学术投稿

液相芯片技术在人乳头瘤病毒分型检测中的应用

彭春梅;邓先连;林斌;胡守旺;陈晓光

关键词:液相芯片, 人乳头瘤病毒, 分型检测, 测序
摘要:目的 构建人乳头瘤病毒(HPV)基因分型的液相芯片,针对中国常见的23种型别的HPV进行分型检测,并探讨其在临床应用中的特异性和敏感性.方法 采用HPV通用型引物MY09/11以及一条简并引物对临床样本进行PCR扩增;针对HPV不同型别设计分型探针,并偶联到Luminex微球上,通过Luminexm平台对PCR产物进行分型检测.同时以测序法作为验证标准,对液相芯片法(Luminex法)检测结果进行评价.结果 以测序法作为验证标准,Luminex法对314例HPV样本的分型检测结果为灵敏度98.10%,特异性98.08%,符合率98.09%.Kappa一致性检验结果为0.962.结论 Luminex法用于HPV感染样本中的分型检测具有高灵敏度和特异性,可以用于临床HPV诊断.
热带医学杂志相关文献
  • 人SET基因RNA干扰重组质粒载体的构建及其在肝细胞中的表达

    目的 建立真核质粒载体介导的人SET基因RNA干扰表达体系,并检测其在肝细胞中对SET蛋白表达的影响,为研究SET蛋白在三氯乙烯致肝细胞毒性的作用打下基础.方法 设计并合成2对人SET基因特异性短发夹RNA(short hair-pin RNA,shRNA)寡核苷酸链,退火形成双链DNA后插入到真核表达质粒psiRNA-hH1 neo中产生shRNA重组质粒载体,经酶切和测序鉴定成功后,转染至L-02肝细胞中,48 h后收集细胞提取总蛋白,Western blotting检测干扰后SET蛋白的表达.结果 shRNA重组质粒的酶切和测序鉴定均正确,Western blotting结果显示重组质粒psiRNA1组的干扰效果较好,对SET蛋白表达的抑制率达60%左右,与正常对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建针对人SET基因的RNA干扰真核质粒载体,其能有效地抑制肝细胞内SET蛋白的表达,为深入研究SET蛋白在三氯乙烯致肝细胞毒性中的作用奠定了基础.

    作者:黄新凤;刘建军;蒋英芝;席仁荣;杨亮 刊期: 2011年第03期

  • 中药与西药对照治疗偏头痛的Meta分析

    目的 评价中药治疗偏头痛的临床疗效和安全性.方法 计算机检索中国期刊全文数据库、维普中文期刊数据库、万方学术期刊全文数据库、中国生物医学文献服务系统(CBM)、中国生物医学期刊引文数据库(CMCI/CMCC整合版)、中医药在线数据库,检索2000年1月一2009年12月10年间的相关文献,收集中药治疗偏头痛的随机对照试验(RCTs).按纳入排除标准筛选试验、评价研究质量、提取有效数据,并采用RevMan 5.0进行统计分析.结果 终纳入20个RCT评价中药与西药在偏头痛疗效方面的差异,Meta分析显示:有效率[RR=1.22,95%CI(1.15,1.29),P<0.01],差异有统计学意义.敏感性分析表明评价结果稳定.漏斗图显示不对称,提示纳入评价的文献存在发表性偏倚.结论 中药治疗偏头痛有效,但由于本系统评价纳入研究的方法学质量较低,尚需开展更多设计合理、执行严格的多中心大样本且随访时间足够长的随机对照试验验证其疗效及安全性.

    作者:谢炜;史国军;于林;鲍勇;杜念念;于云红 刊期: 2011年第03期

  • Bcl-xl基因克隆及其在SH-SY5Y细胞中的表达

    目的 研究Bcl-xl基因在SH-SY5Y细胞中的表达.方法 构建真核表达载体plRES2-EGFP/Bcl-xl,采用脂质体介导将重组质粒导入SH-SY5Y细胞,RT-PCR和Western-blot检测外源基因表达.结果 本实验成功构建了真核表达载体plRES2-EGFP/Bcl-xl,并用脂质体介导的方法高效转染SH-SY5Y细胞,RT-PCR显示有Bcl-xl mRNA表达增加,Western-blot显示有32 kD的蛋白质表达增加.结论 重组质粒plRES2-EGFP/Bcl-xl经转染能够在SH-SY5Y细胞中高效表达,为进一步研究Bcl-xl对SH-SY5Y细胞的生物学功能奠定了基础.

