学术投稿

人瘦素基因的克隆及在酿酒酵母中的表达和生物信息学分析

韩晋云;郑文岭;宋艳斌;姜茂竹;王妮莎;马文丽

关键词:瘦素, 酿酒酵母, 消化道, 基因治疗
摘要:目的 构建人瘦素基因和蛋白转导肽Tat基因的融合表达载体,转入酿酒酵母表达系统进行诱导表达,并对融合瘦素蛋白进行生物信息学分析.方法 脂肪组织中提取总RNA,逆转录为cDNA,以此cDNA为模板扩增瘦素基因.构建重组质粒pYES2-Tat-leptin,转入酿酒酵母表达菌株INVSc1诱导表达Tat-leptin融合蛋白,利用相关在线软件对融合瘦素蛋白相关的生物学功能进行分析.结果 经SDS-PAGE电泳和Western blotting 鉴定,酿酒酵母成功表达融合蛋白Tat-leptin.经生物信息学分析后获得了融合瘦素蛋白的相关生物学特性.结论 Tat-leptin融合蛋白在酿酒酵母中成功表达,并对融合瘦素蛋白的生物学特征进行了预测,为消化道基因治疗肥胖的研究奠定了基础.
热带医学杂志相关文献
  • 慢性乙型肝炎患者生存质量与压力的相关性研究

    目的 描述慢性乙型肝炎患者的生存质量和压力、健康危险性压力发生率的总体情况,并探讨慢性乙肝患者的生存质量与压力的相关性.方法 采用横断面调查和方便抽样方法,应用中文版世界卫生组织生存质量量表简表(WHOQOL-BREF)、慢性肝病问卷(CLDQ)和中文版知觉心理压力量表(CPSS)调查162名慢性乙肝患者(观察组),并与108名正常人(对照组)进行比较.结果 观察组在WHOQOL-BREF的生理领域、心理领域和社会关系领域的得分较对照组低(P<0.01).观察组的压力和健康危险性压力发生率在CPSS的得分较对照组高(P<0.01,P<0.05).观察组的生存质量在WHOQOL-BREF的4个领域和CLDQ的6个维度的得分均与压力呈显著负相关(P<0.01).结论 慢性乙肝患者的生存质量较差,压力和健康危险性压力发生率较高;慢性乙肝患者的生存质量与压力呈负相关.

    作者:杨莉;林细吟;高玲玲 刊期: 2010年第05期

  • 深圳市外来劳务工人A群、C群流行性脑脊髓膜炎抗体水平检测及分析

    目的 利用横断面基线调查深圳市外来劳务工人血清中A群和C群流行性脑脊髓膜炎(流脑)水平,为外来劳务工人流脑防控提供依据.方法 抽取深圳市罗湖区、龙岗区、宝安区3个监测点,每个监测点选择50人份以上,3个监测点共选择1003人,采用间接ELESA法(定量)检测血清中抗A群和C群脑膜炎奈瑟菌抗体效价.结果 共检测1003份血清标本,外来劳务工人A群和C群流脑抗体平均滴度分别为10.78μg/ml、2.71 μg/ml.A群和C群流脑血清抗体保护率分别为93.7%、64.8%,二者差异有统计学意义(P<0.01);不同年龄组、不同籍贯外来劳务工人A群流脑抗体保护率差异均有统计学意义(P<0.05).结论 深圳市外来劳务工人C群流脑抗体保护率明显低于A群,为了预防可能存在的流脑C群流行和暴发,提示应加强外来劳务工C群流脑多糖疫苗免疫接种.

    作者:刘涛;程锦泉;扈庆华;肖锦辉;陈应坚;卓菲;刘军;刘开钳;钟学飘;潘彩珠 刊期: 2010年第05期

  • 早期诊断输卵管外异位妊娠的临床初探

    目的 探讨临床上提高输卵管外异位妊娠早期诊断准确率的途径.方法 回顾分析近年经手术后病理证实的输卵管以外部位的异位妊娠的术前超声诊断情况.结果 33例患者22例在术前确诊,9例误诊,2例漏诊.结论 经阴道超声结合彩色多普勒超声可提高异位妊娠的诊断准确率.

