周凌；郭坤元；李江琪
目的观察单纯疱疹病毒1型(HSV-1)感染对体外原代培养鸡胚端脑神经元活性的影响.方法在Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)上接种HSV-1,并利用空斑实验测定病毒滴度;以106 PFU/ml病毒吸附感染原代培养鸡胚端脑神经元,用倒置显微镜、透射电镜、MTT细胞活性分析、DNA琼脂糖凝胶电泳,观察HSV-1感染对细胞活性的影响.结果 HSV-1感染神经元24,48,72 h与同时正常细胞比较,活性分别下降25%,56%,97%.形态学及DNA电泳显示神经元主要以坏死的形式死亡.结论 HSV-1感染导致神经元活性下降.
作者：王得新；王瑞金；冯子敬；王佳伟 刊期： 2002年第04期
目的探讨流行性腮腺炎病毒性脑膜炎(腮脑)短程高效的治疗方法.方法以临床和实验室确诊的155例腮脑患者为观察组,采用地塞米松一次性鞘内注射治疗方法,并与同期入院的常规对症治疗组对照.结果观察组退热时间、头痛和脑膜刺激症状消失时间及治愈时间分别是32 h、15 h、12 h、3.1 d,明显优于对照组的58 h、24 h、32 h、6.5 d,且差异有非常显著性或差异有显著性(P<0.01或0.05).结论地塞米松一次性鞘内注射疗法治疗腮脑短程、高效,安全.
作者：赵敏；姜天俊；陈菊梅；周先志；周志平 刊期： 2002年第04期
对115例肝炎肝硬化患者血清钙、镁、磷水平进行测定观察,探讨其变化规律及临床意义.
作者：陈晓；张永宏；常德成 刊期： 2002年第04期
目的对昆虫细胞系统表达纯化的中和性流感病毒血凝素基因工程全抗体IgG-IV-2,IgG-IV-6进行体外和体内抗病毒效果的研究.方法对比抗体应用前后病毒在MDCK细胞中的病毒滴度和动物模型中粘膜用药前后鼠肺内病毒滴度的改变,验证抗体的粘膜抗感染效果.结果两株基因工程抗体使4.5 log10TCID50 滴度的病毒下降1/2的剂量分别为0.8 μg和0.5 μg;动物模型的粘膜给药表明使4.0 log10TCID50的病毒下降1/2所需的抗体剂量IgG-IV-2为0.25 mg/kg体重,IgG-IV-6为0.1 mg/kg体重,联合应用时为0.08 mg/kg体重.结论获得的基因工程抗体具有体内体外的抗病毒效果,能够中和病毒毒力.
作者：杨贵宾；王艳；赵小东；韩峰；吴淑华；侯云德 刊期： 2002年第04期
目的研制可同时检测HIV-1、HIV-2抗体及p24抗原的胶体金快速诊断试剂.方法利用重组杆状病毒-昆虫细胞系统进行HIV-1 gp41及 HIV-2 gp36抗原的高效表达,以免疫亲和层析法纯化抗原.抗-HIV p24单克隆抗体杂交瘤细胞株,并制备抗-HIV p24单克隆抗体.以硝酸基纤维膜为载体,以纯化的HIV-1 gp41、HIV-2 gp36 抗原及抗 p24抗体点膜,20 nm 胶体金颗粒/抗人IgG和抗-HIV p24单克隆抗体进行标记,对33份已知HIV感染者阳性血清及6份阴性血清进行检测.结果通过重组杆状病毒-昆虫细胞系统进行HIV-1 gp41及HIV-2 gp36抗原的表达,可获取浓度为2.0 mg/L的纯化抗原.从抗p24单克隆抗体杂交瘤细胞株中培养上清液,通过葡萄球菌蛋白A免疫亲和层析柱可得到1.5 mg/L的纯化抗体.利用纯化的抗原抗体进行标记,对39份已知血清进行检测,与荷兰Organon公司HIV1+2抗体、p24抗原、ELISA诊断试剂同时检测结果进行比较,证实有较强的特异性及敏感性.结论同时检测HIV-1、HIV-2抗体及p24抗原快速诊断试剂的问世,可为HIV感染的诊断提供一个简便、可靠、敏感的方法.