    作者:蔡晓冬;杨炼红;吕瑞妍;沈庆煜 刊期: 2011年第03期

  • 三种副溶血性弧菌分子检测试剂盒的评价

    目的 综合评价国内三种副溶血性弧菌商品试剂盒的检测效果.方法 选用TIANDA公司的副溶血性弧菌PCR检测试剂盒、TAITAI GEN公司的副溶血性弧菌Real-time PCR检测试剂盒和HF公司的副溶血性弧菌LAMP检测试剂盒,以10倍稀释梯度的标准菌液确定各种试剂盒检出限;以国标法为标准,评价每种试剂盒的灵敏度、特异度和符合率;后比较三种试剂盒的耗时、成本和操作性.结果 PCR、Real-time PCR和LAMP检测试剂盒的检出限分别为1.18x103 cfu/ml、11.8 cfu/ml和11.8 cfu/ml;在74份海产品检测中,三种试剂盒的灵敏度分别为100%、100%和100%;特异度分别为56%、48%和50%;符合率分别为70%、65%和66%;三种试剂盒检测结果之间差异无统计学意义(P=0.074);耗时分别为120、80和80 rain;成本分别为:10、40和45元/次;操作性从难到易排列依次为PCR、Real-time PCR和LAMP检测试剂盒.结论 三种分子检测试剂盒的灵敏度高,特异度较低,操作简便,可推荐作为副溶血性弧菌检测的初筛方法.

    作者:黄弦;江晓玲;贺小峰;胡贵方 刊期: 2011年第03期

  • 急性脑出血患者血清甲状腺激素水平的变化及其临床意义

    目的 探讨急性脑出血患者血清甲状腺激素水平及其临床意义.方法 根据脑出血量多少、神经功能缺损程度及治疗2周后的疗效,将98例急性脑出血患者分为:脑出血量≤30 ml为A组、>30 ml为B组;神经功能缺损程度轻型的为C组、中型的为D组、重型的为E组;疗效为显效的为F组、有效的为G组、无效的为H组.选择40例健康者作对照.采用电化学发光法检测急性脑出血患者和健康对照者血清中T3、T4、FT3、FT4、TSH水平.结果 急性脑出血患者A、B、C、D、E、G和H组与健康对照组,B组与A组,D、E组与C组,G、H组与F组之间,甲状腺激素水平差异均有统计学意义(P<0.05),T4、FT4、TSH水平升高,而T3、FT3,水平下降.而疗效为显效的F组与健康对照组比较.甲状腺激素水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 急性脑出血患者T4、FT4、TSH水平升高和T3、FT3水平下降与病情的严重程度及预后密切相关.

    作者:龙熙德;郭毅;朱平安 刊期: 2011年第03期

  • 重庆市消除碘缺乏病评估结果分析

    目的 评价碘缺乏病的防治效果,分析影响因素,为制定防治方案提供依据.方法 各区县随机抽取9个乡镇检查居民食用盐含碘量;抽取5所小学8~10岁儿童检查甲状腺、尿碘和五年级学生碘缺乏病防治知识;查阅组织领导、防治监测、碘盐管理和健康教育资料,进行综合评分;重庆市对区县评估结果进行复核;用X2检验作统计学分析.结果 全市40个区县检查居民食用盐14 217户,合格碘盐食用率为90.00%-99.72%,平均为95.90%,尿碘检测4 050人,中位数为247.20μg/L,300μg/L以上占37.10%,区县中位数100-200μg/L占25%(10/40),200~300 μg/L占57.5%(23/40),>300μg/L占17.5%(7/40);甲状腺检查16 852人,肿大率为3.25%一9.00%,平均为5.80%;学生防治知识平均得分3.1~5.0分,平均为4.4分;防治措施综合评分为86.00~99.00分,平均为95.00分.市级复查中检查食用盐1 250户,合格碘盐食用率为90.91%~100.00%,平均为96.88%;甲状腺检查16 852人,肿大率触诊和B超法为5.00%~8.33%,乎均分别为7.02%和6.64%;防治知识调查1 366人,得分2.5~4.9分;防治措施综合评分为88.8~99.5分.结论 重庆市有39个区县实现了消除碘缺乏病目标,1个县实现了基本消除碘缺乏病目标,市级层级实现了消除碘缺乏病目标,防治工作取得显著成效.但存在碘过量,须降低食盐加碘浓度.

