学术投稿

不同试剂盒对乙脑病毒RNA提取效能的比较

陈亿雄;陈志永;柯雪梅;任旭琦;陈清

关键词:乙脑病毒, RNA提取, 实时荧光定量反转录聚合酶链反应
摘要:目的 比较常见的3种商售RNA提取试剂对乙脑病毒检测的相对效率、耗时和成本,为实验室应用及检测结果的评价提供依据.方法 对乙脑病毒参考株悬液作10-1~10-4系列稀释,选用QIAGEN公司的QIAamp Viral RNA Mini Kit、Sangon生物公司的RNA提取试剂盒和Invitrogen公司的Trizol试剂3种核酸提取方法提取上述样本RNA,用TaqMan实时荧光定量反转录聚合酶链反应对其提取效率进行评价,并比较3种试剂(盒)的耗费时间和价格.结果 对不同稀释度乙脑病毒样本的检测,均以QIAGEN公司QIAamp Viral RNA MiniKit检测的敏感度高.以该试剂盒的提取效率为100%,则Invitrngen和Sangon生物公司RNA提取试剂(盒)的提取效率分别为77.4%~86.8%和64.2%~74.1%.3种试剂(盒)对cDNA起始模板量的估计也有明显的影响,差别达到1~3个数量级,以QIAGEN公司的试剂盒敏感.3种试剂(盒)提取RNA耗时分别为60 min、100 min和70 min,价格效率比分别为46元、23元和20元.结论 RNA提取试剂可影响JEV荧光定量PCR检测的结果,各实验室应根据实验目的 和实验室条件,合理选择病毒RNA提取试剂盒.
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  • 肺炎支原体抗原酶联免疫检测方法的建立

    目的 采用ELISA技术,建立肺炎支原体(Mycoplmma pneumonia)抗原检测方法.方法 制备肺炎支原体的多克隆抗体,建立酶联免疫吸附法,检测标本中的肺炎支原体,对其敏感性和特异性进行检测.结果 本方法可以检测毒株的1/212的稀释样品,对甲型流感病毒(H3N2亚型、H1N1亚型)、乙型流感病毒、副流感病毒(Ⅰ型、Ⅲ型)、呼吸道腺病毒(Ⅲ型、Ⅶ型)、肺炎衣原体无特异性反应.结论 本肺炎支原体抗原检测方法可用于疑似肺炎支原体感染样品的临床诊断和鉴别诊断.

    作者:周转;李军涛 刊期: 2009年第05期

  • 呼吸道感染标本嗜血杆菌的分布及耐药性分析

    目的 了解本院呼吸道感染标本中嗜血杆菌的临床分布及耐药情况.方法 标本接种于嗜血杆菌巧克力平板,对分离到的嗜血杆菌进行鉴定、β-内酰胺酶试验和药敏试验.结果 嗜血杆菌β-内酰胺酶的产生率为21.8%,对氨苄西林、阿莫西林/棒酸、头孢呋辛、头孢噻肟、左旋氧氟沙星、红霉素、复方新诺明的耐药率分别为28.4%、16.4%、10.2%、3.1%、31.1%、90.2%和52.9%.结论 嗜血杆菌是呼吸道感染的主要致病菌.阿莫 西林/棒酸和二代三代头孢菌素的敏感率高于其他抗生素.加强嗜血杆菌耐药谱监测,合理使用抗生素是延缓耐药菌株快速上升的好方法.

    作者:邓辉;薛永祥 刊期: 2009年第05期

  • 大肠埃希菌O157:H7 Tir基因的生物信息学分析

    目的 扩增和测序肠出血型大肠埃希菌O157:H7 tir基因,利用生物信息学预测分析其结构和功能特征.以探讨Tir作为疫苗候选抗原的可能性.方法 利用PCR技术扩增咖基因并测序,应用生物信息学网站在线分析工具和vector NTI suite软件分析Tir蛋白结构和生物学功能,预测B细胞抗原表位.结果 该基因全长1 674 bp,编码558个氨基酸,蛋白质总体亲水性高,有稳定的理化性质.含有3个结构和功能域,两段穿膜结构,多个磷酸化位点,预测20个B细胞线性表位.结论 Tir毒力因子是很有前景的疫苗候选抗原,为肠出血型大肠埃希菌O157:H7的疫苗研究提供了理论依据.

