吴海燕；吴秉毅；李洁；刘鲲；李玉华；郭坤元；宋朝阳
目的 测定白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶的基因的全长序列并用生物信息学方法分析其结构和功能.方法 从白纹伊蚊卵、幼虫、蛹、雌蚊、雄蚊中提取总RNA,逆转录后以总cDNA为模板,设计简并引物进行巢式PCR,扩增部分序列后设计新的特异性引物补全5'端序列,使用3'-RACE法补全3'端序列,拼接全长后进一步进行生物信息学分析.结果 通过巢式PCR扩增出1 145 bp的核苷酸序列,测序后设计5'端序列的下游引物,扩增出约900 bp的核苷酸序列,设计3'端的上游引物,配合3'RACE试剂盒扩增出约600 bp的核苷酸序列,寻找重复序列将三段序列进行拼接,得到国内外从未获得的长2 244 bp、编码747个氨基酸序列的白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶基因的全长序列.生物信息学分析其与白纹伊蚊的相似性高,为含信号肽的跨膜蛋白,含3个Cu氧化酶超家族位点,属于蓝色多铜氧化酶家族.结论 联合PCR技术的应用使较长长度的基因序列的扩增更为方便、准确.为进一步对其进行功能的研究奠定了基础.
作者：刘静；吴瑜；詹希美；冯崑尧；甘明；张美春；郑小英；李卓雅；何蔼 刊期： 2011年第05期
目的 利用生物信息学方法分析华支睾吸虫LAP2全长基因的结构和功能,并将该基因克隆至原核表达载体进行表达、纯化、为进一步研究LAP2功能奠定基础.方法 利用生物信息学相关软件,分析华支睾吸虫LAP2基因及其蛋白的结构、生物学和免疫学功能特征.针对LAP2的EST序列的编码区设计引物,从华支睾吸虫囊蚴cDNA质粒中扩增目的基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,经PCR、双酶切及DNA测序鉴定的阳性克隆诱导目的蛋白表达、亲和层析纯化、免疫印迹鉴定及组化定位.结果 华支睾吸虫LAP2基因全长为1 761 bp,其编码序列长度为1 662 bp,编码553个氨基酸,理论分子量是59 696.5 Da,与人的该基因氨基酸序列相似性为26.7%,一致性仅为15.4%.该基因在大肠杆菌中可被高效表达,纯化的重组蛋白能被感染华支睾吸虫的大鼠血清识别,免疫组化结果表明该重组蛋白定位于华支睾吸虫成虫的肠支及表膜.结论 华支睾吸虫LAP2在大肠杆菌中呈高效的可溶性表达,具有良好的抗原活性,可能为华支睾吸虫成虫分泌排泄抗原的组份之一.
作者：邓传欢；余新炳；王乐旬；黄灿；黄艳；李文芳；李然；徐劲 刊期： 2011年第05期
目的 观察血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)的AT-1型受体阻断剂氯沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)血清Ang Ⅱ及炎症因子水平的影响.方法 应用ELISA试剂盒检测SHR(n=12)和血压正常大鼠(WKY)(n=6)血清中AngⅡ的水平及炎症因子IL-1β、IL-6和高敏C反应蛋白(hsCRP)的浓度.结果 SHR血清中AngⅡ、IL-1β、IL-6及hsCRP水平明显升高,与WKY的相应指标比较差异均具有统计学意义(P值均<0.05).氯沙坦在降低SHR血压的同时可以明显地降低其血清中AngⅡ、IL-1β、IL-6及hsCRP的水平,与用药前的相应指标比较差异均具有统计学意义(P值均<0.05).结论 氯沙坦可以降低SHR血清的Ang Ⅱ及炎症因子IL-1β、IL-6和hsCRP的水平,这可能是氯沙坦的降压机制之一.
