学术投稿

人SET基因RNA干扰重组质粒载体的构建及其在肝细胞中的表达

黄新凤;刘建军;蒋英芝;席仁荣;杨亮

关键词:RNA干扰, SET基因, 真核质粒载体, Western blotting
摘要:目的 建立真核质粒载体介导的人SET基因RNA干扰表达体系,并检测其在肝细胞中对SET蛋白表达的影响,为研究SET蛋白在三氯乙烯致肝细胞毒性的作用打下基础.方法 设计并合成2对人SET基因特异性短发夹RNA(short hair-pin RNA,shRNA)寡核苷酸链,退火形成双链DNA后插入到真核表达质粒psiRNA-hH1 neo中产生shRNA重组质粒载体,经酶切和测序鉴定成功后,转染至L-02肝细胞中,48 h后收集细胞提取总蛋白,Western blotting检测干扰后SET蛋白的表达.结果 shRNA重组质粒的酶切和测序鉴定均正确,Western blotting结果显示重组质粒psiRNA1组的干扰效果较好,对SET蛋白表达的抑制率达60%左右,与正常对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建针对人SET基因的RNA干扰真核质粒载体,其能有效地抑制肝细胞内SET蛋白的表达,为深入研究SET蛋白在三氯乙烯致肝细胞毒性中的作用奠定了基础.
热带医学杂志相关文献
  • 2型糖尿病肾病Ⅲ期的中医用药规律分析

    目的 分析和了解中医药治疗2型糖尿病肾病Ⅲ期的用药规律.方法 选用维普咨询中文科技期刊数据库(1989-2009)、中国期刊全文数据库(CNKI)(1979-2009)、万方数据库(1982-2009)、中国生物医学文献数据库(CBM)(1990-2009)、中文生物医学期刊数据库(CMCC/CMCI)(1994-2009)为资料源,对中医药治疗2型糖尿病肾病Ⅲ期的随机对照文献的用药规律进行统计分析.结果 检索到有效文献223篇,共涉及138种中药,用药频次居于前10位的是黄芪、丹参、山茱萸、山药、生地黄、川芎、茯苓、当归、益母草、大黄.药类频次统计显示,益气药居于首位,活血、养阴、收涩、清热、利水渗湿、破血逐瘀药也占了相当大的比重.结论 2型糖尿病肾病Ⅲ期的中医用药多以益气养阴活血药为主,同时辅以清热、淡渗利湿、收涩固摄、化瘀泄浊、疏风解表等药,并结合临床常用经验方或药对,取得了良好的疗效.

    作者:肖雅;严美花;张乐;谢豪杰;赵晓山;罗仁 刊期: 2011年第03期

  • 冠心病患者外周血T淋巴细胞PD-L1的表达及意义

    目的 研究程序性死亡配体-1(PD-L1)在冠心病患者外周血中T淋巴细胞上的表达及意义.方法 按照WHO关于冠心病诊断标准,将实验分为稳定型心绞痛(SA)组(n=23)、急性冠脉综合征(ACS)组(n=21)和正常对照组(n=18),三组均经冠状动脉造影证实.采集三组人群的外周血,用流式细胞技术及RT-PCR技术测定T淋巴细胞PD-L1蛋白及mRNA表达情况.结果 与正常对照组比较,SA组和ACS组外周血T淋巴细胞PD-L1蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.01);但SA组与ACS组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 冠心病患者外周血T淋巴细胞PD-L1表达上调,其可能在动脉粥样硬化斑块形成过程中起作用.