作者：徐克沂；张永新；王瑛；Innocent MBAWUIKE 刊期： 2002年第04期
目的分析慢性重型肝炎(慢重肝)的发病特点.方法使用SPASS及STATA软件对520例慢重肝患者的发病特点进行分析.结果①<10天、<2周、2～4周、4周～半年的发生率分别为10.4%、18.1%、17.1%及64.8%;②每组均有40%以上患者无明确的诱因,但30%以上患者有1～3种以上诱因,合并感染的发生率高,差异有非常显著性(P<0.01);③每组均有50%以上患者发生于肝硬化;④每组均有50%以上患者无肝性脑病,而腹水发生率均在75%以上,首先出现肝性脑病均低于5%,而首先出现腹水均在10%以上;⑤每组出现肝性脑病的晚时间均晚于变重时间.结论①520例患者均在慢性肝病的基础上逐渐发展成慢重肝的;②慢重肝在发病诱因、基础、肝性脑病发生率及出现时间、首先出现的合并症等方面与无肝病史的急性、亚急性重型肝炎相差较大,应独立命名并需加强研究.
作者：邹正升；陈菊梅；辛绍杰；邢汉前；李保森；李建宇；沈宏辉；刘艳萍 刊期： 2002年第04期
目的克隆与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白结合的肝细胞中的未知蛋白基因. 方法应用酵母双杂交系统,构建丙型肝炎病毒核心蛋白诱饵质粒,转化酵母AH109后与含文库质粒的酵母Y187进行配合,在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选.筛选出30个克隆,既能在四缺营养缺陷培养基上生长(SD/-Trp-Leu-Ade-His)又能在涂有x-α-gal的四缺培养平皿上长出蓝色菌落,提取此酵母克隆的质粒,转化大肠埃希菌后进行测序,进行生物信息学分析.结果分析结果显示,其中6号克隆的测序结果与Genbank中的2个未知功能序列有98%的同源性,初步证明了此基因与丙型肝炎病毒核心蛋白有结合性.结论丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白肝基因克隆成功.
作者：李克；王琳；成军；张玲霞；段惠娟；陆荫英；杨继珍；刘妍；夏小兵；王刚；董菁；李莉；钟彦伟；洪源；陈菊梅 刊期： 2002年第04期
丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)是一种重要的致人类肝炎病毒,它与瘟病毒和黄病毒有相似的基因组结构,在分类上归属于黄病毒家族中的一个独立的属[1].与其他RNA病毒类似.HCV易发生变异,其基因序列呈高度异质性(heterogeneity).HCV基因组异质性可以见于两种情况:基因型(genotypes)和准种(quasispecies).其中,HCV准种在病毒逃避宿主免疫监视、病毒持续存在及耐受抗病毒治疗中的重要地位日益受到重视[2,3].
作者：陈嵩；王宇明 刊期： 2002年第04期
目的观察免疫活性细胞回输前后慢性丙型肝炎患者外周血丙型肝炎病毒(HCV)滴度及C区和E2区CTL表位的变化情况.方法定量PCR检测4例接受免疫活性细胞回输的慢性丙型肝炎患者外周血HCV滴度,并利用分子克隆、基因测序和计算机辅助分析技术分析不同时间点不同分离株CTL表位的变化情况.结果 4例患者在接受免疫活性细胞回输前后血清ALT水平存在不同程度波动,其差值从第2例患者的58到第1例患者的198,同时HCV滴度也发生了较大变化,其变化倍数从第3例患者的25.37倍到第4例患者的882.35倍,其对数转换值的波动幅度在1.40～2.94之间.在免疫活性细胞回输后4例患者外周血HCV滴度均出现了不同程度的一过性下降.在全部观察期内HCV C区和E2区的CTL表位编码区均未出现明确的变化.结论机体免疫攻击状态发生改变时可引起患者体内丙型肝炎病毒滴度的变化,但不伴随目前观察的CTL表位编码基因的改变.
作者：王齐欣；陈红松；丛旭；费然；高燕；孙婧；魏来；王宇 刊期： 2002年第04期
目的探讨逆转录病毒载体介导人类G6PD基因在人白血病细胞中的表达.方法构建G6PD cDNA的逆转录病毒表达载体pLG6PDSN,转染包装细胞PA317,病毒上清感染人红白血病细胞K562,以PCR方法检测病毒载体是否整合于细胞基因组,定量法测定G6PD表达.t检验比较转染组与对照组间的表达差异.结果酶切鉴定表明,G6PD cDNA准确插入pLXSN相应位点,载体构建成功.转染后PCR扩增NeoR基因,证明细胞DNA整合有逆转录病毒载体.转染组与对照组酶活性测定差异有显著性(P<0.01).结论本试验所构建的重组载体pLG6PDSN为严重G6PD缺陷症的基因治疗提供了表达载体.
