学术投稿

SD大鼠胚胎上胚层干细胞的分离与培养

卢安尚;张薇;邓新燕;赵勇;郭思政;郭中敏

关键词:上胚层, 多分化潜能, 上胚层干细胞, 活化素
摘要:目的 从SD大鼠胚胎中获取附植后胚胎上胚层干细胞(post-implantation epiblast stem cells,Episc),并探讨组织来源、胎龄、细胞因子、传代方法等条件对SD大鼠Episc(SD Episc)分离与培养的影响.方法 分别取5.5 d和7.75 d胎龄囊胚上胚层(epiblast),以昆明小鼠胚胎成纤维细胞为饲养层,于添加白血病抑制因子(leucocyte inbibitory factor,LIF)或活化素(activin)的基础培养基中,进行原代培养.分别采用机械法和胰酶消化法对克隆集落进行传代.后通过碱性磷酸酶染色对克隆集落进行鉴定分析,并对其体外分化能力进行检测.结果 培养于LIF培养基和activin 培养基中的囊胚均发生严重分化.培养于LIF的培养基中的epiblast也发生了严重的自发分化.而在activin培养基中,epiblast形成SD Episc原代集落.经机械法传代获得AKP染色阴性、能形成拟胚体的SD Episc.结论 利用细胞因子activin,结合机械传代法可从7.75 d胎龄SD大鼠胚胎中获得SD Episc.
热带医学杂志相关文献
  • 重庆市九龙坡区2009年甲型H1N1流感暴发疫情流行病学分析

    目的 了解重庆市九龙坡区甲型H1N1流感暴发疫情的流行病学特征.为更好地制定有针对性的控制措施提供依据.方法 对重庆市九龙坡区2009年甲型H1N1流感暴发疫情处理资料进行描述性分析.结果 16起甲型H1N1流感暴发疫情累计确诊64例,平均罹患率为0.36%(64/17778);疫情集中发生在9月,发病人群主要是中专职校学生;男女性别比为3:1.结论 甲型H1N1流感暴发疫情均发生在学校,学校是控制甲型H1N1流感疫情的关键,应及时报告疫情、有效落实控制措施.

    作者:李中琴;李晓娟;谭学钧 刊期: 2011年第03期

  • 2型糖尿病肾病Ⅲ期的中医用药规律分析

    目的 分析和了解中医药治疗2型糖尿病肾病Ⅲ期的用药规律.方法 选用维普咨询中文科技期刊数据库(1989-2009)、中国期刊全文数据库(CNKI)(1979-2009)、万方数据库(1982-2009)、中国生物医学文献数据库(CBM)(1990-2009)、中文生物医学期刊数据库(CMCC/CMCI)(1994-2009)为资料源,对中医药治疗2型糖尿病肾病Ⅲ期的随机对照文献的用药规律进行统计分析.结果 检索到有效文献223篇,共涉及138种中药,用药频次居于前10位的是黄芪、丹参、山茱萸、山药、生地黄、川芎、茯苓、当归、益母草、大黄.药类频次统计显示,益气药居于首位,活血、养阴、收涩、清热、利水渗湿、破血逐瘀药也占了相当大的比重.结论 2型糖尿病肾病Ⅲ期的中医用药多以益气养阴活血药为主,同时辅以清热、淡渗利湿、收涩固摄、化瘀泄浊、疏风解表等药,并结合临床常用经验方或药对,取得了良好的疗效.

