学术投稿

利用荧光素酶报告基因在体观察移植的人胚胎干细胞的动向

蔡柳洪;张滨;陈世钦;曾敏慧;陶欣

关键词:荧光素酶报告基因, 慢病毒载体, 人胚胎干细胞
摘要:目的 利用慢病毒载体携带荧光素酶报告基因并转导人胚胎干细胞,以实现在体观察移植细胞的增殖情况.方法 酶切pGL3 base质粒获得荧光素酶基因序列,酶切LTBR-GIP获得载体骨架,经过酶切产物热失活、平末端处理、CIP处理、胶纯化和连接,所构建慢病毒载体命名为ULIP,包括UBC启动子和IRES连接,能同时表达荧光素酶基因和Puromycin抗性基因.以ULIP转导人胚胎干细胞H9,并以Puromycin筛选稳定转导的细胞.随后移植于BALB/c小鼠和RAG-/-γC-/-小鼠,在Xenogen IVIS (r)50成像系统进行荧光信号检测.结果 稳定转导ULIP或LTBR-GIP的H9移植到BALB/c小鼠,ULIP组3d后荧光信号明显减弱,5d后基本上不能检出.而移植到RAG-/-yC-/-小鼠后,ULIP组的荧光信号在第3天稍有下降,随后荧光信号逐渐增强.LTBR-GIP-H9在移植BALB/c小鼠和RAG-/-yC-/-小鼠后均未能检测到荧光信号.结论 荧光素酶报告基因可以用于观察移植细胞在体内的动向,实现实时观察移植细胞的存活情况.
热带医学杂志相关文献
  • 泉州市麻疹在“消除阶段”的流行病学特征分析

    目的 分析泉州市麻疹在“消除阶段”(2006-2011年)的流行病学特征,为调整麻疹防制对策,实现消除麻疹目标提供依据.方法 对麻疹发病监测资料和防制对策进行描述流行病学分析.结果 2006-2011年报告发病率高的是晋江(6/10万),低的是永春(0.16/10万).发病高峰后移或消平.病例主要以外地户籍人口为主,占56%.发病年龄有呈双向位移的趋势,<8月龄组和≥15岁组的人群所占比例增高.无麻疹疫苗免疫史的是发病的主体.发病前7~21 d去过医院的病例占57%.结论 通过消除麻疹免疫空白人群,强化麻疹疫情应急处理能力,控制医院感染等综合防控措施,是消除麻疹的关键.

    作者:黄彩虹;洪思让;陈雅红 刊期: 2013年第01期

  • 寄生原虫microRNA研究进展

    miRNA是一类非常重要的非编码小分子,作为RNA干扰(RNAi)中的一个重要元件能够在生物体中通过对mRNA表达的控制在转录后水平上对调节众多基因起到负调控作用.在研究多个物种microRNA的功能时,人们发现miRNA的表达具有时序性和组织特异性,提示其在特定功能基因的表达方面可能发挥着重要的调控作用.本文就miRNA的研究进展作一综述.

    作者:梅妹;孙喜东;王洁琳;宫鹏涛;陈启军;姜宁 刊期: 2013年第01期

  • 2005-2011年广州市海珠区公共场所卫生质量监测分析

    目的 了解2005-2011年广州市海珠区公共场所卫生质量,为加强公共场所卫生管理提供科学依据.方法 依照《公共场所卫生监测技术规范》、《公共场所卫生标准检验方法》、《公共场所卫生标准》和《公共场所用品卫生标准》,对2005-2011年全区6 764间次各种类型的公共场所的监测资料进行分析.结果 监测空气样本14 894宗,合格率71.90%,公共卫生用品38 929宗,合格率96.36%.公共交通等候室空气的合格率高96.15%,医院候诊室低28.30%,各类公共场所监测合格率差异有统计学意义(x2=1978.71,P<0.01).风速的合格率高99.59%,照度的合格率低83.54%,不同监测项目的合格率差异有统计学意义(x2=4933.47,P<0.01).理发美容店的卫生用品合格率高98.49%,文化娱乐场所卫生用品合格率低87.35%,差异有统计学意义(x2=497.58,P<0.01);公共卫生用品大肠菌群的合格率高97.99%,霉菌的合格率低83.00%,差异有统计学意义(x2=583.92,P<0.01).结论 海珠区公共场所卫生状况不容乐观,应不断加强公共场所通风消毒保洁工作,保证公共场所卫生.