作者：周怀能；李秀娟；廖新学；唐利龙 刊期： 2011年第05期
目的 探讨X射线对人Burkkit淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖及凋亡的影响.方法 用不同剂量X射线照射细胞,并在不同时间段用倒置显微镜观察照射后细胞的形态变化及生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期,并观察X射线对克隆形成的影响.结果 16 Gy照射后48 h对Raji细胞的抑制率(92.67±1.20)%显著;8 Gy照射后48 h早期凋亡率(42.04±3.62)%高;8 Gy照射后24 h细胞周期G2/M期细胞(57.86±3.31)%,明显大于正常对照组(14.54±2.32)%;8 Gy照射后第7天无克隆形成,第14天克隆数为(5.33±2.40),明显小于正常对照组第7天(116.67±20.28)和第14天(263.33±20.27).结论 X射线可抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡,照射后细胞周期阻滞在G2/M期,X射线8 Gy照射后不能完全抑制Raji细胞的增殖.
作者：曾雅丽；郭坤元；余莉华；李玉华；宋朝阳；胡亮衫 刊期： 2011年第05期
目的 比较Nested-PCR和SYBR Green Ⅰ Real-Time PCR两种方法检测狂犬病毒的敏感性、特异性和时效性.方法 对10倍连续稀释的狂犬病毒(疫苗株)核酸样品,采用Nested-PCR和SYBR Green Ⅰ Real-Time PCR方法进行平行检测,比较两种方法的敏感性:同时以登革热2型病毒、诺如病毒、星状病毒、EV71和乙型脑炎病毒核酸对两种方法的特异性进行评价.结果 SYBR Green Ⅰ Real-Time PCR方法可检测出2.3×106 copies/μl核酸分子,与NestedPCR方法相比,敏感度提高10倍.两种检测方法的特异性均好,与登革热2型病毒、诺如病毒、星状病毒、EV71和乙型脑炎病毒核酸均无交叉反应.SYBR Green Ⅰ Real-Time PCR方法检测花费3 h,检测时间比Nested-PCR方法节省2 h.结论 与Nested-PCR相比,SYBR Green Ⅰ Real-Time PCR是相对高效的检测狂犬病毒的方法.
作者：马莉珍；柯雪梅；肖建鹏；陈清 刊期： 2011年第05期
目的 探讨苏木素复染是否影响免疫组化显色反应强度,为免疫组化定量分析的质量控制提供科学依据.方法 用免疫组织化学方法检测GLC-82肺腺癌细胞株细胞蜡块中Ki67、Tiam1的表达,检测分为复染组和非复染组;在Nikon显微镜下通过Canon数码像机和Zoom Browser Ex采图软件随机截取样品显色反应细胞图像,用Imagepro Plus图像分析软件,分别测试苏木素复染与不复染时GLC-82细胞Tiam1、Ki67蛋白表达的阳性单位(PU值),每组各测试100个细胞.结果 苏木素复染后GLC-82细胞Tiam1的PU值为(36.76±5.12).大于未复染Tiam1的PU值(26.64±5.09,t=9.906,P=0.000),相对偏差为38%.苏木素复染后GLC-82细胞Ki67的PU值为(21.74±4.59),大于未复染Ki67的PU值(14.37±4.65,t=7.985,P=0.000),相对偏差为51%.结论 经苏木素复染,Tiam1、Ki67的PU值均明显增大,且核表达抗原Ki67的相对偏差明显大于浆表达抗原Tiam1的相对偏差.因此,对免疫组化结果定量分析时,为保证测试结果的可靠性,不应进行苏木素复染.
作者：李玉梅；万里燕；申洪 刊期： 2011年第05期
目的 研究PI3K p85α在大肠癌侵袭和转移过程中的表达及意义.方法 用免疫组织化学二步法检测试剂盒检测123例大肠病变组织标本中PI3K p85α的表达情况,用等级相关的秩和检验分析PI3K p85α在大肠病变组织中表达的意义及其与临床病理特征间的关系;培养已成功沉默PI3K p85α表达的大肠癌Lovo细胞(PI3K p85α/RNAi-Lovo)及Lovo对照组细胞,肿瘤细胞侵袭实验(transwell)和划痕愈合实验观察PI3K p85α对lovo细胞的侵袭和转移能力的影响,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达.结果 PI3K p85α蛋白在大肠癌癌变过程中表达阳性率呈递增趋势,差异有统计学意义(P<0.05).PI3K p85α/RNAi-Lovo细胞组侵袭和转移能力明显低于对照组;MMP-2表达量及活性显著降低.结论 PI3K p85α蛋白可能在大肠癌的侵袭和转移中起重要作用,沉默PI3K p85α基因可以显著抑制其侵袭、转移和基质金属蛋白酶的分泌及活性,因而PI3K p85α影响lovo细胞的侵袭和转移可能与调控基质金属蛋白酶分泌密切相关.