    作者:肖邦忠;罗兴建;李心术;吴成果;陈亚琳;黄文利;谢君 刊期: 2011年第03期

  • 三种沙门菌分离培养基的性能评价

    目的 对XLD琼脂、SS琼脂、HE琼脂3种沙门菌分离培养基的性能进行评价.方法 选取3个不同批次的待测样品,以生长率、选择性和特异性为测试指标,分别重复测定20次.结果 标准菌株鼠伤寒沙门菌CMCC (B)50115和福氏志贺菌CMCC(B) 51572在SS琼脂、XLD琼脂、HE琼脂上三批次培养基中的生长率均大于0.5,且三批次间差异无统计学意义(P>0.05);亚利桑那沙门菌CMCC(B)47001在XLD琼脂上三批次培养基中的生长率均在0.9以上,三批次间差异亦无统计学意义(P>0.05).3株目标菌在受试三批次培养基上均呈现正常的生理生化特性,形成具特征性的菌落.粪肠球菌ATCC29212在3种培养基上生长均受抑制.结论 根据ISO/TS11133.2-2003培养基的性能评价标准判断,XLD琼脂、SS琼脂、HE琼脂培养基均符合标准要求,整体性能稳定、一致.

    作者:苏丽春;柯碧霞;陈经雕;谭海玲;严纪文;蔡芷荷 刊期: 2011年第03期

  • 急性应激对大鼠行为学及蓝斑TH、DBH基因表达的影响

    目的 观察急性应激状态下大鼠行为学的改变及不同时间点蓝斑内酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺一β一羟化酶(DBH)的基因表达.方法 将24只健康雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组和模型组,模型组又分为造模后1、3、6 h组,每组6只.运用束缚和游泳的方法造模,观察其行为学的改变;并分别在造模后相应时间点取出蓝斑,用RT-PCR法检测蓝斑TH、DBH的表达.结果 模型组造模前后比较,1、6 h组的穿越格数和直立次数明显下降(P<0.05),3 h组的穿越格数、直立次数和理毛次数均明显降低(P<0.05,P<0.05,P<0.01);与对照组大鼠相比,造模后1 h组的穿越格数减少(P<0.05),1、3 h组的直立次数明显降低(P<0.01,P<0.05),1、3、6 h组的理毛次数降低明显且差异均有统计学意义(均P<0.01).模型组蓝斑TH和DBH表达水平较对照组升高,其中3 h组表达高(P<0.05),1、6 h组差异均无统计学意义(P>0.05),TH和DBH两者的表达趋势相似.结论 急性应激使大鼠的行为能力降低,蓝斑去甲肾上腺素能神经元中TH、DBH表达增高,使去甲肾上腺素合成增多,而去甲肾上腺素可以显著影响大鼠的情绪行为,在应激过程中起重要作用;TH、DBH表达的增高可能参与了急性应激所致的行为异常.

