学术投稿

幽门螺杆菌脂蛋白Lpp20的表达纯化及其临床应用的初步研究

靖吉芳;张艳

关键词:幽门螺杆菌, 重组蛋白, Lpp20, 血清学诊断
摘要:目的 获得重组幽门螺杆菌(H.pylori)脂蛋白(rLpp20),并研究其在血清学诊断中的应用价值.方法 应用重组质粒pGEX-6P-2/Lpp20在大肠杆菌(E.coli)BL21中表达,并进行GST亲和层析纯化,用Western-blot检测纯化产物(rLpp20)的免疫反应性;以rLpp20为包被抗原建立EMSA法对200份患者血清标本进行特异性IgG抗体检测,并与幽门螺杆菌-IgG抗体检测试剂盒法进行比较.结果 成功表达的rLpp20(43 000 Mr),纯化产物可被幽门螺杆菌多克隆抗体及阳性血清识别;成功建立了以rLpp20为包被抗原的间接ELISA法,其灵敏度为91.0%,特异度为100%.与试剂盒法比较,两者的符合率为95.5%.结论 Lpp20具有良好的免疫反应性,能与幽门螺杆菌阳性血清特异性结合,有望应用于幽门螺杆菌血清学诊断.
热带医学杂志相关文献
  • 早期足量营养支持在极低出生体重儿宫外生长发育迟缓中的作用

    目的 探讨强化肠内外营养对极低出生体重儿宫外生长发育迟缓(EUGR)发生率、各临床生长指标的影响.方法 采用回顾性研究方法,将本院早期足量营养支持开展前(2005年1月至2008年12月)与开展后(2010年1月至2011年12月)符合人选条件的极低出生体重儿分为对照组和研究组,比较两组患儿宫外生长发育迟缓的发生率和临床观察指标.结果 早产儿恢复出生体重时间对照组为(10.26±1.6)d,研究组为(8.19±1.0)d;生理性体重下降大幅度对照组为(9.8±2.1)%,研究组为(7.0±1.2)%;EUGR发生率(以出院体重评价)对照组为85.7%,研究组为64.3%;以上3个指标两组比较差异均有统计学意义(P<0.05);以头围评价对照组为54.3%,研究组为40.5%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 早期足量营养支持能被极低出生体重儿接受,可缩短生理性体重下降时间及减小生理性体重下降幅度,降低宫外生长发育迟缓的发生率.

    作者:曾淑娟;杨皓;丘惠娴;伍全概;周秋婧;张佳彬 刊期: 2013年第05期

  • 不同月经阶段子宫内膜内参基因的稳定性分析

    目的 筛选子宫内膜不同时期基因表达研究中稳定的内参基因.方法 招募月经周期规律的20~40岁育龄期妇女,分别于黄体期(11人)和增殖期(9人)抽吸入选者的子宫内膜,比较这两个阶段候选内参基因ATP5B、B2M、CYC1、RPL13A、SDHA、TOP1、YWHAZ、18S rRNA、ACTB、GAPDH的稳定性,选择稳定的基因作为合适的内参基因.结果 CYC1和RPL13A是增殖期内膜稳定的内参基因,而YWHAZ和ACTB则是黄体期内膜合适的内参基因.结论 确定不同时期子宫内膜的内参基因为研究其基因表达和相关功能奠定了基础.

    作者:黄兴芳;梁晓燕 刊期: 2013年第05期

  • 三种方法检测轮状病毒感染的比较研究

    目的 比较荧光PCR、ELISA、胶体金法对儿童轮状病毒感染的检测效果,为合理选择实验室检测方法提供依据.方法 采集广州市儿童医院门诊及住院腹泻患儿粪便标本90份,分别采用荧光PCR、ELISA、胶体金3种方法诊断轮状病毒感染,检测结果应用SPSS17.0软件包进行分析.结果 ELISA与荧光PCR法检测轮状病毒感染差异无统计学意义(P>0.05),两种方法具有较好的吻合度(Kappa=0.888,P<0.05);胶体金法与荧光PCR法检测轮状病毒感染差异无统计学意义(P>0.05),两种方法检测吻合度一般(Kappa=0.526,P<0.05);以荧光PCR检测为标准,ELISA法检测的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、总符合率分别为100%、88.1%、90.6%、100%、90.0%,胶体金法检测分别为100%、66.7%、74.6%、80.0%、76.6%.结论 ELISA法、胶体金法均与荧光PCR法诊断结果较一致,ELISA法诊断效能优于胶体金法,胶体金法敏感、快速,单独标本可随时检测,适合急诊、基层卫生机构.