    作者:陈君;魏亚非;缪绯;武凯;刘映峰;孙茂本;江玲 刊期: 2011年第03期

  • 糖尿病肾病中医药/中西医结合研究临床治疗的研究趋向分析

    目的 探讨近30年来糖尿病肾病中医药/中西医结合临床治疗中医药研究的趋向及特点,为此后的中医药/中西医结合治疗糖尿病肾病提供借鉴.方法 遵循循证医学评价文献的原则,以维普咨询中文科技期刊数据库(1989-2009)、中国期刊全文数据库(CNKI)(1979-2009)、万方数据库(1982-2009)、中国生物医学文献数据库(CBM)(1990-2009)、中文生物医学期刊数据库(CMCC/CMCI)(1994-2009)为资料源,全面检索1984-2009年间的糖尿病肾病治疗类文献,使用Epidta双录入数据,全部数据导出至SPSSl3.0,从研究现状、特点及发展走向几个方面进行计量学评价分析.结果 共检索出文献2 300篇,其中涉及临床经验或个案类文章196篇、病凶病机研究类53篇、辨证治疗类58篇、各中医治法治疗类117篇、自拟方及成方治疗类613篇、中成药和单味中药治疗类563篇、中药联合ACEI/ARB研究类700篇,不同类型文献起始、兴盛年份各不相同.结论 临床经验或个案研究、辨证治疗研究起步较早,近年来RCT研究成为热点,不过目前RCT文献质量仍需进一步提高,设计科学、方法严谨、大样本、多中心的糖尿病肾病中西医结合RCT研究为今后重要发展方向.

    作者:张乐;严美花;肖雅;谢豪杰;赵晓山;罗仁 刊期: 2011年第03期

  • 急性心肌梗死后心脏性猝死的探讨

    目的 探讨急性心肌梗死后心脏性猝死(SCD)预防的关键环节.方法 回顾56例急性心肌梗死后心脏性猝死患者的病历及随访资料,分析其原因或诱因、发病季节与发病时间、溶栓治疗与SCD的关系、致命性心律失常与SCD的相关性与预后等.结果 严重心律失常为SCD的主要诱因,冬秋季多于春夏季,白天多于晚上,上午多于下午:住院治疗1周后、出院1周后为SCD的高发期,血钾偏低者多见,前壁多于下壁,未溶栓及溶栓未再通者SCD死亡率高.结论 综合分析患者病例资料,密切观察病情变化,加强对关键环节的管理,对降低急性心肌梗死后心脏性猝死的发生具有积极的意义.

    作者:朱兵 刊期: 2011年第03期

  • 石墨炉原子吸收光谱法测定矿泉水中总铬的不确定度分析

    目的 分析石墨炉原子吸收光谱法测定矿泉水中总铬的测量不确定度.方法 应用测量不确定度评定理论,结合试验方法,建立数学模型,确定和计算测定过程各不确定度分量,分析石墨炉原子吸收光谱法测定矿泉水中总铬的测量不确定度.结果 矿泉水中总铬含量为3.87μg/L,取包含因子k=2,其扩展不确定度为0.16μg/L,终报告矿泉水中的总铬含量为(3.87±0.16)μg/L;同时对影响测定结果的不确定度的各部分因素进行了量化,由标准物质引入的相对不确定度分量urel(标准)=1.1%;由标准曲线引入的相对不确定度分量urel(拟合)=1.3%,由重复测定引入的不确定度分量urel(重复)=0.93%,由回收率引入的不确定度分量urel(Rec)=0.89%.结论 影响测量结果的不确定度主要因素是标准曲线拟合引入的误差,标准物质及其稀释过程引入的不确定度次之,其他因素如环境条件、重复测定、回收率等对测量结果的不确定度影响较小.

    作者:苏丹华;梁春霞 刊期: 2011年第03期

  • Bcl-xl基因克隆及其在SH-SY5Y细胞中的表达

    目的 研究Bcl-xl基因在SH-SY5Y细胞中的表达.方法 构建真核表达载体plRES2-EGFP/Bcl-xl,采用脂质体介导将重组质粒导入SH-SY5Y细胞,RT-PCR和Western-blot检测外源基因表达.结果 本实验成功构建了真核表达载体plRES2-EGFP/Bcl-xl,并用脂质体介导的方法高效转染SH-SY5Y细胞,RT-PCR显示有Bcl-xl mRNA表达增加,Western-blot显示有32 kD的蛋白质表达增加.结论 重组质粒plRES2-EGFP/Bcl-xl经转染能够在SH-SY5Y细胞中高效表达,为进一步研究Bcl-xl对SH-SY5Y细胞的生物学功能奠定了基础.

