李文姝；田晓娟；林晓云；刘建晓；朱珊丽；薛向阳；张丽芳
本文针对新形势下五年制医学生的特点,通过全面提升教师素质,打造一流教学团队,对学生全面分析,做到因材施教,探索多种教学模式,以提高教学效果.为医学寄生虫学教学提供一定的参考和借鉴作用.
作者：陈光；蔡连顺；罗兰；毕胜；苏菊香；代月 刊期： 2014年第02期
目的 对大理地区HIV感染合并丙型肝炎患者进行丙型肝炎病毒(HCV)基因分型研究. 方法 采集患者血液,提取RNA,采用HCV特异性引物进行巢式RT PCR扩增,PCR产物直接测序,采用生物信息学软件进行序列分析. 结果 在大理州人民医院共采集疑似丙型肝炎病人血清13份,HCV核酸检测4份(24～27号)阳性.序列分析显示4株病毒之间核苷酸同源性在80.4％～95.8％之间;24号与1b型HCV核苷酸同源性在98.6％以上,而其他基因型病毒核苷酸同源性在90.2％以下;25、27号与3b型HCV核苷酸同源性在92.1％～98.6％之间,而与其他基因型核苷酸同源性均在87.4％以下;26号与3a型HCV核苷酸同源性在94.4％～94.9％之间,而与其他基因型病毒核苷酸同源性在84.6％以下.遗传进化分析显示25、27号病例为3b HCV感染,26号病例为3a HCV感染,24号为1b HCV感染. 结论 大理地区HIV感染人群中存在HCV基因1和基因3两个基因型,3a、3b和1b3个基因亚型HCV感染.
作者：王佳丽；王静林；王育芳；杨红樱；马顺高；宝福凯 刊期： 2014年第02期
目的 观察重组弓形虫肌动蛋白解聚因子(Recombinant Toxoplasma gondii actin depolymerizing factor,rTgADF)滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答及抗弓形虫攻击的保护作用. 方法 40只雌性BALB/c小鼠随机分为2组,分别用30 μg rTgADF(溶于20μl PBS)和20μl PBS于第0、14和21d各滴鼻免疫1次.末次免疫后14 d,每组处死小鼠5只,ELISA法测定血清IgA、IgG和IgG1/IgG2a及鼻咽、阴道和小肠冲洗液sIgA以及脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10水平.每组另取5只小鼠,用4×104RH株弓形虫速殖子/只灌胃攻击(致死性),观察小鼠健康状况并计算存活率.其余小鼠用1×104速殖子/只灌胃攻击(慢性),攻击后30 d处死,计数肝、脑组织速殖子. 结果 rTgADF诱发小鼠产生较强的系统免疫和黏膜免疫应答,免疫组小鼠血清IgG、IgA和IgG1/IgG2a水平与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),鼻咽、阴道和小肠冲洗液sIgA水平与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),脾淋巴细胞培养液上清中IFN-γ和IL-2、IL-4水平与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),IL-10水平组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).致死性攻击后30 d,对照组小鼠全部死亡,免疫组小鼠存活率为20％,差异有统计学意义(P＜0.01);慢性感染后30 d,免疫组小鼠肝和脑虫荷分别比对照组减少63.87％(P＜0.01)和50.14％(P＜0.05). 结论 rTgADF滴鼻免疫小鼠诱导产生较强的黏膜及系统免疫应答,并可部分抵抗弓形虫致死性和慢性攻击,可作为弓形虫候选蛋白疫苗.
