夏向群；蒋素文；胡爱荣；胡耀仁；胡婷；金珊珊；邓勤智
目的 对比分析乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭(ACLF)早期(6个月)及远期(10年)预后的影响因素,为指导临床治疗及随访管理提供参考价值.方法 选取2001年1月至2009年12月住院的524例ACLF患者的临床资料,随访终止时间为2013年12月;所有患者均给予内科综合治疗,并依据患者的知情选择给予或不给予核苷/核苷酸类药物(NAs)和人工肝治疗,对可能影响其预后的因素进行Cox回归分析.结果 ACLF患者近期预后的影响因素大小依次为终末期肝病模型评分、患者年龄、中性粒细胞比率、合并肝性脑病、NAs抗病毒治疗与否、HBV DNA水平、人工肝血浆置换治疗次数、胆碱酯酶和总胆红素(P＜0.05);远期预后的影响因素大小依次为患者年龄、NAs应用与否、MELD评分、胆碱酯酶、伴随感染、白细胞计数、患者性别和肝性脑病(P＜0.05),其中NAs抗病毒治疗是一个时间依赖性的独立预后因素.结论 ACLF早期及远期预后的影响因素有所差异,患者的早期治疗及远期随访管理均需要持续NAs抗病毒治疗、改善肝脏功能、防治感染和肝性脑病等并发症,早期治疗还需要积极给予人工肝治疗.
作者：夏向群；蒋素文；胡爱荣；胡耀仁；胡婷；金珊珊；邓勤智 刊期： 2016年第03期
目的 探讨梅州地区女性HPV感染情况与基因亚型分布,为该地区宫颈癌的预防和治疗提供数据资料.方法 运用导流杂交基因芯片技术对24 450例就诊女性的宫颈脱落细胞标本进行HPV基因分型检测,并对HPV基因亚型感染情况进行对比分析.结果 24450例标本中检测出HPV阳性者3 922例,感染率为16.04％.在阳性标本中,HPV高危型阳性率高的前3位依次是HPV-16(30.37％)、HPV-52(17.77％)和HPV-58(15.53％),低危型以HPV-CP8304为主(5.61％).30 ～ 50岁是HPV感染的高峰年龄段,HPV阳性检出率在各年龄组的差异有统计学意义(P ＜0.001).结论 梅州地区就诊女性常见的HPV亚型是16型,30 ～50岁是HPV感染高发人群,HPV基因分型对宫颈癌的预防和治疗具有积极的指导意义.
作者：赵平森；贾润清；林利芳；苏鲁贤；钟志雄；曾毅 刊期： 2016年第03期
肝纤维化的早期诊断,对于慢性乙型肝炎(HBV)的进展预判、治疗方案的选择及长期管理均有十分重要的意义[1].并于2015年由欧洲肝病学会和拉丁美洲肝病学会(EASL-ALEH)联合制订了无创检查评估肝脏疾病严重程度及预后的临床指南[2].该指南认为肝脏硬度(Liver stiffness)测定是重要的无创诊断手段之一,其基于瞬时弹性成像(transient elastography,TE)、声辐射力脉冲(acoustic radiation force impulse,ARFI)成像等检查手段.
