学术投稿

SiRNA对丙型肝炎病毒5'非翻译区的干扰作用实验研究

陈兆军;张腊红;李伟;刘霞

关键词:肝炎病毒, RNA干扰
摘要:目的 研究多种siRNA对丙型肝炎病毒(HCV)5'非翻译区(5'-UTR)的干扰作用.方法 以绿色荧光蛋白基因(GFP)为报告基因,构建HCV 5'UTR与GFP核酸序列连接的表达载体:pcDNA-HCV-5'UTR-GFP.设计针对HCV 5'UTR区3段小干扰RNA(siRNA),siRNA与表达质pcDNA-HCV-5'UTR-GFP共转染Hep G2细胞中,采用荧光显微镜观测细胞内荧光强度改变,并且用流式细胞术量化分析细胞荧光强度变化,评价多种siRNA对HCV基因表达的作用.结果 成功构建含HCV 5'UTR区的绿色荧光蛋白基因,siRNA能特异性地抑制绿色荧光蛋白基因的表达,siRNA A、siRNA B和siRNA C的抑制率分别为68.4%、72.6%、75.6%;siRN A+siRNA B、siRN B+siRNA C和siRN A+siRNAC的抑制率分别为91.8%、87.2%、92.4%;siRN A+siRNA B+siRNA C的抑制率高,为95.7%.结论 多种siRNA对HCV 5'UTR区具有干扰作用,组合使用效果更好.
中华实验和临床病毒学杂志相关文献
  • 甲型流感病毒核糖核蛋白复合体的核质转运过程

    甲型流感病毒的基因组由8个负链RNA片段组成,共编码10种蛋白质,每一节段RNA都是以不同的核糖核蛋白复合体(RNPs)形式存在.本综述的目的是根据RNPs中各蛋白的结构特点阐述RNPs在病毒核质转运过程中发挥的作用.

    作者:王乃福;张晓光;周玲 刊期: 2007年第04期

  • 单纯疱疹病毒糖蛋白D与IL-2基因共表达质粒的构建及其免疫学鉴定

    目的 构建含单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D(gD)全长基因和人白细胞介素2(IL-2)共表达的重组真核表达质粒IRES-gD-IL-2,并诱导其在抗原提呈细胞--树突状细胞(DCs)的表达.方法 应用PCR方法分别扩增出HSV-1 gD和IL-2基因,经PCR、双酶切及测序证实正确后分别插入真核表达载体IRES的上、下游.通过脂质体介导转染DCs,并进行免疫学鉴定.结果 重组表达质粒IRES-gD-IL-2经PCR和酶切均出现相应长度的片段.经Western Blot证实,HSV-1 gD抗体可特异识别DCs内表达的gD蛋白.结论 构建了gD与IL-2共表达的重组真核表达质粒IRES-gD-IL-2,免疫印迹鉴定证实该表达产物具有免疫学活性.

    作者:李伟荣;王得新;王健伟;牛勃;胥显民 刊期: 2007年第04期

  • 甲3型流感病毒M基因披甲RNA的研制

    目的 研制内含甲3型流感病毒M基因RNA的披甲RNA.方法 将MS2噬菌体基因组中编码成熟酶蛋白、包膜蛋白和pac位点的DNA片段克隆到表达质粒pET30b中,构建重组质粒pAR-1.将甲3型流感病毒M基因连接到pAR-1 pac位点的下游,诱导表达出内含M基因RNA的披甲RNA AR-2,并进行纯化、定量和稳定性研究.结果 成功构建和表达了耐核糖核酸酶、内含M基因RNA的披甲RNA,每1 ml LB培养基可诱导表达出约8.9×1011个拷贝的AR-2.结论 制备的AR-2稳定,无生物传染危险性,可作为甲型流感病毒M基因核酸检测的标准品和质控品.