    作者:王玲;龙北国;胡黎平;罗军;陈健文;范宏英 刊期: 2009年第05期

  • 刚地弓形虫SAG3基因体外扩增及生物信息学分析

    目的 获取刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株表面抗原SAG3目的 基因片段,对其结构和功能进行生物信息学分析,预测其编码蛋白作为候选抗原基因的可行性.方法 提取弓形虫的基因组DNA,自行设计一对寡核苷酸引物,PCR体外扩增SAG3基因,用生物信息学方法对SAG3蛋白的理化性质、结构和功能进行预测.结果 扩增出的基因片段约1 174 bp,测序后鉴定其为弓形虫RH株SAG3基因片段.预测SAG3蛋白相对分子质量约为41 785.2,能形成两个功能结构域,氨基酸序列的前38(或39)位为信号肽序列.通过多种预测方法分析SAG3氨基酸序列抗原表位可能位于第10、50、80、95、160、180、220、250、300、330和360位点内或附近.结论 成功获得SAG3基因,为深入研究该基因结构奠定了基础.

    作者:杨雯;朱穗京;田春林;王卫群;刘晓泉 刊期: 2009年第05期

  • 3起老人院诺如病毒胃肠炎暴发疫情分析

    目的 分析3起发生在老人院内的诺如病毒胃肠炎局部暴发疫情的流行特征,为今后预防类似事件的发生提供参考依据.方法 收集2007年佛山市老人院诺如病毒胃肠炎暴发疫情现场流行病学调查报告,采用描述性流行病学方法对疫情调查处理情况进行分析.结果 2007年佛山市共报告3起老人院诺如病毒胃肠炎暴发疫情,共发病56例,无死亡病例;疫情集中发生在2~3月份:每起疫情均从部分患者粪便标本中检测诺如病毒Ⅱ型核酸;3起疫情主要以人-人密切接触的途径传播.结论 早发现、早报告、早处理疫情,以及日常加强院内卫生,强化护工的规范操作,是预防和控制诺如病毒胃肠炎在老人院发生的关键.

    作者:梁自勉;李艳容;黄祖星 刊期: 2009年第05期

  • 湖北省近20年血吸虫病控制效果和变化趋势

    目的 了解近20年来湖北省实施的血吸虫病防治策略,对疫情控制的效果和变化趋势的影响.方法 将1989年以来全省开展的4次大型流行病学抽样调查和1次病情普查资料建立数据库,统计分析主要疫情指标变化,评价各防治时段的防治策略所产生的效果及影响.结果 近20年,湖北省实施了3种防治策略;全省人群、耕牛感染率和推算病人数指标呈现大幅下降;人群、耕牛感染率呈指数曲线下降趋势.结论 近20年,湖北省实施的3种防治策略的演变,与防治工作进程、社会经济改革和自然因素相关;3个时段的防治策略都发挥了应有的作用,为血防工作延续起到效果基奠和经验积累的作用.

    作者:朱惠国;戴裕海 刊期: 2009年第05期

  • T103A变异MxA蛋白抑制水泡性口膜炎病毒复制的体外研究

    目的 研究T103A变异MxA蛋白抑制水疱性口膜炎病毒(VSV)复制活性.方法 将野生型、T103A变异MxA蛋白表达载体和对照质粒分别瞬时转染Wish细胞,24 h后VSV感染细胞,48 h后用MTT法检测各组细胞增殖;另取Wish细胞转染上述3种质粒,转染24 h加入VSV感染细胞,24 h后收集细胞采用RT-PCR检测VSVmRNA水平;Western blot检测各组MxA蛋白表达.结果 野生型、T103A变异MxA蛋白均在Wish细胞有较好表达;MTT检测结果提示T103A变异组细胞增殖数显著低于野生型组(P<0.01);RT-PCR结果显示T103A变异组VSVmRNA水平显著高于野生型组(P<0.01),但与对照组比较差异无统计学意义(P0.05).结论 T103A变异MxA蛋白失去了抑制VSV复制活性.

