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2010年广州市甲型H1N1流感病毒分离株HA基因变异分析

许沙沙;常彦敏;徐霖;冯发深;何霞;王铸;张定梅;黎孟枫;曹开源

关键词:甲型H1N1流感, 血凝素, 抗原决定簇
摘要:目的 比较2010年广州市分离到的甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因和2009年中国大陆甲型H1N1流感病毒HA基因的变异情况,为甲型H1N1流感的监测和防控提供理论依据.方法 收集2010年广州市有发热和呼吸道症状病人的咽拭子标本,用H1N1流感特异性引物进行PCR检测,扩增分离到的H1N1病毒HA片段,测序后与2009年的H1N1毒株进行比对和分析,并用生物信息学方法对抗原位点和糖基化位点进行分析.结果 共收集到426份标本,甲型流感阳性211份,其中H1N1流感4株,与2009年分离的甲型H1N1流感相比,有12个氨基酸碱基位点发生了有意义突变,其中6个位点位于抗原位点上;4株毒株HA基因145位氨基酸都发生了变异;其中2株毒株在第180位氨基酸位点的抗原位点发生了变异.进化分析表明4株毒株与2009年中国大陆分离的8株毒株进化关系较远.结论 2010年广州市甲型H1N1毒株与2009年相比发生了较大变异.HA基因145位和180位氨基酸位点变异对H1N1毒株抗原变异有重要意义.本文分离的A/Guangdons/ZS03/2010(H1N1)和A/Guangdong/ZS01/2010(H1N1)毒株可能已经发生了抗原性漂移.
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  • 含人P21启动子双荧光素酶基因载体的构建

    目的 构建带有EGFP标记含人P21启动子的双荧光素酶报告基因载体.方法 从人血白细胞DNA中克隆P21启动子,用于控制firefly荧光素酶的表达;renilla荧光素酶基因和EGFP基因用IRES连接,在CMV启动子控制下表达:上述元件和基因克隆至载体pLL3.7中,应用酶切和测序的方法进行鉴定正确后转染至293FT细胞观察EGFP表达.结果 经酶切、测序证实成功构建了带有EGFP标记的含人P21启动子的双荧光素酶报告基因的载体,并成功表达EGFP.结论 含人P21启动子的双荧光素酶报告基因的载体成功构建,为下一步的药物筛选打下基础.

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    目的 构建人乳头瘤病毒(HPV)基因分型的液相芯片,针对中国常见的23种型别的HPV进行分型检测,并探讨其在临床应用中的特异性和敏感性.方法 采用HPV通用型引物MY09/11以及一条简并引物对临床样本进行PCR扩增;针对HPV不同型别设计分型探针,并偶联到Luminex微球上,通过Luminexm平台对PCR产物进行分型检测.同时以测序法作为验证标准,对液相芯片法(Luminex法)检测结果进行评价.结果 以测序法作为验证标准,Luminex法对314例HPV样本的分型检测结果为灵敏度98.10%,特异性98.08%,符合率98.09%.Kappa一致性检验结果为0.962.结论 Luminex法用于HPV感染样本中的分型检测具有高灵敏度和特异性,可以用于临床HPV诊断.

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    目的 了解柳州市不同层次商业性工作者人群特征、艾滋病相关知识、行为及梅毒、艾滋病病毒感染等现状.方法 采用二阶段整群抽样方法抽取调查对象,使用健康问卷面对面调查并采集血样检测HIV和梅毒抗体.结果 本次研究共调查403人.部分调查对象认为能够从表面区分艾滋病感染者,与客人发生性行为时安全套使用率较高,但与固定性伴安全套使用率很低.不同档次对象的年龄、婚姻和文化程度略有不同,安全套使用率也略有差别.调查者中1d接客多20人,1周接客多25人;首次性行为年龄小12岁,首次商业性服务年龄小14岁.58.50%的调查者近1年患过性传播疾病.未发现HIV阳性者,但发现梅毒RPR初筛阳性者10人,阳性率为2.48%.结论 在干预活动时应针对不同层次人群特点,对有配偶或固定性伴者应当加大干预力度和采取不同的策略促其使用安全套,以减少HIV进一步传播.

