法 40只SD雄性大鼠随机分为4组,均行侧脑室注射,A组注射致痫剂量的L-谷氨酸钠;B组联合注射IL-1β和阈下剂量的L-谷氨酸钠;C组注射白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1 receptor antagonist,IL-1 ra)30 min后,再联合注射IL-1β和阈下剂量的L-谷氨酸钠;D组注射等容量的生理盐水.各组均在注射完毕30 min后断头取海马组织,采用放射免疫分析法(RIA)测定4组大鼠海马的cAMP含量.结果A、B两组大鼠均有明显的痫性发作,且海马cAMP的含量均明显高于D组(P<0.05),C组大鼠海马cAMP的含量较B组下降,并且与D组无显著差异.结论在谷氨酸和IL-1β的协同致痫活动中,cAMP参与了其细胞内信号转导过程.

    作者:李莉;李正莉;朱长庚;刘庆莹;于珊;李平 刊期: 2003年第06期

  • CD28、CD80、CD86在银屑病皮损中的表达

    目的研究共同刺激分子CD28、CD80、CD86在银屑病患者皮损中的表达及其在银屑病发生、发展中的作用.方法采用免疫组织化学ABC法检测22例银屑病患者皮损和15例正常对照皮肤中CD28、CD80、CD86的表达水平.结果银屑病皮损中CD28在真皮乳头、表皮基底层及棘层有较强的表达,与正常皮肤相比有显著性差异(P<0.01);CD80、CD86在表皮颗粒层、棘层的表达相对正常皮肤均有明显的增强(P<0.01).结论CD28、CD80、CD86在银屑病发病中起重要作用.

    作者:刘志香;陈爱军;黄长征;涂亚庭;刘厚君;王椿森 刊期: 2003年第06期

  • 氟对人胚肝细胞氧化应激、DNA损伤及凋亡的影响

    目的研究氟对人胚肝细胞(L-02细胞)氧化应激、DNA损伤及诱导凋亡的作用.方法体外培养的L-02细胞接触40、80、160μg/ml氟化钠24 h,检测L-02细胞脂质过氧化物(LPO)水平,还原型谷胱甘肽(GSH)含量,DNA损伤率,细胞凋亡率和周期构成比的情况.结果氟可使L-02细胞LPO水平升高,GSH含量下降,并且二者均与氟浓度呈明显的剂量-效应关系;氟可使L-02细胞DNA损伤率、凋亡率和S期细胞数明显升高,高剂量氟组DNA损伤率和凋亡率与低剂量氟组之间存在显著性差异.结论氟可致L-02细胞出现氧化应激,引起DNA损伤,诱导细胞凋亡,并且三者之间存在明显的相关关系.

    作者:王爱国;邓淑凯;夏涛;褚启龙;张明;刘方;陈学敏;杨克敌 刊期: 2003年第06期

  • 改良面正中掀翻式手术治疗巨大鼻咽纤维血管瘤

    目的探讨对侵及翼腭窝、颞下窝等处的巨大鼻咽纤维血管瘤的改良面正中掀翻手术方法.方法回顾分析8例鼻咽外受侵巨大鼻咽纤维血管瘤的改良面正中掀翻术.结果8例患者术后伤口均愈合好,面部无畸形,鼻腔通气好,1例张口稍受限.结论改良面正中掀翻术是治疗巨大鼻咽纤维血管瘤的一种很好的术式,具有面部无切口、术野清晰等特点.

    作者:陈建军;孔维佳;项济生;杨成璋;余青松 刊期: 2003年第06期

  • 胸主动脉瘤的外科治疗

    目的总结10例胸主动脉瘤的外科治疗经验.方法在体外循环下行主动脉瓣及人造血管置换1例,Ben-tail手术2例,Cabrol手术1例,在左心转流下行降主动脉瘤切除+人造血管移植4例;中度低温停循环主动脉/股动脉交替灌注降主动脉瘤切除2例.结果全组10例无手术死亡及术后并发症的发生.结论手术技术、体外循环方法和术中保护主要器官免受缺血损伤是手术成功关键所在.

    作者:范国华;涂仲凡;黄杰;毛志福 刊期: 2003年第06期

  • 三氧化二砷诱导慢性髓系白血病细胞G2/M周期停滞及其机理

    目的研究三氧化二砷对慢性髓系白血病细胞的体外作用特点及其机理.方法将三氧化二砷与慢性髓性白血病细胞系K562作用后,测定细胞的生长曲线及活性,流式细胞测量术检测细胞凋亡和细胞周期分布的改变;同时,采用RT-PCR方法检测药物作用前后细胞周期相关基因表达的变化.结果①三氧化二砷明显抑制K562细胞的生长,其作用呈时间和浓度依赖性;②三氧化二砷诱导K562细胞凋亡的作用较弱,但可明显诱导K562细胞在G2/M期停滞,此效应也呈时间和浓度依赖性;③三氧化二砷作用后,细胞周期抑制基因p57表达明显上调,而细胞周期促进基因cyclinB的表达受到抑制.结论三氧化二砷能有效抑制慢性髓系白血病细胞的生长,其机理主要为诱导细胞G2/M期周期停滞;该效应与细胞周期相关基因的表达变化有关.