作者：周凌；郭坤元；李江琪 刊期： 2002年第04期
目的纯化重组表达的汉滩病毒核蛋白.方法重组菌经IPTG诱导后,表达的目的蛋白为带有谷胱甘肽转硫酶(GST)标签的融合蛋白,并以包涵体形式存在.将包涵体变性、复性后,采用Glutathione Sepharose 4B 亲和色谱对核蛋白进行纯化,并用夹心ELISA和Western blot检测纯化蛋白.结果表达产物第一次过柱亲和层析后可去除杂蛋白,获得纯化的核蛋白与谷胱甘肽转硫酶的融合蛋白,再经凝血酶酶切,第二次过柱亲和层析后获得的穿过峰为核蛋白,洗脱峰为GST.纯化的融合蛋白和纯化的核蛋白均为SDS-PAGE单点纯,并具有良好的抗原活性.结论 Glutathione Sepharose 4B亲和色谱纯化重组汉滩病毒核蛋白是一种较为有效的方法.
作者：尹文；徐志凯；薛小平；刘勇；王海涛；张芳琳 刊期： 2002年第04期
目的筛选人源抗HIV-1 gp120趋化蛋白受体结合位点噬菌体Fab单克隆抗体基因.方法根据HIV-1 gp120趋化蛋白受体结合位点的氨基酸序列合成23肽,并以此为固相抗原从HIV-1噬菌体Fab抗体库筛选阳性克隆,并进行鉴定及序列测定.结果获得了1株抗HIV-1 gp120趋化蛋白受体结合位点的人源Fab抗体克隆,具有较高的亲和力、特异性和抑制率,序列测定及分析显示该抗体属IgG Ⅰ亚类,κ型,重、轻链可变区分别属VhⅢ和VκⅢ基因家族.结论成功地获得了人源抗HIV-1 gp120趋化蛋白受体结合位点噬菌体Fab单克隆抗体基因.
作者：沈宏辉；貌盼勇；洪世雯；侯俊；杨健洋 刊期： 2002年第04期
目的观察HBsAg阳性儿童对国产甲型肝炎灭活疫苗的免疫原性和安全性.方法随机选取121名1～10岁健康儿童和10名同龄的HBsAg阳性儿童,抗-HAV均阴性,接种唐山怡安生物工程有限公司研制的甲型肝炎灭活疫苗.接种剂量为500 U/剂和1 000 U/剂两组,免疫程序为0和6个月,并在初免后30 d,第二针后30和180 d用ELISA方法检测抗-HAV.结果 HBsAg阳性儿童和健康儿童接种500 U/剂和1 000 U/剂甲型肝炎灭活疫苗后抗体阳转率均为100%.第二针免疫后30 d抗体平均几何滴度500 U/剂组分别为4 684.9 mIU和4 535.6 mIU;1 000 U/剂组分别为5 399.8 mIU和7 347.1 mIU.二者比较差异无显著性,免疫后亦未见异常反应,初免后1年抗体水平仍然很高.结论 HBsAg阳性儿童接种国产甲型肝炎灭活疫苗具有良好的免疫应答,同时也是安全的.
作者：陈江婷；任银海；吴文婷；马守东；李胜平；王建红；康文学；韩连军；高拴景；张玉成；刘崇柏 刊期： 2002年第04期
普马拉病毒(puumala virus, PUUV)引起人类肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS),是流行性肾病(nephropathia epidemica,NE)的病原体,NE的病死率一般低于由汉滩型、汉城型和Dobrava型病毒引起的HFRS.
作者：刘刚；李川；扈光伟；李悦；姚来顺；陈玉庆；黄飚；任明；陈允志；吴世新；于传友；那宝终；钟向东；孙悦新；李文新；李德新 刊期： 2002年第04期
呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、腺病毒(adenovirus,ADV)是引起儿科急性下呼吸道感染的两种重要病原.实验室提供及时和准确的病原检测报告,对临床明确病因、采取适当治疗手段和防止滥用抗生素有重要意义.
作者：徐锦；丁韵珍；苏犁云；孙家娥；杨毅 刊期： 2002年第04期
目的探讨优化密码对人乳头瘤病毒6b型(HPV 6b)基因表达及免疫原性的影响,为治疗性DNA疫苗的研究奠定基础.方法设计合成含优化密码及pRB结合位点突变的HPV 6bE7(hu-mE7)全长基因.测序验证无误后,定向克隆于pcDNA3的KpnⅠ和EcoRⅠ位点,成功构建真核表达质粒pcDNA3-hu-mE7.体外转染COS-1细胞,免疫荧光检测其E7蛋白表达.C57BL/6小鼠胫前肌内接种裸DNA,观察其诱导的细胞免疫反应. 结果 pcDNA3-hu-mE7在COS-1细胞获得明显表达,表达产物主要位于细胞核中.DNA免疫结果显示,与含有野生型E7基因的表达质粒pcDNA3-wtE7比较,pcDNA3-hu-mE7免疫小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ产生明显升高,CD8+和CD4+淋巴细胞活性增强.结论优化密码能促进HPV 6b E7蛋白表达及DNA疫苗诱导的细胞免疫反应.