作者：殷骅；毛达峰；高国生；胡爱荣；胡耀仁 刊期： 2016年第03期
目的 分析河北卢龙县腹泻儿童粪便标本中存在的诺如病毒株NHBGR59的全基因组序列,了解其基因结构特点和进化特征.方法 根据454高通量测序获得的两个重叠群(contig)和诺如病毒参考株序列(GenBank登录号KM198534)设计NHBGR59特异性引物,用重叠反转录聚合酶链反应(Reverse transcription PCR,RT-PCR)和cDNA末端快速扩增的技术(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)的方法扩增其全长基因,经过分子克隆、测序获得全基因组序列,然后进行三个开放阅读框(Open Reading Frames,ORFs)序列和系统进化树的分析.结果 诺如病毒河北卢龙珠HBGR59病毒全基因组全长为7 563 bp(除了PolyA尾),病毒基因组分为三个ORFs:ORF1(5～5 098 nt)、ORF2(5 079 ～6 731 nt)和ORF3(6 731 ～7 510 nt),其中ORF1和ORF2之间有20 bp重叠,ORF2和ORF3之间有1 bp重叠.经过全基因组序列分析发现其和基因组Ⅱ基因型6(genogroup Ⅱ GenotypeV,GⅡ.6)诺如病毒株30443同源性高(同源性为98.0％).ORF2以及ORF3核苷酸和氨基酸序列与株30443同源性高(分别为97.0％,98.0％;99.0％,98.0％).ORF1的基因和氨基酸序列与台湾暴发的急性胃肠炎GⅡ.6株11-F J-5(GenBank号KM461694)同源性高(99.0％,99.3％),只在高突变P2区发生一个氨基酸突变位点:aa308 D→N;其中衣壳区的氨基酸序列与其他GⅡ.6型诺如病毒相似度为73.0％ ～99.3％.进化树分析发现河北卢龙株HBGR59与GⅡ.6型株30443和11-FJ-5亲缘关系近.结论 河北卢龙株HBGR59为诺如病毒GⅡ.6型,进化关系上与已报道的GⅡ.6型株30443和1l-FJ-5近.
作者：敖元云；虞结梅；李莉莉；靳淼；段招军 刊期： 2016年第03期
目的 研究人类免疫缺陷病毒(HIV)特异性CD8T细胞在体外增殖反应的影响因素.方法 应用3种不同的抗原刺激方式在体外刺激HIV感染者病毒特异性CD8 T细胞增殖,并比较在培养体系中添加外源性细胞生长因子IL-2对HIV特异性CD8 T细胞增殖的影响.结果 与将MHCI匹配HIV抗原肽直接加入外周血淋巴细胞(PBMCs)持续刺激CD8 T细胞和仅刺激CD8 T细胞2h这两种方法相比,从PBMCs中去除CD8 T细胞获得混合抗原递呈细胞APCs,并用混合APCs结合承载抗原肽呈递给CD8 T细胞可以更有效地刺激HIV特异性CD8 T细胞的增殖.培养体系中添加细胞因子IL-2与不添加IL-2相比虽然明显提高CD8T细胞增殖数目,但引起非特异性增殖.结论 在不添加外源性IL-2培养条件下应用混合APCs呈递抗原肽的刺激方法可通过同时递呈抗原信号和细胞共刺激信号更特异地刺激了HIV特异性CD8 T细胞的有效增殖.
作者：金聪；涂婷；牟丹蕾；李群辉；李涛；吴昊；陈华标 刊期： 2016年第03期
目的 研究病毒共感染白纹伊蚊C6/36细胞后,白纹伊蚊浓核病毒-3(AalDV-3)对登革2型病毒(DENV-2)在细胞内的复制的影响.方法 C6/36细胞感染AalDV-3后5d,共感染DENV-2,设立单独感染AalDV-3与DENV-2为对照组.共感染后不同时间点,qPCR法检测病毒的拷贝数;共聚焦显微镜检测DENV-2感染率;共感染后37℃孵育24 h后,于1～2d以流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 共感染后不同时间点,共感染组相对于DENV-2单独感染组,DENV-2基因拷贝数均明显下降(P＜0.05),其中第8d病毒滴度降低率达到高的67％.共感染组DENV-2细胞阳性率均低于40％,明显低于DENV-2单独感染(＞70％,P＜0.05).流式细胞术结果显示,共感染组1～2d细胞凋亡率分别为23.43±1.02％和52.83±1.18％,明显低于DENV-2单独感染组凋亡率59.43±1.23％和96.21±1.87％ (P ＜0.05).结论 病毒共感染白纹伊蚊C6/36细胞后,AalDV-3可降低对DENV-2拷贝数,降低DENV-2细胞感染率,减少DENV-2诱导的细胞凋亡,AalDV-3具有防制蚊媒传染病的潜在价值.