    作者:李集宇;苏婉华 刊期: 2013年第01期

  • 峨山县2009-2011年农村居民手足口病住院疾病直接经济负担研究

    目的 通过分析峨山县2009-2011年农村居民手足口病住院疾病直接经济负担,探讨手足口病对农村居民造成的疾病经济负担.方法 对手足口病新农合住院报销病例的住院费用等进行分析,以住院总费用与新农合报销费用之差计算住院直接经济负担.结果 2009-2011年,因手足口病住院的农村居民病例有1 073例,住院疾病直接经济负担总额871 505.7元,实际补偿比39.6(36.1,43.2)%,人均疾病直接经济负担638.0(558.4,759.4)元,实际补偿比、人均疾病直接经济负担有逐年增加的趋势(P均<0.001).县区级医疗机构就诊的病例其实际补偿比大于省市级,差异有统计学意义(P<0.05).结论 新农合的实施一定程度上减轻了农村居民的手足口病住院直接经济负担,但并未有明显的减轻趋势,探索手足口重症病例特别补偿方式尤为重要.

    作者:李顺祥;高良敏;赵金仙;张洪军 刊期: 2013年第01期

  • 香港地区流行性腮腺炎月发病例数SARIMA模型预测分析

    目的 研究季节性差分自回归滑动平均模型(SARIMA)拟合季节时间序列的方法,并将其应用于预测香港流行性腮腺炎疫情趋势.方法 利用R软件对2000年1月至2012年8月香港流行性腮腺炎月发病例数资料进行建模,用所构建模型进行预测分析.结果 流行性腮腺炎发病呈上升趋势,SARIMA(2,1,1)×(1,1,1)12模型较好地拟合了香港流行性腮腺炎的月发病例数,模型残差为白噪声序列,回代考核平均相对误差为17.5%;后8个月的数据作为前瞻性预测考核,平均相对误差为16.4%.结论 SARIMA模型较好地模拟腮腺炎的流行特征,并进行中、短期预测.

    作者:徐燕;阎玉霞;韩剑锋;陈平雁 刊期: 2013年第01期

  • 食道鳞状上皮细胞癌转移体外细胞模型的建立

    目的 建立一个适宜的食道鳞状上皮细胞癌(ESCC)体外转移研究模型.方法 将ESCC细胞系HK2置于未处理细胞培养皿中培养、传代,筛选出具有非锚定依赖生长能力的细胞株.以体外侵袭实验,软琼脂克隆形成实验比较、验证筛选细胞系与母代细胞的侵袭能力和非锚定依赖生长能力.利用比较蛋白质学的方法分析筛选细胞与母代细胞间的蛋白表达图谱差异.结果 成功筛选出具有较高转移能力并可传代培养的HK2-AD细胞株.HK2和HK2-AD细胞侵袭至小室膜反侧的细胞数分别为(16.7±2.5)和(28.7±7.4),软琼脂集落生成实验表明,HK2和HK2-AD细胞形成的集落数分别为(16.8±3.2)和(25±5.1),差异均有统计学意义(P<0.05).HK2-AD细胞中一些与细胞运动、细胞无氧代谢及抑制凋亡相关的蛋白质分子表达明显上调.结论 利用肿瘤细胞的非锚定依赖生长特性建立了一个高转移能力、呈三维生长的HK2-AD细胞株,为ESCC肿瘤转移机制研究和药物筛选提供了一个有价值且易于操作的食道癌转移体外细胞模型.

    作者:蔡贞;周园;温淑娟;谷祯梅;裘宇容 刊期: 2013年第01期

  • 医学免疫学精品课程建设的探索

    课程建设是教学改革的中心环节,是高等学校提高教学质量的重要措施.本校医学免疫学教研室以精品课程建设为契机,从培养目标、师资建设、教学内容、教学方法和手段及考核制度方面进行了实践,取得了一定的成效.

    作者:胡雪梅;姜昱竹;栾希英;张晓姝;张海霞 刊期: 2013年第01期

  • 宿主蛋白LSm1-7复合体在登革病毒RNA复制中的作用研究

    目的 探讨LSm1-7复合体在登革病毒(DENV)RNA复制中的作用.方法 DENV感染HepG2细胞后,在不同时间点(2、24、36、48 h)收集细胞和提取总mRNA,实时定量PCR (RT-qPCR)分析LSm1表达水平;将LSm1的siRNA和非特异对照siRNA两次转染HepG2细胞后感染DENV-2,24h后收集细胞,提取总mRNA,RT-qPCR分析LSm1表达水平与病毒RNA表达水平;利用LSm1抗体与dsRNA抗体对DENV感染细胞进行免疫荧光染色,激光共聚焦分析LSm1与dsRNA共定位情况.结果 与2h比较,随着时间的推移,DENV-2 RNA和LSm1 RNA水平逐渐升高;与对照组siNC比较,siLSm1组LSm1 RNA水平明显降低,沉默效率达78.2%;与对照组siNC比较,siLSm1组DENV RNA含量降低35.6%;LSm1-7复合体在DENV感染HepG2细胞后募集到核周围,与DENV dsRNA共定位.结论 LSm1-7复合体可能作为DENV复制复合物的组成部分,正调控DENV RNA的复制.

