赵蔚明；于修平；周亚滨；卞继峰；贾继辉；栾怡；齐眉；孙新六；王红
丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)是一种重要的致人类肝炎病毒,它与瘟病毒和黄病毒有相似的基因组结构,在分类上归属于黄病毒家族中的一个独立的属[1].与其他RNA病毒类似.HCV易发生变异,其基因序列呈高度异质性(heterogeneity).HCV基因组异质性可以见于两种情况:基因型(genotypes)和准种(quasispecies).其中,HCV准种在病毒逃避宿主免疫监视、病毒持续存在及耐受抗病毒治疗中的重要地位日益受到重视[2,3].
作者：陈嵩；王宇明 刊期： 2002年第04期
目的观察HBsAg阳性儿童对国产甲型肝炎灭活疫苗的免疫原性和安全性.方法随机选取121名1～10岁健康儿童和10名同龄的HBsAg阳性儿童,抗-HAV均阴性,接种唐山怡安生物工程有限公司研制的甲型肝炎灭活疫苗.接种剂量为500 U/剂和1 000 U/剂两组,免疫程序为0和6个月,并在初免后30 d,第二针后30和180 d用ELISA方法检测抗-HAV.结果 HBsAg阳性儿童和健康儿童接种500 U/剂和1 000 U/剂甲型肝炎灭活疫苗后抗体阳转率均为100%.第二针免疫后30 d抗体平均几何滴度500 U/剂组分别为4 684.9 mIU和4 535.6 mIU;1 000 U/剂组分别为5 399.8 mIU和7 347.1 mIU.二者比较差异无显著性,免疫后亦未见异常反应,初免后1年抗体水平仍然很高.结论 HBsAg阳性儿童接种国产甲型肝炎灭活疫苗具有良好的免疫应答,同时也是安全的.
作者：陈江婷；任银海；吴文婷；马守东；李胜平；王建红；康文学；韩连军；高拴景；张玉成；刘崇柏 刊期： 2002年第04期
目的了解常州地区乙型肝炎病毒基因型分布特征,探讨其基因型与肝功能损伤、病毒复制水平及对拉米夫定疗效的关系. 方法采用巢式聚合酶链反应 (nest-PCR), 扩增乙型肝炎病毒S基因区, 用末端标记方法对PCR产物标记并直接测序, 测序结果和GenBank中登录的标准基因型序列相比较. 结果对该地区146份不同HBV感染者血清HBV DNA进行了基因分型,B型51份 (34.9%),C型95份(65.1%),未发现B、C以外其他基因型;丙氨酸转氨酶(ALT)水平分别为383.8±335.7IU和364.3±333.7 IU,(t=0.335,P>0.05)、HBV DNA含量分别为107.795±1.22和107.69±1.19拷贝/毫升(t=0.138,P>0.05)、HBeAg 阳性数分别为36/51和64/95,(χ2=0.159,P>0.05);104例慢性乙型肝炎中B型为43例、C型为61例,28例肝硬化和肝癌患者检出B型4例、C型24例,二组比较χ2=7.65,P<0.01;23例B基因型患者和45例C基因型患者接受48周以上拉米夫定治疗,48周后反跳者B型为18例,C型为14例,χ2=13.49,P<0.001.结论本地区HBV DNA基因型为B型和C型;二种基因型丙氨酸转氨酶水平、病毒复制水平和HBeAg表达水平差异均无显著性;C基因型与肝硬化和肝癌关系密切;拉米夫定对C基因型患者的疗效强于B型.
作者：王永忠；周国平；李夏亭；周志武；周胜生；阮丽花；陈敏；邓为群 刊期： 2002年第04期
目的探索抗病毒药物联合免疫调节药物治疗慢性乙型肝炎的疗效.方法采用拉米夫定联合胸腺五肽治疗慢性乙型肝炎,同期单用拉米夫定或胸腺五肽作对照,动态观察血清HBV复制指标及肝功能.结果治疗结束时联合组血清HBeAg阴转及抗HBe阳转率明显优于拉米夫定组(P＜0.05),与胸腺五肽组比较差异无显著性(P＞0.05);联合组的HBV DNA阴转率优于胸腺五肽组(P＜0.05),与拉米夫定组比较差异无显著性(P＞0.05).治疗结束后6个月、12个月的病毒复制指标变化与治疗结束时无明显变化.联合组的显效率及总有效率均高于其他两组,且ALT复常率保持在85%以上.结论拉米夫定联合胸腺五肽治疗慢性乙型肝炎,可达到有效而持续的抗病毒作用.亦有利于ALT持久复常.