作者：郭菁华；王衍海 刊期： 2016年第03期
目的 利用GeXP系统结合多重PCR技术,建立诺如病毒(GⅠ和GⅡ组)、轮状病毒、星状病毒的方法.方法 根据4种病毒的序列特征,制备病毒标准品质粒,收集病原体样本,利用GenBank下载4种病毒的核苷酸序列,根据4种病毒的序列特征,利用GeXP express Profiler设计特异性引物,优化条件使GeXP系统能够特异性、快速的检测对应病毒.评价其灵敏度、特异性及功效,并应用于120份临床标本检测.结果 优化后的引物能特异性的检测各病毒,无交叉反应;灵敏度为100％,特异性为99.53％,功效为99.62％,与荧光定量PCR检测结果一致性为99.51％,检测浓度低至5×103/ μ1拷贝,在已知临床样本灵敏度高、特异性好.结论 GeXP方法的建立为快速、准确的检测这4种腹泻病毒提供了便利,对口岸突发群体性腹泻的病原体检出有重要意义.
作者：石莹；陈肖潇；樊学军；田绿波；杨雨；张薇薇 刊期： 2016年第03期
目的 研究2014年上海市手足口病的病原谱,及肠道病毒A组71型(EV-A71)和柯萨奇病毒A组16型(CV-A 16)变异变迁规律.方法 采集上海市2014年手足口病患者的咽拭子标本,进行核酸检测,对核酸检测结果为EV-A71、CV-A16以及其他EV阳性的临床标本进行病毒分离.对病毒分离结果阳性株进行全长VP1编码区基因的扩增以及核苷酸序列的测定和分析,然后与EV-A71、CV-A16各基因型和基因亚型的代表株构建亲缘性进化树.结果 2014年上海市辖区共对2017例HFMD临床标本进行了核酸检测,共有1644例检测结果为阳性.从中随机地选择出75份临床标本接种RD细胞和Vero细胞,共有60份出现EV特征性CPE,病毒分离的阳性率为82.67％,其中23株被鉴定为EV-A71、32株被鉴定为CV-A16、5株被鉴定为其他EV.23株EV-A71全部属于C4a进化分支;32株CV-A16中,有8株属于B1a进化分支,有24株属于B1b进化分支.结论 2014年上海市辖区手足口病呈现EV-A71与CV-A16共同流行的模式.C4a进化分支的EV-A71在上海市持续传播,而Bib进化分支成为上海市CV-A16的流行优势株.研究和掌握EV-A71和CV-A16等肠道病毒流行株的基因特征,发现其变异位点和变异趋势,对HFMD预防控制策略措施的制定将有重要的参考意义.
作者：甘霖；滕峥；王嘉瑜；张勇；许文波；钟照华；张曦；严冬梅 刊期： 2016年第03期
目的 研究轮状病毒与组织血型抗原之间的关系.方法 以直接从人粪便标本中检测到的比较少见的G8P[14]型轮状病毒为研究对象,表达纯化得到P[14]VP8*蛋白,通过寡糖结合和唾液结合实验,研究其与组织血型抗原的结合.结果 P[14] VP8*蛋白可以与A型寡糖和A型唾液特异结合,而没有检测到与其他型别的组织血型抗原结合.结论 A型组织血型抗原可能是P[14]型轮状病毒的潜在受体,这为进一步研究其他型别轮状病毒受体结合特征及轮状病毒监测提供了一定的基础和依据.
作者：孙晓曼；郭妮君；徐子乾；李丹地；段招军 刊期： 2016年第03期
目的 分析慢性乙型肝炎相关性肝细胞癌(HCC)患者肝癌组织及癌旁组织PDCD1基因拷贝数差异.方法 利用Taqman real-time PCR检测27例肝细胞癌患者肝癌切除术后石蜡包埋肝癌组织和癌旁组织PDCD1基因(PDCD1)拷贝数.结果 肝癌组织及癌旁组织PDCD1基因拷贝数之间无显著差异(P＞0.05);肝癌组织及癌旁组织PDCD1基因拷贝数与术前AFP水平无显著相关性(P＞0.05);肝癌组织及癌旁组织PDCD1基因拷贝数与肿瘤组织恶性程度无显著相关性(P＞0.05).结论 PD1在肿瘤免疫逃逸反应中起作用,但肝癌组织及癌旁组织中其基因PDCD1的拷贝数变异并不是影响慢性乙型肝炎相关性肝细胞癌发生发展的因素.
