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乙型肝炎病毒X蛋白诱导p16INK4A基因启动子甲基化及其机制研究

邝建玉;杨林;瞿志军

关键词:乙型肝炎病毒X蛋白, p16, 甲基化, DNA甲基化转移酶
摘要:目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对p16INK4A基因启动子甲基化的影响及机制.方法 以HepG2细胞和稳定表达GFP/HBx融合蛋白的HepG2/GFP-HBx为实验细胞,HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx细胞接种于裸鼠皮下建立裸鼠肝癌皮下移植瘤;设计合成靶向HBV X的siRNA(X-siRNA)和对照siRNA,用X-siRNA、5-N-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)单独或联合处理细胞及裸鼠;甲基化PCR检测细胞及移植瘤组织p16INK4A基因甲基化;RT-PCR法测定DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的mRNA表达.结果 甲基化PCR检测显示HepG2/GFP-HBx组细胞及移植瘤组织均存在p16INK4a甲基化而HepG2/GFP组均未检出p16甲基化;X-siRNA、5-Aza-CdR处理的细胞及移植瘤组织中p16INK4A基因甲基化均减低;RT-PCR检测显示GFP-HBx/HepG2组DNMT1、DNMT3A较HepG2组显著升高,差异有统计学意义(P=0.000 2、P=0.000 5),较GFP/HepG2细胞组也显著升高,差异有统计学意义(P=0.001 1、P=0.0005),而DNMT3B在HepG2、GFP/HepG2、GFP-HBx/HepG2细胞组组间检测值差异无统计学意义(P>0.05).结论 HBX蛋白可能通过上调DNMT1、DNMT3A mRNA的转录表达而诱导p16INK4A基因启动子的甲基化.
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    作者:陈淑芬;李凯;李相新;宋春林;韦僖雯 刊期: 2016年第08期

  • 右美托咪啶对ACS血管反应和临床转归的影响

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    作者:欧志英;尹应先;吴韶清;李丽霞;周荣;徐翼;龚四堂 刊期: 2016年第08期

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    作者:陈婧;高洁嫦;杨群玉 刊期: 2016年第08期

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    作者:赵思文;李万根;吴君洁 刊期: 2016年第08期

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    作者:郑冼华;曾丽;罗冠彬;李成华;林智君 刊期: 2016年第08期

  • 广州市越秀区大肠癌筛查方法评价

    目的 为了更好地开展居民大肠癌筛查,分析比较危险因素筛查问卷和大便潜血检查(FOBT)两种方法的检出率,以及与病理诊断相比的灵敏度和特异度.方法 对2014年对广东省广州市越秀区的1 501名居民进行了大肠癌筛查结果进行分析.采用了危险因素筛查问卷和FOBT检测两种方法.结果 有1335名居民接受调查问卷筛查方法,共筛查出825位易患大肠癌的危险人群,检出率为61.8%.有704位居民接受FOBT方法,共检出67位为阳性,检出率9.5%.有1 153名居民接受肠镜检查和病理检查,筛查出636名居民有病变,阳性率为55.2%.筛查问卷方式检验大肠癌的灵敏度为65.5%,特异度为10.3%,ROC曲线下面积为0.58;FOBT检验方法灵敏度为11.1%,特异度为84.8%,ROC曲线下面积为0.61.结论 此次筛查问卷和FOBT方法效果均不够理想,建议问卷法+FOBT检测筛查兼顾灵敏度和特异度.

    作者:张婷;龚诚华;戴丽萍;曾立忠;王金平 刊期: 2016年第08期

  • 抗弓形虫腺苷激酶IgY的制备及理化性质的研究

    目的 制备抗重组刚地弓形虫腺苷激酶(AK)的抗体IgY,对IgY进行特异性鉴定,并用间接ELISA的方法进行滴度、耐热、耐酸、耐碱、耐胃蛋白酶等理化性质的研究.方法 利用弓形虫AK蛋白,免疫产蛋母鸡,制备并纯化抗AK的卵黄抗体IgY,SDS-PAGE和Westem blot进行特异性分析,间接EILSA进行滴度和理化性质的检测.结果 SDS-PAGE检测Igy分子量与理论值一致;Western blot显示制备的IgY为抗AK的特异性IgY;二喹啉甲酸(BCA)法测浓度为4.25 mg/ml;间接ELISA检测滴度为1∶1×105;耐热,温度80℃时作用5 min不降解;耐碱,pH为8.5时,作用120 min不降解;30%岩藻糖可以完全抑制在pH等于3时的迅速降解;37℃胃蛋白酶作用120 min不降解.结论 本研究成功制备并鉴定了抗AK的IgY,IgY具有滴度和浓度高、耐热、耐酸、耐碱、耐胃蛋白酶的性质,为下一步的研究提供了理论依据.