作者：唐善令；史文丽；张伟 刊期： 2002年第04期
目的观察单纯疱疹病毒1型(HSV-1)感染对体外原代培养鸡胚端脑神经元活性的影响.方法在Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)上接种HSV-1,并利用空斑实验测定病毒滴度;以106 PFU/ml病毒吸附感染原代培养鸡胚端脑神经元,用倒置显微镜、透射电镜、MTT细胞活性分析、DNA琼脂糖凝胶电泳,观察HSV-1感染对细胞活性的影响.结果 HSV-1感染神经元24,48,72 h与同时正常细胞比较,活性分别下降25%,56%,97%.形态学及DNA电泳显示神经元主要以坏死的形式死亡.结论 HSV-1感染导致神经元活性下降.
作者：王得新；王瑞金；冯子敬；王佳伟 刊期： 2002年第04期
目的纯化重组表达的汉滩病毒核蛋白.方法重组菌经IPTG诱导后,表达的目的蛋白为带有谷胱甘肽转硫酶(GST)标签的融合蛋白,并以包涵体形式存在.将包涵体变性、复性后,采用Glutathione Sepharose 4B 亲和色谱对核蛋白进行纯化,并用夹心ELISA和Western blot检测纯化蛋白.结果表达产物第一次过柱亲和层析后可去除杂蛋白,获得纯化的核蛋白与谷胱甘肽转硫酶的融合蛋白,再经凝血酶酶切,第二次过柱亲和层析后获得的穿过峰为核蛋白,洗脱峰为GST.纯化的融合蛋白和纯化的核蛋白均为SDS-PAGE单点纯,并具有良好的抗原活性.结论 Glutathione Sepharose 4B亲和色谱纯化重组汉滩病毒核蛋白是一种较为有效的方法.
作者：尹文；徐志凯；薛小平；刘勇；王海涛；张芳琳 刊期： 2002年第04期
目的探讨优化密码对人乳头瘤病毒6b型(HPV 6b)基因表达及免疫原性的影响,为治疗性DNA疫苗的研究奠定基础.方法设计合成含优化密码及pRB结合位点突变的HPV 6bE7(hu-mE7)全长基因.测序验证无误后,定向克隆于pcDNA3的KpnⅠ和EcoRⅠ位点,成功构建真核表达质粒pcDNA3-hu-mE7.体外转染COS-1细胞,免疫荧光检测其E7蛋白表达.C57BL/6小鼠胫前肌内接种裸DNA,观察其诱导的细胞免疫反应. 结果 pcDNA3-hu-mE7在COS-1细胞获得明显表达,表达产物主要位于细胞核中.DNA免疫结果显示,与含有野生型E7基因的表达质粒pcDNA3-wtE7比较,pcDNA3-hu-mE7免疫小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ产生明显升高,CD8+和CD4+淋巴细胞活性增强.结论优化密码能促进HPV 6b E7蛋白表达及DNA疫苗诱导的细胞免疫反应.
作者：赵蔚明；于修平；周亚滨；卞继峰；贾继辉；栾怡；齐眉；孙新六；王红 刊期： 2002年第04期
目的克隆与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白结合的肝细胞中的未知蛋白基因. 方法应用酵母双杂交系统,构建丙型肝炎病毒核心蛋白诱饵质粒,转化酵母AH109后与含文库质粒的酵母Y187进行配合,在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选.筛选出30个克隆,既能在四缺营养缺陷培养基上生长(SD/-Trp-Leu-Ade-His)又能在涂有x-α-gal的四缺培养平皿上长出蓝色菌落,提取此酵母克隆的质粒,转化大肠埃希菌后进行测序,进行生物信息学分析.结果分析结果显示,其中6号克隆的测序结果与Genbank中的2个未知功能序列有98%的同源性,初步证明了此基因与丙型肝炎病毒核心蛋白有结合性.结论丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白肝基因克隆成功.
