学术投稿

RNA干扰GPC3基因表达影响肝癌细胞Huh-7凋亡的机制研究

郑大勇;阮健;刘斐烨;何本夫;黄娜;罗西;秦如斋;罗荣城

关键词:肝癌, RNA干扰, 细胞凋亡, GPC3, Caspase-3
摘要:目的 观察RNA干扰GPC3基因表达对人肝癌细胞Huh-7凋亡的影响,并探讨其初步机制.方法 设计并合成靶向GPC3的特异性siRNA片段,通过脂质体转染法瞬时转染肝癌细胞Huh-7,48 h后验证siRNA的干扰效率;Annexin V/PI染色法观察GPC3基因沉默对细胞凋亡的影响:通过Western blot和定量PCR来检测caspase3的蛋白水平和核酸水平表达.结果 设计合成的GPC3 siRNA转染后,能够有效抑制Huh-7细胞中GPC3的表达;流式细胞仪检测结果显示,GPC3干扰组细胞在转染后48、72 h的凋亡率显著高于空白对照组(P<0.01),96 h后两组凋亡率差异无统计学意义(P>0.05).GPC3干扰组的caspase3在转染后48、72 h的表达高于未转染组,96 h后两组间caspase3水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 siRNA静默GPC3基因能促进肝癌细胞凋亡,其机理可能与上调caspase3有关.进而推测,GPC3基因可能成为肝癌靶向治疗的一个新靶点.
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    作者:刘晓宇;刘瑞涛;赖仞;夏立新;刘志刚;李荔 刊期: 2011年第05期

  • 单根毛囊改良分离法在疤痕性秃发毛囊移植中的临床研究

    目的 采用改良的单根毛囊分离法得到单根完整毛囊,用于毛发移植治疗头部及眉部的疤痕性秃发,探讨该法应用于疤痕植发的技术要点和临床效果,为毛发移植治疗提供一定的临床数据.方法 头部和眉部疤痕性秃发17例患者,使用改良法获得单根毛囊并植入疤痕秃发区域.统计供区所得完整单根毛囊数和受区毛囊成活数,并在术中取所得毛囊进行组织学检查.结果 17例患者随访3~12个月,生长外观自然,原有疤痕基本遮盖.供区毛囊提取率为54.87%~86.01%,受区毛囊成活率为70.27%~96.36%,组织学检查显示毛囊生发结构完整.结论 改良分离法获取的单根完整毛囊具生长活性,植入后天获得性的疤痕秃发区域内后生长良好,可改善疤痕区外观.

    作者:黄胜华;胡志奇;颜玲;郭栋;罗艳香;石颖 刊期: 2011年第05期

  • 汉坦病毒感染C57BL/6小鼠组织中特异性抗原的检测

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    作者:程林峰;白露;李凯;李璞媛;胡刚;于澜;吴兴安;徐志凯;张芳琳 刊期: 2011年第05期

  • 慢病毒载体介导的RNAi技术构建稳定抑制β-catenin的人鼻咽癌细胞株

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    作者:姜睿;张弓;马磊;李锡清;姚开泰 刊期: 2011年第05期

  • PI3K p85α在大肠癌侵袭转移过程中的表达及意义

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    作者:王彦云;宋于刚 刊期: 2011年第05期

  • 约翰霍普金斯大学Welch医学图书馆资源建设研究

    数字环境下,信息的载体形式得到了极大的丰富,信息量越来越大,用户希望能够快速、直接、有效的获取信息,这都促使图书馆必须调整资源建设的策略,逐渐适应内外部环境的变化,由单一的物理馆藏转变为物理馆藏与电子馆藏并进.本文以美国约翰霍普斯金大学Welch医学图书馆为例,研究其21世纪以来资源建设的概况、资源建设策略、资源建设实践等,为我国医学图书馆资源建设研究提供参考.