    作者:蔡晓冬;杨炼红;吕瑞妍;沈庆煜 刊期: 2011年第03期

  • 小鼠气性坏疽动物模型的建立

    目的 建立产气荚膜梭菌感染小鼠的后肢的气性坏疽动物模型,为早期诊断、了解气性坏疽的致病机理及治疗方法提供依据.方法 小鼠随机分成4组,每组10只.三个实验组分别肌肉注射3.5x109、3.5x108和3.5x107 cfu/ml浓度的产气荚膜梭菌(ATCC13124)菌液0.1 ml,空白对照组肌肉注射生理盐水0.1 ml,72 h后观察小鼠感染情况,取伤口分泌物作革兰氏染色涂片,细菌血平板厌氧培养和荧光定量PCR方法定量检测.结果 3.5x109、3.5x108、3.5x107 cfu/ml实验组和对照组在肌肉注射72 h内的死亡率为90%、70%、10%和0%.各组平均存活时间依次为(20:43±11:12)h、(37:24±25:39)h、(68:36±10:45)h和(72:00±0:00)h,死亡小鼠出现了气性坏疽的症状,分泌物培养和镜检出产气荚膜梭菌;未死亡小鼠康复;空白对照组无任何症状.各组Ct值均值为21.21±2.69、28.45±2.74、32.49±2.87和0.00±0.00,组间P值均<0.05.结论 成功建立了不同浓度的产气荚膜梭菌在不同时间段内感染小鼠的后肢气性坏疽的动物模型,为了解气性坏疽的致病机理及治疗方法奠定基础.

    作者:石玉玲;徐少珊;孙朝晖;陈丽丹;刘坚 刊期: 2011年第03期

  • 丙型肝炎疫苗的研究现状

    丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是引起输血相关肝炎及慢性肝炎、肝硬化、肝癌的主要病原,目前尚无有效的治疗与预防手段.本文综述了当前世界HCV疫苗研究的进展,并分析了疫苗研制中存在的问题和疫苗研制的策略.

    作者:张立营;高博 刊期: 2011年第03期

  • 三种沙门菌分离培养基的性能评价

    目的 对XLD琼脂、SS琼脂、HE琼脂3种沙门菌分离培养基的性能进行评价.方法 选取3个不同批次的待测样品,以生长率、选择性和特异性为测试指标,分别重复测定20次.结果 标准菌株鼠伤寒沙门菌CMCC (B)50115和福氏志贺菌CMCC(B) 51572在SS琼脂、XLD琼脂、HE琼脂上三批次培养基中的生长率均大于0.5,且三批次间差异无统计学意义(P>0.05);亚利桑那沙门菌CMCC(B)47001在XLD琼脂上三批次培养基中的生长率均在0.9以上,三批次间差异亦无统计学意义(P>0.05).3株目标菌在受试三批次培养基上均呈现正常的生理生化特性,形成具特征性的菌落.粪肠球菌ATCC29212在3种培养基上生长均受抑制.结论 根据ISO/TS11133.2-2003培养基的性能评价标准判断,XLD琼脂、SS琼脂、HE琼脂培养基均符合标准要求,整体性能稳定、一致.