作者：关丽；张铁娥；王海龙；孟晓丽；杨建一；殷国荣 刊期： 2014年第02期
目的 探讨中华圆田螺多糖对小鼠酒精性肝损伤的保护作用. 方法 将昆明种小鼠随机分成6组,分别为健康对照组、模型对照组、阳性对照组、中华圆田螺多糖低剂量组、中剂量组和高剂量组.模型组小鼠用56℃红星二锅头12 ml/(d·kg)体重灌胃,连续10 d;药物组在给予同等量酒精灌胃的同时分别用低剂量、中剂量和高剂量中华圆田螺多糖灌胃,连续10 d;阳性对照组按80 mg/(d·kg)体重灌胃益肝灵;健康对照组每天用等量生理盐水灌胃.末次灌胃后摘眼球取血,分离血清,测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;处死小鼠,取肝脏,制成肝匀浆,检测超氧化物歧化酶(SOD)活性剂及丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量.同时光镜下观察肝组织病理形态学的改变. 结果 中华圆田螺多糖中、高剂量组小鼠血清ALT、AST分别为(46.22±10.61、43.06±11.18)U/L和(135.64±24.53、119.17±23.17)U/L,与模型组(66.71±15.46)U/L和(196.22±42.13)U/L比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);中华圆田螺多糖低、中、高剂量组小鼠肝脏SOD和MDA分别为(161.36±15.67、170.69±14.73、175.12±16.77)U/mg prot和(1.37±0.39、1.18±0.26、1.10±0.28) nmol/mg prot,与模型组(140.86±13.36)U/mg prot和(1.84±0.57)nmol/mg prot比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);中华圆田螺多糖中、高剂量组GSH为(237.44±43.37、248.96±33.10)nmol/mg prot,与模型组(202.62±39.88)nmol/mg prot比较差异有统计学意义(P＜0.05).肝脏病理切片显示中华圆田螺多糖各剂量组对酒精性肝损伤小鼠肝细胞变性、坏死、炎性细胞浸润程度有改善作用. 结论 中华圆田螺多糖能降低血清ALT、AST活性和肝脏MDA含量,增加血清SOD活性,提高肝脏GSH含量,对酒精性肝损伤具有一定保护作用.
作者：范巧云；李朝品；王克霞 刊期： 2014年第02期
目的 克隆鉴定细粒棘球绦虫原头蚴核糖体蛋白S9基因,分析其在细粒棘球绦虫不同发育阶段的表达情况.方法 从已构建的cDNA文库挑选基因,克隆EgRPS9基因并对编码产物的理化性质、功能位点、蛋白质的结构和功能域进行预测和分析,通过RealTime-PCR检测RPS9基因在细粒棘球绦虫不同发育阶段的表达情况. 结果 通过各种生物数据库对EgRPS9基因进行预测并测序,显示该基因具有完整开放阅读框,大小为564 bp,编码188个氨基酸,预测分子质量单位为22.0 ku,等电点为10.32.SMART保守功能区域分析发现该基因第107～149个氨基酸为40 S亚基S9结构域S4超家族.通过多序列比对发现该基因具有较高的保守性,进化树结果表明该基因与曼式血吸虫、日本血吸虫及华氏睾吸虫亲缘关系较近.Real time-PCR检测原头蚴和囊泡RPS9基因相对表达量分别为1.16和1.02,差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 成功克隆出细粒棘球绦虫40S亚基RPS9新基因,该基因在细粒棘球绦虫不同发育阶段均有表达.
作者：肖云峰；刘辉；吕国栋；赵军；高惠静；李娟；王建华 刊期： 2014年第02期
实验课在人体寄生虫学教学中非常重要,是理论与实践研究的技术基础.能够培养学生解决临床实际问题的能力及理论与实践相结合的能力.改革实验教学,调动学生的积极性,培养他们的创造意识和创新能力,使我国目前培养出的医学生在理论上和实验操作技能上都达到符合要求的水平.
