学术投稿

广西HIV-1重组毒株env区快速基因分型方法的建立

梁浩;罗皓;邵一鸣;刘伟;张志勇;邢辉;卢灿健;沈菁;麦志丹

关键词:HIV-1, 基因型, 聚合酶链反应
摘要:目的 建立一种快速简便的基因分型方法,对广西HIV-1重组毒株env基因区进行亚型鉴定.方法 从HIV阳性样品中提取核酸,使用HIV-1 M组通用引物对env区进行第一轮扩增,第二轮则使用分别检测B'/C或C亚型和CRF01-AE亚型的二套特异性引物放入同一反应管中进行扩增,根据不同亚型扩增的目的带位置不同来判断亚型.将通用引物扩增出的所有样本均进行基因测序和系统树分析以验证结果.结果 50份样本中,经基因测序和系统树分析证实CRF08-BC样本3份(6%),CRF01-AE样本43份(86%),4份(8%)样本无法确定亚型.经亚型特异性引物PCR法检测得出B'/C或C亚型样本3份(100%),CRF01-AE样本39份(90.7%),灵敏度为91.3%,特异度为100%.两种方法检测结果经差异性检验显示x2=2.25,P>0.05,差异无统计学意义,结果一致者占92%.与基因分析结果吻合.重复实验显示CRF08-BC平均重复性为100%(10/10),CRF01-AE为93.8%(61/65).结论 该方法是一种简便、快速、低成本,具有高度灵敏性和特异性的HIV-1毒株env基因区分型法,能够直接对广西HIV-1 CRF01-AE重组毒株进行鉴定.
中华实验和临床病毒学杂志相关文献
  • 中华医学会系列杂志编辑部主任工作会议胜利召开

    作者: 刊期: 2006年第03期

  • 使命与奉献——祝贺顾方舟教授从医55周年

    顾方舟教授是我国著名的老一辈医学科学家、病毒学家、教育家和社会活动家.他专门从事脊髓灰质炎研究40余载.他是中国研究脊髓灰质炎病毒和研发脊灰活疫苗的第一人,成绩卓著,名声斐然.

    作者:王树惠;彭小忠 刊期: 2006年第03期

  • LMP1基因重组慢病毒载体的构建及表达性能鉴定

    为了进一步探讨EB(Epstein Barr)病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)的作用机制及其功能,我们构建了EDL2-N-LMP-慢病毒载体,并对所构建的EDL2-N-LMP-慢病毒载体结构及表达进行鉴定.

    作者:杨玉芳;丁彦青;梁丽;翁德胜 刊期: 2006年第03期

  • 病毒性心肌损伤时总RNA表达及cTnI基因的扩增分析

    目的 研究心肌型肌钙蛋白(cTnI)-mRNA在监测病毒性心肌损伤发生发展和预后中的价值.方法 于BALB/c小鼠腹腔接种1×108 TCID50柯萨奇病毒B3(CVB3)液诱发心肌损伤发生,分别在CVB3感染后第3、6、9、12、15、18和21天采集外周血后处死小鼠,留取鼠心脏作病理组织学检查,并以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析心肌及外周血中cTnI基因的表达状态.结果 CVB3感染后,鼠心肌组织及循环血中cTnI-mRNA均表达增加,且与心肌细胞肿胀、炎性细胞浸润、核固缩及碎裂、变性、坏死、钙化等组织学改变相关.cTnI-mRNA基因扩增,心肌组织全数阳性;外周血阳性率在对照组及感染后第3、6、9、12、15、18和21天分别为0、0、0、16.7%、40.0%、71.4%、83.3%和87.5%.结论 病毒性心肌损伤时cTnI-mRNA上调表达并释放入血,循环血cTnI-mRNA为监测心肌损伤发生发展及预后的灵敏基因标志物.