    作者:苏丽春;柯碧霞;陈经雕;谭海玲;严纪文;蔡芷荷 刊期: 2011年第03期

  • 人SET基因RNA干扰重组质粒载体的构建及其在肝细胞中的表达

    目的 建立真核质粒载体介导的人SET基因RNA干扰表达体系,并检测其在肝细胞中对SET蛋白表达的影响,为研究SET蛋白在三氯乙烯致肝细胞毒性的作用打下基础.方法 设计并合成2对人SET基因特异性短发夹RNA(short hair-pin RNA,shRNA)寡核苷酸链,退火形成双链DNA后插入到真核表达质粒psiRNA-hH1 neo中产生shRNA重组质粒载体,经酶切和测序鉴定成功后,转染至L-02肝细胞中,48 h后收集细胞提取总蛋白,Western blotting检测干扰后SET蛋白的表达.结果 shRNA重组质粒的酶切和测序鉴定均正确,Western blotting结果显示重组质粒psiRNA1组的干扰效果较好,对SET蛋白表达的抑制率达60%左右,与正常对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建针对人SET基因的RNA干扰真核质粒载体,其能有效地抑制肝细胞内SET蛋白的表达,为深入研究SET蛋白在三氯乙烯致肝细胞毒性中的作用奠定了基础.

    作者:黄新凤;刘建军;蒋英芝;席仁荣;杨亮 刊期: 2011年第03期

  • 2型糖尿病肾病患者外周血单个核细胞组织因子活性检测的意义

    目的 探讨2型糖尿病肾病患者外周血单个核细胞组织因子促凝活性(TF-PCA)的改变及其临床意义.方法 63名2型糖尿病患者按照尿白蛋8/肌酐比共分为三组:比值<30 mg/g为正常蛋白尿组(n=22),30 mg/g≤比值<300 mg/g为微量白蛋白尿组(n=26),比值≥300 mg/g为大量白蛋白尿组(n=15);同时选择21名健康体检者作为对照组.采用一期凝固法测定外周血单个核细胞TF-PCA.常规检测空腹血糖、糖化血红蛋白、超敏CRP(Hs.CRP)、尿酸(UA)、胱抑素C(CYSC),并进行相关分析.结果 糖尿病组外周血TF-PCA随尿蛋白水平升高而升高,同时单个核细胞TF-PCA与空腹血糖、Hs-CRP、UA等呈正相关,相关系数分别为0.419、0.293、0.232(P<0.05).结论 2型糖尿病患者外周血单个核细胞TF-PCA明显升高,且与多种因素相关,TF-PCA升高可能与DN的发病机制、病程进展相关.

    作者:付文金;郑磊;王前;汤惠华;王少波;叶长钦;陈载鑫;熊石龙;彭兰芬 刊期: 2011年第03期

  • 实时荧光PCR法检测}HER2基因扩增方法的建立

    目的 探讨应用双标准曲线的实时荧光PCR法检测原癌基因人类表皮生长因子受体2(HER2)基因扩增在临床乳腺癌诊治中的可行性.方法 收集500例乳腺癌术后新鲜组织标本,抽提组织DNA进行实时荧光PCR检测,采用双标准曲线法定量,通过计算目的 基因浓度和内标基因浓度的比值来判断HER2基因的扩增情况.选择灵敏度和特异度均较高的荧光原位杂交方法作为对照方法.结果 检测阳性标本72例,阴性样本419例.该方法检测的灵敏度为85.9%,特异度为98.79%,准确度为96.74.与荧光原位杂交法(FISH)检测结果相比,二者具有较好的一致性.结论 双标准曲线的实时荧光PCR法用于检测HER2基因扩增相对准确可靠,有较好的临床应用前景.

    作者:邓艳华;吴荃;陈华云;李明 刊期: 2011年第03期

  • 细菌耐药性机制研究进展

    20世纪中期,随着医院和社区获得性耐青霉素葡萄球菌的相继出现,细菌耐药性逐步成为一个全球性备受瞩目的问题[1,2].细菌耐药性又称抗药性.