    作者:余治健;邓启文;曾位森 刊期: 2009年第05期

  • 咪唑安定和芬太尼在老年患者纤维支气管镜检查中的应用

    目的 观察咪唑安定和芬太尼在老年患者纤维支气管镜检查中的应用效果及安全性评价.方法 将210例接受纤维支镜检查的老年患者随机分成试验组(A组)和对照组(B组),同时选择同期106例青年患者作为对照(C组),A、C两组在局部麻醉的基础上加用咪唑安定和芬太尼进行麻醉,B组单纯应用局部麻醉,分别观察3组各时点的平均动脉压、心率、呼吸频率及脉氧饱和度.对A、C两组患者按Bamsay法进行镇静分级评估,记录A、C两组的麻醉诱导时间和麻醉时间.调查3组患者对检查过程的遗忘程度、不良反应以及再次检查的接受程度.结果 A组麻醉时间高于C组(P<0.01).A、C两组遗忘比率分别为97.2%(103/106)和95.3%(101/106),镇静分级评估A组以3级为主占68.9%(73/106),C组以2级为主占66.0%(70/106),而B组镇静程度全部为0级,无遗忘.A、C两组在检查过程中平均动脉压稍下降,但平稳,而B组显著升高,波动大.B组心率入声门时比A、C两组显著加快(P<0.01).A、C两组在检查过程中的不良发应、中断检查及再次检查接受程度与B组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 老年患者在纤维支气管镜检查联合应用咪唑安定和芬太尼麻醉安全有效.

    作者:张锡林;吴智龙 刊期: 2009年第05期

  • 微创治疗在子宫肌瘤中的应用

    子宫肌瘤是女性生殖系统常见的良性肿瘤.近年来,以腹腔镜和官腔镜为代表的微创技术在子宫肌瘤治疗的应用中逐渐普及,如腹腔镜子宫切除术、腹腔镜子宫肌瘤切除术、官腔镜子宫肌瘤切除术,以及近年来越来越受到重视的阴式子宫切除术、阴式子宫肌瘤剔除术及子宫动脉栓塞术等.上述手术具有刨伤小、患者痛苦少、恢复快、住院时间短等优点,但适应证、手术方法、并发症又各不相同.

    作者:陈江鸿;陈国伟 刊期: 2009年第05期

  • 尼妥珠单抗联合化疗药物对人结肠癌细胞株LoVo的实验研究

    目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)的单克隆抗体尼妥珠单(nimotuzumab,h-R3)与化疗药物联合对结肠癌细胞株LoVo的作用.初步探讨其可能的作用机制.方法 采用MTT法测定不同药物单药、两药联合分别对结肠癌细胞株LoVo的IC50值;计算不同药物联合的q值,以确定药物联合的作用;流式细胞仪检测不同药物单药或者联合对细胞周期分布及凋亡比例的影响.结果 联合h-R3能显著提高伊立替康对LoVo细胞的细胞抑制率.诱导更多肿瘤细胞发生凋亡以及产生G0/G1期、G2/M期阻滞,与5-氟尿嘧啶联合具有类似的作用,但较伊立替康不明显,而与奥沙利铂联合无明显增效作用.结论 h-R3通过协同或相加作用提高伊立替康、氟尿嘧啶的细胞杀伤作用,其机制与促进细胞凋亡和影响细胞周期分布有关,奥沙利铂联合对LoVo细胞无明显增效作用.为进一步的体内及体外实验提供了一定的指导作用.

    作者:李小燕;曹梦苒;吕成伟;郑大勇;苏宁;罗荣城 刊期: 2009年第05期

  • 重组寄生虫-BCG疫苗研究进展

    卡介苗(BCG)由于其广泛应用的安全性及其免疫佐剂作用,以其为载体的重组疫苗研究日益被科学家们重视.本文简要概述了近年来硕大利什曼原虫、疟原虫、弓行虫、肝片吸虫等寄生虫重组BCG疫苗的构建及免疫机制的研究进展.