作者：耿志辉；耿玮峥；许宗革；马琳；刘利 刊期： 2014年第02期
目的 了解天津地区不同年份福氏志贺菌血清型分布,整合子携带情况,耐药性及其变化趋势. 方法 采用血清学方法对天津地区不同年份分离的56株福氏志贺菌进行分型;PCR扩增整合子整合酶及可变区,并测序;采用KB法测定其对16种抗菌药物的敏感性. 结果 1981～1983年分离株福氏志贺菌1类整合酶阳性率为87.50％(28/32),其中27株可变区含氨基糖苷类药物耐药基因aadA;2009～2011年分离株福氏志贺菌1类整合酶阳性率为91.67％(22/24),可变区及3'末端扩增均阴性.1981～1983年分离株福氏志贺菌2类整合酶均阴性;2009～2011年分离株福氏志贺菌2类整合酶阳性率79.17％(19/24),可变区含dfrA1、sat1、aadA1,介导对甲氧苄啶、链丝菌素和链霉素耐药.有17株福氏志贺菌1、2类整合酶均阳性.1981～1983年分离株福氏志贺菌对四环素、链霉素、氯霉素及甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐药率高,多重耐药率为65.63％;2009～2011年分离株福氏志贺菌对氨苄西林、链霉素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、哌拉西林和四环素耐药率高,多重耐药率为83.33％. 结论 1、2类整合子广泛存在于天津地区福氏志贺菌中,其中1类整合子3 '保守末端可能缺失或存在变异.2009～2011年分离株福氏志贺菌对抗菌药物耐药性较1981～1983年分离株增强,多重耐药率增高.福氏志贺菌优势血清型发生转变,血清型分布呈现多样化.
作者：王俊；祁伟；王淑香；郭文学 刊期： 2014年第02期
目的 研究HPV L1携带EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2(LMP2)多表位DNA联合多肽的免疫效应. 方法 BALB/c雌性小鼠随机分为4组.pcHPVL1-EBV LMP2 DNA免疫组,肌肉注射pcDNA3.1(+)/HPVL1-EBV LMP2多表位DNA,每鼠每次100 μg;DNA联合多肽免疫组:先用DNA免疫,每鼠每次50 μg,同时皮下注射EBV LMP2多表位肽,每鼠每次5 μg;DNA免疫对照组:肌肉免疫空载体pcDNA3.1(+),每鼠每次100 μg;多肽免疫对照组:每鼠每次10 μg皮下注射不相关多肽.共免疫4次,间隔2周.免疫后第7周收集小鼠血清,采用ELISA法检测小鼠EBV LMP2特异性抗体IgG、IgA以及HPVL1特异性抗体IgG;免疫后第9周测定EBV特异性抗体IgG1与IgG2a亚类,同时采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定小鼠脾细胞CTL的杀伤活性. 结果 多肽联合DNA免疫组小鼠血清EBV LMP2特异性抗体IgG、IgA A值分别为1.573±0.025和0.436±0.033,单独DNA免疫组分别为1.282±0.051和0.317±0.022,差异有统计学意义(F=80.393,27.722,P＜0.05);两免疫组小鼠血清HPV L1特异性IgG A值别为0.648±0.063和0.702±0.023,差异无统计学意义(F=1.952,P＞0.05).DNA免疫组IgG1和IgG2a A值别为0.723±0.023和0.594±0.084,差异无统计学意义(F=6.643,P＞0.05),是混合Th1/Th2免疫反应类型;多肽联合DNA免疫组IgG1和IgG2aA值别为0.897±0.042和0.629±0.035,差异有统计学意义(F=72.306,P＜0.05),是偏向Th2免疫反应类型.多肽联合DNA免疫组在效靶比为10∶1时,小鼠脾细胞CTL杀伤效应(杀伤率)为27.70％,DNA免疫组为21.50％,差异有统计学意义(F=51.559,P＜0.05). 结论 多肽联合DNA免疫可产生有效的CTL杀伤效应,更能发挥有效的体液免疫作用,其免疫策略可为EBV相关肿瘤的免疫治疗提供参考.
作者：李文姝；田晓娟；林晓云；刘建晓；朱珊丽；薛向阳；张丽芳 刊期： 2014年第02期
开放共享的人体寄生虫资源库是开展寄生虫学和寄生虫病防治研究的物质基础.本文在建设人体寄生虫种质资源库中强调“双共享”这一理念和思路.通过实施数据库建设、网站建设和免费开放实物种质资源库等提升其在教学服务、科研服务、科普教育服务和社会服务的水平,以进一步提升华南地区乃至我国寄生虫种质资源的保护和利用水平.
