学术投稿

幽门螺杆菌融合基因vacA-hpaA的克隆及在大肠杆菌和双歧杆菌中的表达

王国富;高峰;薛士鹏;吴利先

关键词:幽门螺杆菌, 融合基因vacA-hpaA, 双歧杆菌, 大肠杆菌, 表达
摘要:目的 构建幽门螺杆菌融合基因vacA-hpaA的大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒,并观察其在大肠杆菌(E.coli)和双歧杆菌(B.bifidium)中的表达情况.方法 通过PCR得到hpaA-vacA融合基因,将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-hpaA-vacA,电穿孔转化入大肠杆菌BL21和双歧杆菌.转化菌经IPTG诱导,然后用SDS-PAGE和Western blotting方法鉴定表达的重组蛋白.结果 构建了重组质粒pGEX-vacA-hpaA,vacA-hpaA融合基因的分子量约为1548bp;经SDS-PAGE分析,在大肠杆菌中表达出85kD的融合蛋白,表达的蛋白约占细菌总蛋白的20.5%;在双岐杆菌中也能得到正确表达,但表达量较大肠杆菌低,占细菌总蛋白约8.5%.Western blotting结果确认了该条带为hpaA-vacA融合基因的产物.结论 构建的重组质粒pGEX-hpaA-vacA能够在大肠杆菌及双歧杆菌中获得表达.
中国现代医学杂志相关文献
  • 干预协同刺激分子CD86对生殖道沙眼衣原体感染小鼠妊娠结局的影响

    目的 了解小鼠感染沙眼衣原体后的妊娠结局,以及CD86mAb干预治疗后对妊娠结局的影响及与体内Th1型、Th2型细胞因子水平的关系.方法建立小鼠沙眼衣原体生殖道感染模型,合笼受孕后为模型组,受孕后孕4d腹腔注射CD86 mAb100μg作为治疗组,将未受衣原体感染孕鼠作为对照组.孕12d用酶联免疫法检测各组小鼠血清中Th1型(IFN-γ)和Th2型(IL-4)细胞因子的表达水平.结果(①模型组Th1型细胞因子(IFN-γ)上升,较对照组和治疗组差异有统计学意义(P<0.05),②模型组胚胎吸收率升高,较对照组和治疗组差异有统计学意义(P<0.05).③3组的受孕情况、胚重、孕期体质量增加量差异无统计学意义.结论 小鼠感染沙眼衣原体后体内Th1细胞因子IFN-γ增加,形成Th1型偏倚,增加了胚胎吸收率;CD86mAb干预可降低Th1型偏倚程度,降低小鼠胚胎吸收率.

    作者:肖国宏;侯棚钟;陈敦金;孙利华;杨智莺;郑和平;薛耀华 刊期: 2011年第35期

  • 乙酰肝素酶的RNA干扰对B16黑素瘤细胞实验性肝转移的影响

    目的 研究用RNA干扰的方法抑制乙酰肝素酶的表达及其对B16黑色素瘤细胞实验性肝脏转移的影响.方法 将HPA siRNA转入B16黑色素瘤细胞,抑制HPA的表达,并测定该细胞的增殖能力及黑色素生成能力;还将RNA干扰的B16黑色素瘤细胞注入小鼠脾脏测定其实验性肝转移的能力,并与对照组比较.结果 将HPA siRNA转入B16黑色素瘤细胞,行RNA干扰后获得HPA较低表达的细胞(表达水平为对照组的20%,P<0.01),而黑色素生成及细胞增殖能力不受影响(P>0.05).将该细胞注入小鼠脾脏后,计数实验性肝转移结节的数目,实验组较对照组肝脏转移结节明显减少(P<0.01).结论 B16黑色素瘤细胞经RNA干扰后,随着HPA表达的降低,细胞转移能力下降.RNA干扰抑制HPA的表达,是一种理想的抗肿瘤治疗方法.