    作者:吴玮;姚登福;朱建华;高增栋;吴信华;邱历伟 刊期: 2006年第03期

  • 胸腺肽α1治疗急性乙型肝炎疗效观察

    1 材料与方法选取153例符合条件者随机分为治疗组78例,对照组75例,治疗前肝功能均异常,乙肝病毒复制标志物(HBVM)均阳性,两组病例在性别、年龄、病程、HBVM和肝功能等方面均无明显统计学差别,均具有可比性.两组均给予保肝、降酶,退黄为主的常规治疗.治疗组在此基础上加用胸腺肽α1(迈普新,成都地奥九泓制药厂生产)1.6 mg,每周2次,皮下注射,疗程均为3个月.用两点注(速率法)检测肝功能,用ELISA检测HBVM中HBeAg、用PT-PCR法检测HBV DNA.

    作者:刘立亚;宏伟;杨文珍;万志军;谭彦芳;李荣权;汪涛 刊期: 2006年第03期

  • 血清HBsAg阳性IgA肾病肾组织HBV抗原蛋白及血清和肾组织HBV-DNA检测分析

    目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染与IgA肾病发病的关系.方法 32例肾活检冰冻切片组织HBsAg和HBcAg蛋白和42例HBsAg阳性的肾活检石蜡切片组织及其部分血清HBV-DNA的检测.结果 HBsAg和HBcAg在IgA肾病肾活检组织的总阳性率为59.1%,在非IgA肾病中的总阳性率为63.6%,二者差异无统计学意义.42例肾活检组织中,仅发现有5例(11.9%)在肾活检组织中有HBV-DNA的存在.且5例均为大三阳患者,其病理诊断为系膜增生性肾小球肾炎2例,轻微肾小球病变1例,基底膜病变1例,IgA肾病仅1例.血清HBsAg阳性的患者,同时进行了42例肾活检组织的血清HBV-DNA检测,其中大三阳患者为12例,其血清HBV-DNA均为阳性,而这12例血清阳性的肾活检组织中仅有5例HBV-DNA为阳性,其余30例血清及肾活检组织中HBV-DNA为阴性.结论 HBsAg和HBcAg蛋白在IgA肾病肾活检组织和非IgA肾病肾活检组织表达差异无统计学意义,表明HBV感染与IgA肾病并无直接关系.

    作者:张磊;金晓明;贺岩;迟继铭;班翔;黄淇 刊期: 2006年第03期

  • 关于我刊来稿须付稿件处理费的通知

    作者:《中华实验和临床病毒学杂志》编辑部 刊期: 2006年第03期

  • 特异性HPV16E7 CTL表位肽-MHC I复合物单抗的制备及鉴定

    目的 制备抗HPV16E7CTL表位(49-57)-MHC I类分子复合物的特异性单克隆抗体,并对其敏感性、特异性及亲和力进行鉴定,为今后研究HPV16感染后机体对病毒蛋白的免疫呈递途径研究奠定基础.方法 制备高纯度的HPV16E7 CTL表位(49-57)肽RAHYNIVTF,将其与TAP缺陷的RMA-S细胞孵育后免疫BALB/c小鼠,常规收集小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选杂交瘤细胞株的阳性克隆,并对其进行一系列鉴定.结果 筛选出的杂交瘤细胞株能稳定分泌抗HPV16E7(49-57)-MHC I类分子复合物的单抗,不仅能与装载有RAHYNIVTF的TAP缺陷的RMA-S细胞结合,也能与具有内源性抗原处理能力的RMA细胞结合,但不能与装载有类似变异肽(进行氨基置换后的RAHYNIVTF)或乙肝病毒对照肽的RMA-S或RMA细胞反应,具有良好的敏感性、特异性及亲和力.结论 本实验制备表位肽-MHC I类复合物单抗的方法,对今后研究包括HPV16感染在内的病毒感染免疫有很大的临床应用价值.