    作者:金玉华;苏健;吴敏;程欢 刊期: 2010年第05期

  • 《动物寄生虫病学》网络教学平台的构建与初步应用

    目的 构建<动物寄生虫病学>网络教学平台,初步应用于教学,并对其效果进行评价.方法 借助计算机技术构建课程网络平台,网络平台设计时坚持自主性、开放性、双向互动性、先进性、科学性和实用性,平台包括课程概况、师资队伍、理论教学、实践教学、教学研究、学科建设、试题试卷、答疑系统、相关链接、新动态等模块以及相应的子栏目.选择一个班级进行教学应用,采用问卷调查的方式进行效果反馈,并通过与上一届学生期末考试成绩的比较分析和学生评教得分进一步比较教学效果.结果 成功构建了本课程的网络教学平台并进行了初步应用,提高了教学质量和效果.结论 网络教学平台有助于提高教学质量和效果,本课程初步成为了一门有自身特色、教学内容新颖生动、教学方法与手段先进、教学效果较好的课程,提升了我校人才培养的质量.

    作者:许金俊;陶建平;王小波;吴力力;高崧 刊期: 2010年第05期

  • 我院重症监护室铜绿假单胞菌感染趋势及其耐药性分析

    目的 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)为院内感染的重要代表菌及临床分离率较高的菌株,在我院PA占所有菌株检出率的24.5%、占革兰阴性杆菌检出率的35.4%.通过对我院2006年1月-2009年6月期间4个重症监护室铜绿假单胞菌的感染情况及其耐药性进行分析,并与同期非重症监护室的病区进行比较,分析PA产碳青霉烯酶水解碳青霉烯类抗生素后同时携带多种耐药基因对其他药物敏感性的影响.方法 采用Micro Scan全自动细菌鉴定和药敏分析仪,数据的分析采用WHONET软件.结果 4年间我院重症监护室铜绿假单胞菌检出数为559株,依次为:内科ICU 272株、外科ICU 149株、急诊ICU 126株、儿科ICU 12株.药敏结果显示:铜绿假单胞菌对大部分抗生素的敏感性呈逐年下降的趋势,尤其是重症监护室感染菌株.PA对碳青霉烯类抗菌素耐药的菌株产生多重甚至广泛耐药的几率较高.结论 4年间我院重症监护室铜绿假单胞菌对抗生素的耐药状况严重,尤其对头孢菌素.氨基糖苷类抗生素耐药率明显增加.对亚胺培南的耐药株同时携带多种耐药机制,产生多重耐药甚至泛耐药.多重耐药株和泛耐药株的检出亦呈逐年上升的趋势.

    作者:冯雪琴;兰海丽;卢兰芬;吴秀娟 刊期: 2010年第05期

  • 嗜肺军团菌MompS抗原二级结构分析及表位预测

    目的 分析嗜肺军团菌MompS抗原的二级结构并预测其B细胞表位,初步判断其活性多肽所在区域.方法 联合运用多种方法对MompS的二级结构和表面特性,如亲水性、理化性质、可及性、免疫原性和可塑性等方面进行分析,预测其抗原表位.结果 MompS存在多个潜在抗原表位位点,可能的蛋白质抗原表位分布于三个区域:M1(353-546)、M2(1-215)、M3(216-399).体外实验证明,所预测抗原表位区域基本能与免疫血清发生抗原特异性反应.结论 应用DNA Star和胞外区在线分析软件能够成功预测MompS抗原的B细胞表位,M3区域可用于后续的活性肽表位筛选区域.

    作者:许颖;陈建平;关望;牛钦王 刊期: 2010年第05期

  • 植烷酸氧化酶真核表达载体的构建及其细胞内定位

    目的 构建小鼠植烷酸氧化酶(Phyh)真核表达载体,并观察其在NIH 3T3细胞中的表达定位情况.方法 提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到Phyh编码序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3上;对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,利用脂质体转染方法转染NIH 3T3细胞;使用细胞免疫化学技术对重组质粒pcDNA3/HA.Phyh在NIH 3T3细胞中的表达及蛋白定位进行分析.结果 PCR、双酶切和测序鉴定表明,pcDNA3/HA-Phyh真核表达质粒构建正确;转染实验发现,该质粒能够在NIH 3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞质中.结论 成功构建了带HA标签的小鼠Phyh真核表达载体,该载体能够在哺乳动物细胞NIH 3T3中表达,为进一步研究Phyh的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具.

