学术投稿

香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR的建立与应用

谭翰清;谭海芳;林凤;丁丽娜;程洁萍;朱颖梅;苏乐斌;陈华

关键词:香港海鸥形菌, 实时荧光PCR, TaqMan-MGB探针
摘要:目的 建立快速、灵敏、特异的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR体系,用于食源性致病菌监测和淡水鱼产品贸易往来的快速检测.方法 根据GenBank公布的香港海鸥形菌16S rRNA基因高保守序列,设计特异引物对和TaqMan-MGB探针,建立和优化快速检测体系,评价反应体系的特异性、灵敏度、重复性,并在淡水鱼类、急性胃肠炎腹泻患者标本中临床应用,结合细菌分离方法和序列测定分析进行验证.结果 建立的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应体系检测时限短,仅40 min就可出结果,特异性好,与沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血弧菌等非目标菌无交叉反应,灵敏度高,检测下限达10拷贝/反应,稳定性好,同一浓度阳性质粒进行16次重复检测的Ct值变异系数0.183%.92份淡水鱼及211份医院急性胃肠炎腹泻标本实时荧光PCR与常规细菌分离结果完全一致,均检出了12株香港海鸥形菌,16S rRNA测序结果显示与HKU1株同源性在99.5%以上,进一步验证了实时荧光PCR的特异性.结论 本研究建立的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应体系快速、特异、灵敏,在防止食源性疾病的传播和加快贸易通关速度方面,具有较强的的应用价值.
热带医学杂志相关文献
  • 携带跨膜信号的凋亡蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

    目的 构建携带跨膜信号序列的凋亡蛋白(apoptin)的原核表达载体PET-28a(+)-apoptin,诱导表达并纯化重组apoptin蛋白,制备多克隆抗体.方法 用多重PCR的方法扩增跨膜信号序列(PTD)及apoptin的编码序列,构建原核表达载体PET-28a(+)-PTD-apoptin,转化大肠杆菌BL21 (DE3),低温条件下IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE方法鉴定蛋白表达,经镍亲和层析方法纯化目的蛋白后,免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体.结果 DNA测序鉴定表明成功构建了原核表达载体PET-28a(+)-PTD-apoptin,该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经低温和IPTG诱导后,获得重组apoptin蛋白,制备的多克隆抗体经ELISA方法和免疫印迹法证实能特异性地识别apoptin.结论成功获得了携带跨膜信号序列的重组蛋白apoptin及其多克隆抗体,为进一步研究其特异性诱导肿瘤细胞凋亡功能及相关机制奠定了基础.

    作者:杜晶春;吴玉;李雪燕 刊期: 2013年第01期

  • 短时受精在体外受精-胚胎移植治疗周期中的应用价值

    目的 比较体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗中精卵孵育不同时间对胚胎质量的影响.方法 按精卵共孵育时间不同将280个周期采集到的卵子3 342枚随机分为短时受精组(A组,精卵共同孵育4~6 h后随机选取1/2数量卵子脱颗粒细胞)、长受精组(B组,所剩1/2数量卵子,精卵孵育过夜).分别比较两组的受精率、多精受精率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率和胚胎种植率.结果 两组的受精率、多精受精率和卵裂率比较差异无统计学意义(P>0.05);A组的优质胚胎率、临床妊娠率和胚胎种植率显著高于B组(P<0.05).结论 缩短精卵孵育时间不影响受精率及卵裂率,相反能提高胚胎质量,从而提高临床妊娠率.

    作者:李宜学;田喜凤;王晓波;郭全;樊桂玲;刘娜 刊期: 2013年第01期

  • 骨折患者医院感染临床特征和风险因素分析

    目的 了解基层医院内骨折患者感染情况,探讨骨科住院患者医院感染的相关因素,从而降低感染率.方法 于2009-2010年共收集骨折患者719例,进行细菌培养鉴定,并对检出的病原菌按照K-B法进行药敏试验,同时收集患者的一般信息.结果 骨折患者719例中发生医院感染56例,感染率为7.79%.其中革兰阳性球菌23株(41.07%),主要包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肠球菌等;革兰阴性杆菌33株(58.93%),主要包括大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌等.药敏结果显示革兰阳性菌和阴性菌均对青霉素类抗生素耐药率较高.万古霉素和亚胺培南分别是革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌敏感性较高的抗菌药物.骨科感染的发生与骨折类型、住院时间、年龄、围手术期抗菌药物使用以及是否有基础疾病有明显关系(P<0.05).结论 骨折患者感染与多种因素相关,应采取积极有效的措施以及合理应用抗生素药物,从而降低骨科患者感染的发生.