    作者:汪六庆;周银娣;徐海红 刊期: 2016年第08期

  • 韶关市区学龄前儿童视力发育现状的横断面调查

    目的 了解韶关市区学龄前儿童视力发育异常的发病率以及影响学龄前儿童视力发育的相关因素,以采取相应措施,促进其视力健康发育.方法 随机选择韶关市区的20家托幼机构的1 265名学龄前儿童作为研究对象.采用SureSight视力筛查仪进行视力筛查,向视力异常儿童家长及同比例视力正常儿童家长发放《儿童视力影响因素调查表》,对各个影响因素进行统计分析.结果 筛查了1265名学龄前儿童,发现异常人数261名(20.63%).3~、4~、5~、6~<7岁四个年龄组的异常率分别为19.86%,18.39%、19.21%、26.09%.调查男性学龄前儿童652人,异常率22.59%,女性学龄前儿童613人,异常率18.59%.学龄前儿童视力异常率与其看电视时间、看电视距离、玩电子产品时间、挑食偏食、家庭采光、父母视力异常、每日户外运动时间、父母是否掌握眼睛保健知识、不良用眼习惯等日常生活有关(P<0.05).结论 韶关市区学龄前儿童的视力发育情况受到多种不良生活习惯的影响,应引起社会重视.

    作者:肖朝霞;范开蓉;陈晓芳;邓新萍;张玉香;张文英;袁少芳;徐亮 刊期: 2016年第08期

  • Gn启动日经阴道彩色多普勒超声对卵巢反应性的预测价值

    目的 探讨经阴道彩色多普勒超声(TV-CDS)在控制性超排卵(COH)启动时评估卵巢储备功能及预测卵巢反应性的价值.方法 选取本中心接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的186例不孕患者,采用TV-CDS检测促性腺激素(Gn)启动日卵巢大小、窦卵泡数(AFC)、子宫、卵巢动脉血流参数,根据获卵数及人绒毛膜促性腺激素(HCG)日E2水平分为卵巢低反应组和非卵巢低反应组,比较两组间各指标的差异.结果 两组间AFC、卵巢内血流评分、卵巢间质动脉收缩期峰值速度(OA-PSV)、卵巢间质动脉收缩期阻力指数(OA-RI)、子宫动脉收缩期阻力指数(UA-RI)差异有统计学意义(P<0.05).获卵数与AFC、卵巢内血流评分、OA-PSV呈正相关关系,与UA-RI、OA-RI呈负相关关系,其中以卵巢内血流评分、OA-PSV、AFC及OA-RI的相关程度较高.ROC曲线下面积预测卵巢低反应中,UA-PSV的AUC值对卵巢储备功能预测能力高,其次是AFC.结论 Gn启动日TV-CDS检测AFC、卵巢内血流评分、OA-PSV、OA-RI、UA-RI可作为评估于卵巢储备功能及预测卵巢反应性的有效方法.

    作者:陈霞;陈智毅;王伟群 刊期: 2016年第08期

  • 足月新生儿窒息时复苏采用氧浓度与脑损伤的相关性

    目的 探讨足月新生儿脑损伤与窒息时复苏采用氧浓度的关系.方法 选取窒息但无脑损伤的足月新生儿240例为研究对象并采用数字随机法分为低氧浓度组(21%氧浓度复苏)、中氧浓度组(40%氧浓度复苏)和高氧浓度组(100%氧浓度复苏),每组80例.患儿复苏前后均行头颅MRI检查并以出现苍白球或底丘脑异常信号为脑损伤诊断标准诊断三组脑损伤发生情况,比较三组复苏效果并分析足月新生儿脑损伤与窒息时复苏采用的氧浓度的关系.结果 与低氧浓度组比较,中氧浓度组和高氧浓度组脑损伤发生率降低,开始啼哭时间和建立自主呼吸时间缩短,出生后5 min和10 min的新生儿Apgar评分和Pa02升高(P<0.05).高氧浓度组和中氧浓度组脑损伤发生率以及复苏效果相关指标比较差异无统计学意义(P>0.05).中氧浓度组出生后5 min和10 min的PaO2低于高氧浓度组(P<0.05).Logistic分析结果显示,足月新生儿脑损伤与窒息时复苏采用的氧浓度密切相关.结论 窒息时中等氧浓度(40%)窒息复苏效果更有利于PaO2提高,因此临床上可采用中等氧浓度以安全有效地提高疗效并预防足月窒息新生儿脑损伤的发生.