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  • 银屑病患者外周血单个核细胞CCR5的表达及其意义

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  • 广州地区自然水域水中常见硅藻形态图谱及其分布特点

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    作者:毕启明;郭晓然;郭鹏;黄成成;曲冬阳;王迪佳;王宇鹏;杨鼎 刊期: 2011年第03期

  • 艾滋病抗病毒治疗48例死亡患者相关因素分析

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    作者:韦秋玲;韦克召;韦超;潘利永;韦幕葵 刊期: 2011年第03期

  • 重庆市消除碘缺乏病评估结果分析

    目的 评价碘缺乏病的防治效果,分析影响因素,为制定防治方案提供依据.方法 各区县随机抽取9个乡镇检查居民食用盐含碘量;抽取5所小学8~10岁儿童检查甲状腺、尿碘和五年级学生碘缺乏病防治知识;查阅组织领导、防治监测、碘盐管理和健康教育资料,进行综合评分;重庆市对区县评估结果进行复核;用X2检验作统计学分析.结果 全市40个区县检查居民食用盐14 217户,合格碘盐食用率为90.00%-99.72%,平均为95.90%,尿碘检测4 050人,中位数为247.20μg/L,300μg/L以上占37.10%,区县中位数100-200μg/L占25%(10/40),200~300 μg/L占57.5%(23/40),>300μg/L占17.5%(7/40);甲状腺检查16 852人,肿大率为3.25%一9.00%,平均为5.80%;学生防治知识平均得分3.1~5.0分,平均为4.4分;防治措施综合评分为86.00~99.00分,平均为95.00分.市级复查中检查食用盐1 250户,合格碘盐食用率为90.91%~100.00%,平均为96.88%;甲状腺检查16 852人,肿大率触诊和B超法为5.00%~8.33%,乎均分别为7.02%和6.64%;防治知识调查1 366人,得分2.5~4.9分;防治措施综合评分为88.8~99.5分.结论 重庆市有39个区县实现了消除碘缺乏病目标,1个县实现了基本消除碘缺乏病目标,市级层级实现了消除碘缺乏病目标,防治工作取得显著成效.但存在碘过量,须降低食盐加碘浓度.

    作者:肖邦忠;罗兴建;李心术;吴成果;陈亚琳;黄文利;谢君 刊期: 2011年第03期

  • 细菌耐药性机制研究进展

    20世纪中期,随着医院和社区获得性耐青霉素葡萄球菌的相继出现,细菌耐药性逐步成为一个全球性备受瞩目的问题[1,2].细菌耐药性又称抗药性.

    作者:周显凤;倪贤生;吴越 刊期: 2011年第03期

  • 三种副溶血性弧菌分子检测试剂盒的评价

    目的 综合评价国内三种副溶血性弧菌商品试剂盒的检测效果.方法 选用TIANDA公司的副溶血性弧菌PCR检测试剂盒、TAITAI GEN公司的副溶血性弧菌Real-time PCR检测试剂盒和HF公司的副溶血性弧菌LAMP检测试剂盒,以10倍稀释梯度的标准菌液确定各种试剂盒检出限;以国标法为标准,评价每种试剂盒的灵敏度、特异度和符合率;后比较三种试剂盒的耗时、成本和操作性.结果 PCR、Real-time PCR和LAMP检测试剂盒的检出限分别为1.18x103 cfu/ml、11.8 cfu/ml和11.8 cfu/ml;在74份海产品检测中,三种试剂盒的灵敏度分别为100%、100%和100%;特异度分别为56%、48%和50%;符合率分别为70%、65%和66%;三种试剂盒检测结果之间差异无统计学意义(P=0.074);耗时分别为120、80和80 rain;成本分别为:10、40和45元/次;操作性从难到易排列依次为PCR、Real-time PCR和LAMP检测试剂盒.结论 三种分子检测试剂盒的灵敏度高,特异度较低,操作简便,可推荐作为副溶血性弧菌检测的初筛方法.

    作者:黄弦;江晓玲;贺小峰;胡贵方 刊期: 2011年第03期

  • SHP-1对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭的影响及机制初步探讨

    目的 探讨SHP-1对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭能力的影响.方法 MCF-7细胞株分别瞬时转染SHP-1的特异性siRNA干扰序列:然后分别通过RT-PCR和Western-blot检测MCF-7细胞十扰前后SHP-1基因和蛋白表达变化,并通过RT-PCR检测干扰前后MMP-9基因变化;通过Transwell小室实验检测干扰SHP-1对细胞侵袭能力的影响.结果 RT-PCR和Western-blot证实SHP-1在人乳腺癌细胞株MCF-7中有表达以及SHP-1 SiRNA的干扰效率:干扰SHP-1后,MMP-9的表达量上调;Transwell小室实验证实,与MCF-7阴性干扰对照及空白对照细胞相比,siRNA组的侵袭能力显著增强(P<0.001).结论 乳腺癌MCF-7中SHP-1的表达水平高低和该细胞侵袭能力高低呈负相关,其侵袭可能和MMP-9的表达呈正相关.