    作者:叶艳菊;李文桂 刊期: 2009年第05期

  • 血者ABO血型反定型O细胞凝集原因分析

    目的 分析献血者ABO血型反定型O细胞凝集原因,以确保受血者输血安全.方法 对江门市2000年1月至2008年6月间,采用微板法检测献血者ABO血型出现反定型O细胞凝集者进行冷凝集素效价测定、吸收放散试验、意外抗体鉴定等血型血清学检测.结果 308 410例献血者中有25例出现反定型O细胞凝集.其中血清中含有冷凝集素导致O细胞凝集16例:效价1:4~1:32者10例、效价≥1:64者6例;血清中存在意外抗体导致O细胞凝集9例:抗-M(IgM)5例、抗-Lea(IgM)2例、抗-Leb(IgM)1例、抗-P1(IgM)1例.结论 采用微板法检测献血者ABO血型出现反定型O细胞凝集时,应进行相关的血型血清学检测;非血源紧缺的情况下,反定型O细胞凝集者不宜作为献血者.

    作者:王平;杨克坚;罗月明 刊期: 2009年第05期

  • 2007年广州市公共场所用品用具卫生状况调查

    目的 了解2007年广州市各类公共场所用品用具的卫生状况.方法 按照<公共场所卫生监测规范和<公共场所卫生标准检验方法的要求对公共场所用品用具进行抽样和检测,按照<公共场所卫生标准进行分析和评价.结果 2007年共监测广州76家公共场所单位的1 430份用品用具,合格1 326份,总合格率为92.73%.不同公共场所中,用品用具合格率高为旅店业客房(95.38%),公共浴室和理发、美容室用品用具的合格率明显低于客房,差异有统计学意义(P<0.05),娱乐场所用品用具合格率低(仅为70%),与客房相比差异有统计学意义(P<0.001);不同种类用品用具中,杯具合格率低(85.82%),但与其他各类相比差异无统计学意义.不合格检验项目主要是细菌总数,其次为大肠菌群.结论 广州市公共场所用品用具卫生质量仍存在一些问题,应加强公共场所用品用具清洗、消毒卫生的监管工作.

    作者:刘慧;钟嶷;郭重山;李小晖;周自严;江思力;王伟鸿;王志伟;杨轶戬;刘查田 刊期: 2009年第05期

  • 糖尿病肾病合并冠心病患者C反应蛋白及巨噬细胞移动抑制因子的改变

    目的 通过检测糖尿病肾病合并冠心病患者血浆高敏C反应蛋白(hsCRP)及巨噬细胞移动抑制因子(MIF),了解hsCRP及MIF在糖尿病肾病合并冠心病患者中的变化,协助临床决策.方法 收入64例糖尿病肾病合并冠心病患者及57例糖尿病肾病但无明确冠心病依据的患者,同时收入54例健康志愿者,以ELISA法检测分析其血浆中高敏C反应蛋白及巨噬细胞移动抑制因子的变化.结果 糖尿病肾病合并冠心病组患者血浆hsCRP水平(9.93±2.58)mg/L及MIF水平(23.61±6.64)μg/L高于无明确冠心病依据的患者[hsCRP(7.37±1.32)mg/L,MIF(15.56±3.70)μg/L],差异有统计学意义(P均<0.05),两组患者血浆hsCRP及MIF水平又均显著高于对照组[hsCRP(3.51±2.00)mg/L,MIF(9.57±1.25)μg/L].结论 检测糖尿病肾病患者血浆hsCRP及MIF,可能有助于鉴别糖尿病肾病患者有无合并冠心病的危险.

    作者:徐向明;何坚;贺军 刊期: 2009年第05期

  • 弓形虫急慢性感染的生物学基础及其研究进展

    弓形虫是一种条件致病原虫,可造成人体急性和慢性感染.本文针对弓形虫急、慢性感染的生物学基础,从体外条件、人体的免疫力、特异性蛋白、中间体、离子通道和传导通路等方面综述了速殖子与缓殖子的相互转化及其可能的机制.

    作者:李乐;谭峰;陈晓光 刊期: 2009年第05期

  • PTPN22基因多态性与中国广东汉族人群RA发病的相关性研究

    目的 检测中国广东地区汉族人群中类风湿关节炎(RA)发病与蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22(PTPN22)基因Arg620Trp/1858CT多态性的关系.方法 采用PCR-BFLP技术分析了广东汉族人群中148例散发RA患者和150例健康对照者PTPN22 1858位点基因型.结果 在中国广东地区汉族人群中PTPN22 1858位点仅存在等位基因C,与RA的发病无关.结论 中国广东地区汉族人群中,PTPN22 Arg620Trp多态性与RA的发病无关;PTPN22基因可能存在其他多态性位点,需作进一步探讨.