    作者:董阳超;雷迎峰;丁天兵;时莹;潘鹭翔;王晓霞;张泽信;徐志凯 刊期: 2013年第01期

  • 短时受精在体外受精-胚胎移植治疗周期中的应用价值

    目的 比较体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗中精卵孵育不同时间对胚胎质量的影响.方法 按精卵共孵育时间不同将280个周期采集到的卵子3 342枚随机分为短时受精组(A组,精卵共同孵育4~6 h后随机选取1/2数量卵子脱颗粒细胞)、长受精组(B组,所剩1/2数量卵子,精卵孵育过夜).分别比较两组的受精率、多精受精率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率和胚胎种植率.结果 两组的受精率、多精受精率和卵裂率比较差异无统计学意义(P>0.05);A组的优质胚胎率、临床妊娠率和胚胎种植率显著高于B组(P<0.05).结论 缩短精卵孵育时间不影响受精率及卵裂率,相反能提高胚胎质量,从而提高临床妊娠率.

    作者:李宜学;田喜凤;王晓波;郭全;樊桂玲;刘娜 刊期: 2013年第01期

  • 湖沼型疫区沟渠反复药物灭钉螺效果观察

    目的 观察湖沼型疫区沟渠反复药物灭钉螺效果,为制定防治对策提供科学依据.方法 选择有感染性钉螺分布的灌渠1条,采用50%氯硝柳胺乙醇胺盐可湿性粉剂2 g/m2喷洒法反复实施药物灭螺,每次药物灭螺后采用系统抽样方法进行近期(14 d)和远期(30~90 d)效果现场考核,观察钉螺死亡率、螺口密度和感染性钉螺变化情况.结果 4次药物灭螺,近期效果考核钉螺死亡率在87.35%~90.48%之间,校正死亡率分别87.29%、84.69%、88.74%、88.47%,与灭前比较,差异有统计学意义(x2=302.14、430.00、241.83、61.07,P均<0.01);活螺平均密度下降率分别为94.35%、85.48%、91.94%、94.35%;未发现感染性钉螺.3次远期效果考核钉螺死亡率在4.76%~23.33%之间,与灭前比较无差异;活螺平均密度下降率分别为35.48%、29.84%、50.87%;后2次未发现感染性钉螺.结论 反复药物灭螺对控制感染性钉螺作用明显,但对年度钉螺螺口消长作用有限.

    作者:苏文;苏尚洋;任晓晴;蒋世福;张道颖;何亮才 刊期: 2013年第01期

  • 儿童腹型过敏性紫癜胃肠道损害的彩超与胃镜表现

    目的 探讨腹部彩超与胃镜检查对儿童腹型过敏性紫癜的胃肠道损害的诊断价值.方法 结合临床特点回顾性分析126例腹型过敏性紫癜患儿腹部彩超及胃镜检查结果.结果 126例患儿均有腹痛,有或无伴阵发性加重,腹痛可出现皮肤紫癜前(n=22)、紫癜中(n=54)、紫癜后(n=50).腹痛重而体征较轻微,腹部部位不固定.腹痛较轻者腹部超声多无阳性表现,腹痛持续或伴阵发性加重者腹部超声表现为病变部位肠管壁节段性水肿,血流增加,严重者可发现肠套叠、肠梗阻或肠坏死.胃镜下均有不同程度胃肠粘膜病理改变,包括胃肠粘膜充血、糜烂、点状出血及多发性溃疡.结论 腹部彩超及胃镜检查对儿童腹型过敏性紫癜有早期诊断价值.

    作者:梁燕;周惠梅;魏青;梁文青 刊期: 2013年第01期

  • 蠕虫与自身免疫性疾病治疗研究

    研究显示,蠕虫感染可预防自身免疫性疾病和减轻疾病的损害程度,利用蠕虫的免疫调控机制可望开辟自身免疫性疾病新的防治策略.本文就近年来蠕虫感染或蠕虫抗原免疫以防治自身免疫性疾病的研究进展作一综述.