    作者:陶杨;丁秀芳;陈育尧;孙学刚;覃桂强;张艳平;黄杰春;吕志平 刊期: 2011年第03期

  • 实时荧光PCR法检测}HER2基因扩增方法的建立

    目的 探讨应用双标准曲线的实时荧光PCR法检测原癌基因人类表皮生长因子受体2(HER2)基因扩增在临床乳腺癌诊治中的可行性.方法 收集500例乳腺癌术后新鲜组织标本,抽提组织DNA进行实时荧光PCR检测,采用双标准曲线法定量,通过计算目的 基因浓度和内标基因浓度的比值来判断HER2基因的扩增情况.选择灵敏度和特异度均较高的荧光原位杂交方法作为对照方法.结果 检测阳性标本72例,阴性样本419例.该方法检测的灵敏度为85.9%,特异度为98.79%,准确度为96.74.与荧光原位杂交法(FISH)检测结果相比,二者具有较好的一致性.结论 双标准曲线的实时荧光PCR法用于检测HER2基因扩增相对准确可靠,有较好的临床应用前景.

    作者:邓艳华;吴荃;陈华云;李明 刊期: 2011年第03期

  • 重庆市艾滋病流行形势分析与防治策略研究

    目的 了解重庆市艾滋病流行趋势与特征,为艾滋病防治工作提供建议.方法 收集1993--2009年重庆市艾滋病疫情资料与哨点监测数据,描述性分析HIV感染者年龄、性别、婚姻状况、职业、传播途径等的流行趋势,比较分析1999--2009年吸毒人群以及2006--2009年暗娼与男男性行为人群HIV感染率的变化趋势.结果 重庆市累计报告HIV感染者7775例,近5年报告的病例数都超过了1000例,2009年经异性和同性性接触传播分别占26.6%和38.5%,50岁及以上年龄组所占的比例由2001年前的1.9%上升至2009年的17.4%.哨点监测发现静脉注射吸毒人群HIV由1999年的0.4%上升至2009年的6.4%,男男性行为人群HIV感染率由2006年的10.4%上升至2009年的19.0%,暗娼人群HIV感染率维持在0.5%以下.结论 重庆市男男性行为人群、吸毒人群HIV感染率显著升高,加强针对上述人群的防控工作与HIV感染者的管理工作刻不容缓.

    作者:丁贤彬;张维;冯连贵;卢戎戎;徐静;周超;欧阳琳 刊期: 2011年第03期

  • 2009-2010年广州甲型H1N1流感的流行特征分析

    目的 分析甲型H1N1流感在广州的流行特征.方法 2009年5月至2010年4月,每周分别从广州四家监测医院采集流感样症状患者的嗽口液或咽拭子,采用real-time PCR方法鉴定甲型H1N1流感病毒;在广州5大城区采集不同年龄的人群血清,通过血凝抑制实验检测血清中甲型H1N1流感抗体;对其时间和年龄的分层进行分析.结果 全年共采集嗽口液或咽拭子3 580份,甲型H1N1流感核酸检测阳性530份,阳性率为14.8%,阳性率高的月份出现在10~12月,为36.5%~42.3%,阳性率高的年龄组为5~岁和15~岁组,为18.5%和24.2%.低的年龄组为≥60岁组,为4.1%.人群血清标本共采集1 527份,甲型H1N1流感抗体阳性439份,阳性率为28.7%,阳性率高的年龄组为5~岁和15~岁组,为36.1%和39.5%,低的年龄组为≥60岁组,为8.6%.结论 甲型H1N1流感的流行期发生在10~12月,流行时间短,感染的主要人群是学龄组人群,而老年人群的感染率相对较低.预防流感的工作重点应放在学校内.

    作者:陈艺韵;耿进姝;吴继彬;鲁恩洁;李铁钢;狄飚 刊期: 2011年第03期

  • 急性心肌梗死后心脏性猝死的探讨

    目的 探讨急性心肌梗死后心脏性猝死(SCD)预防的关键环节.方法 回顾56例急性心肌梗死后心脏性猝死患者的病历及随访资料,分析其原因或诱因、发病季节与发病时间、溶栓治疗与SCD的关系、致命性心律失常与SCD的相关性与预后等.结果 严重心律失常为SCD的主要诱因,冬秋季多于春夏季,白天多于晚上,上午多于下午:住院治疗1周后、出院1周后为SCD的高发期,血钾偏低者多见,前壁多于下壁,未溶栓及溶栓未再通者SCD死亡率高.结论 综合分析患者病例资料,密切观察病情变化,加强对关键环节的管理,对降低急性心肌梗死后心脏性猝死的发生具有积极的意义.