作者：黄锦桃；李美玉；陈剑煌；张瑞琳；陈省平 刊期： 2014年第02期
蚊类不仅吸血骚扰,而且传播多种严重疾病.本文就我国疟疾媒介鉴定及基因特征,登革热媒介白纹伊蚊基因特征与易感性做了综述,并就淋巴丝虫病媒介与乙脑媒介做了概要.
作者：郑学礼 刊期： 2014年第02期
结核病是当今世界主要的致死疾病之一,早期诊断是控制结核病的关键,血清学实验是结核诊断的重要依据.随着科学技术的进步,新的结核诊断用抗原不断被发现.本文概述了38 ku蛋白、Ag85复合体、MPT64蛋白、ESAT-6蛋白、CFP-10蛋白、16 ku蛋白、MTB81、MTB84和U1蛋白等9种结核分枝杆菌重要抗原的研究进展,并对其应用策略进行了探讨.
作者：聂恒；吴利先 刊期： 2014年第02期
目的 建立针对高致病性2型猪链球菌(Streptococcus suis 2,SS2)89K毒力岛Ⅳ型分泌系统的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法. 方法 根据国内流行株特有89K毒力岛编码的Ⅳ型分泌系统(T4SS-89K)的virB4 89K基因保守区域设计并合成LAMP引物,通过优化反应体系和扩增条件建立T4SS-89K快速检测方法,对方法的特异性、敏感性进行评估. 结果 优化的LAMP反应体系具有良好的扩增效率,检测灵敏度为1.53×101拷贝/反应,全部扩增检测可在60 min内完成;建立的LAMP法具有良好的特异性,与不含T4SS-89K的猪链球菌(包括1/2型、1型、3～33型),以及其他常见9种对照菌均不发生特异性扩增,而与1998和2005年疫情现场分离的高致病性SS2均可发生特异性扩增. 结论 建立的LAMP方法具有特异、灵敏,设备要求简单等特点,可用于高致病性SS2快速检测.
作者：张凤玉；胡丹；吕恒；张锦海；郝丽娜；龚秀芳；操敏；郑峰；耿美玲 刊期： 2014年第02期
目的 通过对实验条件的优化,建立一种高感染率和低死亡率的肺孢子菌感染模型诱导方法. 方法 以免疫抑制剂诱导大鼠自然感染肺孢子菌为基本方法,对比不同剂量、不同预处理方法、不同季节等因素对诱导大鼠肺孢子菌感染模型的成功率、感染度及动物死亡率等的影响. 结果 每鼠每次腹膜下注射2.5mg地塞米松(每周两次)至第8周,诱导的肺孢子菌感染率为87.50％,死亡率为0,3 mg地塞米松组第7周诱导的肺孢子菌感染率为87.50％,死亡率为37.50％,2.0和3.5 mg组感染率、死亡率分别为12.50％、0和75.00％、75.00％,差异有统计学意义(P＜0.05);乙醚麻醉组肺孢子菌感染率为100％,非麻醉组为50.00％,差异有统计学意义(P＜0.05);4～6月期间诱导的大鼠肺孢子菌感染率为62.50％,7～9月期间诱导的大鼠肺孢子菌感染率为100％,11月～次年1月组感染率为37.50％,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 地塞米松腹腔内注射诱导大鼠感染肺孢子菌,以每鼠每次2.5～3 mg为佳剂量;辅助乙醚吸入麻醉可提高肺孢子菌感染率;夏秋季节诱导的大鼠肺孢子菌感染率较高.