    作者:孙明晶;胡水旺;夏高晓;姜勇 刊期: 2010年第05期

  • 2008年广州市20岁以上正常人群甲型肝炎抗体流行率调查

    目的 调查2008年广州市20岁以上正常人群甲型肝炎抗体(抗-HAV IgG)流行率.方法 2008 年在广州市南方医院健康体检人群中,采集20岁以上5个年龄组正常人群血清500份,应用雅培(Abbott)公司抗-HAV IgG诊断试剂盒(化学发光法),定性检测血清中的抗-HAV IgG,分析人群中抗-HAV IgG流行率.结果 2008年广州市20岁以上正常人群抗-HAV IgG总流行率为72.2%(361/500),男性人群阳性率为73.2%(230/314),女性人群阳性率70.4%(131/186).20~岁组、30~岁组、40~岁组、50~岁组和60岁以上组抗-HAV IgG阳性率分别为52.8%(56/106)、52.5%(63/120)、82.5%(94/114)、89.8%(88/98)和96.8%(60/62),随年龄增长而上升.结论 目前广州市20~39岁组人群抗-HAV IgG阳性率较低,建议对该人群的易感者进行甲型肝炎疫苗免疫.

    作者:吴小东;李文凡;杨生义;刘学恩;杨洁;周彬;庄辉;侯金林 刊期: 2010年第05期

  • 热休克蛋白70的功能及其在寄生虫生长发育中的作用

    热休克蛋白(Heat shock protein,HSP)也称应激蛋白,具有分子伴侣活性.外源性HSP70能被宿主抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)识别,引起前炎症反应及获得性免疫应答,而自体HSP70则具有抗炎效应.在近的研究中还发现HSP70具有佐剂功效,能增强机体对其他抗原肽的免疫应答反应.HSP70在寄生虫的生长发育过程中也起着重要作用.

    作者:何思杰;吕志跃;吴忠道 刊期: 2010年第05期

  • AFP增强子驱动的HSV-TK/GCV自杀基因系统对肝癌细胞杀伤的实验研究

    目的 探讨人AFP增强子驱动的单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)自杀基因系统体外靶向杀伤肝癌细胞效应.方法 构建人AFP增强子驱动的pAFP-CDNA3.1-TK自杀基因真核表达质粒,脂质体转染肝癌细胞,检测TK mRNA和蛋白表达.MTT法检测GCV对肝癌细胞的杀伤作用.结果 成功构建pAFP-CDNA3.1-TK自杀基因真核表达质粒,在AFP阳性HepG2细胞中检测到TK mRNA和蛋白表达,添加GCV 可特异性地杀伤HepG2细胞,而AFP阴性的SMMC7721细胞生长不受影响.结论 AFP增强子驱动的TK/GCV自杀基因系统可以靶向杀伤AFP阳性肝癌细胞.

    作者:庄树彤;秦颖;朱宝和;廖允军;王成友;夏荣;刘美洲 刊期: 2010年第05期

  • 1例接种甲型H1N1流感疫苗后心因性反应案例分析

    1病例基本情况患者于2009年11月25日15:40接种甲流疫苗1h后出现头晕、恶心、腹痛、右膝关节痛等症状,经现场临床医生查体,仅有下腹部轻压痛,右膝关节皮肤稍触及疼痛明显的阳性体征,经双侧内关、足三里穴针炙后,欲吐止,腹痛及右膝关节痛缓解,但30'后在操场等候其母时感畏冷,四肢稍有抖动,右膝关节又感疼痛,随之上肢抖动幅度越来越大,遂送市医院治疗.