    作者:郭敏;肖密丝;陈焕辉;赵明奇;朱冰 刊期: 2013年第05期

  • 毛萼乙素诱导肝细胞癌细胞凋亡的实验研究

    目的 研究毛萼乙素抑制肝癌肿瘤细胞增殖的机制.方法 利用MTT实验检测毛萼乙素对肝癌肿瘤细胞株增殖的影响,采用Hoechst染色法检测毛萼乙素是否能引起人肝癌细胞株HepG2的凋亡,采用Western-blotting检测凋亡相关蛋白Bax和PARP的表达水平,免疫荧光技术检测Bax的表达水平.结果 毛萼乙素可以明显抑制肝癌细胞的生长,Hoechst染色实验发现毛萼乙素可以诱导肝癌细胞的凋亡,Western-blotting实验检测到实验组Bax高表达,凋亡蛋白PARP的剪切带与对照组相比也明显增强.免疫荧光实验也显示,实验组Bax高表达.结论 毛萼乙素可通过升高促凋亡蛋白Bax的表达,促进肝癌细胞株HepG2的凋亡,从而抑制其增殖.

    作者:白海燕;谢丹;廖奕佶;买世娟;阳桂香;普建新;李朝晖 刊期: 2013年第05期

  • TIP30在脑胶质瘤中的表达及其临床意义

    目的 探讨TIP30在脑胶质瘤中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测70例脑胶质瘤病人石蜡病理切片中TIP30蛋白表达,并分析其表达与临床病理特征之间的关系;同时,采用RT-PCR方法检测16例脑胶质瘤新鲜组织中TIP30基因的含量.结果 TIP30蛋白在36例(51.4%)脑胶质瘤标本和8例(88.9%)正常脑组织标本中的表达差异有统计学意义(P=0.04).TIP30的表达与患者的年龄、性别无关,与脑胶质瘤的病理类型、分级和肿瘤大小相关(P<0.05).单因素分析结果显示,TIP30阳性表达的脑胶质瘤病人总生存时间长于阴性表达组(P=0.003).RT-PCR结果亦表明,脑胶质瘤中TIP30基因含量低于正常脑组织(P=0.001).结论 TIP30在脑胶质瘤中表达下调,可能充当抑癌基因的角色,同时也可能是脑胶质瘤病人重要的预后指标之一.

    作者:胡莹莹;刘新会;罗荣城 刊期: 2013年第05期

  • 类风湿关节炎2010ACR/EULAR与1987ACR诊断分类标准的诊断效能比较研究

    目的 评价类风湿关节炎(RA) 2010ACR/EULAR分类标准(简称2010标准)与1987ACR诊断标准(简称1987标准)的诊断效能.方法 回顾性分析2009年5月至2011年6月期间南方医科大学南方医院门诊和住院的114例早期关节炎患者.分别以患者一年内使用甲氨蝶呤/来氟米特治疗、一年时风湿专科医生判断为RA作为诊断RA的“金标准”,评价两种分类标准的诊断效能.结果 2010标准与1987标准敏感性分别为0.87和0.63(甲氨蝶呤/来氟米特使用标准)、0.91和0.76(风湿专科医生判断标准);特异性分别为0.67和0.81(甲氨蝶呤/来氟米特使用标准)、0.56和0.92(风湿专科医生判断标准);两种标准ROC曲线下面积(AUC)分别为0.89和0.86(甲氨蝶呤/来氟米特使用标准)、0.87和0.92(风湿专科医生判断标准).按风湿专科医生判断标准,1年时39例非RA患者基线期符合2010标准的有17例(43.6%),分别为未分化关节炎(n=7)、银屑病关节炎(n=5)、干燥综合征(n=2)、系统性红斑狼疮(n=1)、自限性关节炎(n=2);1年时39例非RA患者基线期符合1987标准的有3例,均为银屑病关节炎.按风湿专科医生判断标准,基线期符合1987标准的60例RA患者有4例不符合2010标准,其血清学均正常.结论 运用2010标准有利于RA的早期诊断;2010标准可能将其他关节炎和部分结缔组织病误分类为RA,对分类为RA的患者临床需加强随访;使用2010标准过程中结合1987标准可减少血清学正常的RA的漏诊风险.