作者：国九英；樊华；张楠；马素丽；刘生；李盛格；安春丽 刊期： 2014年第02期
目的 建立一种快速检测布鲁氏菌抗体的新方法. 方法 利用胶体金免疫层析技术,以大肠埃希菌表达、纯化的OMP31与BP26重组蛋白作为检测抗原,以金黄葡萄球菌A蛋白(SPA)作为胶体金标记物,制备胶体金免疫层析试纸条,用于检测布鲁氏菌抗体,并分析方法的敏感性和特异性. 结果 以粒径为40 nm胶体金制备的试纸条检测布鲁氏菌抗体的敏感性高,胶体金佳标记pH为6.2,SPA蛋白适标记量为6μg/ml.交叉试验证明试纸条不与其他非相关疾病感染血清反应,特异性高.试纸条检测结果与琥红平板试验方法的符合率为92％. 结论 制备的布鲁氏菌抗体胶体金免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,可用于鉴别布鲁氏菌自然感染和人工免疫,并可区分牛、羊种布鲁氏菌感染,可在基层推广使用.
作者：程婷婷；石峰；陈创夫；王远志；张辉；李志强；鲁芝子；监通；马齐蔓 刊期： 2014年第02期
整合医学微生物学和人体寄生虫学建立病原生物学学科是追求先进医学教育理念,顺应医学教学改革发展潮流的必然结果.病原生物学学科的建立有利于构建完整的病原学知识体系,也有利于实现教学和科研资源的共享.人体寄生虫学的发展在现今世界范围内普遍受到忽视,纳入病原生物学学科体系之后势必改善其不断萎缩之势.整合课程建设为加快病原生物学学科发展提供了契机.针对病原生物学整合课程建设,笔者提出了以下建议:以器官系统为主线重新组织教学内容,建立PBL或CBL的教学方法,培养一支能上整合课程的教师队伍.
作者：朱涛 刊期： 2014年第02期
目的 分离并鉴定2010年云南省昆明市甲型肝炎患儿粪便标本中混存的ECHO20 (Echovirus 20,ECHO20)KM/EV20/2010病毒株,分析其VP1基因遗传特征. 方法 采用KMB17细胞对大便标本进行病毒分离;采用微量细胞病变法,经WHO肠道病毒组合血清及单价血清对该分离株进行鉴定;采用RT-PCR法扩增病毒VP1基因并进行序列测定,并运用Mega 4.0等软件进行分析处理. 结果 分离毒株经微量中和试验鉴定为ECHO20血清型,编号为KM/EV20/2010;经RT-PCR法扩增获得为867 bp的VP1基因,与国内分离株核苷酸和氨基酸的同源性分别为79.5％～91.7％和98.9％～99.6％,与国外分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别为80.2％～83.2％和96.4％～99.6％;在进化树上云南分离株与GenBank中登录的中国国内2001年山东分离株01352和1998年法国分离株94CF1666形成一个进化分支. 结论 KM/EV20/2010分离株为肠道病毒ECHO20型病毒,可用KMB17人二倍体胚肺成纤维细胞分离增殖.
作者：潘玥；邵聪文；吉玛；朱艳菊；张云昆；马忠飞；刘建生；马绍辉 刊期： 2014年第02期
目的 比较疟疾实验室检测方法,分析疟疾标本的检测结果. 方法 分别用吉氏染色镜检、巢氏PCR和序列分析方法对2012年河南省收集的165份疟疾标本进行检测,并对检测方法及结果进行分析比较. 结果 综合分析镜检、巢氏PCR和序列分析等3种方法的检测结果,165份疟疾标本的阳性率为93.94％,其中镜检和巢氏PCR阳性率分别为87.88％和90.30％;两种方法对疟原虫虫种的误判率为10.32％,其中对间日疟原虫、卵形疟原虫和三日疟原虫的误判率分别为42.86％、40.00％和28.57％,而对恶性疟原虫的误判率为0.85％. 结论 姬氏染色镜检和巢氏PCR两种方法在疟疾检测中各有优缺点,建议2种方法结合使用以提高疟疾诊断的准确率.