作者：王彦云；宋于刚 刊期： 2011年第05期
目的 分析深圳市福田区1985-2009年病毒性肝炎流行特征.方法 对福田区1985-2009年法定传染病报告的病毒性肝炎疫情资料进行统计分析.结果 深圳市福田区1985-2009年病毒性肝炎的发病率为47.50/10万,发病率从1985年的57.3/10万上升至1990年高225.16/10万,然后逐年下降,2009年下降至低4.15/10万:常住人口病毒性肝炎的发病率基本高于暂住人口的发病率;每年春季病毒性肝炎发病人数明显较其他季节多,而冬季发病人数少;发病人群男女比例为2.12∶1;发病人群的职业以职员和工人为主,两者发病人数占总发病人数64.15%.结论 深圳市福田区1985-2009年病毒性肝炎的防治工作取得了显著效果,但发病率仍处于较高水平.
作者：钟剑明；李学云；方良；范苏云；黄慧萍；韦思丹 刊期： 2011年第05期
目的 鉴定动物实验中Wistar大鼠所感染寄生虫的种属和分析其感染特征.方法 解剖检查正常条件下饲养的大鼠肝脏表面的囊泡,取囊中的虫体头节以10%甲醛及KOH溶液处理后光学显微镜下进行寄生虫的形态学鉴定;并对所感染部位的肝组织进行病理学检查.结果 大鼠生长状况良好,无明显异常体征,寄生的虫体鉴定为带形囊尾蚴;本次所解剖检查的Wistar大鼠对该虫的感染率高达85.7%,感染部位均为肝脏,感染虫体数目为5～120个不等,可见带形囊尾蚴早期和成熟期两种形态;肝脏病理虫体周围有嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润,未被虫体占位的肝小叶结构正常,未见肝脏纤维瘤样变.结论 Wistar大鼠在饲养中易反复感染带形囊尾蚴,并能耐受重度感染,作为动物模型,一方面应严防该虫的感染对实验结果的干扰,另一方面可作为一个很好的免疫应答的干预模型应用于其他疾病的研究.
作者：张晓辉；黄怀球；钟毅；冯佩英；张静；薛汝增；李关荣；陈荣章；赵静 刊期： 2011年第05期
目的 观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养人羊膜间充质干细胞(HAMSCs)增殖的影响.以探索体外培养HAMSCs的适条件.方法 分离、培养HAMSCs,选取第3代细胞进行鉴定及检测.实验组将bFGF分为0.1、0.5、1、5、10、20、40、80 ng/ml 共8个浓度组;阴性对照组只加HAMSCs,不加bFGF;空白对照组只加培养基.各组孵育48 h后加入Am-Blue试剂,继续孵育,待培养基由靛青蓝色开始变成粉红色时取出用酶标仪测量各组的吸光度(OD),重复3次实验.结果 0.5、1、5、10、20、40、80 ng/ml浓度组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);10 ng/ml组与0.5、1、5 ng/ml组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);10 ng/ml组与40、80 ng/ml组相比,差异无统计学意义(e=0.067),表明bFGF促增殖作用强的小浓度为10 ng/ml.结论 bFGF能够促进HAMSCs增殖,且促增殖作用强的小浓度为10 ng/ml.