    作者:梁明姬;马国哲;韩芳;李春华 刊期: 2016年第08期

  • 乙型肝炎病毒X蛋白诱导p16INK4A基因启动子甲基化及其机制研究

    目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对p16INK4A基因启动子甲基化的影响及机制.方法 以HepG2细胞和稳定表达GFP/HBx融合蛋白的HepG2/GFP-HBx为实验细胞,HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx细胞接种于裸鼠皮下建立裸鼠肝癌皮下移植瘤;设计合成靶向HBV X的siRNA(X-siRNA)和对照siRNA,用X-siRNA、5-N-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)单独或联合处理细胞及裸鼠;甲基化PCR检测细胞及移植瘤组织p16INK4A基因甲基化;RT-PCR法测定DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的mRNA表达.结果 甲基化PCR检测显示HepG2/GFP-HBx组细胞及移植瘤组织均存在p16INK4a甲基化而HepG2/GFP组均未检出p16甲基化;X-siRNA、5-Aza-CdR处理的细胞及移植瘤组织中p16INK4A基因甲基化均减低;RT-PCR检测显示GFP-HBx/HepG2组DNMT1、DNMT3A较HepG2组显著升高,差异有统计学意义(P=0.000 2、P=0.000 5),较GFP/HepG2细胞组也显著升高,差异有统计学意义(P=0.001 1、P=0.0005),而DNMT3B在HepG2、GFP/HepG2、GFP-HBx/HepG2细胞组组间检测值差异无统计学意义(P>0.05).结论 HBX蛋白可能通过上调DNMT1、DNMT3A mRNA的转录表达而诱导p16INK4A基因启动子的甲基化.

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  • 炎性因子以及PCT用于鉴别诊断颅内感染的性质

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    作者:刘美;李子渊 刊期: 2016年第08期

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    作者:曾慧倩;赖毓冕;石磊 刊期: 2016年第08期

  • 珠海地区女性HPV感染状况及基因亚型分布

    目的 了解珠海地区女性人乳头瘤病毒(HPV)感染状况及其基因亚型分布特征,为珠海地区HPV感染相关疾病的诊疗和防治提供科学依据.方法 收集我院2014年6月至2015年8月的宫颈脱落细胞标本3 833例,采用PCR-反向斑点杂交法(PCR-RDB)进行HPV基因分型检测,分析女性宫颈HPV感染现状及基因亚型分布特征.结果 3833例标本,平均年龄(36.05±9.969)岁,HPV感染总阳性率为21.37%.高危型和低危型HPV感染的检出率分别为24.57%和7.23%.高危型HPV排前3位的是HPV52 (17.40%)、HPV16 (9.76%)和HPV58型(7.24%),低危型HPV则是HPV81 (5.82%)、HPV6(5.66%)和HPV43型(4.84%).单重感染率(15.13%)明显高于多重感染率(6.24%),15~岁年龄段例外.HPV感染呈U型分布,两个峰值在15~和>50岁年龄段,阳性率分别为73.68%和25.75%,而在21~、31~、41~岁年龄段HPV感染阳性率呈逐渐降低趋势,分别为:22.91%、21.90%和17.00%.结论 珠海地区女性HPV感染的年龄分布和基因亚型分布具有自身的流行病学特点,这为该地区HPV感染相关疾病的早期筛查和防治提供了科学依据.

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    目的 构建钩端螺旋体融合基因lipL32-lipL41重组表达质粒,并获得重组表达的融合蛋白.方法 设计引物,聚合酶链反应(PCR)从各参考标准株中扩增LipL32、LipL41基因,连接引物PCR法构建LipL32-LipL41融合基因,连接到大肠杆菌表达载体pET28a上,构建pET28a-LipL32-LipL41重组质粒,并转化到大肠杆菌DE3菌株中进行诱导表达,聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blot鉴定融合蛋白的表达.结果 扩增获得的LipL32-LipL41融合基因为1900 bp,原核表达重组质粒PET28a-LipL32-LipL41经酶切鉴定含有融合基因片段,在大肠杆菌中表达出Mr 90000左右的重组融合蛋白LipL32-LipL41.结论 成功构建钩体LipL32-LipL41融合基因,并在大肠杆菌中成果表达融合蛋白,为进一步评价LipL32-LipL41作为候选抗原诊断钩端螺旋体病的价值奠定基础.

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    作者:韩梅;邢淑芳 刊期: 2016年第08期

  • 益气养阴活血法联合二甲双胍治疗2型糖尿病的临床疗效

    目的 研究并分析应用益气养阴活血法联合二甲双胍治疗2型糖尿病的临床疗效.方法 选择本院2013年5月至2015年4月期间2型糖尿病患者共200例,按照随机数字表法分为试验组和对照组各100例,对照组给予二甲双胍治疗,试验组则应用益气养阴活血法联合二甲双胍治疗,观察并比较两组患者治疗前后的临床疗效.结果 两组患者治疗前后相比较,试验组患者相比于对照组患者空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白、24h尿蛋白量等指标明显改善,两组结果比较差异有统计学意义(P<0.05);并且总胆固醇、甘油三酯、血肌酐、血尿素氮等指标明显降低,两组结果比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 应用益气养阴活血法联合二甲双胍治疗2型糖尿病,临床效果显著,值得推广.

    作者:徐经涛;林经;陈斯舒 刊期: 2016年第08期

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