    作者:尹锐;郝飞;钟白玉;李芹阶;李安信 刊期: 2006年第03期

  • EBV4型IgA/VCA IgA/EA IgG/EA IgG/ZEBRA抗体在鼻咽癌普查和早期诊断中的应用

    目的 摸索以疱疹病毒4型(EBV)IgG/ZEBRA为捕捉抗原的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)条件,为大量人群普查奠定基础.方法 将纯化的ZEBRA抗原用于对鼻咽癌(NPC)患者血清及健康人血清IgG/ZEBRA抗体的ELISA检测.结果 检测NPC患者血清288份,其中ELISA实验显示阳性262份,敏感度91%,检测正常人血清96份,其中阳性5份,特异度94.8%.其结果显示NPC组的阳性率与健康对照组的数据之间差异有统计学意义(P<0.001).本研究在此基础上对广东惠州5463份和广西桂平2017份血清进行检测,检出早期鼻咽癌患者5例.并将结果与免疫酶法检测IgA/VCA、IgA/EA、IgG/EA比较.结论 以EBV早期抗原ZEBRA为捕捉抗原的间接ELISA方法具有较高的特异性和敏感性,可以用于大量人群的NPC早期筛查和早期诊断.

    作者:张晓梅;钟建明;汤敏中;张晓光;廖建;郑裕明;邓洪;曾毅 刊期: 2006年第03期

  • 引起人类脑炎的新双链RNA病毒

    全世界已经报道的病毒有5400多种,其中双链RNA病毒除了双RNA病毒科外,绝大多数都存在于呼肠孤病毒科.2005年国际病毒分类委员会(International Committee for Taxonomy of virus,ICTV)第八次分类报告中正式公布在呼肠孤病毒科中增加一个新属,其英文名称为Seadornavirus.

    作者:徐丽宏;梁国栋 刊期: 2006年第03期

  • 乙型脑炎病毒单克隆抗体制备及其特性鉴定

    目的 制备乙脑病毒单克隆抗体并对其各项生物学性质进行鉴定.方法 通过免疫、融合、克隆和筛选等方法制备乙脑单抗,使用ELISA、IFA、中和试验和Western blot等方法鉴定单抗的敏感性、特异性、种内反应广谱性以及中和活性.结果 终获得3株稳定分泌的乙脑单克隆抗体细胞株,其滴度均超过106.3株单抗只与乙脑病毒反应,与其他9种虫媒病毒皆不反应.ELISA相加试验证明3株单抗的作用位点非常相近,选择其中的F12.37与10个代表性乙脑病毒株反应,F12.37能够敏感地检测到所有10个在细胞内复制的病毒株.F12.37还能够中和乙脑P3株(基因Ⅲ型)和SH03-103株(基因Ⅰ型),保护50%细胞不产生病变的稀释度分别为1:3.2×105和1:105,Western blot结果显示F12.37与乙脑病毒E蛋白相互作用.结论 本研究获得了3个高滴度、高特异性的乙脑单克隆细胞株,其中F12.37具有较高的敏感性和较好的种内反应广谱性,能够中和两个基因型乙脑病毒,其作用位点位于乙脑病毒E蛋白.

    作者:王雷;付士红;李雄;牛新玲;唐青;梁国栋 刊期: 2006年第03期

  • 加强我国病毒性脑炎的监测与研究

    病毒性脑炎是指由多种嗜神经性病毒感染引起的症候群,为了有别于其他病原体所致的脑炎而统称为病毒性脑炎.病毒性脑炎症状严重、死亡率高、许多患者会留有后遗症,对人类健康造成极大威胁.