    作者:于新芬;潘劲草;黄志成;叶榕;寇宇 刊期: 2007年第04期

  • 甲胎蛋白异质体的检测及临床应用

    甲胎蛋白(alpha fatoprotein,AFP)是早期肝细胞癌(HCC)诊断的良好指标,但是部分良性肝病也有AFP升高,30%~40%的肝细胞癌AFP正常,这样导致部分肝病无法判断良恶性.

    作者:陈松劲;邵平扬 刊期: 2007年第04期

  • 双抗原夹心法ELISA在检测抗肾综合征出血热总抗体中的应用

    目的 建立可以检测不同来源血清中抗汉坦病毒抗体的简单、灵敏的方法.方法 汉坦病毒核蛋白重组表达纯化后,同时作为捕获作用的固相抗原和检测作用酶标记抗原,建立检测血清中抗汉坦病毒总抗体的双抗原夹心法ELISA法,并与常用的IFA法进行比较分析.结果 检测不同血清时特异性为100%,敏感性高于IFA法4~8倍.且不需考虑更换检测试剂,不同来源的血清样本对检测结果没有明显的影响.结论 本方法操作简单,成本低,具有较高的敏感性和特异性,适合用于汉坦病毒感染的监测、调查和临床诊断以及宿主动物间病毒感染流行的调查与监测.

    作者:张全福;李建东;李伟红;李川;刘琴芝;梁米芳;李德新 刊期: 2007年第04期

  • 重型肝炎/肝衰竭临床分类的进一步探讨

    目的 提高对重型肝炎/肝衰竭临床分类的进一步认识.方法 回顾分析251例急性、亚急性肝衰竭患者的临床资料,按照病因分为无肝病基础组(第1组)、肝炎组(第2组)、肝硬化组(第3组)共3组,并对每组中急性、亚急性肝衰竭的实验室检查、肝性脑病的发病率及预后进行统计学分析.结果 (1)转氨酶、胆碱脂酶及白蛋白的差异:无论是急性还是亚急性肝衰竭中,无肝病基础组转氨酶、胆碱脂酶及白蛋白均明显高于有肝病基础患者,特别是高于肝硬化组患者(P<0.05);(2)肝性脑病的发病率及各等级分布:在1、2、3组中,急性肝衰竭肝性脑病的发病率分别为100.00%,66.23%和51.02%;亚急性肝衰竭分别为71.42%,54.81%和49.99%;(3)在预后方面:在1、2、3组中急性肝衰竭的好转治愈率分别为15.38%、42.85%和26.09%;亚急性肝衰竭患者33.33%、51.39%和36.85%,3组具有统计学差异(P<0.05).结论 无论是急性还是亚急性发病,3组重型肝炎/肝衰竭患者的临床特点及其预后均有差异,依此进行分类,有其临床实用性及科学性,将能更好的指导临床诊断、治疗和预后判断.

    作者:曾珍;楼敏;韩玉坤;耿华;常秀娟;陈菊梅 刊期: 2007年第04期

  • 湖南3县(市)狂犬病病毒分子生物学研究

    目的 研究湖南省狂犬病高发区和无病例区动物携带狂犬病的分子生物学特征.方法 用直接免疫荧光法检测犬唾液及犬、猫脑标本,以RT-PCR法复核阳性进行遗传学分析.结果 武冈市和洞口县送检的82只和17只犬中,分别有12只和1只检测到狂犬病毒抗原与核苷酸阳性,阳性率分别为14.63%和5.88%.凤凰县67份犬脑标本未检测出病毒.28份猫脑组织标本也未检测出狂犬病毒.用RT-PCR法扩增阳性犬脑组织(编号为Wg13,Dk13)的狂犬病毒N基因,两株病毒之间核苷酸与氨基酸的同源性分别为99.4%及99.1%;Wg13株与中国疫苗株CTN株和aG株的核苷酸同源性(氨基酸)分别为89.4%(98.2%)、86.1%(95.1%);Dk13株与中国疫苗株CTN株和aG株的核苷酸同源性分别为89.1%(98.0%)、86.1%(94.9%).与其他国家分离到的狂犬病毒相比,两株病毒与印度尼西亚的同源性大,分别为92.8%、93.2%,而与印度、日本及斯里兰卡等其他国家同源性相对较小.结论 两株狂犬病毒均为Ⅰ型狂犬病毒,其N基因的核苷酸序列与当前使用的疫苗株相比,两株病毒与CTN疫苗株分在同一组,同源性较大.