    作者:周显凤;倪贤生;吴越 刊期: 2011年第03期

  • 液相芯片技术在人乳头瘤病毒分型检测中的应用

    目的 构建人乳头瘤病毒(HPV)基因分型的液相芯片,针对中国常见的23种型别的HPV进行分型检测,并探讨其在临床应用中的特异性和敏感性.方法 采用HPV通用型引物MY09/11以及一条简并引物对临床样本进行PCR扩增;针对HPV不同型别设计分型探针,并偶联到Luminex微球上,通过Luminexm平台对PCR产物进行分型检测.同时以测序法作为验证标准,对液相芯片法(Luminex法)检测结果进行评价.结果 以测序法作为验证标准,Luminex法对314例HPV样本的分型检测结果为灵敏度98.10%,特异性98.08%,符合率98.09%.Kappa一致性检验结果为0.962.结论 Luminex法用于HPV感染样本中的分型检测具有高灵敏度和特异性,可以用于临床HPV诊断.

    作者:彭春梅;邓先连;林斌;胡守旺;陈晓光 刊期: 2011年第03期

  • 柳州市不同层次暗娼人群梅毒及艾滋病感染状况分析

    目的 了解柳州市不同层次商业性工作者人群特征、艾滋病相关知识、行为及梅毒、艾滋病病毒感染等现状.方法 采用二阶段整群抽样方法抽取调查对象,使用健康问卷面对面调查并采集血样检测HIV和梅毒抗体.结果 本次研究共调查403人.部分调查对象认为能够从表面区分艾滋病感染者,与客人发生性行为时安全套使用率较高,但与固定性伴安全套使用率很低.不同档次对象的年龄、婚姻和文化程度略有不同,安全套使用率也略有差别.调查者中1d接客多20人,1周接客多25人;首次性行为年龄小12岁,首次商业性服务年龄小14岁.58.50%的调查者近1年患过性传播疾病.未发现HIV阳性者,但发现梅毒RPR初筛阳性者10人,阳性率为2.48%.结论 在干预活动时应针对不同层次人群特点,对有配偶或固定性伴者应当加大干预力度和采取不同的策略促其使用安全套,以减少HIV进一步传播.

    作者:张英霞;林海涛;俸卫东;单桂苏;张铁军 刊期: 2011年第03期

  • 脑死亡供体肾脏病理改变及移植应用标准评判的探讨

    目的 探讨脑死亡供体肾脏病理改变及对临床使用的指导意义.方法 对13例脑死亡供体26个肾脏进行了穿刺活检,做HE染色、网状纤维染色及PAS染色.结果 发现大多数患者均有不同程度的近曲小管坏死,而远曲小管、肾小球、基底膜多无改变.选择肾近曲小管上皮细胞坏死<50%、肾小球无明显改变、肌酐<250 μmol/L、年龄<55岁的供体26个肾脏施行了移植,均取得成功.结论 脑死亡供体肾脏根据穿刺病理活检改变并结合临床表现可以作为临床移植的评判依据.

    作者:农江;孙煦勇;秦科;赖彦华;聂峰;董建辉;文海涛;李壮江;杨建均;何昌桓 刊期: 2011年第03期

  • 银屑病患者外周血单个核细胞CCR5的表达及其意义

    目的 研究银屑病患者外周血单个核细胞趋化因子受体5(CCR5)的表达及其与银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)的关系.方法 分离35例中重度寻常型银屑病患者及30例健康对照者外周血单个核细胞(PBMCs),用RT-PCR法测定PBMCs培养前后CCR5 mRNA的表达水平,免疫荧光标记一流式细胞仪检测CCR5阳性细胞比率.结果 治疗前银屑病患者外周血单个核细胞中CCR5 mRNA表达水平明显高于治疗后及健康对照组,并与PASI呈正相关(r=0.516,P<0.05).结论 CCR5可能通过活化与趋化单个核细胞到银屑病皮损而参与了银屑病的发病.