作者：李克；王琳；成军；张玲霞；段惠娟；陆荫英；杨继珍；刘妍；夏小兵；王刚；董菁；李莉；钟彦伟；洪源；陈菊梅 刊期： 2002年第04期
对115例肝炎肝硬化患者血清钙、镁、磷水平进行测定观察,探讨其变化规律及临床意义.
作者：陈晓；张永宏；常德成 刊期： 2002年第04期
目的观察免疫活性细胞回输前后慢性丙型肝炎患者外周血丙型肝炎病毒(HCV)滴度及C区和E2区CTL表位的变化情况.方法定量PCR检测4例接受免疫活性细胞回输的慢性丙型肝炎患者外周血HCV滴度,并利用分子克隆、基因测序和计算机辅助分析技术分析不同时间点不同分离株CTL表位的变化情况.结果 4例患者在接受免疫活性细胞回输前后血清ALT水平存在不同程度波动,其差值从第2例患者的58到第1例患者的198,同时HCV滴度也发生了较大变化,其变化倍数从第3例患者的25.37倍到第4例患者的882.35倍,其对数转换值的波动幅度在1.40～2.94之间.在免疫活性细胞回输后4例患者外周血HCV滴度均出现了不同程度的一过性下降.在全部观察期内HCV C区和E2区的CTL表位编码区均未出现明确的变化.结论机体免疫攻击状态发生改变时可引起患者体内丙型肝炎病毒滴度的变化,但不伴随目前观察的CTL表位编码基因的改变.
作者：王齐欣；陈红松；丛旭；费然；高燕；孙婧；魏来；王宇 刊期： 2002年第04期
目的从流行病学调查入手,分析病毒性肝炎与胆石症之间的因果关系.方法统计本院1998年1月至2001年6月确诊的乙型肝炎住院病人510例,与同一时期非乙肝病人3598例做对照.将乙型肝炎(乙肝)患者分层为组,分别调查各组胆结石症的患病率,将资料按队列研究的设计,计算患胆石症的相对危险度RR,做组间RR的显著性检验(U检验).结果提示与对照组比较,乙肝患者中的慢性肝炎,肝硬化的患者,RR值显著升高,差异有非常显著性(P＜0.01),急性肝炎和瘀胆型肝炎RR值升高不显著.乙肝患者经长期服用中药,可使胆石症的患病率降低.结论研究提示胆石症的病因之一是乙肝的慢性病变改变,从而为胆石症的防治提供了流行病学的理论依据.
作者：张新力；田江克；董政；施源；苏颖；周艳贤 刊期： 2002年第04期
目的获取含有戊型肝炎病毒(HEV)全长结构基因的重组杆状病毒,表达戊型肝炎病毒结构蛋白.方法将HEV全长结构基因(5 147～7 126 nt)插入杆状病毒表达载体pAcUW51,与线性化杆状病毒DNA(Baculo Gold DNA)共转染Sf9昆虫细胞,挑病毒斑进一步感染Sf9细胞,用SDS-PAGE,Western Blot及免疫荧光检测戊型肝炎病毒结构蛋白的表达及活性.结果 SDS-PAGE分析表明HEV结构基因在杆状病毒系统中高效表达,有相对分子质量约为73 000和63 000两种形式;Western Blot及免疫荧光检测证明表达产物可与HEV阳性血清特异反应,说明具有HEV特异抗原性.结论应用杆状病毒表达系统成功表达了HEV结构蛋白.