作者：杨可立；关玉娟；杨湛；肖艳华；李剑萍；张霞意；吴丹丹 刊期： 2016年第03期
目的 通过易错PCR技术提高1株人源抗狂犬病毒单链抗体RV08的亲和力.方法 采用Agilent公司GeneMorph Ⅱ Random Mutagenesis Kit对RV08轻、重链可变区进行易错PCR扩增,随机引入突变,通过单链抗体(Single-chain antibody fragment ScFv)噬菌体呈现技术构建随机突变抗体文库,经狂犬病毒颗粒aG株固相富集筛选,通过ELISA和IFA鉴定阳性抗体克隆并进行序列测定.利用IgG表达载体VH/VK双质粒系统瞬时转染293T细胞实现IgG抗体的分泌型表达,通过非竞争ELISA测定突变抗体亲和力.结果 RV08随机突变抗体库的库容为6×106 cfu/ml,目的基因插入率为100％.重链序列突变频率约为0.95％,轻链序列突变频率约为1.2％,后获得5株高亲和力的抗体突变株,其中3株抗体HL46、HL2和HL37亲和力分别为原始克隆RV08的1.79倍、1.47倍和1.23倍.结论 易错PCR技术与噬菌体抗体库技术相结合使得抗体亲和力获得明显提高,为抗体的体外亲和力成熟提供了参考方法.
作者：孙丽娜；李川；刘洋；李德新；梁米芳 刊期： 2016年第03期
目的 了解妊娠期围生期水痘病毒感染后的妊娠结局.方法 检索1994年到2015年6月间发表的具有完整孕产和临床特点描述的妊娠合并水痘及新生儿水痘(Neonatal Varicella,NV)患者的文献,并将信息纳入综合分析.结果 71例孕产期水痘患者中孕妇水痘发病时间为孕7周-产后1周(中位时间产前4d),伴发合并症9例;71例水痘感染孕妇出生健康婴儿42例,NV28例,先天性水痘综合征1例.NV发病中位时间为产后10 d;28例NV中单纯水痘19例,占67.9％(19/28);伴发合并症9例,占32.1％ (9/28),其中死亡3例,占10.7％(3/28).NV患儿主要死因是肺炎、败血症和中毒性肝炎.结论 中晚期妊娠或围生期水痘病毒感染较易发生NV.NV常在出生后2周内发病,潜伏期较短的NV患儿易伴发合并症.
作者：宋颖劼；杨建强 刊期： 2016年第03期
目的 荧光抗体病毒中和试验(FAVN)技术应用于汉坦病毒中和抗体的检测的探索与改进.方法 采用固定病毒稀释血清的方法,将不同稀释度的血清和固定浓度的病毒经37℃中和lh,然后加入到Vero-E6细胞已长成单层的96孔板上,37℃、5％ CO2培养7d,经固定和荧光染色,即可在荧光显微镜下判定结果,根据公式计算血清的中和滴度.结果 合适的细胞浓度为4×104～4.5×104/孔,病毒血清混合液在37℃中和较好.用此方法检测双价灭活疫苗免疫后30份人血清标本的中和抗体,与空斑减少中和试验结果比较,该方法较敏感、稳定.结论 荧光抗体病毒中和试验法具有快速、简便、敏感、稳定的特点.