    作者:肖奇友;吕伟;罗述斌;钟群;熊成龙;王祥迪;杨安宝;张永振 刊期: 2007年第04期

  • Nr-CWS对TC-1细胞致瘤作用的影响及抗女性下生殖道人乳头状瘤病毒感染的研究

    目的 探讨Nr-CWS对含HPV16型病毒基因的TC-1细胞荷瘤鼠肿瘤生长的影响及对女性下生殖道HPV感染的清除效果.方法 SCID小鼠分别注射TC-1细胞形成肿瘤模型后随机分成3组,分别注射生理盐水、60 μg/ml和120 μg/ml Nr-CWS,观察肿瘤生长的情况.临床选取45例单纯HPV感染者使用Nr-CWS 1个月、3个月后再次检测HPV,分析Nr-CWS对生殖道HPV感染的清除效果.结果 动物实验表明两组用药组的肿瘤体重明显低于对照组,抑瘤率分别为59.1%和84.2%;三组瘤重用秩和检验分析P<0.05,差异有统计学意义;临床实验结果显示用药后3个月HPV检测转阴23例(51.1%),型别减少9例(20%),无效13例(28.9%);治愈率与自然转阴率31%相比较,X2检验P=0.005,差异有统计学意义.结论 Nr-CWS对HPV16型病毒基因的TC-1细胞荷瘤鼠肿瘤有明显的抑制作用;且对临床女性下生殖道HPV感染有一定的清除作用.

    作者:赵健;詹少兵;李雪倩;周玲;杨英捷;廖秦平 刊期: 2007年第04期

  • 人巨细胞病毒感染致动脉粥样硬化的研究进展

    近年来动脉粥样硬化(artherosclerosis,AS)病变在全球的发病率越来越高,而且逐渐年轻化.根据REACH(Reduction of Atherothrombosis for Continued Health)调查研究显示,动脉粥样硬化血栓形成是世界头号杀手.

    作者:李丹;王佳伟;赵伟秦;王得新 刊期: 2007年第04期

  • 慢性重型肝炎合并真菌感染61例临床分析

    近年来随着高效、广谱抗生素及激素在临床上的广泛应用,真菌感染的发病率呈上升趋势[1].慢性重型肝炎由于肝功严重障碍,免疫力低下,易并发真菌感染,感染又再次加重肝功衰竭,促使病情恶化和死亡.本研究对我院近年来收治的慢性重型肝炎患者合并真菌感染的情况进行分析.

    作者:姚云洁;吴贻琛;朱琼香;邢汉前;游绍莉;辛绍杰 刊期: 2007年第04期

  • 二 干扰素的诱生和作用机制

    1概述50年前Issacs和Lindenmann在研究病毒干扰时发现了干扰素.半个世纪以来,干扰素研究始终是现代分子生物学的一个前沿领域.对此,我们可以从几个方面来认识.

    作者:金冬雁;黎孟枫 刊期: 2007年第04期

  • 先天性巨结肠患者人类巨细胞病毒UL139基因多态性的研究

    目的 研究人巨细胞病毒(HCMV)UL139基因在先天性巨结肠(HD)临床株中的多态性,探讨其多态性与HD之间的关系.方法 对53株HD患儿痉挛段肠组织标本和6株尿标本的临床株进行UL139开放阅读框(ORF)的扩增及测序.对照组为10个无症状HCMV感染患儿的尿标本.结果 28个HD临床株完成测序,进化树分析结果显示UL139基因DNA序列分为3组5个基因型,G3为主要基因型(48.1%).与对照组比较,X2=7.378,P=0.194.24个临床株同时完成了HCMVUL144基因测序,HCMV UL144与UL139基因经Kendall等级相关分析τ=-0.114,P=0.425.不同临床分型HD分散分布于UL139各个基因型中.结论 HCMV UL139基因具有高度的多态性;UL139基因分型与HD的临床分型无关;UL139基因与UL144基因无相关性.