作者：张明程；伊瑶；刘崇柏；毕胜利 刊期： 2002年第04期
大规模培养哺乳动物细胞是生产具有重要医用价值的生物制品,如疫苗、生长因子、单抗等的重要方法.哺乳动物细胞的大规模培养方式主要有传统的转瓶和现代的各种生物反应器.目前,我国乙型肝炎疫苗(转基因中华地鼠卵巢细胞产品)的生产采用转瓶培养方式.但近年来,应用载体和生物反应器大规模培养哺乳动物细胞已成为国际上细胞培养工业化有发展前途的技术[1].本室引进了国外新的篮式载体型生物反应器系统用于哺乳动物细胞系的大规模培养研究.
作者：宗芳；王文；张陵林；田淑芳；阮力 刊期： 2002年第04期
目的研究抗-HBV药拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的抗乙型肝炎病毒DNA的疗效.方法分治疗组和对照组,治疗组每日1次口服拉米夫定100 mg,疗程一年;对照组用一般护肝药治疗.定期检测血常规、肝功能及病毒学指标等.结果拉米夫定治疗慢性乙型肝炎疗程一年,ALT复常率为90.7%,HBV DNA阴转率为73.1%,与对照组相比差异有显著性(P＜0.05),HBeAg阴转率为50.0%,HBeAg/抗-HBe的血清转换率为38.2%,与对照组相比差异无显著性(P＞0.05),病情反复,ALT再次升高者治疗组为3.1%,与对照组相比较差异有显著性(P＜0.05),治疗2例重症肝炎患者,无1例死亡.结论拉米夫定能有效地抑制HBV DNA的复制,使ALT恢复正常,降低慢性乙型肝炎的复发率,提高患者存活率.
作者：温小凤；李雪梅；谢后禹；陈念；曾文凤；茹海匀；崔小平；汤中敏 刊期： 2002年第04期
目的对昆虫细胞系统表达纯化的中和性流感病毒血凝素基因工程全抗体IgG-IV-2,IgG-IV-6进行体外和体内抗病毒效果的研究.方法对比抗体应用前后病毒在MDCK细胞中的病毒滴度和动物模型中粘膜用药前后鼠肺内病毒滴度的改变,验证抗体的粘膜抗感染效果.结果两株基因工程抗体使4.5 log10TCID50 滴度的病毒下降1/2的剂量分别为0.8 μg和0.5 μg;动物模型的粘膜给药表明使4.0 log10TCID50的病毒下降1/2所需的抗体剂量IgG-IV-2为0.25 mg/kg体重,IgG-IV-6为0.1 mg/kg体重,联合应用时为0.08 mg/kg体重.结论获得的基因工程抗体具有体内体外的抗病毒效果,能够中和病毒毒力.
作者：杨贵宾；王艳；赵小东；韩峰；吴淑华；侯云德 刊期： 2002年第04期
目的研制可同时检测HIV-1、HIV-2抗体及p24抗原的胶体金快速诊断试剂.方法利用重组杆状病毒-昆虫细胞系统进行HIV-1 gp41及 HIV-2 gp36抗原的高效表达,以免疫亲和层析法纯化抗原.抗-HIV p24单克隆抗体杂交瘤细胞株,并制备抗-HIV p24单克隆抗体.以硝酸基纤维膜为载体,以纯化的HIV-1 gp41、HIV-2 gp36 抗原及抗 p24抗体点膜,20 nm 胶体金颗粒/抗人IgG和抗-HIV p24单克隆抗体进行标记,对33份已知HIV感染者阳性血清及6份阴性血清进行检测.结果通过重组杆状病毒-昆虫细胞系统进行HIV-1 gp41及HIV-2 gp36抗原的表达,可获取浓度为2.0 mg/L的纯化抗原.从抗p24单克隆抗体杂交瘤细胞株中培养上清液,通过葡萄球菌蛋白A免疫亲和层析柱可得到1.5 mg/L的纯化抗体.利用纯化的抗原抗体进行标记,对39份已知血清进行检测,与荷兰Organon公司HIV1+2抗体、p24抗原、ELISA诊断试剂同时检测结果进行比较,证实有较强的特异性及敏感性.结论同时检测HIV-1、HIV-2抗体及p24抗原快速诊断试剂的问世,可为HIV感染的诊断提供一个简便、可靠、敏感的方法.