    作者:周少波 刊期: 2011年第35期

  • 胆总管腺癌Musashi-1和ALDH1表达及其临床病理意义

    目的 研究胆总管腺癌和癌旁组织中Musashi-1和ALDH1两种癌干细胞标记物表达水平及其临床病理意义.方法 40例胆总管腺癌和15例癌旁组织手术切除标本常规制作石蜡包埋切片,PUMA和ABCG2染色方法为EnVisionTM免疫组织化学法.结果 胆总管腺癌Mus-1和ALDH1表达阳性率明显高于癌旁组织(Mus-1:52.5%与13.3%,x2=6.89,P<0.01;ALDH1:40.0%与6.7%,x2=5.68,P<0.05);PUMA和ABCG2表达阳性的癌旁组织上皮均呈现轻至中度不典型增生;腺癌Ⅰ级和淋巴结未转移病例Mus-1和ALDH1表达阳性率低于腺癌Ⅲ级和淋巴结转移病例(P<0.05);Mus-1和ALDH1在胆总管腺癌中的表达呈明显一致性(x2=6.19,P<0.05).结论 Mus-1和ALDH1表达与胆总管腺癌发生、临床生物学行为及预后有较密切的关系.

    作者:黄江生 刊期: 2011年第35期

  • 葛根素对散发阿尔茨海默病线粒体损伤的保护作用研究

    目的 观察葛根素对散发阿尔茨海默病(SAD)线粒体损伤的保护作用.方法 在无mtDNA的神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y cells)中转入SAD患者血小板中的mtDNA,制备SAD胞质杂交细胞模型,观察不同浓度的葛根素对该模型细胞存活率(MTT实验)、细胞凋亡(流式细胞法)及ROS水平(荧光法)的影响.结果 给予葛根素(0.1~10.0μmoL/L)24h后,SAD胞质杂交细胞的存活率分别为(76.00±3.8)%、(81.66±3.4)%和(89.67±4.5)%,有明显的浓度依赖性;并且凋亡率分别为21.83%、14.58%和14.60%,各组间差异具有统计学意义;而且SAD胞质杂交细胞的ROS水平较对照组增加(P<0.01),葛根素则能改善SAD胞质杂交细胞的ROS水平.结论 葛根素通过降低细胞内ROS水平,以保护SAD线粒体.

    作者:张海英;易西南;刘亦恒;劳梅丽;张显芳;胡海涛 刊期: 2011年第35期

  • 对南亚留学生医学生物化学实验教学质量问题的探讨

    随着医学教育国际化的发展,留学生英语教学成为医学院面临的新课题.通过对印度BASAVESHWARA MEDICAL COLLEGE的交流学习和对南亚留学生班的生物化学实验教学体会,就留学生的教学内容、考试形式和课堂纪律进行了探讨和思索,以期进一步提高留学生医学生物化学实验教学的质量,增强国际间医学教育的合作.

    作者:周静华 刊期: 2011年第35期

  • 临床教学医院研究生实验病理学技术的教学实践与探索

    实验病理学技术是临床医学科研实践中的重要专业技能.为了培养和提高临床教学医院研究生的实验病理学技术的理论水平和实验操作能力,文章分析了临床教学医院研究生实验病理学技术培养的现状,并从课程教学和实验室教学两个层面,阐述了对临床医学专业研究生的实验病理学技术的教学模式、教学内容、教学方法和实验室组织病理学分析平台建设和管理等方面的教学实践和探索.

    作者:黄琛;杨燕琳;陈栎 刊期: 2011年第35期

  • 颈椎前路手术早期并发症的防治探讨

    目的 探讨颈椎前路手术早期并发症及其防治措施.方法 回顾性分析该院2007年5月~2010年6月颈椎前路手术186例.其中颈椎病92例,颈椎间盘突出症59例,颈椎外伤32例,颈椎后纵韧带钙化3例,采用前路减压自体髂骨植骨融合带锁钢板内固定术95例,前路减压钛网植骨融合带锁钢板内固定术91例.结果 术后随访3个月~1年,平均7个月20d.手术相关并发症16例,发生率为8.5%,其中喉上、喉返神经损伤5例,脑脊液瘘3例,钢板螺钉松动、滑脱2例,颈部血肿2例,脊髓损伤加重1例,应激性溃疡2例,胸导管损伤1例.结论 颈椎前路手术早期并发症原因较多,充分的术前准备,熟悉颈前路解剖,严格规范化操作以及良好的术后处理,是有效颈防和应对颈椎前路手术早期并发症的的关键.