    作者:刘妮波;阮学平;任慧玲;孙灵芝 刊期: 2011年第05期

  • 长期能量限制对成年雌性大鼠生殖寿命的影响

    目的 探讨长期能量限制对成年雌性大鼠生殖寿命的影响.方法 6月龄雌性SD大鼠30只,分为正常饮食组、能量限制(CR)20%组和CR40%组,记录正常饮食(NC)组每日摄食量,并将此摄食量的80%和60%分别喂养CR20%组和CR40%组大鼠,监测大鼠体重及动情周期变化,12个月后取大鼠卵巢.卵巢组织切片由苏木精-伊红染色,观察卵泡储备数量和不同发育阶段的卵泡比例.结果 NC组体重持续上升,而CR20%组体重小幅增加,CR40%组体重持续下降.CR40%组大鼠的卵泡储备数量(105.7±9.5)和原始卵泡数(55.0±6.8)与NC组(51.2±5.4,18.3±3.7)相比差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.001),原始卵泡比例(52.1%±2.9%)与对照组(35.8%±5.5%)相比差异有统计学意义(P<0.001),而成熟卵泡比例(6.8%±1.9%)和发育卵泡比例(41.2%±3.0%)与NC组(15.6%±6.2%,48.9%±4.2%)相比差异亦有统计学意义(P<0.001,P<0.05).CR20%组卵泡储备数量和不同发育阶段的卵泡比例与NC组相比差异无统计学意义.结论 长期能量限制可能通过抑制卵泡发育启动、减少发育卵泡和成熟卵泡的数量,从而减少卵泡的消耗,有益于生殖寿命延长.

    作者:林旋豪;罗丽莉;许锦阶;陈晓纯;栗丽;陈振国;傅玉才 刊期: 2011年第05期

  • 判别函数在法医学溺死诊断中的应用

    目的 探讨判别函数在法医学溺死诊断中的价值.方法 运用环境扫描电镜、能谱分析仪及图像分析软件观测生前入水溺死、死后抛尸入水尸体,根据异物颗粒面积、大直径、整体密度等参数建立与溺死、死后入水判别函数.结果 异物颗粒的大直径和整体密度有助于判别函数鉴别溺水及死后抛尸入水,交叉验证判别函数符合率为89.0%.与传统方法相比,该法在保证实验结果可靠性的同时具有简便、快捷、客观等优势.结论 判别方程对法医学实践鉴别溺水、死后入水具有积极的提示及勘验指导价值.

    作者:许心舒;王晓亮;蒋拥军;王慧君 刊期: 2011年第05期

  • RNA干扰GPC3基因表达影响肝癌细胞Huh-7凋亡的机制研究

    目的 观察RNA干扰GPC3基因表达对人肝癌细胞Huh-7凋亡的影响,并探讨其初步机制.方法 设计并合成靶向GPC3的特异性siRNA片段,通过脂质体转染法瞬时转染肝癌细胞Huh-7,48 h后验证siRNA的干扰效率;Annexin V/PI染色法观察GPC3基因沉默对细胞凋亡的影响:通过Western blot和定量PCR来检测caspase3的蛋白水平和核酸水平表达.结果 设计合成的GPC3 siRNA转染后,能够有效抑制Huh-7细胞中GPC3的表达;流式细胞仪检测结果显示,GPC3干扰组细胞在转染后48、72 h的凋亡率显著高于空白对照组(P<0.01),96 h后两组凋亡率差异无统计学意义(P>0.05).GPC3干扰组的caspase3在转染后48、72 h的表达高于未转染组,96 h后两组间caspase3水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 siRNA静默GPC3基因能促进肝癌细胞凋亡,其机理可能与上调caspase3有关.进而推测,GPC3基因可能成为肝癌靶向治疗的一个新靶点.