    作者:韦肖霞;祝程诚;冯允;李舒婷;姬鹏宇;吕志跃;吴忠道 刊期: 2013年第01期

  • 携带跨膜信号的凋亡蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

    目的 构建携带跨膜信号序列的凋亡蛋白(apoptin)的原核表达载体PET-28a(+)-apoptin,诱导表达并纯化重组apoptin蛋白,制备多克隆抗体.方法 用多重PCR的方法扩增跨膜信号序列(PTD)及apoptin的编码序列,构建原核表达载体PET-28a(+)-PTD-apoptin,转化大肠杆菌BL21 (DE3),低温条件下IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE方法鉴定蛋白表达,经镍亲和层析方法纯化目的蛋白后,免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体.结果 DNA测序鉴定表明成功构建了原核表达载体PET-28a(+)-PTD-apoptin,该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经低温和IPTG诱导后,获得重组apoptin蛋白,制备的多克隆抗体经ELISA方法和免疫印迹法证实能特异性地识别apoptin.结论成功获得了携带跨膜信号序列的重组蛋白apoptin及其多克隆抗体,为进一步研究其特异性诱导肿瘤细胞凋亡功能及相关机制奠定了基础.

    作者:杜晶春;吴玉;李雪燕 刊期: 2013年第01期

  • 广州增城市2011年手足口病流行病学分析

    目的 了解增城市手足口病流行病学特征和流行因素,探讨防制对策.方法 对2011年国家疾病监测信息管理系统监测的2011年增城市手足口病发病情况进行流行病学的描述性分析,采用SPSS13.0软件进行统计分析.结果 增城市共报告手足口病5 327例,其中重症病例3例,无死亡病例;发病范围广,人口密集且流动性大的新塘镇发病率为257.77/10万,城区发病率高于农村(x2=9.414,P<0.01);发病季节性明显,发病高峰主要集中在5-7月;发病人群主要为散居儿童,以6岁以下儿童为主(占98.89%),其中0~6岁和6~22岁两个年龄段发病率比较差异有统计学意义(P<0.01),男性发病率显著高于女性(x2=252.186,P<0.01);检出病原体以人肠道病毒71型(EV71)为主.结论 手足口病发病与年龄、季节有关,发病主要致病菌为EV71;人群的健康教育和相关的预防措施将有助于更好的预防手足口病.

    作者:郑丽琼;黎金祥;萧炯尧;唐侍豪;孟晓静 刊期: 2013年第01期

  • 女性冠心病患者高密度脂蛋白亚组分的检测及临床意义

    目的 研究女性冠心病患者高密度脂蛋白(HDL)亚组分及相对含量的变化并分析其临床意义.方法 采用双相电泳-免疫印迹法分析78例女性冠心病患者(观察组)及82例女性非冠心病组(对照组)血清HDL各亚组分的含量.结果 观察组血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、LDL-C/HDL-C的值明显高于对照组,而HDL-C明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);女性冠心病患者血清中Preβ 1-HDL、HDL-3b、HDL-3c水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05),而HDL-2b水平显著低于对照组(P<0.05).结论 女性冠心病患者血清中,HDL颗粒有变小的趋势,HDL-2b预测冠心病的可能性更高.

    作者:肖华;陈英;姚振国 刊期: 2013年第01期

  • 广州市医院成人病毒性腹泻的分子流行病学研究

    目的 了解广州市医院门诊成人病毒性腹泻的感染情况和分子流行病学特征.方法 2011年6月至2012年5月在广州市两家哨点医院收集门诊18岁以上腹泻患者粪便标本127份.采用酶联免疫技术检测A群轮状病毒,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测粪便标本中的诺如病毒、星状病毒和札幌病毒,聚合酶链反应(PCR)检测腺病毒.结果 共127份腹泻患者粪便标本,其中男性占54.33%(69/127),女性占45.67%(58/127),年龄以60岁以上所占比例高,为25%(7/28).127份粪便标本中,单一腹泻病毒感染25份,阳性率19.69%,其中检出轮状病毒阳性7份,阳性率5.52%(7/127);诺如病毒阳性11份,阳性率8.66%(11/127);札幌病毒3份,腺病毒阳性3份,阳性率均为2.36%(3/127);星状病毒1份,阳性率0.79%(1/127).未见混合感染,发病具有明显的秋冬季节升高现象,诺如病毒、札幌病毒、腺病毒、星状病毒流行株为别为GⅡ-4型、GⅠ-2型、AD41和HAstV-1.结论 医院就诊成人腹泻病例中约1/4为病毒性腹泻,其中诺如病毒是重要的病原体,感染对象主要是60岁以上人群.