    作者:黄远忠;董正蓉;林伯盛;马丹晓 刊期: 2011年第03期

  • 阳山县华支睾吸虫病综合防治示范区中期评估结果

    目的 了解阳山县华支睾吸虫病综合防治示范区人群华支睾吸虫感染状况,评估示范区一年来综合防治效果.方法 按国家中期考核评估方案要求分东西南北中5个片随机抽取调查点,采用改良加藤厚涂片法对人群进行虫卵粪检.结果 东片青莲、西片黎埠、南片七拱、北片小江、中片阳城5个片调查点华支睾吸虫感染率分别为7.26%、6.09%、14.80%、7.14%和10.80%,平均为9.28%.感染率由2006年的14.01%下降到9.28%,下降率为33.76%.结论 阳山县居民华支睾吸虫感染率较2006年基线调查结果明显下降,综合防治效果明显.

    作者:李志奇;黄新华;张学军;刘狄轩 刊期: 2011年第03期

  • 重庆市消除碘缺乏病评估结果分析

    目的 评价碘缺乏病的防治效果,分析影响因素,为制定防治方案提供依据.方法 各区县随机抽取9个乡镇检查居民食用盐含碘量;抽取5所小学8~10岁儿童检查甲状腺、尿碘和五年级学生碘缺乏病防治知识;查阅组织领导、防治监测、碘盐管理和健康教育资料,进行综合评分;重庆市对区县评估结果进行复核;用X2检验作统计学分析.结果 全市40个区县检查居民食用盐14 217户,合格碘盐食用率为90.00%-99.72%,平均为95.90%,尿碘检测4 050人,中位数为247.20μg/L,300μg/L以上占37.10%,区县中位数100-200μg/L占25%(10/40),200~300 μg/L占57.5%(23/40),>300μg/L占17.5%(7/40);甲状腺检查16 852人,肿大率为3.25%一9.00%,平均为5.80%;学生防治知识平均得分3.1~5.0分,平均为4.4分;防治措施综合评分为86.00~99.00分,平均为95.00分.市级复查中检查食用盐1 250户,合格碘盐食用率为90.91%~100.00%,平均为96.88%;甲状腺检查16 852人,肿大率触诊和B超法为5.00%~8.33%,乎均分别为7.02%和6.64%;防治知识调查1 366人,得分2.5~4.9分;防治措施综合评分为88.8~99.5分.结论 重庆市有39个区县实现了消除碘缺乏病目标,1个县实现了基本消除碘缺乏病目标,市级层级实现了消除碘缺乏病目标,防治工作取得显著成效.但存在碘过量,须降低食盐加碘浓度.

    作者:肖邦忠;罗兴建;李心术;吴成果;陈亚琳;黄文利;谢君 刊期: 2011年第03期

  • 2010年广州市甲型H1N1流感病毒分离株HA基因变异分析

    目的 比较2010年广州市分离到的甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因和2009年中国大陆甲型H1N1流感病毒HA基因的变异情况,为甲型H1N1流感的监测和防控提供理论依据.方法 收集2010年广州市有发热和呼吸道症状病人的咽拭子标本,用H1N1流感特异性引物进行PCR检测,扩增分离到的H1N1病毒HA片段,测序后与2009年的H1N1毒株进行比对和分析,并用生物信息学方法对抗原位点和糖基化位点进行分析.结果 共收集到426份标本,甲型流感阳性211份,其中H1N1流感4株,与2009年分离的甲型H1N1流感相比,有12个氨基酸碱基位点发生了有意义突变,其中6个位点位于抗原位点上;4株毒株HA基因145位氨基酸都发生了变异;其中2株毒株在第180位氨基酸位点的抗原位点发生了变异.进化分析表明4株毒株与2009年中国大陆分离的8株毒株进化关系较远.结论 2010年广州市甲型H1N1毒株与2009年相比发生了较大变异.HA基因145位和180位氨基酸位点变异对H1N1毒株抗原变异有重要意义.本文分离的A/Guangdons/ZS03/2010(H1N1)和A/Guangdong/ZS01/2010(H1N1)毒株可能已经发生了抗原性漂移.

    作者:许沙沙;常彦敏;徐霖;冯发深;何霞;王铸;张定梅;黎孟枫;曹开源 刊期: 2011年第03期

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