作者：高松哲；陈剑；王彦平；肖盼；宋子宣；阮余霞；杨筱曦；吴静；唐光霞 刊期： 2011年第05期
目的 采用改良的单根毛囊分离法得到单根完整毛囊,用于毛发移植治疗头部及眉部的疤痕性秃发,探讨该法应用于疤痕植发的技术要点和临床效果,为毛发移植治疗提供一定的临床数据.方法 头部和眉部疤痕性秃发17例患者,使用改良法获得单根毛囊并植入疤痕秃发区域.统计供区所得完整单根毛囊数和受区毛囊成活数,并在术中取所得毛囊进行组织学检查.结果 17例患者随访3～12个月,生长外观自然,原有疤痕基本遮盖.供区毛囊提取率为54.87%～86.01%,受区毛囊成活率为70.27%～96.36%,组织学检查显示毛囊生发结构完整.结论 改良分离法获取的单根完整毛囊具生长活性,植入后天获得性的疤痕秃发区域内后生长良好,可改善疤痕区外观.
作者：黄胜华；胡志奇；颜玲；郭栋；罗艳香；石颖 刊期： 2011年第05期
目的 构建新型甲胎蛋白安培免疫传感器.方法 首先在玻碳电极(GCE)表面修饰一层羧基化碳纳米管(CNTs).然后利用带负电荷的DNA分子和带正电荷的硫堇之间的静电作用,层层自组装修饰硫堇以增强检测信号,然后利用硫堇的氨基固定纳米金,以便固定抗体,后利用牛血清白蛋白封闭未结合位点.结果 修饰的碳纳米管能够显著地提高电极的导电性,利用层层组装技术修饰了5层硫堇.在优化的条件下(pH 7.0,温浴时间25 min),制作的甲胎蛋白免疫传感器线性范围在0.5～25 ng/ml内,检测限0.02 ng/ml.结论 成功利用层层自组装技术构建新型基于碳纳米管修饰的无酶型甲胎蛋白安培免疫传感器,该传感器灵敏度高,特异性好,有望成为原发性肝癌早期诊断的新方法.
作者：贾立永；郑磊；干宁；Wen Wang；王前 刊期： 2011年第05期
目的 了解铜绿假单胞菌临床分离株的耐药特点及其外排泵存在的状况.方法 采用K-B法检测铜绿假单胞菌临床分离株对9种常用抗生素(庆大霉素、氨曲南、头孢他啶、亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、环丙沙星、左氧氟沙星、多粘菌素B)的耐药情况;通过外排泵抑制剂氰氯苯腙(CCCP)对四种药物(羧苄青霉素、红霉素、亚胺培南、庆大霉素)的琼脂稀释法抑制试验分别检测铜绿假单胞菌的四种外排泵(MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM)的表型;应用PCR检测MexAB-OprM外排泵调节基因mexR的存在情况.结果 铜绿假单胞菌对9种常用抗生素的耐药率依次为:庆大霉素36.67%(22/60),氨曲南33.33%(20/60),头孢他啶31.67%(19/60),亚胺培南28.33%(17/60),阿米卡星26.67%(16/60),哌拉西林/他唑巴坦23.33%(14/60),环丙沙星21.67%(13/60),左氧氟沙星11.67%(7/60),多粘菌素B为0.外排泵表型阳性株依次为:MexAB-OprM 35株,阳性率58.33%(35/60);MexXY-OprM 13株,阳性率21.67%(13/60);MexCD-OprJ 11株,阳性率18.33%(11/60);MexEF-OwN 10株,阳性率16.67%(10/60).35株MexAB-OprM外排泵表型阳性株中有28株扩增出mexR基因片段,检出率为80.0%(28/35).结论 铜绿假单胞菌临床分离株对庆大霉素耐药率高,对多粘菌素B耐药率低:MexAB-OprM外排泵的存在是铜绿假单胞菌临床分离株的重要耐药机制.