    作者:赵丽;裘宇容 刊期: 2009年第05期

  • 子痫前期患者白细胞介素-8和胎盘生长因子的表达及其意义

    目的 通过检测子痫前期患者羊水中白细胞介素-8(IL-8)和胎盘组织中胎盘生长因子(PLGF)的水平,以探讨IL-8和PLGF在子痫前期发病中的作用.方法 采用酶联免疫吸附法和免疫组化法分别测定20例轻度子痫前期患者,22例重度子痫前期患者和30例正常妊娠妇女(对照组)的羊水中IL-8和胎盘组织中的PLGF的表达.结果 子痫前期轻度组及重度组羊水IL-8均高于对照组,重度组羊水IL-8显著高于轻度组,差异均有统计学意义(P<0.01).子痈前期轻度组及重度组胎盘组织中PLGF表达量均低于对照组(P<0.01),而重度组低于轻度组(P<0.01).子痫前期轻、重度组及对照组胎盘组织中PLGF表达量与羊水IL-8水平均呈高度负相关(P<0.01).结论 子痫前期患者羊水中IL-8增高,而胎盘组织中PLGF表达下降,可能与子痫前期的发生、发展有关.

    作者:吴雪琴;赵勇;朱小芳;李玉芳;许瑞环 刊期: 2009年第05期

  • HCV反向点杂交基因分型方法的建立

    目的 利用反向点杂交技术建立HCV基因分型新方法.方法 在HCV 5'端非编码区(5'NCR)设计引物和分型探针(1.2.3.6型),采用反向点杂交分型技术对53例HCV RNA阳性(浓度均在102~107 IU/mL之间)血清进行分型,并以基因序列分析作为金标准,对新方法的敏感性、特异性和重复性进行评价.结果 反向点杂交基因分型新方法检出的基因型有52例:1b型32例占60.38%,2a型4例占7.55%,6a型8例占15.09%.3b型8例占15.09%;未检出的基因型有1例,用基因序列分析也未能确定型别(失败的原因应是该HCV RNA扩增产物浓度偏低2.24×102IU/mL).本研究的方法敏感性为98.1%,特异性为100%,随机抽取20份标本再次检测的结果与前次检测的结果完全一致,重复性好.结论 相对现有的型特异性PCR分型、基因芯片、核酸序列分析等各种方法,反向点杂交技术用于HCV基因分型是一种准确有效和简便经济的方法.

    作者:唐文志;杨永强;黄小燕;戴小波;李宇雄;谭星蓉 刊期: 2009年第05期

  • 新型的变异甲型H1N1流感疫情爆发的防控

    2009年4月24日开始在墨西哥、美国等地接连爆发新型甲型H1N1流感(疫情之初称人感染猪流感)病毒疫情,这一疫情迅猛发展.截至北京时间4月29日晚,甲型HlNl流感疫情目前已蔓延至23国,其中10国已有确诊病例.

    作者:张宇锋;高志良 刊期: 2009年第05期

  • 乙肝病毒前S1抗原时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

    目的 利用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立乙型肝炎病毒前S1抗原的检测试剂盒.方法 应用双抗体夹心法建立乙肝preS1抗原TRFIA检测试剂盒,对试剂盒的各项性能指标进行评估.结果 对280份血清样本进行检测并与国产酶联免疫法试剂盒对比,结果显示自制试剂盒的特异性更好;200份正常人血清样本检测结果表明,该试剂盒的cutoff值=阴性对照荧光值×4.5.用自制质控品检测分析内和分析间的精密度分别为3.4%~7.8%,6.9%~8.4%;检测HBsAg及HBeAg无交叉反应.结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求,TRFIA法精密度和特异性有较大提高,可替代酶免法试剂盒.

    作者:胡妮娅;董志宁;周卓龙;李明;吴英松 刊期: 2009年第05期

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主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会