    作者:毛志芹;黄英;阮强;孙梅;齐莹;高红 刊期: 2007年第04期

  • 丙型肝炎病毒核心抗原检测用于献血者筛查价值的探讨

    目的 应用酶联免疫吸附技术筛查献血员中丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)和抗体(HCV-Ab),了解丙型肝炎病毒核心抗原筛查献血员应用价值.方法 对我站2004年8-12月间的3972份献血者血清标本进行抗-HCV初、复检和HCV-cAg ELISA检测,将ELISA法阳性的25份血清标本,再做RT-PCR检测证实.结果 3972份血清标本检测中,有10份仅初检抗-HCV阳性样本,经HCVRNA检测阳性有1份,12份仅复检抗-HCV阳性样本,经HCV RNA检测阳性有1份,HCV-cAg检测阳性有3份,经HCV RNA检测阳性有2份.结论 HCV-cAg ELISA检测技术的敏感性与HCV RNA技术类似,但成本明显降低,可与HCV抗体联合检测应用献血员筛查.

    作者:王福成;施之雍;蔡隽;苏俊 刊期: 2007年第04期

  • 再谈感染病学相关新概念及新词汇的翻译问题

    随着科技水平的不断发展,专业新词汇和新概念不断增加,感染病学亦不例外.由于感染病学学科广泛涉及到病毒学、细菌学、寄生虫学、免疫学、病理学、药理学及肝病学等,新词汇/新概念涉及面广,对在其理解和翻译中很易产生各种问题,笔者在多种场合曾与不同学科学者进行过有关讨论,并发表过专文[1].现对近年出现的部分新词汇/新概念的翻译问题进行探讨,供各位同道参考和商讨.

    作者:王宇明;胡仕琦 刊期: 2007年第04期

  • HBV基因型研究进展

    近年来研究发现,乙肝病毒的基因分型更能准确地反映原型病毒株之间的自然异质性,基因型的研究成为研究领域的热点.以下就基因型的概念、地理分布、临床意义及对治疗的反应性作一概述.

    作者:刘旭锦;王凯;范玉琛 刊期: 2007年第04期

  • 慢性乙型肝炎患者病毒基因型分布及与临床关系

    目的 了解邯郸市乙肝病毒基因型分布情况,并探讨其与临床的关系.方法 采用PCR-RFLP方法对邯郸108份HBV感染者的血清进行基因型分型,并结合转氨酶和HBV-DNA结果,分析乙肝病毒基因型的临床意义.结果 邯郸市慢性乙肝人群感染的HBV主要以C基因型为主,占93.5%,B基因型占6.5%.不同性别感染基因型差异无统计学意义.肝生化指标ALT、AST、TB比较提示C基因型患者的肝脏炎症似乎比B型患者重,但差异无统计学意义.C基因型的患者血清HBeAg阳性率高于B基因型.C基因型的患者血清HBV-DNA略高于B基因型,但无统计学差异.结论 邯郸市慢性乙肝人群感染的HBV主要以C基因型为主.C基因型患者血清HBeAg阳性率高于B基因型,C基因型患者与B基因型相比肝脏炎症较重,HBV-DNA略高,但差异无统计学意义.