    作者:范凌;潘显明;权毅;邓少林;黄刚;李伟;屈波 刊期: 2011年第35期

  • 规则性和非规则性肝叶切除术对肝胆管结石病的疗效比较

    目的 探讨规则性肝叶切除术和非规则性肝叶切除术对肝胆管结石病的疗效.方法 对114例行规则性肝叶切除术、40例行非规则性肝叶切除术的肝胆管结石病患者的临床资料进行回顾性分析,比较两组患者在手术时间、术中出血量、术后输血、术后并发症、住院时间、结石清除率等方面的差异.结果 规则性肝叶切除术组除手术时间长于非规则性肝叶切除术组以外,其他各方面均优于非规则性肝叶切除术组(P<0.05).结论 规则性肝叶切除术更适于临床治疗肝胆结石病.

    作者:李青 刊期: 2011年第35期

  • 荧光素酶标记的肺癌细胞系的建立及动物模型验证

    目的 建立一株稳定表达萤火虫荧光素酶的人肺癌细胞系并通过裸鼠成瘤模型进行验证.方法 酶切并连接萤火虫荧光素酶基因到真核表达载体pRc/CMV2上构建pRc/CMV2-1uc重组质粒,脂质体2000转染到肺癌细胞株A549,经G418筛选得到抗性克隆,荧光素酶活性检测筛选出荧光素酶活性高的稳定细胞克隆.小动物活体影像系统检测确定稳定细胞克隆生物发光能力和细胞数量的关系,建立裸鼠皮下成瘤模型并分析移植瘤的发光强度和肿瘤生长的相关性.结果 重组质粒pRc/CMV2-1uc转染A549细胞后,经G418筛选的抗性克隆传代至40代时,确定3株荧光素酶活性较高的阳性克隆,高的9号克隆,1×105个细胞的RLU值为9.44×105.小动物活体影像系统检测发现阳性克隆的发光强度与细胞数量呈正相关(R2=0.99);9号克隆皮下接种裸鼠形成接种瘤,其发光强度与肿瘤的生长正相关.结论 成功构建了稳定表达萤火虫荧光素酶的A549细胞系,该细胞系可在小鼠活体水平动态监测其发生、发展.

    作者:刘启才;郑国兵;李晓艳;彭燕;张金栋;周问渠;李冰 刊期: 2011年第35期

  • 复杂医源性胆道损伤的治疗经验(附82例报道)

    目的 探讨复杂医源性胆道损伤的治疗方法.方法 回顾性分析1990~2007年湖南省人民医院肝胆科收治的82例复杂医源性胆道损伤患者的临床资料.结果 复杂医源性胆道损伤再手术的方式较多,以肝胆管盆式Roux-en-y术较好,占93.4%(75/80),71例获平均4年7个月随访,效果良好率达85%(60/71).结论 肝胆管盆式Roux-en-y术是治疗复杂医源性胆道损伤常用的有效术式,如何发现并找到毁损以上胆管是手术关键.