作者：赵蔚明；于修平；周亚滨；卞继峰；贾继辉；栾怡；齐眉；孙新六；王红 刊期： 2002年第04期
目的了解甲型流感病毒H9N2亚型毒株在深圳地区鸡群和人群中的分布.方法采用常规的鸡胚双腔法来分离病毒.抗体测定,采用红细胞凝集抑制(HI)试验和中和试验测定法.结果从深圳地区农贸市场鸡群中分离到27株H9N2亚型流感病毒,但未能从人群中分离到H9N2病毒.约有26%人血清中检测到H9亚型毒株的抗体,(HI滴度≥20),同时还发现抗体阳性率和几何均数随人群年龄增长而增高,同时与职业有关.然而,在鸡群中H9毒株的抗体阳性率仅为7%.结论禽H9N2毒株不仅能感染人,而且在深圳地区人群和禽类中较为广泛的分布.人H9N2很大可能来源于鸡的H9N2毒株.
作者：程小雯；刘建军；何建凡；单芙香 刊期： 2002年第04期
目的观察慢性乙型肝炎(CH-B)患者血清、肝组织中HBV DNA含量与庚型肝炎病毒(HGV)感染的关系,探讨HGV感染对CH-B患者乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学法、荧光定量PCR(FQ-PCR)技术方法对56份CH-B患者血清HGV RNA、肝组织HGV Ag、血清及肝组织中HBV DNA含量分别进行了检测,并将血清HGV RNA与肝组织HGV Ag的表达、HGV RNA、HGV Ag阳性与阴性患者HBV DNA含量分别进行了对比研究.结果血清HGV RNA、肝组织HGV Ag阳性分别为10份(17.9%)、8份(14.3%).血清HGV RNA阳性与肝组织HGV Ag表达显著相关(P＜0.01),但部分肝组织HGV Ag阴性患者亦有血清HGV RNA表达.血清HGV RNA、肝组织HGV Ag阳性与阴性患者血清及肝组织中HBV DNA含量差异无显著性 (P＞ 0.05). 结论 HGV感染对CH-B患者HBV复制无影响.HGV可在肝脏中复制,但致病性可能较微弱.
作者：商庆华；于建国；卓海龙；徐传镇；王宁；张光曙 刊期： 2002年第04期
目的获取含有戊型肝炎病毒(HEV)全长结构基因的重组杆状病毒,表达戊型肝炎病毒结构蛋白.方法将HEV全长结构基因(5 147～7 126 nt)插入杆状病毒表达载体pAcUW51,与线性化杆状病毒DNA(Baculo Gold DNA)共转染Sf9昆虫细胞,挑病毒斑进一步感染Sf9细胞,用SDS-PAGE,Western Blot及免疫荧光检测戊型肝炎病毒结构蛋白的表达及活性.结果 SDS-PAGE分析表明HEV结构基因在杆状病毒系统中高效表达,有相对分子质量约为73 000和63 000两种形式;Western Blot及免疫荧光检测证明表达产物可与HEV阳性血清特异反应,说明具有HEV特异抗原性.结论应用杆状病毒表达系统成功表达了HEV结构蛋白.
作者：张明程；伊瑶；刘崇柏；毕胜利 刊期： 2002年第04期
目的探讨B7-2分子是否能够增强乙型肝炎病毒(HBV) DNA疫苗诱导的特异性免疫应答.方法将B7-2表达质粒与HBV DNA 疫苗共接种于小鼠腓肠肌内,检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性,迟发性超敏反应(DTH)及抗-HBs滴度.结果 B7-2表达质粒与HBV DNA疫苗共接种组的DTH反应和CTL活性, 明显强于单独接种HBV DNA 疫苗组(P＜0.01).两组的抗-HBs滴度差异无显著性(P＞0.05).结论 B7-2表达质粒与HBV DNA疫苗共接种可显著增强抗-HBV 特异性细胞免疫应答(CMI).
作者：王延军；靳清汉；宋昌稳；孙斌 刊期： 2002年第04期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