    作者:朱兵 刊期: 2011年第03期

  • 柳州市不同层次暗娼人群梅毒及艾滋病感染状况分析

    目的 了解柳州市不同层次商业性工作者人群特征、艾滋病相关知识、行为及梅毒、艾滋病病毒感染等现状.方法 采用二阶段整群抽样方法抽取调查对象,使用健康问卷面对面调查并采集血样检测HIV和梅毒抗体.结果 本次研究共调查403人.部分调查对象认为能够从表面区分艾滋病感染者,与客人发生性行为时安全套使用率较高,但与固定性伴安全套使用率很低.不同档次对象的年龄、婚姻和文化程度略有不同,安全套使用率也略有差别.调查者中1d接客多20人,1周接客多25人;首次性行为年龄小12岁,首次商业性服务年龄小14岁.58.50%的调查者近1年患过性传播疾病.未发现HIV阳性者,但发现梅毒RPR初筛阳性者10人,阳性率为2.48%.结论 在干预活动时应针对不同层次人群特点,对有配偶或固定性伴者应当加大干预力度和采取不同的策略促其使用安全套,以减少HIV进一步传播.

    作者:张英霞;林海涛;俸卫东;单桂苏;张铁军 刊期: 2011年第03期

  • 小鼠气性坏疽动物模型的建立

    目的 建立产气荚膜梭菌感染小鼠的后肢的气性坏疽动物模型,为早期诊断、了解气性坏疽的致病机理及治疗方法提供依据.方法 小鼠随机分成4组,每组10只.三个实验组分别肌肉注射3.5x109、3.5x108和3.5x107 cfu/ml浓度的产气荚膜梭菌(ATCC13124)菌液0.1 ml,空白对照组肌肉注射生理盐水0.1 ml,72 h后观察小鼠感染情况,取伤口分泌物作革兰氏染色涂片,细菌血平板厌氧培养和荧光定量PCR方法定量检测.结果 3.5x109、3.5x108、3.5x107 cfu/ml实验组和对照组在肌肉注射72 h内的死亡率为90%、70%、10%和0%.各组平均存活时间依次为(20:43±11:12)h、(37:24±25:39)h、(68:36±10:45)h和(72:00±0:00)h,死亡小鼠出现了气性坏疽的症状,分泌物培养和镜检出产气荚膜梭菌;未死亡小鼠康复;空白对照组无任何症状.各组Ct值均值为21.21±2.69、28.45±2.74、32.49±2.87和0.00±0.00,组间P值均<0.05.结论 成功建立了不同浓度的产气荚膜梭菌在不同时间段内感染小鼠的后肢气性坏疽的动物模型,为了解气性坏疽的致病机理及治疗方法奠定基础.

    作者:石玉玲;徐少珊;孙朝晖;陈丽丹;刘坚 刊期: 2011年第03期

  • 细菌耐药性机制研究进展

    20世纪中期,随着医院和社区获得性耐青霉素葡萄球菌的相继出现,细菌耐药性逐步成为一个全球性备受瞩目的问题[1,2].细菌耐药性又称抗药性.

    作者:周显凤;倪贤生;吴越 刊期: 2011年第03期

  • SD大鼠胚胎上胚层干细胞的分离与培养

    目的 从SD大鼠胚胎中获取附植后胚胎上胚层干细胞(post-implantation epiblast stem cells,Episc),并探讨组织来源、胎龄、细胞因子、传代方法等条件对SD大鼠Episc(SD Episc)分离与培养的影响.方法 分别取5.5 d和7.75 d胎龄囊胚上胚层(epiblast),以昆明小鼠胚胎成纤维细胞为饲养层,于添加白血病抑制因子(leucocyte inbibitory factor,LIF)或活化素(activin)的基础培养基中,进行原代培养.分别采用机械法和胰酶消化法对克隆集落进行传代.后通过碱性磷酸酶染色对克隆集落进行鉴定分析,并对其体外分化能力进行检测.结果 培养于LIF培养基和activin 培养基中的囊胚均发生严重分化.培养于LIF的培养基中的epiblast也发生了严重的自发分化.而在activin培养基中,epiblast形成SD Episc原代集落.经机械法传代获得AKP染色阴性、能形成拟胚体的SD Episc.结论 利用细胞因子activin,结合机械传代法可从7.75 d胎龄SD大鼠胚胎中获得SD Episc.