作者：李琦；魏亚梅；韩旭；韩占英；张艳波；许永刚；齐顺祥 刊期： 2016年第03期
目的 探讨NE/α1-AT失衡在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)发生发展中的作用及其意义以及黄连素对其影响.方法 8周龄C57 BL/6JApoE-/-雄性小鼠26只,按体重随机分为正常对照组(正常饮食,SC组,n=8)、高脂组(高脂高胆固醇饮食,HFHC组,n=8)、黄连素干预组(n=10).黄连素干预组6周起予以20 mg/kg/d黄连素灌胃,喂养12周处死所有小鼠,称体重肝湿重,检测肝功能和血脂,肝组织油红0染色评估脂肪变,HE染色评估炎症改变.酶联免疫反应(ELISA)检测肝组织中NE、α1-AT浓度,免疫组化染色及蛋白免疫印迹(Western Blot)方法检测NE表达情况,RT-PCR法检测小鼠肝组织α1-AT的mRNA表达.结果 高脂组和正常对照组相比,高脂组小鼠ALT、AST均有明显升高,TG明显高于对照组.高脂组小鼠HE染色可见明显脂肪变及炎症灶并伴有明显气球样变,造模终点其NAS积分5-8分,达到NASH诊断标准.高脂组NE浓度及活性明显升高,α1-AT水平降低,NE/α1-AT比值较正常组升高;黄连素干预组炎症气球样变较高脂组减少.黄连素干预组小鼠ALT、AST较对照组升高明显,且较高脂组AST明显下降,黄连素干预组小鼠NE/α1-AT较高脂组明显下降.结论 高脂高胆固醇喂养ApoE-/-小鼠12周可成功建立NASH小鼠模型,NE与α1-AT在非酒精性脂肪性肝炎发生发展中有明显的变化,NE/α1-AT失衡在NASH中起到重要作用;黄连素可减轻NASH小鼠肝脏内脂质沉积和炎症程度,并可改善NE/α1-AT失衡,具有防治NASH作用.
作者：陈颖基；马晓洁；王磊；金沛桦；瞿欢佳；施军平 刊期： 2016年第03期
人鼻病毒(Human Rhinovirus,HRV)是引起人类呼吸道感染的常见病原体之一,通常表现为较轻且具自限性的上呼吸道感冒症状,也可以感染下呼吸道引起肺炎、儿童喘息、哮喘加重以及成人慢性阻塞性肺疾病(COPD)等.自1956年人类分离到第一株HRV后,目前已有150多种血清型,HRV被认为是人类急性上呼吸道感染的常见病原.近几年随着分子生物学技术的广泛应用,HRV研究发展迅速,尤其C型的发现,并发现HRV与人类急性下呼吸道感染也密切相关.
作者：奚志敏；沈军；王立波 刊期： 2016年第03期
目的 探讨鼠诺如病毒(Murine noroviurs,MNV)感染C57BL/6小鼠后临床及生物学特征,了解MNV的感染特点.方法 将MNV-CW1毒株以高剂量(104 PFU/只)和低剂量(102PFU/只)分别灌胃到C57BL/6小鼠体内,建立MNV感染小鼠模型.对感染小鼠进行体征观察和体温检测,检测粪便和血液排毒情况、组织中病毒的分布情况以及十二指肠病理切片检查.结果 感染的小鼠没有明显的体表变化,没有腹泻、发热等临床症状和病理改变.粪便检测感染后1～2d排毒.在感染后第3天部分血液中检测到MNV RNA.主要感染部位为消化系统和脾脏.结论 本研究建立的MNV-CW1感染C57BL/6小鼠模型为MNV感染小鼠致病机制进一步研究提供实验信息和技术支撑.
作者：庞立丽；靳淼；王慧敏；王莹；陈爱珺；李慧颖；章青；高福；段招军 刊期： 2016年第03期
目的 探讨双氢青蒿素(DHA)能否影响具有突变型p53的人肝癌细胞株Huh-7增殖、凋亡及迁移等生物学行为及其作用机制.方法 DHA处理Huh-7细胞后MTT法检测增殖抑制率,免疫荧光分析DNA双链损伤情况,WB法测γH2AX蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡.细胞划痕法检测DHA对细胞迁移能力的影响.WB法测细胞中STAT3蛋白的活性及表达水平.结果 DHA能抑制Huh-7细胞的增殖活性,抑制作用呈浓度依赖性.20 μ,mol/L DHA处理48 h能升高γH2AX表达水平,损伤Huh-7细胞DNA双链.DHA处理48 h细胞的凋亡百分率为(3.15±0.39)％.DHA降低Huh-7细胞迁移能力,p-STAT3(Y705)表达水平下降.结论 DHA能造成Huh-7细胞DNA双链损伤,诱导细胞凋亡,但此过程与p53活性无关.可能的机制是通过降低STAT3磷酸化水平抑制突变型p53的Huh-7细胞增殖,诱导Huh-7细胞凋亡和抑制细胞迁移.
作者：郭俊；杨靖；李艳 刊期： 2016年第03期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