    作者:吴金术;彭创;欧晔;成伟 刊期: 2011年第35期

  • 同型半胱氨酸致内皮细胞、平滑肌细胞和泡沫细胞低密度脂蛋白受体DNA甲基化的比较研究

    目的 观察同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞、平滑肌细胞以及泡沫细胞中低密度脂蛋白受体(LDLR)DNA甲基化的影响.方法 原代培养内皮细胞、人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMCs)和单核细胞源性泡沫细胞,用0、50、100、200和500μM Hcy干预后培养72 h,提取基因组DNA,巢式降落式PCR(nMS-PCR)法分别检测3种细胞中LDLR DNA甲基化修饰状态的变化,以观察Hcy对不同细胞LDLR的作用和影响.结果 内皮细胞、VSMCs与不同浓度Hcy培养72 h后,LDLR基因启动子区DNA呈高甲基化改变,泡沫细胞LDLR启动子区DNA呈低甲基化改变,与对照组比较差异有统计学意义(P <0.05,P<0.01),且以50或100μM Hcy组明显.结论 Hcy对不同细胞LDLR启动子区DNA甲基化的影响有差异性,提示可能存在更深层次的机制.

    作者:孙炜炜;马琳娜;徐支芳;马长剑;王菊;巩慧慧;姜怡邓 刊期: 2011年第35期

  • 前列腺素E1控制性降压对老年患者血浆内皮素和降钙素基因相关肽的影响

    目的 研究前列腺素E1用于老年患者控制性降压时对血浆内皮素(ET)和降钙素基因相关肽(CGRP)的影响.方法 86例择期全麻下行鼻内镜手术的老年患者随机分为前列腺素组E1(P组,43例)和硝酸甘油组(N组,43例).两组分别以前列腺素E1和硝酸甘油持续输注,使平均动脉压(MAP)下降25%~30%.以麻醉前(T0)、降至目标血压时(T1)、降压后30min(T2)、停降压时(T3)及停降压后30min(T4)为时点,记录两组MAP、HR和血乳酸(LAC)及ET、CGRP和ET/CGRP值.结果 在T1、T2和T3时间点N组HR较降压前增快,P组与降压前接近,N组高于P组(P<0.05).N组在T2、T3和T4时间点ET值较T0时升高(P<0.05),P组降压前后结果相似,且N组高于P组(P<0.05);P组CGRP自降压后开始升高,T1~T4与T0比较差异有统计学意义,N组CGRP在降压完成时升高但随即开始下降,T2~T4低于P组(P<0.05);P组ET/CGRP在降压前后变化不明显,而N组T2~T4高于T0且高于P组(P<0.05).结论 前列腺素E1用于控制性降压能维持ET/CGRP的稳定,有利于维持老年患者在降压和复压期间血管的正常调节功能.

    作者:舒爱华;占乐云;王强;吕恩;张明瑜;陈小波 刊期: 2011年第35期

  • 实验性牙髓炎保存活髓的研究

    目的 探索牙髓炎保存活髓的方法.方法 将20只成功建立实验性牙髓炎模型的新西兰大白兔,按时间分为1、3、5、7d4组;每只兔采用自身对照的方法,随机将两颗下颌前牙分为实验组和对照组,实验组在牙颈部钻2个引流孔,分别插入制备好的5号小儿头皮静脉针,头皮针周围用玻璃离子密封,再分别接5mL注射器,1支用于抽负压,另1支向髓腔内注入抗生素液,冲洗结束后,头皮针两端胶管用酒精棉球填塞,头皮针作为引流管保留;对照组使用碘仿糊剂处理.分别于1、3、5、7d处死兔子,收集牙齿标本,显微镜下观察炎症控制情况.结果 实验组第1天5例中炎症4例,愈合1例;对照组5例中炎症5例,愈合0例.实验组第3天5例中愈合5例,炎症0例;对照组5例中愈合2例,炎症3例.实验组第5天5例中愈合5例,炎症0例;对照组5例中愈合4例,炎症1例.实验组、对照组第7天全部愈合.结论 牙髓炎进行牙颈部钻孔引流能有效保存活髓.