    作者:夏冒李;李娟;吴婧;朱俊卿;陈湘南 刊期: 2013年第05期

  • 原花青素对C57BL/6J小鼠动脉舒张功能保护作用的研究

    目的 探讨原花青素(OPC)对C57BL/6J小鼠血管内皮舒张功能的影响及物质基础.方法 ①将内皮功能紊乱的C57BL/6J小鼠分为对照组、0.1% w/w原花青素组、抗生素组、抗生素+0.1% w/w原花青素组,干预4周后观察小鼠胸主动脉舒张功能;②采用高效液相色谱法(HPLC)测定OPC (100 mg/kg)灌胃后小鼠60 min血浆中OPC以及其代谢物原儿茶酸(PCA)含量;③将内皮功能紊乱的C57BL/6J小鼠分为抗生素组、抗生素+0.1% w/wOPC、抗生素+0.1% w/w OPC+ 0.003%w/w PCA,干预4周后观察小鼠胸主动脉舒张功能.结果 ①OPC干预可提高小鼠动脉舒张功能,但该效应被抗生素阻断;②OPC灌胃小鼠60 min后,HPLC法测得血浆PCA浓度为(10.6± 1.8) μmol/L,但OPC未检出;③抗生素阻断OPC介导的小鼠动脉舒张功能可被其代谢物PCA部分恢复.结论 原花青素可以改善血管内皮舒张功能,其物质基础可能与其代谢物PCA有关.

    作者:高渊;王雅慧;严啸;李丹;凌文华;王冬亮 刊期: 2013年第05期

  • 应用PCR技术研究白纹伊蚊的吸血习性

    目的 应用PCR技术鉴定登革热传播媒介白纹伊蚊胃血来源,研究白纹伊蚊的吸血习性.方法 在实验室条件下,将6种动物(鸡、猫、狗、鸽、野鼠、小鼠)分别放入6个小玻璃房,同时,将6种动物放入一个大玻璃房,然后放入已经饥饿18h的白纹伊蚊雌蚊,3h后采集吸血蚊,应用PCR技术鉴定白纹伊蚊胃血来源.现场调查则通过紫外诱蚊灯和BG-Sentinel Trap采集吸血蚊,利用实验室建立的PCR体系鉴定白纹伊蚊胃血来源.结果 在不同空间内,白纹伊蚊对野鼠的平均吸血率高,为44.45%,其余依次为鸡、猫、小鼠、狗、鸽(38.27%、36.53%、35.70%、34.94%、24.75%).在同一空间内,白纹伊蚊对鸡、小鼠、猫、野鼠、狗、鸽的吸血率依次为12.36%、7.09%、6.41%、4.81%、2.52%、1.60%.在现场收集到的饱血白纹伊蚊共13只,其中吸狗血的有7只,吸人血的白纹伊蚊有2只,多重吸血(小鼠和猫)的白纹伊蚊有1只.结论 PCR技术可鉴定白蚊伊蚊胃血来源,结果稳定可靠;白纹伊蚊不仅嗜吸人血,也可兼吸多种常见的动物血.