    作者:肖雅;严美花;张乐;谢豪杰;赵晓山;罗仁 刊期: 2011年第03期

  • 艾滋病抗病毒治疗48例死亡患者相关因素分析

    目的 分析本院艾滋病抗病毒治疗死亡患者的相关因素.方法 利用国家统一使用的DataFax抗病毒治疗信息系统所收集的数据资料,对抗病毒治疗死亡患者的相关情况进行分析.结果 共有315例艾滋病患者接受治疗,有48例抗病毒治疗患者死亡.治疗前所有患者出现艾滋病临床Ⅲ期或Ⅳ期表现,CD4细胞小值为4个/μl,大值为263个/μl,平均为36.4个/μl.接受治疗时间短1 d,长2年半,其中39例的治疗时间小于3个月.死于艾滋病相关性疾病42例,其中9例系统治疗无效死亡,11例治疗过程中出现机会性感染,放弃治疗在家中死亡;22例在停药后0.5~8月出现艾滋病相关疾病死亡.自杀4例,死亡原因不明2例.结论 艾滋病抗病毒治疗患者的主要死亡原因是艾滋病相关疾病,依从性困难是患者死亡的另一个原因,经济困难、歧视和药物副作用与病人死亡有直接关系.

    作者:韦秋玲;韦克召;韦超;潘利永;韦幕葵 刊期: 2011年第03期

  • 不同年龄段健康人群诱导痰细胞比例的变化

    目的 探讨不同年龄段健康人群的诱导痰细胞比例是否存在差异,进一步完善诱导痰细胞分类的正常值.方法 将96例年龄介于10~73岁的健康受试者分为4个年龄组(<19岁,19~岁,40~岁,>59岁).对健康受试者行3%的高渗盐水雾化痰诱导试验,检测痰标本的细胞分类情况,并进行统计分析.结果 小于19岁的健康人痰细胞以巨噬细胞为主(87.50%),中性粒细胞次之(11.00%);随着年龄的增长,痰中性粒细胞比例逐渐升高;大于59岁的健康人痰中性粒细胞比例为73.50%,巨噬细胞比例下降为24.38%.各年龄段中性粒细胞和巨噬细胞比例差异均有统计学意义(P<0.01),而嗜酸性粒细胞及淋巴细胞的比例在各组间无显著差异.痰中性粒细胞比例的增加与年龄的增长呈正相关(r=0.845,P<0.001),巨噬细胞比例的变化则与受试者的年龄呈负相关(r=-0.842,P<0.001).结论 不同年龄段的健康人群诱导痰细胞比例存在差异,随年龄的增长,中性粒细胞比例不断增高.涉及痰细胞比例的相关研究需要考虑年龄因素造成的影响.

    作者:罗炜;陈桥丽;王慧;陈如冲 刊期: 2011年第03期

  • 细菌耐药性机制研究进展

    20世纪中期,随着医院和社区获得性耐青霉素葡萄球菌的相继出现,细菌耐药性逐步成为一个全球性备受瞩目的问题[1,2].细菌耐药性又称抗药性.

    作者:周显凤;倪贤生;吴越 刊期: 2011年第03期

  • 糖尿病肾病中医药/中西医结合研究临床治疗的研究趋向分析

    目的 探讨近30年来糖尿病肾病中医药/中西医结合临床治疗中医药研究的趋向及特点,为此后的中医药/中西医结合治疗糖尿病肾病提供借鉴.方法 遵循循证医学评价文献的原则,以维普咨询中文科技期刊数据库(1989-2009)、中国期刊全文数据库(CNKI)(1979-2009)、万方数据库(1982-2009)、中国生物医学文献数据库(CBM)(1990-2009)、中文生物医学期刊数据库(CMCC/CMCI)(1994-2009)为资料源,全面检索1984-2009年间的糖尿病肾病治疗类文献,使用Epidta双录入数据,全部数据导出至SPSSl3.0,从研究现状、特点及发展走向几个方面进行计量学评价分析.结果 共检索出文献2 300篇,其中涉及临床经验或个案类文章196篇、病凶病机研究类53篇、辨证治疗类58篇、各中医治法治疗类117篇、自拟方及成方治疗类613篇、中成药和单味中药治疗类563篇、中药联合ACEI/ARB研究类700篇,不同类型文献起始、兴盛年份各不相同.结论 临床经验或个案研究、辨证治疗研究起步较早,近年来RCT研究成为热点,不过目前RCT文献质量仍需进一步提高,设计科学、方法严谨、大样本、多中心的糖尿病肾病中西医结合RCT研究为今后重要发展方向.