作者：徐克沂；张永新；王瑛；Innocent MBAWUIKE 刊期： 2002年第04期
呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、腺病毒(adenovirus,ADV)是引起儿科急性下呼吸道感染的两种重要病原.实验室提供及时和准确的病原检测报告,对临床明确病因、采取适当治疗手段和防止滥用抗生素有重要意义.
作者：徐锦；丁韵珍；苏犁云；孙家娥；杨毅 刊期： 2002年第04期
目的获得真全长中国大陆2a型丙型肝炎病毒(HCV)5′非编码区 (5′UTR)cDNA,并分析其一级结构和二级结构,为进一步研究其在HCV复制、翻译中的调控机制、开发新的抗HCV药物奠定基础.方法利用逆转录套式聚合酶链反应(RT-PCR)联合限制性内切酶长度多态性分析(RFLP)初步筛选出1例2a型HCV感染者,采用cDNA 末端快速扩增技术(RACE)扩增出一条约800 bp的cDNA片段,A-T克隆,用RFLP与PCR鉴定重组子,全自动序列分析仪测定插入子序列,RNAdraw预测二级结构.结果 RACE法获得真全长2a型HCV 5′端序列.5个克隆中,3个克隆含全长5′UTR序列,与HCV-1,HC-C2,HC-J6,HC-J8相比,同源性分别为93.6%～94.4%, 92.1%～93.0%, 98.8%～99.7%,96.2%～96.5%,与2a型标准株HC-J6相比,21,170,222,247,339位不同,分别为G,A,C,C,T,但这些突变不影响其二级结构.另外2个克隆为5′端缺失突变株,分别缺失54 bp和144 bp.结论 RACE技术快速、有效、实用,可有效获得病毒基因组的末端序列;依此获得中国大陆2a型HCV的5′UTR cDNA;在感染者血液中存在5′端部分缺失的HCV基因片段.
作者：秦兆习；丛旭；蒋栋；哈明昊；陈红松；魏来 刊期： 2002年第04期
目的探讨B7-2分子是否能够增强乙型肝炎病毒(HBV) DNA疫苗诱导的特异性免疫应答.方法将B7-2表达质粒与HBV DNA 疫苗共接种于小鼠腓肠肌内,检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性,迟发性超敏反应(DTH)及抗-HBs滴度.结果 B7-2表达质粒与HBV DNA疫苗共接种组的DTH反应和CTL活性, 明显强于单独接种HBV DNA 疫苗组(P＜0.01).两组的抗-HBs滴度差异无显著性(P＞0.05).结论 B7-2表达质粒与HBV DNA疫苗共接种可显著增强抗-HBV 特异性细胞免疫应答(CMI).
作者：王延军；靳清汉；宋昌稳；孙斌 刊期： 2002年第04期
目的研究丙型肝炎患者血清中HCV E1抗体,确定HCV E1抗原在抗体检测中的应用价值.方法应用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测80份卫生部第3代HCV血清参比品,821例职业献血员血清和720例临床肝炎患者血清中E1抗体.结果用E1抗原单包板检查80份卫生部血清参比品的阳性符合率为70%、阴性符合率为100%;从821例职业献血员血清样品中检出E1抗体阳性率为1.9%;从720例临床肝炎患者血清中检出E1抗体阳性率为68%.大部分E1抗体阳性血清,同时也能和HCV的Core、NS 3抗原及NS 5A抗原呈阳性反应,但有个别血清只对E1抗原呈阳性反应.用市购HCV抗体ELISA检测试剂盒检测为阴性的218例肝炎科门诊患者、813例献血员和848例一般人群血清,用E1抗原单包板复检,检出的阴性率分别为1.4%、1.1%和0.9%.在3例患者血清学转变的追踪研究中,HCV E1抗体都同现早.结论用E1工程蛋白检测E1抗体具有较高的灵敏度和特异性.E1抗体在HCV感染患者中普遍存在而且早出现,在临床诊断上是有意义的.
作者：徐进平；叶林柏；郜金荣；张斌；阮华；吴正辉 刊期： 2002年第04期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