    作者:毛小泉;黄茜;朱亚丽;曾鸣;徐普 刊期: 2011年第35期

  • 酒石酸托特罗定联合酒石酸唑吡坦治疗经尿道前列腺电切术后膀胱痉挛128例疗效观察

    目的 观察酒石酸托特罗定联合酒石酸唑吡坦治疗经尿道前列腺电切术(TURP)后膀胱痉挛的效果.方法 随机将128例前列腺增生术后患者分成3组,联合用药组手术当日起口服酒石酸托特罗定片2mg,每日2次,酒石酸唑吡坦10mg每晚1次,至停留置导尿后1d;托特罗定组手术当日起口服酒石酸托特罗定片2mg,每日2次至停留置导尿后1d;对照组仅于患者诉疼痛不适时予度冷丁75mg肌内注射.结果 联合用药组在术后72h内膀胱痉挛次数、膀胱痉挛持续时间及膀胱冲洗转清时间均少于托特罗定组及对照组.结论 酒石酸托特罗定联合酒石酸唑吡坦治疗前列腺术后膀胱痉挛疗效显著.

    作者:宋光庆;宋小军;曾子健;康颂东;汪东文;王伟 刊期: 2011年第35期

  • 20例正颌患者人格特征及健康质量分析

    目的 通过对比正颌患者与普通人群的人格特征差异以及患者治疗过程中健康相关生命质量指数变化,为正颌手术中的医疗纠纷提供心理评估参照.方法 采用艾森克人格问卷(EPQ)和卡特尔个性因素测验(16PF)评定20例正颌手术患者及40例对照者的人格特征,以及采用健康相关生命质量问卷(HRQL)对患者进行调查.结果 EPQ分析显示正颌患者组属于高精神质人格(P <0.05);16PF分析显示患者组怀疑性因子得分明显高于对照组(P<0.05);并且正颌治疗后患者HRQL改善明显.结论 正颌手术患者人格特征多为敏感猜疑、具有精神质、不友好的人格倾向,但正颌治疗能明显改善患者的健康质量水平.建议实施正颌外科手术前应对患者进行适当的心理评估.

    作者:王银莲;张怡;李宁;陈斯 刊期: 2011年第35期

  • Triton X-100、环氧氯丙烷联合改性处理牛颈静脉带瓣管道的体内外生物相容性研究

    目的 评价Triton X-100、环氧氯丙烷联合改性处理戊二醛固定的牛颈静脉带瓣管道的体内外生物相容性.方法 取新鲜牛颈静脉,热缺血时间在2h以内,依次经戊二醛、Triton X-100、环氧氯丙烷交联处理,制备出新型抗钙化牛颈静脉带瓣管道(EC+Tr组);以单纯戊二醛处理的牛颈静脉为对照(GA组),参照国家植入材料的检验标准,采用处理后牛颈静脉材料浸提液进行溶血试验、皮内注射刺激试验、急性全身毒性试验和细胞毒性试验.结果 溶血试验中,EC+Tr组溶血率为2.6%,小于GA组3.7%的溶血率(P<0.05),符合国家标准(<5%);皮内刺激试验中,EC+Tr组PII(原发性刺激指数)为0.5,小于GA组的0.87,提示对受试动物皮肤刺激轻微;急性全身毒性试验中,受试动物均未出现毒性症状;细胞毒性试验中,EC+Tr组培养的L-929小鼠成纤维细胞经100%浓度材料浸提液处理后形态良好,增殖率达87.55%,毒性评级为1级(合格),优于GA组结果(增值率为69.47%,毒性评级为2级,P<0.05).结论 Triton X-100、环氧氯丙烷联合改性处理戊二醛固定的牛颈静脉带瓣管道符合国家标准,具有良好的生物相容性,为进一步临床应用提供了理论依据.

    作者:林曦;张卫达;王晓武;张宏斌;赵华福;向文星 刊期: 2011年第35期

  • 耐亚胺培南鲍曼不动杆菌体外敏感性试验研究

    目的 了解耐亚胺培南鲍曼不动杆菌体外药敏状况,为临床用药提供参考.方法 收集2007年1月~2010年12月63株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌临床标本,采用法国生物梅里埃Vitek-Compact全自动微生物鉴定仪鉴定细菌,并进行药物敏感试验以及对多黏菌素B和替加环素的敏感性试验.结果 63株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌对15种常用抗菌药物呈现多重耐药特点,对头孢哌酮/舒巴坦的敏感率高,为31.7%,对替加环素和多黏菌素B的敏感率为95.2%和100%.结论 碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的耐药状况加大了院内感染控制的难度,临床应加强监测,积极防止多重耐药菌的传播.