    作者:张乐;严美花;肖雅;谢豪杰;赵晓山;罗仁 刊期: 2011年第03期

  • 人SET基因RNA干扰重组质粒载体的构建及其在肝细胞中的表达

    目的 建立真核质粒载体介导的人SET基因RNA干扰表达体系,并检测其在肝细胞中对SET蛋白表达的影响,为研究SET蛋白在三氯乙烯致肝细胞毒性的作用打下基础.方法 设计并合成2对人SET基因特异性短发夹RNA(short hair-pin RNA,shRNA)寡核苷酸链,退火形成双链DNA后插入到真核表达质粒psiRNA-hH1 neo中产生shRNA重组质粒载体,经酶切和测序鉴定成功后,转染至L-02肝细胞中,48 h后收集细胞提取总蛋白,Western blotting检测干扰后SET蛋白的表达.结果 shRNA重组质粒的酶切和测序鉴定均正确,Western blotting结果显示重组质粒psiRNA1组的干扰效果较好,对SET蛋白表达的抑制率达60%左右,与正常对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建针对人SET基因的RNA干扰真核质粒载体,其能有效地抑制肝细胞内SET蛋白的表达,为深入研究SET蛋白在三氯乙烯致肝细胞毒性中的作用奠定了基础.

    作者:黄新凤;刘建军;蒋英芝;席仁荣;杨亮 刊期: 2011年第03期

  • 重庆市消除碘缺乏病评估结果分析

    目的 评价碘缺乏病的防治效果,分析影响因素,为制定防治方案提供依据.方法 各区县随机抽取9个乡镇检查居民食用盐含碘量;抽取5所小学8~10岁儿童检查甲状腺、尿碘和五年级学生碘缺乏病防治知识;查阅组织领导、防治监测、碘盐管理和健康教育资料,进行综合评分;重庆市对区县评估结果进行复核;用X2检验作统计学分析.结果 全市40个区县检查居民食用盐14 217户,合格碘盐食用率为90.00%-99.72%,平均为95.90%,尿碘检测4 050人,中位数为247.20μg/L,300μg/L以上占37.10%,区县中位数100-200μg/L占25%(10/40),200~300 μg/L占57.5%(23/40),>300μg/L占17.5%(7/40);甲状腺检查16 852人,肿大率为3.25%一9.00%,平均为5.80%;学生防治知识平均得分3.1~5.0分,平均为4.4分;防治措施综合评分为86.00~99.00分,平均为95.00分.市级复查中检查食用盐1 250户,合格碘盐食用率为90.91%~100.00%,平均为96.88%;甲状腺检查16 852人,肿大率触诊和B超法为5.00%~8.33%,乎均分别为7.02%和6.64%;防治知识调查1 366人,得分2.5~4.9分;防治措施综合评分为88.8~99.5分.结论 重庆市有39个区县实现了消除碘缺乏病目标,1个县实现了基本消除碘缺乏病目标,市级层级实现了消除碘缺乏病目标,防治工作取得显著成效.但存在碘过量,须降低食盐加碘浓度.

    作者:肖邦忠;罗兴建;李心术;吴成果;陈亚琳;黄文利;谢君 刊期: 2011年第03期

  • 阳山县华支睾吸虫病综合防治示范区中期评估结果

    目的 了解阳山县华支睾吸虫病综合防治示范区人群华支睾吸虫感染状况,评估示范区一年来综合防治效果.方法 按国家中期考核评估方案要求分东西南北中5个片随机抽取调查点,采用改良加藤厚涂片法对人群进行虫卵粪检.结果 东片青莲、西片黎埠、南片七拱、北片小江、中片阳城5个片调查点华支睾吸虫感染率分别为7.26%、6.09%、14.80%、7.14%和10.80%,平均为9.28%.感染率由2006年的14.01%下降到9.28%,下降率为33.76%.结论 阳山县居民华支睾吸虫感染率较2006年基线调查结果明显下降,综合防治效果明显.