    作者:王占武 刊期: 2013年第01期

  • TLR3、NF-κB在病毒性心肌炎心肌中的表达及意义

    目的 检测Toll样受体3(TLR3)和核因子-κB(NF-κB)在病毒性心肌炎(VMC)所致猝死者心肌组织中的表达,并探讨其意义.方法 运用免疫组化SP法检测TLR3与NF-κB在VMC猝死者及非VMC对照组心肌组织中的表达,比较两组间的表达差异.结果 病毒性心肌炎组心肌组织中TLR3、NF-κB的阳性细胞数为(12.2200±3.49249)和(28.3300±4.67435),分别高于对照组的(2.1750±0.93464)和(3.7900±1.43707),差异有统计学意义(P<0.05),并且两种蛋白的表达量呈显著正相关(r=0.490,P<0.05).结论 TLR3、NF-κB在VMC发生发展过程中起着重要作用,抑制TLR3、NF-κB的活化可能成为治疗VMC的一个潜在的、有价值的靶位.

    作者:刘婧;古力娜尔·库尔班;成建定;刘水平 刊期: 2013年第01期

  • 原发性肝癌血行转移与乙肝病毒的相关性研究

    目的 探讨原发性肝癌患者血行转移与乙肝病毒感染之间的关系.方法 检测原发性肝癌患者HBV感染标志物(HBV-M)和HBV-DNA的结果,比较其与血行转移的关系.结果 125例原发性肝癌患者中HBV感染96例,占76.8%.96例HBV感染阳性的原发性肝癌患者中,发生血管内转移者65例(67.7%),HBV感染阴性的原发性肝癌患者29例,发生血管内转移者8例(27.6%),HBV感染阳性的患者血行转移率明显高于HBV感染阴性患者(P<0.01).结论 乙肝病毒的感染和复制与原发性肝癌的发生和血行转移密切相关.

    作者:曾颖玲;毛惠南 刊期: 2013年第01期

  • 恩平市某村诺如病毒胃肠炎暴发的调查

    目的 了解2012年恩平市某村一起诺如病毒引起的肠炎的流行特点,探讨暴发疫情调查处理的经验,为今后控制类似疫情提供科学依据.方法 由疾控中心专业人员用专门的个案调查表对所有病例进行流行病学调查,部分病例采集大便样本进行检测,并结合实验室结果进行流行病学分析.结果 本次疫情共有11人发病,罹患率为22.92%;小1岁,大62岁,男女性别比为0.83∶1,病例的临床表现基本相同,以腹泻、腹痛等胃肠炎症状为主,病情较轻,病例呈一定的家庭聚集性,病程2~4 d.检测6例现症病人的肛试样品或粪便样品,发现5份检出诺如病毒核酸阳性,其中1份合并轮状病毒核酸阳性.结论 本次疫情是诺如病毒引起的以日常生活接触传播为主的暴发疫情,且部分患者伴有轮状病毒感染.

    作者:杨治文;陈茂余;杨玉芳;岑小莉;李一鹏;甄毅燕 刊期: 2013年第01期

  • 胃癌术后早期肠内营养治疗对患者营养恢复的影响

    目的 观察早期肠内营养对胃癌术后患者术后恢复和营养指标的影响.方法 选择2007年1月至2011年12月于上海市第一人民医院宝山分院行胃癌根治术的患者86例,随机分为早期肠内营养组(EEN组)和肠外营养组(PN组),每组43例.观察两组手术前后的血清白蛋白(ALB)、转铁蛋白(TF)、前白蛋白(PA)、视黄醇结合蛋白(RBP)、体质量(BW)、肱三头肌皮肤皱褶(TSF)和疲劳指数(Christensen's评分),以及术后肛门排气时间、住院时间、Karnofsky评分和并发症发生率.结果 两组术后第7天的BW、TSF、ALB、TF、PA和RBP均较术前第1天出现明显降低(P<0.01),而PN组的TF、PA和RBP水平较EEN组降低更为明显(P<0.01),两组的BW、TSF和ALB水平差异无统计学意义(P>0.05).而术后第7天的Christensen's评分较术前第1天出现明显提高,而PN组的升高较EEN组更为明显,差异有统计学意义(P<0.01).EEN组的肛门排气时间、住院时间和Karnofsky评分均较PN组明显缩短或者降低(P<0.01),而两组并发症比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 早期肠内营养有助于胃癌术后患者的早期康复,改善患者营养状况,促进胃肠道功能恢复,缩短住院时间.