    作者:郑大勇;阮健;刘斐烨;何本夫;黄娜;罗西;秦如斋;罗荣城 刊期: 2011年第05期

  • 血清SCCA、CYFRA21-1、TPS在宫颈鳞癌的表达及对化疗疗效评价的意义

    目的 检测血清鳞状细胞癌抗原(SCCA)、细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、组织多肽特异性抗原(TPS)在宫颈鳞癌的表达,分析其在化疗疗效评价中的意义.方法 宫颈鳞癌患者31例,健康对照组30例,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清SCCA、CYFRA21-1、TPS水平,并比较3项指标在两组人员中的差异及在宫颈癌患者组中化疗前后的变化.结果 ①宫颈癌组血清SCCA、CYFRA21-1、TPS水平明显高于健康对照组(P<0.01).宫颈鳞癌患者中,血清SCCA、CYFRA21-1、TPS诊断敏感性分别为70.00%、48.00%、86.21%,特异性均为100%.TPS诊断敏感性明显高于SCCA、CYFRA21-1(P<0.05).SCCA和TPS联合及三者联合诊断敏感性提高,分别为96.43%、95.83%.②SCCA在不同临床分期表达差异均无统计学意义(P>0.05),在中或高分化组表达明显高于低分化组(P<0.05),与有无淋巴结转移无关(P>0.05).CYFRA21-1、TPS在Ⅲ+Ⅳ期表达明显高于Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05),与肿瘤分化程度无关(P>0.05).对有无淋巴结转移,CYFRA21-1的表达差异无统计学意义(P>0.05),而TPS表达差异有统计学意义(P<0.05).③化疗有效(CR+PR)的患者中,化疗后血清SCCA、TPS较化疗前明显下降(P<0.05),CYFRA21-1化疗后下降,但差异无统计学意义(P>0.05).化疗后病情稳定(SD)或进展(PD)的患者中,化疗前后血清SCCA、CYFRA21-1、TPS水平均无明显差异(P>0.05).结论 SCCA、CYFRA21-1、TPS检测对宫颈鳞癌的诊断具有一定意义,SCCA、TPS水平变化在化疗疗效评估方面具有一定指导作用.

    作者:杨叶青;梁卫江;罗荣城;陈晓华;阮健 刊期: 2011年第05期

  • 苏木素复染对免疫组化显色强度定量分析的影响

    目的 探讨苏木素复染是否影响免疫组化显色反应强度,为免疫组化定量分析的质量控制提供科学依据.方法 用免疫组织化学方法检测GLC-82肺腺癌细胞株细胞蜡块中Ki67、Tiam1的表达,检测分为复染组和非复染组;在Nikon显微镜下通过Canon数码像机和Zoom Browser Ex采图软件随机截取样品显色反应细胞图像,用Imagepro Plus图像分析软件,分别测试苏木素复染与不复染时GLC-82细胞Tiam1、Ki67蛋白表达的阳性单位(PU值),每组各测试100个细胞.结果 苏木素复染后GLC-82细胞Tiam1的PU值为(36.76±5.12).大于未复染Tiam1的PU值(26.64±5.09,t=9.906,P=0.000),相对偏差为38%.苏木素复染后GLC-82细胞Ki67的PU值为(21.74±4.59),大于未复染Ki67的PU值(14.37±4.65,t=7.985,P=0.000),相对偏差为51%.结论 经苏木素复染,Tiam1、Ki67的PU值均明显增大,且核表达抗原Ki67的相对偏差明显大于浆表达抗原Tiam1的相对偏差.因此,对免疫组化结果定量分析时,为保证测试结果的可靠性,不应进行苏木素复染.

    作者:李玉梅;万里燕;申洪 刊期: 2011年第05期

  • 两种PCR方法检测狂犬病毒的敏感性和特异性比较

    目的 比较Nested-PCR和SYBR Green Ⅰ Real-Time PCR两种方法检测狂犬病毒的敏感性、特异性和时效性.方法 对10倍连续稀释的狂犬病毒(疫苗株)核酸样品,采用Nested-PCR和SYBR Green Ⅰ Real-Time PCR方法进行平行检测,比较两种方法的敏感性:同时以登革热2型病毒、诺如病毒、星状病毒、EV71和乙型脑炎病毒核酸对两种方法的特异性进行评价.结果 SYBR Green Ⅰ Real-Time PCR方法可检测出2.3×106 copies/μl核酸分子,与NestedPCR方法相比,敏感度提高10倍.两种检测方法的特异性均好,与登革热2型病毒、诺如病毒、星状病毒、EV71和乙型脑炎病毒核酸均无交叉反应.SYBR Green Ⅰ Real-Time PCR方法检测花费3 h,检测时间比Nested-PCR方法节省2 h.结论 与Nested-PCR相比,SYBR Green Ⅰ Real-Time PCR是相对高效的检测狂犬病毒的方法.