    作者:帅淑芬;李奕基;蔡松武;段金花;陈晓光 刊期: 2013年第05期

  • Nox1基因启动子表达载体的构建

    目的 克隆烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(Nox)上游启动子序列,为研究Nox1基因的转录调控奠定基础.方法 以人基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得1 415 bp(-1415~0)、1 276 bp(-1415~-140)、997 bp(-1415~-419)、839 bp(-1415~-577)、470 bp(-1415~-946)大小的Nox1启动子片段,将其定向克隆人pGL3-Basic荧光素酶表达载体,构建荧光素酶报告基因载体,进行真核细胞转染后鉴定目的片段启动子活性.结果 在A549细胞中,各Nox1启动子片段均有活性;-140~-419 bp和-577~-946 bp区域可能存在Nox1启动子核心区域.结论 成功克隆了在肺泡上皮样细胞中具有活性的Nox1启动子序列,为进一步研究Nox1基因的转录调控机制奠定了基础.

    作者:徐采云;李理;袁伟锋;黄文杰 刊期: 2013年第05期

  • 儿童肠滴虫病9例临床分析

    目的 调查本地区儿童肠滴虫病的临床特点.方法 选择9例住院肠滴虫病患儿,分析其临床表现和血常规、大便常规、病原学检查、生化检查结果及治疗与转归情况.结果 9例患儿大便镜检均见到滴虫(+/HP~+++/HP),8例患儿伴有大便性状的改变.8例经过常规药物处理后好转,1例加用灭滴灵治疗后好转.结论 本地区肠滴虫病的儿童多为5岁以下,临床症状较轻,治疗效果较好.

    作者:伊鹏;古力娜尔喀斯木;艾克热木江;艾孜提艾力;刘虹 刊期: 2013年第05期

  • 花生四烯酸通过mTORC1/2通路促进鼻咽癌细胞的增殖

    目的 研究花生四烯酸(AA)对鼻咽癌细胞增殖的影响及其潜在的分子机制.方法 采用CCK-8法检测AA对鼻咽癌细胞系C666-1增殖的影响,以及雷帕霉素(rapamycin,Rap)、PP242与AA共同作用对C666-1细胞增殖的影响.同时采用免疫印迹法检测AA对鼻咽癌C666-1细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路活性的影响,包括下游相关蛋白S6、Akt的表达水平及磷酸化水平,以及mTOR通路抑制剂Rap、PP242与AA共同作用对mTOR信号通路的影响.结果 AA可强烈促进C666-1细胞的增殖,mTOR通路抑制剂Rap、PP242均可抑制AA促进C666-1细胞增殖.AA可激活C666-1细胞mTORC 1/2下游相关蛋白S6、Akt,使其磷酸化水平升高.mTORC1通路抑制剂Rap可阻断AA对mTORC1的激活,从而降低S6(S235/236)的磷酸化水平,mTORC 1/2通路抑制剂PP242可阻断AA对mTORC 1/2的激活,从而降低S6(S235/236)和Akt (S473)的磷酸化水平.结论 花生四烯酸通过激活mTORC1/2信号通路促进鼻咽癌C666-1细胞系的增殖.

    作者:唐洪君;余勇;刘淼;何敏红;郑航 刊期: 2013年第05期

  • 黄芪注射液联合ACEI或ARB类药物治疗糖尿病肾病Ⅲ期的Meta分析

    目的 评价黄芪注射液联合ACEI或ARB类药物治疗2型糖尿病肾病Ⅲ期的有效性及安全性.方法 根据Cochrane协作网系统评价方法,检索中文期刊全文数据库(1979-2012)、中国生物医学期刊引文数据库(1994-2012)、万方数据库(1982-2012)、维普中文期刊数据库(1989-2012)等,全面收集符合标准的随机对照试验(RCT),采用Jadad量表评价文献质量,应用RevMan 5.1软件进行Meta分析.结果 共纳入20篇RCT文献,共计1 348例DN Ⅲ期患者.Meta分析结果显示,黄芪注射液与ACEI或ARB类药物联用,在降低DN Ⅲ期患者.24 h尿微量白蛋白排泄率(24 h ALBU)、24 h尿蛋白定量(24 h TPU)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)方面优于单用ACEI或ARB类药物,纳入的文献均未报道黄芪注射液的不良反应.结论 与单用ACEI或ARB类药物相比,黄芪注射液与ACEI或ARB类药物联合应用治疗DN Ⅲ期效果更好,且无明显的不良反应.由于纳入文献质量较低,还有待大样本、高质量、多中心、随机、双盲的对照试验来证实.