    作者:应伟青;李斌;卢庆华 刊期: 2013年第01期

  • 蠕虫与自身免疫性疾病治疗研究

    研究显示,蠕虫感染可预防自身免疫性疾病和减轻疾病的损害程度,利用蠕虫的免疫调控机制可望开辟自身免疫性疾病新的防治策略.本文就近年来蠕虫感染或蠕虫抗原免疫以防治自身免疫性疾病的研究进展作一综述.

    作者:韦肖霞;祝程诚;冯允;李舒婷;姬鹏宇;吕志跃;吴忠道 刊期: 2013年第01期

  • 湖沼型疫区沟渠反复药物灭钉螺效果观察

    目的 观察湖沼型疫区沟渠反复药物灭钉螺效果,为制定防治对策提供科学依据.方法 选择有感染性钉螺分布的灌渠1条,采用50%氯硝柳胺乙醇胺盐可湿性粉剂2 g/m2喷洒法反复实施药物灭螺,每次药物灭螺后采用系统抽样方法进行近期(14 d)和远期(30~90 d)效果现场考核,观察钉螺死亡率、螺口密度和感染性钉螺变化情况.结果 4次药物灭螺,近期效果考核钉螺死亡率在87.35%~90.48%之间,校正死亡率分别87.29%、84.69%、88.74%、88.47%,与灭前比较,差异有统计学意义(x2=302.14、430.00、241.83、61.07,P均<0.01);活螺平均密度下降率分别为94.35%、85.48%、91.94%、94.35%;未发现感染性钉螺.3次远期效果考核钉螺死亡率在4.76%~23.33%之间,与灭前比较无差异;活螺平均密度下降率分别为35.48%、29.84%、50.87%;后2次未发现感染性钉螺.结论 反复药物灭螺对控制感染性钉螺作用明显,但对年度钉螺螺口消长作用有限.

    作者:苏文;苏尚洋;任晓晴;蒋世福;张道颖;何亮才 刊期: 2013年第01期

  • 宿主蛋白LSm1-7复合体在登革病毒RNA复制中的作用研究

    目的 探讨LSm1-7复合体在登革病毒(DENV)RNA复制中的作用.方法 DENV感染HepG2细胞后,在不同时间点(2、24、36、48 h)收集细胞和提取总mRNA,实时定量PCR (RT-qPCR)分析LSm1表达水平;将LSm1的siRNA和非特异对照siRNA两次转染HepG2细胞后感染DENV-2,24h后收集细胞,提取总mRNA,RT-qPCR分析LSm1表达水平与病毒RNA表达水平;利用LSm1抗体与dsRNA抗体对DENV感染细胞进行免疫荧光染色,激光共聚焦分析LSm1与dsRNA共定位情况.结果 与2h比较,随着时间的推移,DENV-2 RNA和LSm1 RNA水平逐渐升高;与对照组siNC比较,siLSm1组LSm1 RNA水平明显降低,沉默效率达78.2%;与对照组siNC比较,siLSm1组DENV RNA含量降低35.6%;LSm1-7复合体在DENV感染HepG2细胞后募集到核周围,与DENV dsRNA共定位.结论 LSm1-7复合体可能作为DENV复制复合物的组成部分,正调控DENV RNA的复制.

    作者:董阳超;雷迎峰;丁天兵;时莹;潘鹭翔;王晓霞;张泽信;徐志凯 刊期: 2013年第01期

  • 深圳市宝安区2007-2011年流行性腮腺炎分析

    目的 掌握深圳市宝安区流行性腮腺炎流行特征,为制定防制措施及评价防制效果提供科学依据.方法 采用描述流行病学方法分析深圳市宝安区流行性腮腺炎疫情资料.结果 2007-2011年流行性腮腺炎平均报告发病率为25.74/10万,发病高峰在5-7月,占全年总发病数的44.53%;男性年均报告发病率为35.77/10万,女性为17.46/10万,差异有统计学意义(P<0.01);学生和儿童发病分别占全部报告发病数的34.79%、45.34%; 3~15岁年龄组发病占全部报告发病的79.45%,呈典型的儿童和少年发病高峰.结论 宝安区流行性腮腺炎发病呈逐年上升趋势,防控应以中小学校学生和幼托及散居儿童为主.