    作者:梁国栋 刊期: 2006年第03期

  • 广东省珠江三角洲地区吸毒者中流行的HIV-1 ENV基因序列分析

    目的 了解广东省珠江三角洲地区吸毒者HIV-1亚型的流行规律及其与国际参考株的同源性.方法 应用套式聚合酶链反应(PCR)对43例采自广东省珠江三角洲HIV-1抗体阳性的吸毒者淋巴细胞富集液,并对其核酸样品进行扩增,使用ABI377型测序仪对扩增产物测序后,对其ENV基因C2-V3段的核酸序列进行比较分析.结果 43份血样中,29份为07-BC重组亚型,与国际参考株CN.97.C54A近,基因离散率为(2.291±1.055)%,组内离散率为(3.534±1.306)%;9份为AE重组亚型,与国际参考株01AE.TH.90.CM240近,基因离散率为(8.068±0.534)%,组内离散率为(2.823±1.235)%;3份为08-BC重组亚型,与国际参考株97CNGX-9F近,基因离散率为(1.403±0.681)%,组内离散率为(1.507±0.681)%;2份为泰国B(B')亚型,与国际参考株RL42近,基因离散率为(7.335±3.330)%,组内距离为8.52%.结论 广东省珠江三角洲地区吸毒者感染的HIV-1以曾经主要在西北地区吸毒人群中流行的07-BC重组亚型为主,也存在主要以性传播途径感染的人群中流行的AE重组亚型,提示珠江三角洲地区吸毒者中流行的HIV-1亚型趋于多样化.

    作者:颜瑾;王玉;李杰;马鹏飞;林鹏;邢辉;刁丽梅;邵一鸣 刊期: 2006年第03期

  • 2005年流行性乙型脑炎疫情分析

    目的 了解2005年我国贵州、四川和湖北省三个监测点的乙脑流行情况.方法 收集三个监测点的乙脑流行状况、媒介蚊虫、宿主带毒水平.结果 2005年我国贵州、四川和湖北3个省的乙脑报告病例数占全国总数的40.7%,其中贵州和四川省的病例数居全国前2位,发病率均超过1/10万,高于全国平均水平;报道病例中0~10岁儿童占报告病例90%以上;病例以散居儿童为主;乙脑病例主要集中于6~9月,而7~8月发病数多;蚊虫密度调查显示库蚊和三带喙库蚊为主要蚊种.结论 三省监测点与全国乙脑流行规律相同.贵州和四川省乙脑病例居全国前2位.

    作者:李艺星;尹遵栋;杨俊峰;陈园生;程均福;刘力;刘学成;周兴余;王昭孝;周敬祝;梁晓峰 刊期: 2006年第03期

  • 我国新分离乙脑病毒02-76株的全基因序列特征

    目的 对我国新分离乙脑病毒02-76株进行全基因序列测定和分析,了解乙脑病毒基因组结构及毒力特性.方法 设计乙脑病毒全基因组扩增引物,RT-PCR扩增片段,PCR产物直接测序,拼接后获得全基因序列.通过Clustal X(1.8)、DNASTAR、GENEDOC(3.2)等生物学软件进行核苷酸序列及氨基酸序列分析和病毒的系统进化分析.结果 新分离乙脑病毒02-76株全基因组全长10 977个核苷酸,从96位到10 391位,共10 296个核苷酸编码一个开放阅读框,编码3432个氨基酸.与我国1949年分离的Beijing-1株相比较共存在248个核苷酸差异,16个氨基酸差异.与GenBank中选择的29株乙脑病毒全基因序列比较发现,其核苷酸总体差异率为0.6%~15.1%,氨基酸总体差异率为0.2%~4.6%.通过PrM/C区段、E区段、3'NTR区段及全基因序列进行系统进化分析均显示该毒株属于基因3型乙脑病毒.结论 新分离的乙脑病毒02-76株属于基因3型,与中国分离株SA-14进化关系接近.