    作者:李志奇;黄新华;张学军;刘狄轩 刊期: 2011年第03期

  • EGFR与PDGFR-α在肺腺癌中的表达及意义

    目的 探讨血小板衍生生长因子受体(PDGFR-α)和表皮生长因子受体(EGFR)与肺腺癌发生发展的关系.方法 免疫组化SP法检测PDGFR-α与EGFR在60例肺腺癌原发灶和24例正常支气管黏膜中的表达.结果 PDGFR-α主要在肺腺癌细胞质表达,少数在细胞核表达;EGFR主要表达于肿瘤细胞的细胞膜上,细胞浆中也有表达.二者均在肺腺癌细胞中过度表达(P<0.05).PDGFR-α的阳性表达率在肺腺癌高分化组明显高于低分化组(P<0.05),而EGFR在肺腺癌高分化组和低分化组中的表达相仿(P>0.05).结论 PDGFR-α的阳性表达与肺腺癌的分化程度呈正相关,EGFR的阳性表达与肺腺癌的分化程度无相关性.

    作者:赵世强;李宝平;刘擂;张雷 刊期: 2011年第03期

  • 放射性脑病发生的高危因素及MRI影像学改变研究

    目的 探讨放射性脑病(REP)发生的高危因素和MRI在REP早期诊断中的价值.方法 回顾性分析我院近年106例REP患者的临床资料,将发病时间、照射疗程和剂量与MRI影像学检查相结合进行分析.结果 REP发病时间多集中在首次放疗后1~5年,射野上界在OM线上>2.5 cm者及生物效应剂量(BED)>139 Gy者易发生REP;15.09%的患者尚未出现明显神经系统损害表现时,MRI检查提示为T1WI等或低信号、T2WI高信号.结论 对病人采取合理配比照射区域和次数可减少REP的发生,MRI检查有助于早期发现和诊断REP.

    作者:周礼;何文;黄海威 刊期: 2011年第03期

  • 2009-2010年广州甲型H1N1流感的流行特征分析

    目的 分析甲型H1N1流感在广州的流行特征.方法 2009年5月至2010年4月,每周分别从广州四家监测医院采集流感样症状患者的嗽口液或咽拭子,采用real-time PCR方法鉴定甲型H1N1流感病毒;在广州5大城区采集不同年龄的人群血清,通过血凝抑制实验检测血清中甲型H1N1流感抗体;对其时间和年龄的分层进行分析.结果 全年共采集嗽口液或咽拭子3 580份,甲型H1N1流感核酸检测阳性530份,阳性率为14.8%,阳性率高的月份出现在10~12月,为36.5%~42.3%,阳性率高的年龄组为5~岁和15~岁组,为18.5%和24.2%.低的年龄组为≥60岁组,为4.1%.人群血清标本共采集1 527份,甲型H1N1流感抗体阳性439份,阳性率为28.7%,阳性率高的年龄组为5~岁和15~岁组,为36.1%和39.5%,低的年龄组为≥60岁组,为8.6%.结论 甲型H1N1流感的流行期发生在10~12月,流行时间短,感染的主要人群是学龄组人群,而老年人群的感染率相对较低.预防流感的工作重点应放在学校内.