    作者:刘玉;周琳;肖雅;罗仁;赵晓山 刊期: 2013年第05期

  • 氧化应激与非酒精性脂肪肝病的研究进展

    非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发病率逐年增多,但其发病机制尚未完全阐明.目前较为成熟的阐释是“二次打击”学说,该学说中涉及氧化应激机制.氧化应激在NAFLD发病过程中所起到的作用近年来也日益被关注.本文就氧化应激在NAFLD损伤机制中的作用进行综述,以期能加深对NAFLD发病机制的了解.

    作者:林秋香;周冬生;梁志清 刊期: 2013年第05期

  • 惠州市2007-2012年生产加工环节影响食品质量的因素分析

    目的 分析惠州市生产加工环节食品质量状况,为提出有针对性的卫生监管措施提供依据.方法 对惠州市2007-2012年质量计量监督检测所抽检的生产加工食品的检验数据进行分类、对比,分析影响质量的因素.结果 2007-2012年间,抽检生产加工食品21 891批次,其中合格18 356批次,批次合格率为83.85%;食品标签合格率为95.26%,食品内在质量合格率为88.59%.食品内在质量不合格的原因主要是微生物指标超标,不合格率为6.03%;其次为理化指标,不合格率为5.04%;理化及微生物指标均不合格率为0.34%.食品种类中,豆制品、蔬菜制品和饮料的不合格率较高.结论 惠州市生产加工环节食品质量总体良好,但仍应加强微生物指标的监测,并提高食品标签的规范程度.

    作者:邓晖;陈清 刊期: 2013年第05期

  • 硫酸吲哚酚在尿毒症并发心血管疾病中的研究进展

    慢性肾脏疾病是心血管疾病的重要危险因素.在慢性肾脏疾病患者中,尿毒素尤其是蛋白结合类尿毒素,不仅加重了慢性肾脏疾病,同时促进了心血管疾病的发生、发展,氧化应激认为是心血管疾病的发病机制之一,该假设已得到大量基础和临床研究的证实.硫酸吲哚酚是一种重要的蛋白结合类尿毒素,肾功能衰竭时在肾脏蓄积.目前研究表明,血清中硫酸吲哚酚含量是预测心血管疾病及慢性肾脏疾病肾功能减退的有重要价值的标志物.

    作者:周婧;吴志坚;夏维萍;赵一俏 刊期: 2013年第05期

  • JNK通路介导LPS诱导脐静脉内皮细胞PD-L1表达的实验研究

    目的 探讨脂多糖(LPS)刺激脐静脉内皮细胞表达程序性死亡因子配体1 (PD-L1)与C-JUN氨基末端激酶(JNK)信号通路的关系.方法 体外培养脐静脉内皮细胞,按2× 107/ml种植在6孔培养板中,在无血清培养基中静止24h后随机分成阴性对照组、LPS组及SP600125+LPS组,其中阴性对照组不加干预因素;LPS组先用DMSO(0.1%V/V)作用1h,再用LPS(1.0 μg/ml)刺激24 h;SP600125+LPS组先用SP600125(20 μmol/L)作用1h后再用LPS刺激24 h,Western-blot测定各组PD-L1及P-JNK蛋白表达.结果 SP600125 +LPS组PD-L1蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);而SP600125+LPS组和对照组PD-L1蛋白表达与LPS组比较均明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05).SP600125+ LPS组细胞P-JNK蛋白表达与对照组和LPS组比较均减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论 LPS可能通过JNK信号通路调控脐静脉内皮细胞表达PD-L1.