    作者:黄彩虹;陈雅红;詹惠春 刊期: 2010年第05期

  • 带c-Myc标签的Mdfic基因真核表达载体构建及其在成肌细胞中的表达

    目的 构建新型转录因子Mdfic和c-Myc标签融合表达的真核表达载体pcDNA3.1-Mdfic-Myc,实现其在成肌细胞C2C12中的表达.方法 PCR方法扩增Mdfic的开放阅读框,酶切后的PCR扩增产物和退火后的人工合成的c-Myc标签共同克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建pcDNA3.1-Mdfic-Myc融合表达质粒.重组质粒经过PCR、双酶切和测序鉴定后,脂质体法转染C2C12细胞.RT-PCR和Western blotting方法检测转染后细胞中Mdfic-Myc的表达.结果 成功构建了peDNA-Mdfic-Myc真核表达质粒;RT-PCR和Western blotting结果表明,Mdfic-Myc融合蛋白在成肌细胞C2C12中获得高效表达.结论 pcDNA3.1-Mdfic-Myc融合表达质粒的成功构建及其在成肌细胞中的表达为进一步体外研究Mdfic蛋白单独的功能及其与其他分子间功能性相互作用奠定了基础.

    作者:郭芬;李月琴;黄晓峰;欧淑芳;初彦辉;周天鸿 刊期: 2010年第05期

  • 重庆市人群甲状腺功能亢进发病情况调查分析

    目的 调查全民食盐加碘是否影响甲亢发病升高.方法 抽取碘盐覆盖率较高的永川区1个乡和碘盐覆盖率较低的涪陵区2个乡,以回顾性调查方法调查1990-2008年逐年甲亢发病情况;收集历年碘盐监测资料;采集成人尿液检测碘含量;FT3、FT4升高,TSH降低,有甲亢临床表现者诊断为甲亢;趋势检验(F)、t检验和X2检验作统计学分析.结果 1997-2008年碘盐覆盖率,永川区为93.8%~100.0%;涪陵2005年及其以前为22.5%~72.78%,2006-2008年为86.55%~97.22%.尿碘中位数永川为271.43μg/L,显著高于涪陵的130.68μg/L(P<0.05).共发现甲亢病例234例,食用碘盐前(1990-1996)年均甲亢发病率永川为5.92/10万,涪陵为4.55/10万,差异无统计学意义(P>0.05);食用碘盐后(1997-2008)年均甲亢发病率永川为40.51/10万,显著高于涪陵的12.19/10万(P<0.01),食用碘盐后两地的发病率显著上升(P<0.05).患甲亢相对危险度永川为6.84,涪陵为2.68.病例中女性多于男性,发病年龄小12岁,大82岁,症状为多食、多饮、体重下降、心悸、眼球突出、多汗和甲状腺肿.结论 全民食用碘盐后甲亢发病率升高,存在碘过量,应降低食盐加碘浓度.

    作者:肖邦忠;廖文芳;李心术;罗兴建;吴成果;徐世斌;张仁平;廖云贞;陈亚琳;谢军 刊期: 2010年第05期

  • 未足月胎膜早破母婴结局的临床资料分析

    目的 探讨未足月胎膜早破(PPROM)的母婴预后.方法 回顾性分析我院2004年1月-2008年12月收治的PPROM单胎妊娠的537例孕产妇的临床资料.结果 孕23-32+6周PPROM患者的死产率为83.3%,新生儿死亡率为63.3%,围产存活新生儿发病率与孕33-36+6周的PPROM患者相比,两组差异具有统计学意义(均为P<0.01).PPROM患者的围产儿结局与破膜孕周密切相关.结论 孕23-32+6周PPROM的早产儿预后较差,在保守治疗期间应根据具体情况适时终止妊娠,而孕33-36+6周PPROM患者建议在积极期待治疗期间及时分娩,以减少早产儿并发症.