    作者:黄维甄;邹爱梅;石敏;罗荣城;李荣 刊期: 2011年第03期

  • 糖尿病肾病中医药/中西医结合研究临床治疗的研究趋向分析

    目的 探讨近30年来糖尿病肾病中医药/中西医结合临床治疗中医药研究的趋向及特点,为此后的中医药/中西医结合治疗糖尿病肾病提供借鉴.方法 遵循循证医学评价文献的原则,以维普咨询中文科技期刊数据库(1989-2009)、中国期刊全文数据库(CNKI)(1979-2009)、万方数据库(1982-2009)、中国生物医学文献数据库(CBM)(1990-2009)、中文生物医学期刊数据库(CMCC/CMCI)(1994-2009)为资料源,全面检索1984-2009年间的糖尿病肾病治疗类文献,使用Epidta双录入数据,全部数据导出至SPSSl3.0,从研究现状、特点及发展走向几个方面进行计量学评价分析.结果 共检索出文献2 300篇,其中涉及临床经验或个案类文章196篇、病凶病机研究类53篇、辨证治疗类58篇、各中医治法治疗类117篇、自拟方及成方治疗类613篇、中成药和单味中药治疗类563篇、中药联合ACEI/ARB研究类700篇,不同类型文献起始、兴盛年份各不相同.结论 临床经验或个案研究、辨证治疗研究起步较早,近年来RCT研究成为热点,不过目前RCT文献质量仍需进一步提高,设计科学、方法严谨、大样本、多中心的糖尿病肾病中西医结合RCT研究为今后重要发展方向.

    作者:张乐;严美花;肖雅;谢豪杰;赵晓山;罗仁 刊期: 2011年第03期

  • 重庆市艾滋病流行形势分析与防治策略研究

    目的 了解重庆市艾滋病流行趋势与特征,为艾滋病防治工作提供建议.方法 收集1993--2009年重庆市艾滋病疫情资料与哨点监测数据,描述性分析HIV感染者年龄、性别、婚姻状况、职业、传播途径等的流行趋势,比较分析1999--2009年吸毒人群以及2006--2009年暗娼与男男性行为人群HIV感染率的变化趋势.结果 重庆市累计报告HIV感染者7775例,近5年报告的病例数都超过了1000例,2009年经异性和同性性接触传播分别占26.6%和38.5%,50岁及以上年龄组所占的比例由2001年前的1.9%上升至2009年的17.4%.哨点监测发现静脉注射吸毒人群HIV由1999年的0.4%上升至2009年的6.4%,男男性行为人群HIV感染率由2006年的10.4%上升至2009年的19.0%,暗娼人群HIV感染率维持在0.5%以下.结论 重庆市男男性行为人群、吸毒人群HIV感染率显著升高,加强针对上述人群的防控工作与HIV感染者的管理工作刻不容缓.

    作者:丁贤彬;张维;冯连贵;卢戎戎;徐静;周超;欧阳琳 刊期: 2011年第03期

  • BALB/c小鼠肥大细胞瘤/白血病模型的建立

    目的 研究建立BALB/c小鼠肥大细胞瘤/白血病模型.方法 BALB/c小鼠尾静脉注入小鼠肥大细胞瘤P815细胞,实验按每只小鼠接种细胞数量分为1×107/只组、5×106/只组、2.5×106/只组、1×106/只组、5×105/只组、1×105/只组和溶剂(RPMI 1640 培养液)对照组.观察小鼠的生存状态、体重及肝肺脾(重量、形态、病理)、染色体、血涂片、骨髓涂片、白细胞及血小板计数.结果 注入P815细胞≥1×106/只的所有组小鼠均死亡,<1×106/只的所有组生存良好,且死亡小鼠的生存时间与注入细胞数量呈负向依赖关系(P<0.05).死亡组小鼠体重较注射前相当或减轻、肝肺脾重较对照组及未死亡组显著增加(P<0.05);肝质地变硬,表面可见大量大小不一的白色结节突起,部分脾肺可见出血梗死灶,病理示肝脾有大量异形肥大细胞瘤细胞浸润;脾细胞染色体分析可见肥大细胞瘤细胞的非正常染色体核型;白细胞和血小板计数较对照组降低(P<0.01),血涂片可见少量肥大细胞瘤细胞,骨髓涂片示骨髓原始细胞比例增高.结论 P815细胞通过静脉注射能使BALB/c小鼠形成肥大细胞瘤/白血病,可作为肿瘤实验研究的一种模型构建方法.