    作者:陈智超;大西一功;游泳;罗建明;邹萍;大野龙三 刊期: 2003年第06期

  • 组蛋白去乙酰化酶1在人肺癌组织中的表达

    目的探讨原发性肺癌组织中组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)的表达及临床意义.方法采用免疫组织化学法和原位杂交法,分别测定28例肺癌组织及其癌旁肺组织中HDAC1表达.结果在28例肺癌组织中HDAC1的蛋白质和mRNA的A值分别为0.21±0.02,0.18±0.03,而其癌旁肺组织中HDAC1的蛋白质和mRNA的A值分别为0.16±0.02,0.11±0.01,两者相比差异均有显著性意义,P<0.05.结论HDAC1在肺癌组织中呈过表达.

    作者:黄宏;张珍祥;徐永健 刊期: 2003年第06期

  • 胎鼠肺细胞的分离纯化及原代培养

    目的建立一套可靠的胎鼠肺细胞分离、纯化和培养技术,用于体外研究肺发育和早产儿肺部疾病.方法采用胰酶和胶原酶消化19 d胎鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化胎鼠肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)和肺成纤维细胞(LF),并进行原代培养.用细胞角蛋白(cytokeratin)和波形蛋白(vimentin)免疫细胞化学染色和透射电镜对所分离的细胞进行鉴定.结果该方法所得细胞产量大、纯度高.免疫细胞化学鉴定,AECⅡ细胞cytoker-atin染色阳性,vimentin染色阴性,LF则相反.透射电镜观察AECⅡ,可见细胞内板层小体.结论该方法是一种可靠的胎鼠肺细胞的分离纯化培养技术,可用于体外研究肺发育与早产儿肺部疾病.

    作者:祝华平;常立文;李文斌;刘汉楚;张谦慎 刊期: 2003年第06期

  • 热休克蛋白60表达和一氧化氮在鼻咽癌中的意义

    目的探讨鼻咽癌患者癌组织中热休克蛋白60(heat shock protein 60,HSP60)及血浆中一氧化氮(ni-tric oxide,NO)在鼻咽癌发生、发展和转移中的作用.方法应用免疫组织化学方法检测鼻咽癌癌组织中HSP60的表达,采用硝酸还原酶法检测鼻咽癌患者血浆中NO的水平.结果①18例慢性鼻咽炎和40例鼻咽癌患者鼻咽粘膜组织中HSP60表达的阳性率分别为33.3%、85.0%,过表达率分别为11.1%、67.5%,两者间的差异有显著性意义(P<0.05).②26例角化性鳞状细胞癌,8例未分化癌和6例非角化性癌的鼻咽癌组织中HSP60表达的阳性率分别为80.8%、87.5%、83.3%,过表达率分别为69.2%、62.5%、66.7%,三者间的差异无显著性意义(P>0.05).③鼻咽癌患者血浆中NO水平[(117.871±31.920)μmol/L]高于慢性鼻咽炎患者[(57.162±22.037)μmol/L]及正常对照组[(40.938±13.474)umol/L],差异均有显著性意义(均为P<0.05).结论鼻咽癌患者癌组织中HSP60表达和血浆中NO水平均增高,可能与鼻咽癌的发生、肿瘤免疫及转移密切相关.

    作者:张明;刘立思;程磊 刊期: 2003年第06期

  • 黄体功能不全的不孕症患者白细胞介素1β的检测

    目的探讨卵泡发育及生殖道局部白细胞介素lβ(IL-1β)与黄体功能不全患者不孕的关系.方法对21例诊断为黄体功能不全的患者,进行B超监测卵泡发育,放射免疫法(RIA)检测排卯期血清、宫颈粘液中IL-1β的表达,用化学发光免疫分析仪测定黄体期血清孕酮水平,并与18例正常组作对照.结果黄体功能不全患者(LPD组)与对照组优势卵泡直径比较差异有显著性(P<0.05),两组黄体中期血清孕酮比较差异有显著性(P<0.01),优势卵泡直径与黄体中期血清孕酮呈正相关(P<0.01).排卵期LPD组血清IL-1β与对照组比较无显著性差异(P>0.05),而宫颈粘液中IL-1β与对照组比较差异有显著性(P<0.05),且宫颈粘液中IL-1β与黄体中期血清孕酮呈负相关(P<0.01).结论排卵期生殖道局部IL-1β的高表达可能是黄体功能不全患者不孕的发病环节中的主要免疫因素之一,并可能间接地影响黄体发育导致黄体功能不全.