作者：周瑞敏；刘颖；钱丹；赵玉玲；张红卫；颜秋叶；苏云普；赵旭东；许汴利 刊期： 2014年第02期
目的 鉴定杜氏利什曼原虫无鞭毛体特异表达抗原. 方法 培养杜氏利什曼原虫前鞭毛体并体外转化无鞭毛体,其总蛋白经2-DE电泳后以小鼠抗杜氏利什曼原虫无鞭毛体血清进行Western blot,对前鞭毛体与无鞭毛体特异表达抗原蛋白进行MALDI-TOF/TOF串联质谱鉴定.重组表达无鞭毛体特异表达抗原编码基因,以Western blot法对重组蛋白进行鉴定. 结果 等量的杜氏利什曼原虫前鞭毛体与无鞭毛体蛋白经2-DE电泳均可呈现680～742个蛋白点,Western blot及MALDI-TOF/TOF-MS分析甘油醛3磷酸脱氢酶与延伸因子2为杜氏利什曼原虫前鞭毛体特异表达抗原,核苷二磷酸激酶为无鞭毛体特异表达抗原.重组核苷二磷酸激酶编码基因表达产物经Western blot证实为杜氏利什曼原虫无鞭毛体特异表达强抗原. 结论 杜氏利什曼原虫前鞭毛体与无鞭毛体抗原表达存在差异,核苷二磷酸激酶为杜氏利什曼原虫无鞭毛体特异表达强抗原.
作者：王健；关望；张仁刚；张洁；敬保迁 刊期： 2014年第02期
目的 观察细粒棘球蚴早期感染BALB/c小鼠TGF-β1的表达情况. 方法 用细粒棘球蚴感染BALB/c小鼠,分别于感染后第1、3、5、7、9、12d处死,取其脾细胞和外周血,采用酶联免疫法检测外周血细胞因子TGF-β1的含量,采用qRT-PCR法检测TGF-β1基因的表达量. 结果 实验鼠Eg感染后第1～12 d,外周血 TGF-β1的含量为2 695.79～3 055.09 ng/ml,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);TGF-β1 mRNA相对表达量为0.029～0.060,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).TGF-β1及其mRNA表达量均有随着感染时间延长呈增高的趋势. 结论 TGF-β1在小鼠细粒棘球蚴感染早期表达增加,可能有利于细粒棘球蚴的免疫逃逸.
作者：印双红；陈小林；徐芳洁；张旭勇；吴向未；陈雪玲；侯隽；李迎利；王洪涛 刊期： 2014年第02期
目的 在毕赤酵母中分泌表达具有抗菌活性的杂合抗菌肽Cecropin P1-Dermaseptin S4(CP1-DS4). 方法 根据毕赤酵母密码子的偏爱性优化Cecropin P1和Dermaseptin S4两抗菌肽基因序列,通过SOE-PCR拼接,构建克隆载体pMD18T-cp1-ds4并测序;pMD18T-cp1-ds4经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切后构建重组表达载体pPICZαA-cp1-ds4,测序验证开放阅读框(ORF)正确后经SacⅠ线性化处理,然后电转化毕赤酵母X-33(800V,1mm电转化杯,15s电击1次)并利用Zeocin筛选阳性重组子.重组子接种BMGY、BMMY培养基,采用5％的甲醇诱导表达,采用Tricine-SDS-PAGE分析表达上清,表达上清浓缩后进行抑菌试验. 结果 在本研究中拼接引物经SOE PCR拼接后得到优化的长度为120bp的Dermaseptin S4基因基因片段,该片段与Cecropin P1基因连接形成约197bp杂合抗菌肽片段,成功构建pPICZdA-cp1-ds4表达载体,电转化获得重组酵母菌pPICZαA-cp1-ds4/X-33,经诱导后可产生分子质量单位约为9.7 ku的目的多肽,该多肽对大肠埃希菌和金黄葡萄球菌均有抑制作用. 结论 杂合肽CP1-DS4可以在毕赤酵母X-33中融合分泌表达,且具有抗菌活性.
作者：孙长峰；仲维霞；王洪法；崔勇；赵桂华 刊期： 2014年第02期
中国病原生物学杂志
主管:中国寄生虫病防治杂志
主办：中华人民共和国卫生部