    作者:卢安尚;张薇;邓新燕;赵勇;郭思政;郭中敏 刊期: 2011年第03期

  • 不同年龄段健康人群诱导痰细胞比例的变化

    目的 探讨不同年龄段健康人群的诱导痰细胞比例是否存在差异,进一步完善诱导痰细胞分类的正常值.方法 将96例年龄介于10~73岁的健康受试者分为4个年龄组(<19岁,19~岁,40~岁,>59岁).对健康受试者行3%的高渗盐水雾化痰诱导试验,检测痰标本的细胞分类情况,并进行统计分析.结果 小于19岁的健康人痰细胞以巨噬细胞为主(87.50%),中性粒细胞次之(11.00%);随着年龄的增长,痰中性粒细胞比例逐渐升高;大于59岁的健康人痰中性粒细胞比例为73.50%,巨噬细胞比例下降为24.38%.各年龄段中性粒细胞和巨噬细胞比例差异均有统计学意义(P<0.01),而嗜酸性粒细胞及淋巴细胞的比例在各组间无显著差异.痰中性粒细胞比例的增加与年龄的增长呈正相关(r=0.845,P<0.001),巨噬细胞比例的变化则与受试者的年龄呈负相关(r=-0.842,P<0.001).结论 不同年龄段的健康人群诱导痰细胞比例存在差异,随年龄的增长,中性粒细胞比例不断增高.涉及痰细胞比例的相关研究需要考虑年龄因素造成的影响.

    作者:罗炜;陈桥丽;王慧;陈如冲 刊期: 2011年第03期

  • 改良品质的转基因番茄研制现状

    番茄(Lycopersicon esculentum)是一种优良的蔬菜品种,应用基因工程技术对番茄进行开发和改造已成为国内外研究的热点.本文综述了延迟成熟品种、耐盐品种和耐寒品种的转基因番茄的研制现状.

    作者:李文桂;陈雅棠 刊期: 2011年第03期

  • 利用荧光定量PCR技术对人肠道乳酸杆菌进行定量检测

    目的 应用荧光定量PCR技术对人粪便内乳酸杆菌进行定量检测,建立乳酸杆菌的荧光定量PCR检测体系.方法 依据人肠道乳酸杆菌16S rDNA序列设计属特异性引物,应用荧光定量PCR技术检测乳酸杆菌的16S rDNA,对粪便中的乳酸杆菌进行定量检测和分析,并与用传统方法所获得的结果进行比较.结果 荧光定量PCR检测乳酸杆菌和传统方法检测乳酸杆菌获得的结果接近,差异无统计学意义(P>0.05).结论 荧光定量PCR技术比传统方法省时、省力,且敏感性和特异性更高.

    作者:冯玉奎;郑长青 刊期: 2011年第03期

  • 冠心病患者外周血T淋巴细胞PD-L1的表达及意义

    目的 研究程序性死亡配体-1(PD-L1)在冠心病患者外周血中T淋巴细胞上的表达及意义.方法 按照WHO关于冠心病诊断标准,将实验分为稳定型心绞痛(SA)组(n=23)、急性冠脉综合征(ACS)组(n=21)和正常对照组(n=18),三组均经冠状动脉造影证实.采集三组人群的外周血,用流式细胞技术及RT-PCR技术测定T淋巴细胞PD-L1蛋白及mRNA表达情况.结果 与正常对照组比较,SA组和ACS组外周血T淋巴细胞PD-L1蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.01);但SA组与ACS组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 冠心病患者外周血T淋巴细胞PD-L1表达上调,其可能在动脉粥样硬化斑块形成过程中起作用.

    作者:陈君;魏亚非;缪绯;武凯;刘映峰;孙茂本;江玲 刊期: 2011年第03期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会