    作者:龙日;刘映峰;严全能;吕自明;缪绯;梁欣伟 刊期: 2013年第05期

  • 高分辨率熔解曲线法检测中国5种常见β-地中海贫血突变

    目的 探讨高分辨率熔解曲线法(HRM)检测中国5种常见β-地中海贫血突变的可行性.方法 应用HRM法检测中国5种常见β-地中海贫血突变,检测结果为纯合子的标本进行基因测序验证.结果 HRM法能准确区分-28(c.-78A>G)、Codon17 (c.52A>T)、Codons41/42 (c.126_129delCTTT)、Codons71/72 (c.216_217insA)及IVS-Ⅱ-654(c.316_197C>T)的纯合、杂合突变以及野生型标本,测序结果与HRM法检测结果一致.结论 HRM法检测中国5种常见β-地中海贫血突变具有简便、快速、灵敏度高等优点,有望成为临床尤其是产前诊断领域β-地中海贫血突变筛查的优选方法.

    作者:陈汉彪;尹爱华;张彦;何天文 刊期: 2013年第05期

  • 获得性血友病A确诊前病程分析

    目的 分析获得性血友病A(AHA)诊治的临床特点,探讨国内外治疗该病的差异.方法 整理分析2007-2012年本院收治的9例AHA患者资料,对比近5年国内AHA相关文献及欧洲获得性血友病登记管理组织(EACH2)的研究结果,分析国内外AHA确诊前病程与完全缓解率(CR)的差异.结果 本组9例及国内文献100例AHA患者确诊前病程均延迟于EACH2的研究报道,CR率也均低于后者,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 我国AHA患者治疗状况与欧洲国家存在差异,加大知识宣传,降低漏诊、误诊率可能有助于缩短差距.

    作者:马庆辉;李含;李强;刘阳;秦芳梅;张钰;范志平;孙竞 刊期: 2013年第05期

  • 江门市儿童手足口病危险因素病例对照研究

    目的 了解江门市手足口病(HFMD)发病的危险因素,为制定有效的防控措施提供科学依据.方法 2011年7-8月,选择常住江门且临床诊断为手足口病的非重症患儿62例和未患过手足口病的儿童126名,采用病例对照研究方法,利用自制问卷,调查分析手足口病的影响因素.结果 单因素分析结果显示,大门口10 m范围内可见垃圾、大门口视野可见苍蝇、卫生间使用情况、近两周邻居/玩伴患病以及发病前两周医疗机构暴露情况可能是手足口病发病的危险因素;母亲文化程度可能是发病的保护性因素.多因素分析结果显示,手足口病发病影响因素为发病前两周医疗机构暴露(OR=24.982,P<0.05)、大门口10 m范围内可见垃圾(OR=5.246,P=0.002)、大门口视野可见苍蝇(OR=1.565,P=0.004)和卫生间使用情况(OR=2.373,P=0.006).结论 在江门市预防HFMD重点应加强健康宣教以改善不良卫生环境,同时应采取隔离病例等有效措施减少交叉感染.

    作者:杨玉芳;王立华;陈茂余;洪海波;许坚锋;刘鹰航 刊期: 2013年第05期

  • 金黄色葡萄球菌诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的观察

    目的 观察人脐静脉内皮细胞株ECV-304对金黄色葡萄球菌(S.aureus)感染的反应.方法 常规方法制备金黄色葡萄球菌悬液,以1∶1、1∶10和1∶100的感染复数感染ECV-304细胞1、3、6、12 h和24 h后,估算细胞吞噬细菌数,采用Hoechst33258染色,DNA ladder及细胞凋亡相关因子RT-PCR检测细菌感染后细胞凋亡情况.结果 金黄色葡萄球菌感染复数越高,细胞内吞噬的活细菌数越多.金黄色葡萄球菌感染导致ECV-304细胞发生凋亡,凋亡具有时间依赖性,随着感染时间的延长,凋亡小体增多,DNA片段也随之增多.抗凋亡细胞因子Bcl2 mRNA表达量随着感染时间的延长下降,而促凋亡细胞因子Bax和Caspase-3表达量增多.结论 金黄色葡萄球菌感染ECV-304细胞后,通过下调抗凋亡细胞因子Bcl2、上调促凋亡细胞因子Bax和Caspase-3诱导细胞凋亡.金黄色葡萄球菌感染内皮细胞的可能致病机制为临床治疗提供了实验依据.

    作者:熊传银;罗庆华;胡汉斌;毕爱芬;裴德翠 刊期: 2013年第05期

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主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会