    作者:任海燕;熊田甜;刘洁媛;吴泰顺;马智超 刊期: 2013年第01期

  • 2006-2011年深圳市集体食堂食物中毒流行病学分析

    目的 了解深圳市集体食堂食物中毒发生规律与特点,为预防控制集体食堂食物中毒提供依据.方法 对深圳市2006-2011年上报的集体食堂食物中毒报告资料进行统计分析.结果 2006-2011年深圳市集体食堂发生食物中毒91起,中毒人数1 134人.发病高峰季节为5-10月,共发生70起,占总起数的76.9%.工厂工地企业集体食堂食物中毒发生起数多共71起,占总起数的78.0%.微生物为主要致病因素,占总起数的73.6%,以副溶血性弧菌为主.结论 加强食物中毒高发季节工厂工地企业的卫生监督检查以及食品安全知识的宣传,是预防食物中毒的关键措施.

    作者:罗贤如;黄薇;张锦周;刘建平;王舟;潘柳波;范兴;张志航 刊期: 2013年第01期

  • 黑热病误诊致脾切除1例

    黑热病(kala-azar)是由杜氏利什曼原虫(Leishmania donovania)引起、以白蛉为传播媒介的地方性疾病,临床表现为长期不规则发热、消瘦、肝脾肿大、全血细胞减少及血浆球蛋白明显增高.在非疫区由于认识不足,常引起误诊.

    作者:唐光敏 刊期: 2013年第01期

  • 64例Ⅳ期上皮性卵巢癌的临床分析

    目的 研究Ⅳ期上皮性卵巢癌的临床病理特征及预后影响因素,为Ⅳ期上皮性卵巢癌的治疗提供参考.方法 回顾性分析1997年1月至2009年12月中山大学肿瘤医院收治的经手术及病理确诊为Ⅳ期上皮性卵巢癌患者共64例的临床病例资料及随访资料,其中32例患者直接行手术治疗(PDS),32例患者先行新辅助化疗(NACT),再接受中间性肿瘤细胞术(IDS).分析各临床病理因素及治疗方法对预后的影响.结果 未发现年龄、治疗前CA125水平、病理类型、肿瘤分化程度、原发肿瘤大小、转移类型、是否新辅助化疗及手术满意程度等与总生存时间相关(P>0.05).仅因胸水细胞学阳性诊断为Ⅳ期的患者行新辅助化疗+中间性肿瘤细胞减灭术者总生存时间中位数较直接行手术治疗者长39个月(P=0.020).新辅助化疗与手术的满意程度相关(P<0.001).结论 在经过评估无法行满意的肿瘤减灭术的患者,新辅助化疗+中间性肿瘤细胞减灭术可考虑成为Ⅳ期卵巢癌治疗的选择之一.

    作者:黄绮丹;黄鹤;刘继红 刊期: 2013年第01期

  • 香港地区流行性腮腺炎月发病例数SARIMA模型预测分析

    目的 研究季节性差分自回归滑动平均模型(SARIMA)拟合季节时间序列的方法,并将其应用于预测香港流行性腮腺炎疫情趋势.方法 利用R软件对2000年1月至2012年8月香港流行性腮腺炎月发病例数资料进行建模,用所构建模型进行预测分析.结果 流行性腮腺炎发病呈上升趋势,SARIMA(2,1,1)×(1,1,1)12模型较好地拟合了香港流行性腮腺炎的月发病例数,模型残差为白噪声序列,回代考核平均相对误差为17.5%;后8个月的数据作为前瞻性预测考核,平均相对误差为16.4%.结论 SARIMA模型较好地模拟腮腺炎的流行特征,并进行中、短期预测.

    作者:徐燕;阎玉霞;韩剑锋;陈平雁 刊期: 2013年第01期

  • 中药面膜联合胶原贴辅助治疗面部激素依赖性皮炎疗效观察

    目的 观察中药面膜联合胶原贴辅助治疗面部激素依赖性皮炎的临床疗效.方法 98例患者随机分成两组,治疗组50例,对照组48例.所有患者均口服氯雷他定片,对照组给予胶原贴敷料外敷,每晚1次,连续使用2周,以后1次/2 d;治疗组在上述治疗基础上加用中药面膜,第1周1次/d,第2周后1次/2 d.共4周.结果 治疗后,两组主观指标、客观指标及临床症状总积分均明显下降,治疗组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).且两组患者的症状、体征均有不同程度的好转,治疗组有效率为82.0%,对照组有效率为64.6%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 中药面膜联合胶原贴辅助治疗面部激素依赖性皮炎安全、有效.