    作者:陈艳红;苏春宏;贺芳;陈敦金 刊期: 2010年第05期

  • 白藜芦醇对β淀粉样蛋白诱导星形胶质细胞氧化损伤的保护作用

    目的 研究白藜芦醇对β淀粉样蛋白诱导星形胶质细胞氧化损伤的保护作用,从而探索其对中枢神经保护作用的可能机制.方法 采用不同浓度的白藜芦醇预处理星形胶质细胞12 h.继之用25 μmol/L浓度的β淀粉样蛋白进行损伤,然后检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)以及采用DHE探针测定荧光强度间接反映胞内活性氧(ROS)含量,以评价白藜芦醇对细胞氧化损伤的保护作用.结果 受β淀粉样损伤的细胞存活率明显下降(P<0.05),而用10、100 μmol/L白藜芦醇预处理则能提高该细胞的存活率(P<0.05),但1μmol/L白藜芦醇预处理的细胞存活率并无明显变化;荧光检测显示,蛋白损伤使得荧光强度增高(P<0.05),1μmol/L白藜芦醇处理组荧光强度大于阳性对照组,其余各组荧光强度均小于阳性对照组(P<0.05);蛋白损伤可导致细胞LDH漏出量增加(P<0.05),1 μmol/L白藜芦醇使得LDH漏出增加(P<0.05),而10、100μmol/L白藜芦醇处理组,细胞LDH漏出量明显减少(P<0.05).结论 星形胶质细胞受到β淀粉样蛋白损伤后,白藜芦醇能减少LDH的漏出及有效降低胞内ROS水平,从而显示对星形胶质细胞具有保护作用.

    作者:郭江;陈清;周浩;高璐璐;孔丹莉;俞守义 刊期: 2010年第05期

  • 2009年泉州市鼠疫监测分析

    目的了解泉州市鼠疫宿主动物的种群构成及数量分布情况,为鼠疫防治工作积累基础资料.方法 采用夜笼法捕鼠,并对鼠类及捡获蚤类进行鉴定,计算鼠染蚤率和蚤指数;采用鼠疫RPHA和IHA法等检测鼠疫F1抗体.结果 2009年共捕获鼠形动物2134只,鼠种以褐家鼠和黄胸鼠为主,分别占51.15%和26.66%,两者差异有统计学意义(t=2.783,P=0.019);总鼠密度5.71%,其中山区和沿海地区鼠密度分别为(4.84%±1.51%)、(6.58%±2.01%),差异无统计学意义(t=1.197,P=0.297);鼠体总蚤指数和染蚤率分别为1.16和31.52%;印鼠客蚤指数为1.06,游离蚤指数为0.008,这些指标在山区和沿海地区鼠差异均无统计学意义;鼠疫实验室检测用4种方法均未查出鼠疫F1抗体.结论 褐家鼠仍是泉州市主要鼠种,主要蚤种是印鼠客蚤,未发现鼠间鼠疫流行迹象.

    作者:李锋平;张庆虎 刊期: 2010年第05期

  • 肠道病毒71型实时荧光RT-PCR检测方法的建立及临床评价

    目的 利用实时荧光RT-PCR技术,并通过系统的分析性能和临床性能评价,建立一种早期快速检测肠道病毒71型(EV71)的方法.方法 根据EV71基因组中编码衣壳蛋白VP1基因保守区序列设计一对引物和一条荧光探针,利用实时荧光RT-PCR技术建立了检测EV71的方法,并对扩增产物进行分析,同时进行灵敏度、特异性、精密度评价.在此基础上利用不同标本类型共1104例临床样本对本方法和RT-PCR方法进行对比分析.结果 本方法可以特异性的检测EV71,而对种属相近的或引起症状相似的其他病毒均无交叉反应.本方法检测灵敏度达到9.22×102 PFU/ml,不同浓度样本的Ct值的变异系数在1.4%~2.9%之间.1104例临床样本的研究显示本方法与RT-PCR方法检测结果的总符合率达到96.74%,阳性样本的检出率要高于RT-PCR方法.结论 本方法检测EV71具有灵敏度高、特异性强、精密度高、快速简便的特点,并与RT-PCR方法具有很好的符合率,在手足口病的早期快速诊断和疫情监测方面具有很好的应用前景.