    作者:杨义灿;赵业琼;朱庆 刊期: 2011年第35期

  • 脑胆固醇代谢对阿尔茨海默病的影响研究进展

    阿尔茨海默病(alzheimer's disease,AD)是以进行性认知功能障碍和行为损害为特点的原因不明的中枢神经系统退行性疾病,其发生发展与脂质代谢异常、淀粉样蛋白异常、血管炎症、神经递质异常、遗传变异等多种因素有关.全文主要针对脑胆固醇代谢对AD的影响研究进展进行综述.

    作者:胡敏予;毛敏;郭颖;刘嫣 刊期: 2011年第35期

  • LiCl对脐带血有核细胞增殖作用和信号传导研究

    目的 探讨不同浓度LiCl对脐带血有核细胞增殖、集落形成以及细胞凋亡的影响,观察在此过程中LiCl对脐带血有核细胞β-catenin表达的作用.方法 应用红细胞裂解方法获得脐带血有核细胞,以5000个/孔细胞接种到96孔板和1×105个/孔细胞接种到24孔板,应用不同浓度(10、20和40mM)LiCl处理细胞,用MTT方法测定脐带血有核细胞增殖,以1×105个/孔细胞接种24孔细胞培养板,观察LiCl对细胞集落形成的影响;应用Hoechst33342试剂盒荧光显微镜下检测细胞凋亡和应用Western blotting方法检测脐带血有核细胞β-catenin基因表达情况.结果 随着LiCl浓度的不断增加(0~40mM)和培养时间的不断延长(0~72h),脐带血有核细胞增殖能力与相应对照组相比不断增加,分别呈现出不同程度的显著性差异(分别P<0.05和P<0.01);应用20mM浓度的LiCl培养10d后,发现脐带血有核细胞集落形成能力与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),并呈现出明显的抑制细胞凋亡的作用;Western blotting结果发现,LiCl具有明显地诱导β-catenin基因表达的作用.结论 LiCl在一定条件下能够通过激活脐带血有核细胞内Wnt/β-catenin信号传导途径刺激细胞增殖,达到扩增脐带血有核细胞的目的.

    作者:冯乐平;陈再明;孙情;于冉冉;乔伟 刊期: 2011年第35期

  • 幽门螺杆菌融合基因vacA-hpaA的克隆及在大肠杆菌和双歧杆菌中的表达

    目的 构建幽门螺杆菌融合基因vacA-hpaA的大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒,并观察其在大肠杆菌(E.coli)和双歧杆菌(B.bifidium)中的表达情况.方法 通过PCR得到hpaA-vacA融合基因,将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-hpaA-vacA,电穿孔转化入大肠杆菌BL21和双歧杆菌.转化菌经IPTG诱导,然后用SDS-PAGE和Western blotting方法鉴定表达的重组蛋白.结果 构建了重组质粒pGEX-vacA-hpaA,vacA-hpaA融合基因的分子量约为1548bp;经SDS-PAGE分析,在大肠杆菌中表达出85kD的融合蛋白,表达的蛋白约占细菌总蛋白的20.5%;在双岐杆菌中也能得到正确表达,但表达量较大肠杆菌低,占细菌总蛋白约8.5%.Western blotting结果确认了该条带为hpaA-vacA融合基因的产物.结论 构建的重组质粒pGEX-hpaA-vacA能够在大肠杆菌及双歧杆菌中获得表达.

    作者:王国富;高峰;薛士鹏;吴利先 刊期: 2011年第35期

中国现代医学杂志

中国现代医学杂志

主管:中华人民共和国教育部

主办:中南大学,中南大学肝胆肠外科研究中心