    作者:孔洪彬;李友生 刊期: 2007年第04期

  • 用螨原代培养细胞检测螨体内汉坦病毒和恙虫病东方体复合感染的研究

    目的 研究汉坦病毒(Hantavirus,HV)和恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi,Ot)能否同时共生于同一媒介小盾纤恙螨(Leptotrombidium scutellare)体内.方法 采集HFRS和恙虫病混合感染疫区鼠体恙螨和游离恙螨饲养的幼虫、若虫、成虫,蛋白酶消化后作螨细胞原代培养细胞片,用原位RT-PCR分子杂交和PCR法分别检测HV和Ot在培养螨细胞内的分布和定位.结果 HV和Ot在感染的螨细胞中多分布于消化系统的上皮细胞、卵巢组织细胞内,且随传代次数的增加而阳性率增高.结论 小盾纤恙螨可同时自然感染HV和Ot.

    作者:邓小昭;许可;蒋春梅;王忠灿;孔晶;刁振宇;钱俊英;张云;曹广文 刊期: 2007年第04期

  • 双环醇片对乙型肝炎病毒B、C基因型感染的疗效比较

    目的 比较双环醇片对乙型肝炎病毒B、C基因型感染的疗效.方法 选择乙型肝炎病毒B基因型感染者26例、C基因型感染者44例,同时给予双环醇片口服,50 mg/次,每日3次,疗程24周.观察受试者的临床症状、体征变化,并于治疗前、治疗期间(第12周)及治疗结束时(第24周),分别检测血常规、肝功能、乙肝三系和血清HBV DNA水平.结果 双环醇片能明显改善B、C基因型乙型肝炎病毒感染者的临床症状和肝功能,并有一定的抑制病毒作用,两组患者治疗24周时的血清HBV DNA阴转率分别为19.2%和15.9%,差异无统计学意义.结论 双环醇片不仅能保护慢性乙型肝炎患者的肝功能,同时能抑制乙型肝炎病毒复制,对B、C基因型乙型肝炎病毒感染者的疗效相近.

    作者:阮冰;王军伟;白雪玲 刊期: 2007年第04期

  • 复方鳖甲软肝片治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床研究

    目的 验证复方鳖甲软肝片治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床疗效和安全性.方法 将420例慢性乙型肝炎肝纤维化患者随机分为两组:治疗组300例,口服复方鳖甲软肝片,对照组120例,口服和络舒肝胶囊,6个月为1疗程.结果 治疗组的患者在改善症状和体征,恢复肝功能总疗效方面,显效率和总有效率分别为55.67%和81.67%,对照组分别为15.80%和60.00%,治疗组明显优于对照组(P<0.01).结论 复方鳖甲软肝片在改善中医症状,血清学肝纤维化及肝组织病理指标等方面疗效确切,可以有效治疗慢性乙型肝炎肝纤维化.

    作者:陈菊梅;杨永平;陈德永;韩晋;靳雪源;黄泽香;徐成彬;申砚明 刊期: 2007年第04期

  • 检测乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白的临床意义

    目的 检测乙肝患者血清中乙肝两对半(HBVM)、乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白(HBV-LP)以及HBV DNA,比较在不同乙肝两对半模式的患者中HBV-LP与HBV DNA的检出率,探讨乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白(HBV-LP)用于乙肝患者临床诊断的意义.方法 采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HBV-LP和乙肝两对半,采用荧光定量PCR方法对患者HBV DNA进行检测.结果 (1)相同乙肝模式患者血清中HBV-LP与HBV DNA检出率差异无统计学意义;(2)143例小三阳乙肝患者血清中HBV-LP与HBV DNA阳性率差异无统计学意义,二者的检出一致率为82.52%[(65+53)/143];(3)HBV-LP吸光度(A值)与HBV DNA呈正相关关系(r=0.983).结论 乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白与HBV DNA有良好的正相关关系,在HBeAg阴性的乙肝患者中乙肝病毒表面抗原大蛋白(HBV-LP)与HBV DNA有较高检出一致率,HBV-LP用于临床反映乙肝病毒复制水平,特别是HBeAg阴性乙肝患者体内病毒复制情况有重要的意义.

    作者:龚玉华;胡云;张利莉;苏琴;刁仁联;缪家文 刊期: 2007年第04期

中华实验和临床病毒学杂志

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主管:实验和临床病毒学杂志

主办:中国科学技术协会