    作者:孙茂本;王亮;邓兰;周雪云;吴少杰;张超凤;曾雅丽;吴海燕;余莉华;郭坤元 刊期: 2011年第03期

  • 2型糖尿病肾病Ⅲ期的中医用药规律分析

    目的 分析和了解中医药治疗2型糖尿病肾病Ⅲ期的用药规律.方法 选用维普咨询中文科技期刊数据库(1989-2009)、中国期刊全文数据库(CNKI)(1979-2009)、万方数据库(1982-2009)、中国生物医学文献数据库(CBM)(1990-2009)、中文生物医学期刊数据库(CMCC/CMCI)(1994-2009)为资料源,对中医药治疗2型糖尿病肾病Ⅲ期的随机对照文献的用药规律进行统计分析.结果 检索到有效文献223篇,共涉及138种中药,用药频次居于前10位的是黄芪、丹参、山茱萸、山药、生地黄、川芎、茯苓、当归、益母草、大黄.药类频次统计显示,益气药居于首位,活血、养阴、收涩、清热、利水渗湿、破血逐瘀药也占了相当大的比重.结论 2型糖尿病肾病Ⅲ期的中医用药多以益气养阴活血药为主,同时辅以清热、淡渗利湿、收涩固摄、化瘀泄浊、疏风解表等药,并结合临床常用经验方或药对,取得了良好的疗效.

    作者:肖雅;严美花;张乐;谢豪杰;赵晓山;罗仁 刊期: 2011年第03期

  • 2007-2009年深圳市外来劳务工乙肝病毒感染情况分析

    目的 分析2007-2009年深圳市乙肝五项异常的外来劳务工的乙肝DNA感染情况,为深圳市劳务工群体乙型肝炎的预防和控制提供科学依据.方法 利用实时荧光定量PCR法对2007-2009年深圳市1226名乙肝五项异常的外来劳务工进行乙肝DNA检测分析.结果 深圳市乙肝五项异常的外来劳务工的乙肝DNA总阳性率为48.94%.30岁以下乙肝五项异常的外来劳务工乙肝DNA阳性人数占乙肝DNA阳性总数的85.5%.64.73%的20岁以下乙肝五项异常的劳务工为乙肝DNA阳性.不同年龄组劳务工乙肝DNA阳性率差异具有统计学意义(P<0.001),而不同年份、不同性别以及不同省份的劳务工的乙肝DNA阳性率差异无统计学意义(P>0.05).结论 深圳市乙肝五项异常的劳务工乙肝DNA的阳性率较高,应加强对30岁以下(特别是20岁以下)乙肝五项异常的外来劳务工的乙肝DNA监测,以便对外来劳务工乙肝病毒感染者的传染性进行正确的评估,为防治方案提供依据.

    作者:姚相杰;程锦泉;张仁利;何雅青;杨洪;张海龙;阳帆;冼慧霞 刊期: 2011年第03期

  • SD大鼠胚胎上胚层干细胞的分离与培养

    目的 从SD大鼠胚胎中获取附植后胚胎上胚层干细胞(post-implantation epiblast stem cells,Episc),并探讨组织来源、胎龄、细胞因子、传代方法等条件对SD大鼠Episc(SD Episc)分离与培养的影响.方法 分别取5.5 d和7.75 d胎龄囊胚上胚层(epiblast),以昆明小鼠胚胎成纤维细胞为饲养层,于添加白血病抑制因子(leucocyte inbibitory factor,LIF)或活化素(activin)的基础培养基中,进行原代培养.分别采用机械法和胰酶消化法对克隆集落进行传代.后通过碱性磷酸酶染色对克隆集落进行鉴定分析,并对其体外分化能力进行检测.结果 培养于LIF培养基和activin 培养基中的囊胚均发生严重分化.培养于LIF的培养基中的epiblast也发生了严重的自发分化.而在activin培养基中,epiblast形成SD Episc原代集落.经机械法传代获得AKP染色阴性、能形成拟胚体的SD Episc.结论 利用细胞因子activin,结合机械传代法可从7.75 d胎龄SD大鼠胚胎中获得SD Episc.