    作者:胡婷婷;罗敏红;冀新凤;陈惠芳;姚月娴;黄燕惠;陈清;俞守义 刊期: 2013年第01期

  • 核桃楸的化学成分分析及其抗肿瘤活性概述

    核桃楸主要成分有醌类、黄酮类、二芳基庚烷类等,其具有突出的抗肿瘤活性.本文在查阅近年来国内外相关文献的基础上综述了核桃楸的化学成分及其抗肿瘤活性的研究进展.

    作者:汪向升;张咏莉 刊期: 2013年第01期

  • 反复自然流产患者外周血中CD4+CD25+ Treg细胞、IL-8和IL-10的表达

    目的 对反复自然流产患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)百分率和IL-8、IL-10含量变化及可能产生的作用进行探讨.方法 采用三色流式细胞术检测120例反复自然流产患者、120名正常妊娠妇女和120名正常非妊娠妇女外周血中CD4+CD25+ Treg细胞比例,ELISA法检测上述研究对象IL-8和IL-10含量.结果 反复自然流产组妇女外周血CD4+CD25+Treg细胞的百分率和IL-10水平明显低于正常非妊娠组和正常妊娠组,而IL-8明显高于正常非妊娠组和正常妊娠组,差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 外周血CD4+CD25+Treg细胞、IL-8和IL-10水平与反复自然流产的发生有关.

    作者:王振荣;刘娜;王晓波;李宜学;陈小君 刊期: 2013年第01期

  • 十堰地区铜绿假单胞菌流行趋势及耐药性变迁

    目的 调查十堰地区某教学医院铜绿假单胞菌流行趋势和耐药变化趋势,为指导临床合理使用抗菌药物提供参考.方法 运用WHONTE 5.5软件分析2001-2011年2 839株医院感染铜绿假单胞菌的药敏结果,Cox-Staurt趋势检验分析医院感染铜绿假单胞菌检出率和耐药趋势.结果 2001-2011年铜绿假单胞菌的检出率呈上升的趋势,常见分离标本为痰和外伤分泌物.铜绿假单胞菌仅对头孢哌酮/舒巴坦和亚胺培南的耐药率小于30%,对其他抗菌药物的耐药率均较高.Cox-Staurt趋势检验分析显示,医院感染铜绿假单胞菌对头孢噻肟、头孢他啶、氨曲南、阿米卡星、庆大霉素、环丙沙星、亚胺培南和哌拉西林耐药率呈上升趋势(P<0.05),而对复方新诺明、氯霉素和头孢哌酮/舒巴坦耐药率未见升高趋势.结论 铜绿假单胞菌引起的医院感染越来越严重,其临床分离率高,且对多种药物的耐药率呈上升趋势,应加强细菌耐药性监测和抗菌谱分析,以控制耐药菌株.

    作者:张昭勇;张吉才;吕军;娄国平;王元元 刊期: 2013年第01期

  • 胃癌术后早期肠内营养治疗对患者营养恢复的影响

    目的 观察早期肠内营养对胃癌术后患者术后恢复和营养指标的影响.方法 选择2007年1月至2011年12月于上海市第一人民医院宝山分院行胃癌根治术的患者86例,随机分为早期肠内营养组(EEN组)和肠外营养组(PN组),每组43例.观察两组手术前后的血清白蛋白(ALB)、转铁蛋白(TF)、前白蛋白(PA)、视黄醇结合蛋白(RBP)、体质量(BW)、肱三头肌皮肤皱褶(TSF)和疲劳指数(Christensen's评分),以及术后肛门排气时间、住院时间、Karnofsky评分和并发症发生率.结果 两组术后第7天的BW、TSF、ALB、TF、PA和RBP均较术前第1天出现明显降低(P<0.01),而PN组的TF、PA和RBP水平较EEN组降低更为明显(P<0.01),两组的BW、TSF和ALB水平差异无统计学意义(P>0.05).而术后第7天的Christensen's评分较术前第1天出现明显提高,而PN组的升高较EEN组更为明显,差异有统计学意义(P<0.01).EEN组的肛门排气时间、住院时间和Karnofsky评分均较PN组明显缩短或者降低(P<0.01),而两组并发症比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 早期肠内营养有助于胃癌术后患者的早期康复,改善患者营养状况,促进胃肠道功能恢复,缩短住院时间.

    作者:应伟青;李斌;卢庆华 刊期: 2013年第01期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会