    作者:陈艺韵;耿进姝;吴继彬;鲁恩洁;李铁钢;狄飚 刊期: 2011年第03期

  • 三种副溶血性弧菌分子检测试剂盒的评价

    目的 综合评价国内三种副溶血性弧菌商品试剂盒的检测效果.方法 选用TIANDA公司的副溶血性弧菌PCR检测试剂盒、TAITAI GEN公司的副溶血性弧菌Real-time PCR检测试剂盒和HF公司的副溶血性弧菌LAMP检测试剂盒,以10倍稀释梯度的标准菌液确定各种试剂盒检出限;以国标法为标准,评价每种试剂盒的灵敏度、特异度和符合率;后比较三种试剂盒的耗时、成本和操作性.结果 PCR、Real-time PCR和LAMP检测试剂盒的检出限分别为1.18x103 cfu/ml、11.8 cfu/ml和11.8 cfu/ml;在74份海产品检测中,三种试剂盒的灵敏度分别为100%、100%和100%;特异度分别为56%、48%和50%;符合率分别为70%、65%和66%;三种试剂盒检测结果之间差异无统计学意义(P=0.074);耗时分别为120、80和80 rain;成本分别为:10、40和45元/次;操作性从难到易排列依次为PCR、Real-time PCR和LAMP检测试剂盒.结论 三种分子检测试剂盒的灵敏度高,特异度较低,操作简便,可推荐作为副溶血性弧菌检测的初筛方法.

    作者:黄弦;江晓玲;贺小峰;胡贵方 刊期: 2011年第03期

  • 小鼠气性坏疽动物模型的建立

    目的 建立产气荚膜梭菌感染小鼠的后肢的气性坏疽动物模型,为早期诊断、了解气性坏疽的致病机理及治疗方法提供依据.方法 小鼠随机分成4组,每组10只.三个实验组分别肌肉注射3.5x109、3.5x108和3.5x107 cfu/ml浓度的产气荚膜梭菌(ATCC13124)菌液0.1 ml,空白对照组肌肉注射生理盐水0.1 ml,72 h后观察小鼠感染情况,取伤口分泌物作革兰氏染色涂片,细菌血平板厌氧培养和荧光定量PCR方法定量检测.结果 3.5x109、3.5x108、3.5x107 cfu/ml实验组和对照组在肌肉注射72 h内的死亡率为90%、70%、10%和0%.各组平均存活时间依次为(20:43±11:12)h、(37:24±25:39)h、(68:36±10:45)h和(72:00±0:00)h,死亡小鼠出现了气性坏疽的症状,分泌物培养和镜检出产气荚膜梭菌;未死亡小鼠康复;空白对照组无任何症状.各组Ct值均值为21.21±2.69、28.45±2.74、32.49±2.87和0.00±0.00,组间P值均<0.05.结论 成功建立了不同浓度的产气荚膜梭菌在不同时间段内感染小鼠的后肢气性坏疽的动物模型,为了解气性坏疽的致病机理及治疗方法奠定基础.

    作者:石玉玲;徐少珊;孙朝晖;陈丽丹;刘坚 刊期: 2011年第03期

  • 丙型肝炎疫苗的研究现状

    丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是引起输血相关肝炎及慢性肝炎、肝硬化、肝癌的主要病原,目前尚无有效的治疗与预防手段.本文综述了当前世界HCV疫苗研究的进展,并分析了疫苗研制中存在的问题和疫苗研制的策略.

    作者:张立营;高博 刊期: 2011年第03期

  • 脑死亡供体肾脏病理改变及移植应用标准评判的探讨

    目的 探讨脑死亡供体肾脏病理改变及对临床使用的指导意义.方法 对13例脑死亡供体26个肾脏进行了穿刺活检,做HE染色、网状纤维染色及PAS染色.结果 发现大多数患者均有不同程度的近曲小管坏死,而远曲小管、肾小球、基底膜多无改变.选择肾近曲小管上皮细胞坏死<50%、肾小球无明显改变、肌酐<250 μmol/L、年龄<55岁的供体26个肾脏施行了移植,均取得成功.结论 脑死亡供体肾脏根据穿刺病理活检改变并结合临床表现可以作为临床移植的评判依据.