作者：彭咏麟；吴爱武 刊期： 2011年第05期
目的 观察早期补充不同剂量维生素D对哮喘大鼠肺组织CC族趋化因子嗜酸粒细胞激活趋化因子(eotaxin)和受体CCR3表达的影响.方法 对用卵清蛋白(OVA)建立的大鼠哮喘模型进行1,25-(OH)2VitD3干预,分为低、中、高三个剂量,采用细胞计数、免疫组织化学染色和Western blot方法检测哮喘大鼠肺组织炎症和eotaxin及CCR3的变化.结果 低中剂量维生素D可以减轻哮喘的炎性浸润,表现为肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数减少,嗜酸粒细胞(EOS)百分比下降,eotaxin和CCR3蛋白质表达减弱.相反,高剂量维生素D则促进哮喘的发作.结论 早期补充低中剂量的维生素D对哮喘大鼠肺组织中eotaxin和CCR3有抑制作用,而高剂量维生素D则会促进eotaxin和CCR3的表达,从而加剧大鼠哮喘的气道炎症.
作者：刘佩意；蒋卓勤 刊期： 2011年第05期
目的 研究不同程度的能量限制(CR)下,大鼠脑组织中SIRT1和SIRT2的表达变化.方法 60只大鼠随机分成四组:正常对照组、75%CR组(喂养食物为正常对照组的75%),55%CR组(喂养食物为正常对照组的55%)和高脂组,喂养8周.免疫组织化学检测大鼠脑组织中SIRT1和SIRT2的表达与定位.RT-PCR及Western-blot检测各实验组中SIRT1、SIRT2的表达.结果 在大鼠脑组织中发现SIRT1可于细胞浆和细胞核中表达,且主要于细胞核中表达;SIRT2主要在细胞核中表达.能量限制下,与对照组相比SIRT1表达升高;高脂食物条件下,SIRT1表达相对于对照组增高,但是比CR组减少.75%CR与55%CR相比,后者中的SIRT1的表达增加更多.与对照组相比,55%CR增加SIRT1的表达差异有统计学意义(P<0.05),而75%CR和Hfa增加SIRT1的表达差异无统计学意义.SIRT2在CR和Hfa下表达无明显变化.结论 CR能增加SIRT1而不增加SIRT2的表达,重度CR比中等程度CR对SIRT1表达的影响更大.
作者：庄绪莹；李天题；赵虎；傅玉才；李朝晖 刊期： 2011年第05期
目的 用高效液相色谱法(HPLC)建立岗梅药材的指纹图谱.方法 采用RP-HPLC方法,色谱柱为phenomenex-C18柱(250×4.60mm,5 μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱;流速:1.0 ml/min;柱温:室温;检测波长为203 nm.结果 该方法可使岗梅药材中各成分较好分离,检测了不同来源10批岗梅药材,并根据检测结果确定了11个共有指纹峰,相似度较高,建立了岗梅HPLC指纹图谱共有模式.结论 建立的HPLC指纹图谱准确、简便、可靠,为岗梅的质量控制提供更全面的信息.
作者：卢进；任斌；陈孝 刊期： 2011年第05期
目的 观察RNA干扰GPC3基因表达对人肝癌细胞Huh-7凋亡的影响,并探讨其初步机制.方法 设计并合成靶向GPC3的特异性siRNA片段,通过脂质体转染法瞬时转染肝癌细胞Huh-7,48 h后验证siRNA的干扰效率;Annexin V/PI染色法观察GPC3基因沉默对细胞凋亡的影响:通过Western blot和定量PCR来检测caspase3的蛋白水平和核酸水平表达.结果 设计合成的GPC3 siRNA转染后,能够有效抑制Huh-7细胞中GPC3的表达;流式细胞仪检测结果显示,GPC3干扰组细胞在转染后48、72 h的凋亡率显著高于空白对照组(P<0.01),96 h后两组凋亡率差异无统计学意义(P>0.05).GPC3干扰组的caspase3在转染后48、72 h的表达高于未转染组,96 h后两组间caspase3水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 siRNA静默GPC3基因能促进肝癌细胞凋亡,其机理可能与上调caspase3有关.进而推测,GPC3基因可能成为肝癌靶向治疗的一个新靶点.