    作者:朱坤;高秀杰;邓中平;徐伟文;高旭年;李明 刊期: 2010年第05期

  • 人瘦素基因的克隆及在酿酒酵母中的表达和生物信息学分析

    目的 构建人瘦素基因和蛋白转导肽Tat基因的融合表达载体,转入酿酒酵母表达系统进行诱导表达,并对融合瘦素蛋白进行生物信息学分析.方法 脂肪组织中提取总RNA,逆转录为cDNA,以此cDNA为模板扩增瘦素基因.构建重组质粒pYES2-Tat-leptin,转入酿酒酵母表达菌株INVSc1诱导表达Tat-leptin融合蛋白,利用相关在线软件对融合瘦素蛋白相关的生物学功能进行分析.结果 经SDS-PAGE电泳和Western blotting 鉴定,酿酒酵母成功表达融合蛋白Tat-leptin.经生物信息学分析后获得了融合瘦素蛋白的相关生物学特性.结论 Tat-leptin融合蛋白在酿酒酵母中成功表达,并对融合瘦素蛋白的生物学特征进行了预测,为消化道基因治疗肥胖的研究奠定了基础.

    作者:韩晋云;郑文岭;宋艳斌;姜茂竹;王妮莎;马文丽 刊期: 2010年第05期

  • 异丙酚促进体外培养的成年大鼠海马神经干细胞增殖

    目的 异丙酚对于成年神经干细胞增殖能力的影响目前尚不明确,本研究对异丙酚对体外培养的大鼠成年神经干细胞的作用及其可能的分子机制进行了研究.方法 体外培养的大鼠成年神经干细胞给予BrdU后,分别用10、50、100μg/ml的异丙酚进行处理,并同时设立溶媒对照和空白对照.24 h后.采用免疫染色显示BrdU阳性细胞,DAPI复染细胞核.细胞存活率采用细胞计数法和MTT法测定.人工计数BrdU阳性细胞和固缩细胞核的比例.用Fura 2-AM检测胞浆内Ca2+浓度.分别用免疫荧光和免疫印迹法检测细胞内CREB和磷酸化CREB的表达位置和水平.结果 低浓度(10μg/ml)异丙酚不能促进大鼠成年神经干细胞的增殖.而中浓度(50μg/ml)和高浓度异丙酚(100μg/ml)则呈剂量依赖性的促进其增殖.异丙酚提高了BrdU阳性细胞的比例.细胞死亡率在处理前后维持在低水平上(<2%).异丙酚显著提高了大鼠成年神经干细胞胞浆内的游离Ca2+浓度.异丙酚处理前后,大鼠成年神经干细胞均能表达CREB和磷酸化CREB,但是异丙酚干预后,大鼠成年神经干细胞内磷酸化CREB表达水平显著增高.结论 异丙酚可促进体外培养的大鼠成年神经干细胞的增殖水平,这是细胞存活率升高的主要原因,可能与胞浆内Ca2+浓度以及CREB磷酸化水平的升高有关.

    作者:陶涛;赵振龙;张雅婷;古妙宁 刊期: 2010年第05期

  • 十堰地区恶性肿瘤患者隐孢子虫感染情况调查

    目的 调查十堰地区恶性肿瘤患者的隐孢子虫感染情况及流行特点,为恶性肿瘤患者隐孢子虫感染的防治提供依据.方法 采集十堰市太和医院217例恶性肿瘤患者粪便,采用金胺酚+改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊.结果 217例肿瘤患者隐孢子虫感染率为48.85%,男性患者与女性患者隐孢子虫感染率分别为49.58%和47.96%,差异无统计学意义(P>0.05);化疗、放疗、化疗+放疗患者隐孢子虫感染率分别为38.46%、37.88%和69.86%,差异有统计学意义(P<0.01);不同类别的肿瘤患者的隐孢子虫感染率分别是:呼吸系统为37.50%、消化系统为60.78%、乳腺为38.89%、其他(包括脑瘤、肾上腺瘤、甲状腺瘤等)为40.00%,差异有统计学意义(P<0.01).结论 恶性肿瘤患者易发生隐孢子虫感染,可能与其机体的免疫功能下降有关.

    作者:朱敬;朱名胜;王绍基;宋明华 刊期: 2010年第05期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会