    作者:农江;孙煦勇;秦科;赖彦华;聂峰;董建辉;文海涛;李壮江;杨建均;何昌桓 刊期: 2011年第03期

  • Bcl-xl基因克隆及其在SH-SY5Y细胞中的表达

    目的 研究Bcl-xl基因在SH-SY5Y细胞中的表达.方法 构建真核表达载体plRES2-EGFP/Bcl-xl,采用脂质体介导将重组质粒导入SH-SY5Y细胞,RT-PCR和Western-blot检测外源基因表达.结果 本实验成功构建了真核表达载体plRES2-EGFP/Bcl-xl,并用脂质体介导的方法高效转染SH-SY5Y细胞,RT-PCR显示有Bcl-xl mRNA表达增加,Western-blot显示有32 kD的蛋白质表达增加.结论 重组质粒plRES2-EGFP/Bcl-xl经转染能够在SH-SY5Y细胞中高效表达,为进一步研究Bcl-xl对SH-SY5Y细胞的生物学功能奠定了基础.

    作者:蔡晓冬;杨炼红;吕瑞妍;沈庆煜 刊期: 2011年第03期

  • 冠心病患者外周血T淋巴细胞PD-L1的表达及意义

    目的 研究程序性死亡配体-1(PD-L1)在冠心病患者外周血中T淋巴细胞上的表达及意义.方法 按照WHO关于冠心病诊断标准,将实验分为稳定型心绞痛(SA)组(n=23)、急性冠脉综合征(ACS)组(n=21)和正常对照组(n=18),三组均经冠状动脉造影证实.采集三组人群的外周血,用流式细胞技术及RT-PCR技术测定T淋巴细胞PD-L1蛋白及mRNA表达情况.结果 与正常对照组比较,SA组和ACS组外周血T淋巴细胞PD-L1蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.01);但SA组与ACS组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 冠心病患者外周血T淋巴细胞PD-L1表达上调,其可能在动脉粥样硬化斑块形成过程中起作用.

    作者:陈君;魏亚非;缪绯;武凯;刘映峰;孙茂本;江玲 刊期: 2011年第03期

  • 利用荧光定量PCR技术对人肠道乳酸杆菌进行定量检测

    目的 应用荧光定量PCR技术对人粪便内乳酸杆菌进行定量检测,建立乳酸杆菌的荧光定量PCR检测体系.方法 依据人肠道乳酸杆菌16S rDNA序列设计属特异性引物,应用荧光定量PCR技术检测乳酸杆菌的16S rDNA,对粪便中的乳酸杆菌进行定量检测和分析,并与用传统方法所获得的结果进行比较.结果 荧光定量PCR检测乳酸杆菌和传统方法检测乳酸杆菌获得的结果接近,差异无统计学意义(P>0.05).结论 荧光定量PCR技术比传统方法省时、省力,且敏感性和特异性更高.

    作者:冯玉奎;郑长青 刊期: 2011年第03期

  • 柳州市不同层次暗娼人群梅毒及艾滋病感染状况分析

    目的 了解柳州市不同层次商业性工作者人群特征、艾滋病相关知识、行为及梅毒、艾滋病病毒感染等现状.方法 采用二阶段整群抽样方法抽取调查对象,使用健康问卷面对面调查并采集血样检测HIV和梅毒抗体.结果 本次研究共调查403人.部分调查对象认为能够从表面区分艾滋病感染者,与客人发生性行为时安全套使用率较高,但与固定性伴安全套使用率很低.不同档次对象的年龄、婚姻和文化程度略有不同,安全套使用率也略有差别.调查者中1d接客多20人,1周接客多25人;首次性行为年龄小12岁,首次商业性服务年龄小14岁.58.50%的调查者近1年患过性传播疾病.未发现HIV阳性者,但发现梅毒RPR初筛阳性者10人,阳性率为2.48%.结论 在干预活动时应针对不同层次人群特点,对有配偶或固定性伴者应当加大干预力度和采取不同的策略促其使用安全套,以减少HIV进一步传播.

    作者:张英霞;林海涛;俸卫东;单桂苏;张铁军 刊期: 2011年第03期

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