    作者:李红发;陆杉 刊期: 2003年第06期

  • 羟氯喹对佐剂关节炎大鼠滑膜肿瘤坏死因子-α表达的影响

    目的探讨羟氯喹(HCQ)对佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法建立AA大鼠模型,并给予HCQ等治疗5个月,动态观测AA大鼠踝关节病理改变,并以免疫组化法检测滑膜组织中TNF-α的表达.结果治疗8周后泼尼松组及HCQ组关节病理积分均比AA组明显减低(P<0.01),TNF-α表达水平明显降低,与AA组及萘普生组相比差异有显著性意义(P<0.01).结论HCQ可明显抑制滑膜组织中TNF-α的表达,减轻关节的炎性反应.

    作者:王金荣;王宏伟;舒健翔;庄建新;韩秀珍;程佩萱 刊期: 2003年第06期

  • 3203例胎儿的产前21-三体综合征超声筛查

    目的建立超声检测胎儿颈部软组织厚度(nuchal skinfold thickness,NT)的正常参考值,探讨该项指标在产前检出染色体异常中21-三体胎儿的价值.方法经腹部超声测量3203例中晚孕期胎儿颈部软组织厚度,并进行统计分析.结果初步得出12~40孕周胎儿NT的参考值范围,应用该项指标超声检测21-三体胎儿,其敏感性为66.67%,特异性为95.06%,准确性为95.00%.结论NT超声测值对21-三体胎儿的筛查有重要参考价值.

    作者:陈彦红;许春梅;严思萍;马刚;莫伟英;王小燕;康利克;张永兵;黄向红;陈美芳 刊期: 2003年第06期

  • 活化的过氧化物酶体增生物激活受体-γ诱导人类肺癌细胞凋亡及其机制的研究

    作者: 刊期: 2003年第06期

  • 体外培育牛黄治疗流行性乙型脑炎的临床研究

    目的观察体外培育牛黄治疗暑温风痰闭窍证[流行性乙型脑炎(乙脑)]的临床疗效及安全性.方法采用随机单盲对照法,与单味天然牛黄对照研究,共治疗乙脑患者165例,其中体外培育牛黄治疗组124例,天然牛黄对照组41例.结果治疗组与对照组的痊愈率、显效率分别为38.7%、54.0%和31.7%、43.9%,总有效率分别为99.2%,87.8%.两种牛黄均有较好的疗效.心电图及实验室各项检查表明,两种牛黄治疗患者均未见明显毒副作用和不良反应.结论单味体外培育牛黄治疗流行性乙型脑炎疗效显著.

    作者:蔡红娇;汪世元;张渝候;李强民;夏瑾瑜;王奇;谢红;赖世隆 刊期: 2003年第06期

  • 重型肝炎患者fgl2凝血酶原酶基因的表达

    目的探讨重型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMNC)中fgl2凝血酶原酶mRNA的变化及其意义.方法选择重型肝炎患者18例,非重型急性肝炎15例、非重型慢性肝炎14例,应用RT-PCR方法对其外周血fgl2凝血酶原酶mRNA进行半定量检测.结果重型肝炎组外周血fgl2凝血酶原酶mRNA与β-actin mRNA表达灰度值比值为1.55±0.23,明显高于非重型急性肝炎组(1.34±0.18)、非重型慢性肝炎组(1.29±0.16)及正常对照组(1.31±o.12),均为P<0.01.结论重型肝炎患者的肝坏死可能与fgl2凝血酶原酶的高表达有关,为重型肝炎的诊疗提 供了新的策略.

    作者:李学军;夏凌辉;魏文宁;黄加权;胡豫;宋善俊 刊期: 2003年第06期

  • 绿舒筋生物总碱的体外抗乳腺癌细胞株效应

    目的研究绿舒筋对体外培养乳腺癌细胞株的抑制效应.方法采用乳酸脱氢酶释放法测定绿舒筋、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、环磷酰胺对体外培养乳腺癌细胞株的毒性作用.结果绿舒筋具有抑制肿瘤细胞生长作用,并随药物浓度增加其效应增强,其效应类似于5-Fu和环磷酰胺.结论绿舒筋具有较好的抗肿瘤细胞生长作用,可望成为临床抗癌药物.

    作者:吴建国;曾凡波;杨敬 刊期: 2003年第06期

  • 146例HIV/AIDS患者临床特征分析

    目的分析近3年湖北地区部分HIV/AIDS患者流行病学及临床特征.方法收集146例HIV/AIDS患者临床资料,并从流行情况、临床表现及辅助检查指标等方面作回顾性分析.结果患者中男性占59.6%,农民占63.7%,已知感染途径者以血液传播为主(57/82).发热、消瘦及皮肤、口腔感染为主要临床特征,常伴发丙型肝炎和结核等疾病,WBC总数及CD4 T淋巴细胞数明显减少.接受正规治疗者较少.结论湖北地区HIV/AIDS患者逐年增加,且临床表现复杂易致误诊.应增强防范意识,加大预防及治疗力度.

    作者:宋建新;邢铭友;谭明格;吴春明;李国军;王为华 刊期: 2003年第06期

华中科技大学学报(医学版)杂志

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