    作者:卢安尚;张薇;邓新燕;赵勇;郭思政;郭中敏 刊期: 2011年第03期

  • 小鼠气性坏疽动物模型的建立

    目的 建立产气荚膜梭菌感染小鼠的后肢的气性坏疽动物模型,为早期诊断、了解气性坏疽的致病机理及治疗方法提供依据.方法 小鼠随机分成4组,每组10只.三个实验组分别肌肉注射3.5x109、3.5x108和3.5x107 cfu/ml浓度的产气荚膜梭菌(ATCC13124)菌液0.1 ml,空白对照组肌肉注射生理盐水0.1 ml,72 h后观察小鼠感染情况,取伤口分泌物作革兰氏染色涂片,细菌血平板厌氧培养和荧光定量PCR方法定量检测.结果 3.5x109、3.5x108、3.5x107 cfu/ml实验组和对照组在肌肉注射72 h内的死亡率为90%、70%、10%和0%.各组平均存活时间依次为(20:43±11:12)h、(37:24±25:39)h、(68:36±10:45)h和(72:00±0:00)h,死亡小鼠出现了气性坏疽的症状,分泌物培养和镜检出产气荚膜梭菌;未死亡小鼠康复;空白对照组无任何症状.各组Ct值均值为21.21±2.69、28.45±2.74、32.49±2.87和0.00±0.00,组间P值均<0.05.结论 成功建立了不同浓度的产气荚膜梭菌在不同时间段内感染小鼠的后肢气性坏疽的动物模型,为了解气性坏疽的致病机理及治疗方法奠定基础.

    作者:石玉玲;徐少珊;孙朝晖;陈丽丹;刘坚 刊期: 2011年第03期

  • 2010年广州市甲型H1N1流感病毒分离株HA基因变异分析

    目的 比较2010年广州市分离到的甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因和2009年中国大陆甲型H1N1流感病毒HA基因的变异情况,为甲型H1N1流感的监测和防控提供理论依据.方法 收集2010年广州市有发热和呼吸道症状病人的咽拭子标本,用H1N1流感特异性引物进行PCR检测,扩增分离到的H1N1病毒HA片段,测序后与2009年的H1N1毒株进行比对和分析,并用生物信息学方法对抗原位点和糖基化位点进行分析.结果 共收集到426份标本,甲型流感阳性211份,其中H1N1流感4株,与2009年分离的甲型H1N1流感相比,有12个氨基酸碱基位点发生了有意义突变,其中6个位点位于抗原位点上;4株毒株HA基因145位氨基酸都发生了变异;其中2株毒株在第180位氨基酸位点的抗原位点发生了变异.进化分析表明4株毒株与2009年中国大陆分离的8株毒株进化关系较远.结论 2010年广州市甲型H1N1毒株与2009年相比发生了较大变异.HA基因145位和180位氨基酸位点变异对H1N1毒株抗原变异有重要意义.本文分离的A/Guangdons/ZS03/2010(H1N1)和A/Guangdong/ZS01/2010(H1N1)毒株可能已经发生了抗原性漂移.

    作者:许沙沙;常彦敏;徐霖;冯发深;何霞;王铸;张定梅;黎孟枫;曹开源 刊期: 2011年第03期

  • 中药与西药对照治疗偏头痛的Meta分析

    目的 评价中药治疗偏头痛的临床疗效和安全性.方法 计算机检索中国期刊全文数据库、维普中文期刊数据库、万方学术期刊全文数据库、中国生物医学文献服务系统(CBM)、中国生物医学期刊引文数据库(CMCI/CMCC整合版)、中医药在线数据库,检索2000年1月一2009年12月10年间的相关文献,收集中药治疗偏头痛的随机对照试验(RCTs).按纳入排除标准筛选试验、评价研究质量、提取有效数据,并采用RevMan 5.0进行统计分析.结果 终纳入20个RCT评价中药与西药在偏头痛疗效方面的差异,Meta分析显示:有效率[RR=1.22,95%CI(1.15,1.29),P<0.01],差异有统计学意义.敏感性分析表明评价结果稳定.漏斗图显示不对称,提示纳入评价的文献存在发表性偏倚.结论 中药治疗偏头痛有效,但由于本系统评价纳入研究的方法学质量较低,尚需开展更多设计合理、执行严格的多中心大样本且随访时间足够长的随机对照试验验证其疗效及安全性.

    作者:谢炜;史国军;于林;鲍勇;杜念念;于云红 刊期: 2011年第03期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会