    作者:马莉珍;柯雪梅;肖建鹏;陈清 刊期: 2011年第05期

  • 佛波酯对人外周血DNT细胞表面抗原检测的影响及检测方法的探讨

    目的 探讨佛波酯(PMA)对人外周血淋巴细胞中TCRαβ+CD4-CD8-T细胞(DNT细胞)表面抗原检测的影响及检测方法的探讨.方法 分离人外周血单个核细胞,分别在激活前后对细胞进行TCRαβ、CD4和CD8荧光单抗标记,流式细胞术计数DNT细胞.结果 A方法(先激活,再标记),淋巴细胞表面抗原CD4分子显著下调,DNT细胞与TCRαβ+CD4+CD8+T细胞、TCRαβ-CD4-CD8-T细胞和TCRαβ-CD4+CD8+F细胞间无法设门,与正常对照比较,DNT细胞计数显著增加;B方法(先标记,再激活),DNT细胞与其他细胞群设门清晰,与正常对照比较,对DNT细胞计数无明显影响;C方法(先标记,再联合激活),DNT细胞检测结果与B方法相同.结论 采用A方法(常规方法),不能对活化后的DNT细胞进行准确计数;采用B和C方法(改进方法),可以对活化后的DNT细胞进行准确计数,避免了磁珠或(和)流式分选,为其计数和表面抗原检测提供了一种新的简便方法.

    作者:汪海霞;裘宇容;吴晓娟 刊期: 2011年第05期

  • 深圳市福田区1985-2009年病毒性肝炎流行特征分析

    目的 分析深圳市福田区1985-2009年病毒性肝炎流行特征.方法 对福田区1985-2009年法定传染病报告的病毒性肝炎疫情资料进行统计分析.结果 深圳市福田区1985-2009年病毒性肝炎的发病率为47.50/10万,发病率从1985年的57.3/10万上升至1990年高225.16/10万,然后逐年下降,2009年下降至低4.15/10万:常住人口病毒性肝炎的发病率基本高于暂住人口的发病率;每年春季病毒性肝炎发病人数明显较其他季节多,而冬季发病人数少;发病人群男女比例为2.12∶1;发病人群的职业以职员和工人为主,两者发病人数占总发病人数64.15%.结论 深圳市福田区1985-2009年病毒性肝炎的防治工作取得了显著效果,但发病率仍处于较高水平.

    作者:钟剑明;李学云;方良;范苏云;黄慧萍;韦思丹 刊期: 2011年第05期

  • Wistar大鼠带形囊尾蚴的鉴定和重度感染的病理分析

    目的 鉴定动物实验中Wistar大鼠所感染寄生虫的种属和分析其感染特征.方法 解剖检查正常条件下饲养的大鼠肝脏表面的囊泡,取囊中的虫体头节以10%甲醛及KOH溶液处理后光学显微镜下进行寄生虫的形态学鉴定;并对所感染部位的肝组织进行病理学检查.结果 大鼠生长状况良好,无明显异常体征,寄生的虫体鉴定为带形囊尾蚴;本次所解剖检查的Wistar大鼠对该虫的感染率高达85.7%,感染部位均为肝脏,感染虫体数目为5~120个不等,可见带形囊尾蚴早期和成熟期两种形态;肝脏病理虫体周围有嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润,未被虫体占位的肝小叶结构正常,未见肝脏纤维瘤样变.结论 Wistar大鼠在饲养中易反复感染带形囊尾蚴,并能耐受重度感染,作为动物模型,一方面应严防该虫的感染对实验结果的干扰,另一方面可作为一个很好的免疫应答的干预模型应用于其他疾病的研究.

    作者:张晓辉;黄怀球;钟毅;冯佩英;张静;薛汝增;李关荣;陈荣章;赵静 刊期: 2011年第05期

  • 561例血液病患者染色体核型分析

    目的 探讨血液病患者有关核型改变及其意义.方法 抽取骨髓标本2~5 ml,采用骨髓细胞直接法、24 h短期培养法制备染色体标本,用G显带技术进行核型分析.结果 561例血液病患者中,常规细胞遗传学发现异常核型282例(50.3%),其中结构异常116例(20.7%),数目异常84例(15.0%),同时有结构异常和数目异常82例(14.6%).不同类型血液病患者染色体检测结果不同,在急性髓系白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性粒细胞白血病(CML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、再生障碍性贫血(AA)、骨髓增殖性疾病(MPD)、淋巴瘤、血小板减少症中异常核型分别为56.5%(109/193)、44.9%(57/127)、74.7%(62/83)、56.7%(34/60)、3.7%(1/27)、0%(0/15)、72.7%(8/11)、0%(0/5),在急性混合细胞白血病、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、多发性骨髓瘤(MM)、慢性粒单细胞白血病(CMML)、淋巴瘤白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、纯红再障、恶性组织细胞病等较少患者中,异常核型分别为25.0%(2/8)、0%(0/8)、20%(1/5)、0%(0/5)、100%(4/4)、40%(2/5)、0%(0/3)、100%(2/2).M2伴t(8;21),M3伴t(15;17),M4伴inv(16)、t(16;16),ALL伴t(9;22)CR率分别为88.2%、94.7%、80%、45.5%.结论 染色体核型分析在恶性血液病诊断、分型、预后判断和指导治疗中具有重要意义.