    作者:邹凌云;宋英;王秀霞;马小鹏 刊期: 2013年第01期

  • 寄生原虫microRNA研究进展

    miRNA是一类非常重要的非编码小分子,作为RNA干扰(RNAi)中的一个重要元件能够在生物体中通过对mRNA表达的控制在转录后水平上对调节众多基因起到负调控作用.在研究多个物种microRNA的功能时,人们发现miRNA的表达具有时序性和组织特异性,提示其在特定功能基因的表达方面可能发挥着重要的调控作用.本文就miRNA的研究进展作一综述.

    作者:梅妹;孙喜东;王洁琳;宫鹏涛;陈启军;姜宁 刊期: 2013年第01期

  • 利用荧光素酶报告基因在体观察移植的人胚胎干细胞的动向

    目的 利用慢病毒载体携带荧光素酶报告基因并转导人胚胎干细胞,以实现在体观察移植细胞的增殖情况.方法 酶切pGL3 base质粒获得荧光素酶基因序列,酶切LTBR-GIP获得载体骨架,经过酶切产物热失活、平末端处理、CIP处理、胶纯化和连接,所构建慢病毒载体命名为ULIP,包括UBC启动子和IRES连接,能同时表达荧光素酶基因和Puromycin抗性基因.以ULIP转导人胚胎干细胞H9,并以Puromycin筛选稳定转导的细胞.随后移植于BALB/c小鼠和RAG-/-γC-/-小鼠,在Xenogen IVIS (r)50成像系统进行荧光信号检测.结果 稳定转导ULIP或LTBR-GIP的H9移植到BALB/c小鼠,ULIP组3d后荧光信号明显减弱,5d后基本上不能检出.而移植到RAG-/-yC-/-小鼠后,ULIP组的荧光信号在第3天稍有下降,随后荧光信号逐渐增强.LTBR-GIP-H9在移植BALB/c小鼠和RAG-/-yC-/-小鼠后均未能检测到荧光信号.结论 荧光素酶报告基因可以用于观察移植细胞在体内的动向,实现实时观察移植细胞的存活情况.

    作者:蔡柳洪;张滨;陈世钦;曾敏慧;陶欣 刊期: 2013年第01期

  • 儿童腹型过敏性紫癜胃肠道损害的彩超与胃镜表现

    目的 探讨腹部彩超与胃镜检查对儿童腹型过敏性紫癜的胃肠道损害的诊断价值.方法 结合临床特点回顾性分析126例腹型过敏性紫癜患儿腹部彩超及胃镜检查结果.结果 126例患儿均有腹痛,有或无伴阵发性加重,腹痛可出现皮肤紫癜前(n=22)、紫癜中(n=54)、紫癜后(n=50).腹痛重而体征较轻微,腹部部位不固定.腹痛较轻者腹部超声多无阳性表现,腹痛持续或伴阵发性加重者腹部超声表现为病变部位肠管壁节段性水肿,血流增加,严重者可发现肠套叠、肠梗阻或肠坏死.胃镜下均有不同程度胃肠粘膜病理改变,包括胃肠粘膜充血、糜烂、点状出血及多发性溃疡.结论 腹部彩超及胃镜检查对儿童腹型过敏性紫癜有早期诊断价值.

    作者:梁燕;周惠梅;魏青;梁文青 刊期: 2013年第01期

  • PR(+)/PR(-)乳腺癌差异表达microRNAs潜在作用通路的生物信息学分析

    目的 通过对乳腺癌中与孕激素受体(PR)状态相关的microRNAs差异表达谱进行生物信息学分析,探讨microRNAs在PR表达状态中可能参与的调控机制,为深入研究乳腺癌不同分子亚型的分化提供新思路.方法 利用文献挖掘方法找到与PR状态相关的microRNAs差异表达数据集,然后利用生物信息学方法(Targetscan软件和DAVID数据库)预测microRNAs的靶基因,再对靶基因进行基因本体论(GO)富集和通路分析.结果 通过文献挖掘找到3个差异表达microRNAs数据集,生物信息学分析获得3个相应靶基因集和1个靶基因合集.靶基因的GO分类主要涉及细胞内的信号级联、蛋白氨基酸磷酸化、蛋白质甲基转移酶活性及转录因子活性等生物学过程及分子功能.通路分析发现3条KEGG信号通路和3条BIOCARTA代谢通路可能参与不同PR表达状态的调节.结论 通过生物信息学方法,初步分析了microRNAs在不同PR表达状态中可能参与调控的信号和代谢通路,为进一步探索microRNAs在乳腺癌不同分子亚型分化的调控机制奠定基础.

    作者:麦仲伦;姜茂竹;曾融;吴钢;郑燕芳;张积仁 刊期: 2013年第01期

热带医学杂志

热带医学杂志

主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会