作者：郑大勇；阮健；刘斐烨；何本夫；黄娜；罗西；秦如斋；罗荣城 刊期： 2011年第05期
目的 探讨子宫内膜异位症(Ems)不孕患者腹腔镜术后行夫精人工授精妊娠率的影响因素.方法 回顾性分析164例腹腔镜术后的Ems不孕患者进行的318个人工授精周期的临床资料.以年龄、不孕年限、腹腔镜术后时间、用药情况、周期数、是否促排卵、r-AFS分期、IUI时机分别进行妊娠率的比较.结果 Ems不孕患者术后人工授精的周期妊娠率为13.21%.年龄≤35岁的周期妊娠率高于35岁以上者(χ2=6.687,P<0.05),不孕年限≤5年的妊娠率高于5年以上者(χ2=5.430,P<0.05),腹腔镜术后1年内行人工授精的妊娠率高于1年以上者(χ2=6.005,P<0.05),Ⅰ～Ⅱ期患者的妊娠率高于Ⅲ～Ⅳ期患者(χ2=8.264,P<0.05),加用促排卵治疗的妊娠率高于自然周期者(χ2=4.569,P<0.05),3周期内人工授精的妊娠率高于3周期以上者(χ2=4.031,P<0.05),双次IUI者妊娠率高于单次者(χ2=4.371,P<0.05),差异均有统计学意义.而术后是否使用GnRH-a则与妊娠率无关.结论 Ems不孕患者腹腔镜术后行人工授精治疗的佳时间是术后1年内3周期内有较高的妊娠率,建议同时加用促排卵治疗.
作者：蒋亚玲；邢福祺；李冰；全松；冯健怀 刊期： 2011年第05期
目的 探讨乙肝相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)外周血Th17细胞的表达及其与临床转归的关系.方法 采用流式细胞术分析外周血中Th17细胞比例,flowcytomix技术检测血清中IL-17的水平,荧光PCR检测HBV-DNA载量,ELISA检测HBeAg的状态,分析Th17细胞及IL-17的表达与HBV病毒及预后的关系.结果 与健康对照组及慢乙肝组相比,HBV-ACLF患者Th17细胞及IL-17水平明显升高(P<0.01),且Th17细胞与IL-17水平成正相关;进一步分析发现不同病毒复制水平及HBeAg状态的HBV-ACLF患者Th17细胞及IL-17的差异无统计学意义;与预后好转患者相比,预后不佳HBV-ACLF患者Th17细胞及IL-17水平明显增高(P<0.05),且IL-17的水平与终末期肝病评分成正相关.结论 Th17细胞可能参与了HBV-ACLF的发病机制,且IL-17的表达越高可能提示患者的预后不佳.
作者：张耿林；谢冬英；林炳亮；彭亮；谢婵；张绍全；张宇锋；赖箐；朱建芸；张英；黄仰甦；胡朝霞；高志良 刊期： 2011年第05期
目的 从粉尘螨丙酮提取液中分离抗细菌活性成分,并对其抗菌活性进行初步鉴定.方法 用丙酮抽提粉尘螨,并用Sephadex G50分子筛层析进行对粉尘螨提取液中的抗细菌活性进行初步分离、纯化.对各组分的抗细菌活性进行初步鉴定.结果 经Sephadex G50分子筛层析分离得到Ⅰ及Ⅱ两个峰.粉尘螨丙酮粗提物对绿脓假单胞菌无抑制作用,但对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌及短小芽孢杆菌均有抑制作用.峰Ⅰ及峰Ⅱ则对大肠埃希杆菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌及金黄色葡萄球菌都有抑制作用.粉尘螨粗提液及第二个峰在加热及蛋白酶K处理后仍然保留抗细菌活性,但是第一个峰在同样处理后失去了抗菌活性.结论 首次从粉尘螨分离纯化得到抗细菌成分.
作者：刘晓宇；刘瑞涛；赖仞；夏立新；刘志刚；李荔 刊期： 2011年第05期
热带医学杂志
主管:广东省科学技术协会
主办：广东省寄生虫学会 中华预防医学会