    作者:吴海燕;吴秉毅;李洁;刘鲲;李玉华;郭坤元;宋朝阳 刊期: 2011年第05期

  • 碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人羊膜间充质干细胞增殖的影响

    目的 观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)增殖的影响.以探索体外培养HAMSCs的适条件.方法 分离、培养HAMSCs,选取第3代细胞进行鉴定及检测.实验组将bFGF分为0.1、0.5、1、5、10、20、40、80 ng/ml 共8个浓度组;阴性对照组只加HAMSCs,不加bFGF;空白对照组只加培养基.各组孵育48 h后加入Am-Blue试剂,继续孵育,待培养基由靛青蓝色开始变成粉红色时取出用酶标仪测量各组的吸光度(OD),重复3次实验.结果 0.5、1、5、10、20、40、80 ng/ml浓度组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);10 ng/ml组与0.5、1、5 ng/ml组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);10 ng/ml组与40、80 ng/ml组相比,差异无统计学意义(e=0.067),表明bFGF促增殖作用强的小浓度为10 ng/ml.结论 bFGF能够促进HAMSCs增殖,且促增殖作用强的小浓度为10 ng/ml.

    作者:高松哲;陈剑;王彦平;肖盼;宋子宣;阮余霞;杨筱曦;吴静;唐光霞 刊期: 2011年第05期

  • 联合PCR技术克隆白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶基因及其生物信息学分析

    目的 测定白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶的基因的全长序列并用生物信息学方法分析其结构和功能.方法 从白纹伊蚊卵、幼虫、蛹、雌蚊、雄蚊中提取总RNA,逆转录后以总cDNA为模板,设计简并引物进行巢式PCR,扩增部分序列后设计新的特异性引物补全5'端序列,使用3'-RACE法补全3'端序列,拼接全长后进一步进行生物信息学分析.结果 通过巢式PCR扩增出1 145 bp的核苷酸序列,测序后设计5'端序列的下游引物,扩增出约900 bp的核苷酸序列,设计3'端的上游引物,配合3'RACE试剂盒扩增出约600 bp的核苷酸序列,寻找重复序列将三段序列进行拼接,得到国内外从未获得的长2 244 bp、编码747个氨基酸序列的白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶基因的全长序列.生物信息学分析其与白纹伊蚊的相似性高,为含信号肽的跨膜蛋白,含3个Cu氧化酶超家族位点,属于蓝色多铜氧化酶家族.结论 联合PCR技术的应用使较长长度的基因序列的扩增更为方便、准确.为进一步对其进行功能的研究奠定了基础.

    作者:刘静;吴瑜;詹希美;冯崑尧;甘明;张美春;郑小英;李卓雅;何蔼 刊期: 2011年第05期

  • 乙肝相关慢加急性肝衰竭患者Th17细胞水平及其临床意义

    目的 探讨乙肝相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)外周血Th17细胞的表达及其与临床转归的关系.方法 采用流式细胞术分析外周血中Th17细胞比例,flowcytomix技术检测血清中IL-17的水平,荧光PCR检测HBV-DNA载量,ELISA检测HBeAg的状态,分析Th17细胞及IL-17的表达与HBV病毒及预后的关系.结果 与健康对照组及慢乙肝组相比,HBV-ACLF患者Th17细胞及IL-17水平明显升高(P<0.01),且Th17细胞与IL-17水平成正相关;进一步分析发现不同病毒复制水平及HBeAg状态的HBV-ACLF患者Th17细胞及IL-17的差异无统计学意义;与预后好转患者相比,预后不佳HBV-ACLF患者Th17细胞及IL-17水平明显增高(P<0.05),且IL-17的水平与终末期肝病评分成正相关.结论 Th17细胞可能参与了HBV-ACLF的发病机制,且IL-17的表达越高可能提示患者的预后不佳.

    作者:张耿林;谢冬英;林炳亮;彭亮;谢婵;张绍全;张宇锋;赖箐;朱建芸;张英;黄仰甦;胡朝霞;高志良 刊期: 2011年第05期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会