    作者:王环宇;潘晓玲;付士红;王雷;李铭华;Ichiro KURANE;梁国栋 刊期: 2006年第03期

  • HIV抗体快速检测试剂的临床评价

    目的 对注册前的HIV抗体快速检测试剂的质量进行临床评价.方法 用不同的评价试剂检测440份健康献血员样品、300份HIV抗体强阳性样品以及264份HIV感染高危人群样品,并分别计算其特异性和敏感性.结果 17家注册前试剂检测300份HIV抗体强阳性样品的敏感性为100%;检测440份健康献血员样品的特异性为97.7%~100%;检测264份HIV感染高危人群样品的特异性为59.1%~100%,敏感性为70.3%~95.1%.结论 不同试剂之间存在敏感性和特异性的差异,而且HIV感染的高危自然人群来源的样品有助于客观地反应试剂的质量差异.

    作者:李秀华;宋爱京;王佑春 刊期: 2006年第03期

  • 氧化苦参碱治疗小儿慢性乙型肝炎的临床观察

    我院感染科自1999年4月起,选取104例慢性乙型肝炎患者,随机分为治疗组和对照组,每组各52例.治疗组中:男34例,女18例,年龄5~14岁,平均年龄(10.8±5.2)岁.对照组中:男31例,女21例,年龄4~14岁,平均年龄(9.9±5.9)岁.

    作者:彭华彬;杨志国 刊期: 2006年第03期

  • 病毒性脑炎

    病毒、细菌、原虫、寄生虫等多种病原体均可引起脑组织炎症.病毒性脑炎(Virus encephalitis)是指病毒感染所引起的脑实质炎症,常表现为发热、头痛、抽搐、意识障碍和脑膜刺激症状等,可致中枢神经系统局灶性损害.病毒性脑炎预后不佳,死亡率高,常留有严重后遗症,如乙型脑炎患者的后遗症可达30%.病毒也可感染脑膜出现脑膜炎(Meningitis).脑膜炎可分为细菌性和无菌性两类.后者是指脑脊液涂片和细菌培养为隐性的脑膜炎.一般无菌性脑膜炎多为病毒感染所致,故无菌性脑膜炎和病毒性脑膜炎几乎成为同意词.病毒性脑膜炎的病程一般较短,预后较好.病毒性脑膜脑炎(Meningoencephalitis)是指脑实质和脑膜同时感染.

    作者:潘晓玲;梁国栋 刊期: 2006年第03期

  • 一起甲型肝炎和戊型肝炎的混合暴发

    全球少有甲型肝炎和戊型肝炎混合感染的报道.我们经过流行病学调查与实验室检测分析,证实了一起由甲型肝炎和戊型肝炎病毒混合感染引起的暴发.

    作者:姬铁闯 刊期: 2006年第03期

  • 西尼罗病毒E蛋白结构域Ⅲ特异性单克隆抗体的研制

    目的 研制针对西尼罗Ⅲ重组融合蛋白的特异性单克隆抗体.方法 用西尼罗Ⅲ重组融合蛋白免疫BALB/c小鼠,用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,并用间接ELISA方法进行筛选,所获得的单抗经间接ELISA、免疫印迹和间接免疫荧光试验进行鉴定.结果 共获得了3株能稳定分泌针对西尼罗河病毒E蛋白结构域Ⅲ的特异性单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为4F7、6H3和8E4,其单抗亚类鉴定分别属于IgG1、IgG1和Ig2a.这3株单克隆抗体均能与重组西尼罗河病毒E蛋白结构域Ⅲ发生特异性反应,而与日本脑炎病毒无交叉反应,并且,8E4和6H3识别同一抗原位点,4F7识别西尼罗河病毒E蛋白结构域Ⅲ的另一抗原位点.结论 本实验成功研制出针对西尼罗河病毒E蛋白结构域Ⅲ的特异性单克隆抗体,为我国建立西尼罗河病毒的病原学检测方法并与日本脑炎病毒进行鉴别诊断提供了技术贮备.

    作者:陈义平;杨艳菊;吴晓东;王志亮 刊期: 2006年第03期

中华实验和临床病毒学杂志

中华实验和临床病毒学杂志

主管:实验和临床病毒学杂志

主办:中国科学技术协会