雷秀霞；李国豪；陈斌；李志芳；莫云丹
目的 构建携带人miR302和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒表达载体pFUM3GW.方法 Nhe Ⅰ和Not Ⅰ双酶切pmiR302ApE以释放miR302,接着补平酶切位点而获连接用miR302:BamH Ⅰ酶切携带EGFP的慢病毒载体pFUGW,接着补平酶切产物.并去磷酸化而获连接用载体片段,后使用DNA连接试剂盒(TaKaRa)中的Solution Ⅰ将其与连接用miR302连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,PCR筛选正向阳性克隆,随后将选定的含有阳性克隆的单菌落摇菌,提取质粒并行酶切鉴定及对插入的miR302测序.所构建载体命名为pFUM3GW.获pFUM3GW后,按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产;携带miR302和EGFP基因的慢病毒感染鼻咽癌细胞株C666-1、CNE1和5-8F以建立相应病毒感染体系.结果 PCR、酶切和测序证实成功构建了pFUM3GW,按标准程序生产的携带miR302和EGFP基冈的慢病毒上清高效率感染小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)及鼻咽癌细胞株C666-1、CNE1和5-8F.结论 成功构建携带人miR302和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUM3GW,为相关后续研究打下了良好基础.
作者：申红芬；贾俊双；肖高芳；姚志芳；肖东；姚开泰 刊期： 2009年第09期
目的 观察山稔子提取物对原代体外培养淋巴细胞DNA氧化损伤的保护作用.方法 原代培养24 h的脾淋巴细胞悬液,随机分为7组,其中5组细胞用不同浓度的山稔子提取物溶液预先处理60 min,再加入50 μmol/L的H2O2,H2O2染毒组直接加入相同浓度的H2O2,空白对照组加入等量的PBS溶液,7组细胞共同在4℃下染毒20 min,收获细胞同时进行单细胞凝胶电泳,计算DNA迁移的细胞率和总彗星长度.结果 H2O2可致原代培养脾淋巴细胞的DNA严重损伤,而山稔子提取物能不同程度地降低H2O2诱导产生的DNA损伤,在10、50、100 μg/mL的浓度下.彗星细胞出现率从阳性对照组的100%分别降低为85%、65%和30%(P分别<0.05、0.01、0.01),总彗星长度也从对照组的(52.82±6.42)μm,逐渐降低为(43.68±5.59)μm、(35.80±8.75)μm、(25.35±4.32)μm(P分别<0.05、0.01、0.01).结论 山稔子提取物具有抗氧化作用,能在一定浓度范围内保护细胞显著降低氧自由基对DNA的氧化损伤.
作者：张慧敏；柯跃斌；黄永霞；周丽；耿艺介；皮敏 刊期： 2009年第09期
环介导等温扩增技术应用4条不同的引物特异地识别目标基因上的6段区域,在一个恒温的环境中进行链置换反应,是一种简单、快速、特异、敏感并且低成本的对已知基因的检测方法.本文就环介导等温扩增技术的原理及其在寄生虫分子诊断和检测中的应用作一综述.
作者：李淳；陈青松；蔡先全；朱兴全 刊期： 2009年第09期
目的 分析韶关市近6年来新生儿先天件甲状腺功能低下症(CH)的筛查情况和发病率.方法 新生儿出生72 h充分哺乳6次后足跟采血,滴在特殊的滤纸(美国S＆S903滤纸)片上,用时间分辨荧光免疫分析法测定促甲状腺素浓度.TSH≥10.0 U/L,通知原采血单位立即召回再采血复杏.结果 仍超过10.0 U/L,由本院直接召同抽血确诊.结果 6年共筛查新生儿77 220例,可疑阳性患儿572例,确诊33例,发病率为1/2 340.结论 韶关市新生儿CH发病率高于全国统计率,可能与环境因素及饮食习惯有关.
作者：陈亚军；黄智勇 刊期： 2009年第09期
目的 建一种下颌骨单侧前上牵引的大鼠动物模型,以模拟正畸不对称牵引治疗和关节外因素造成的颞下颌关节病,并研究其颢下颌关节盘和髁状突受力后表面超微结构的改变.方法 利用外科手术方法在24只SD大鼠左侧下颌角与同侧颧弓前区置入镍钛拉簧,手术不破坏关节区.对照组8只,在下颌角和颧弓区分别用钢丝结扎,但不放置弹簧.弹簧施加的牵引力分别为120 g和40 g,使下颌骨受到前上方向的持续牵引力,在手术后3、7、14、28 d安乐死法处死动物.关节盘和髁状突进行扫描电镜榆查.结果 本实验成功建立了下颌骨偏移导致颢下颌关节改变的大鼠动物模型.相对于对照组,实验组的加力侧和对照侧颢下颌关节均有不同程度的病理变化.关节盘病变较轻,髁状突病变以轻力组对照侧为重.结论 下颌骨单侧前上牵引的大鼠动物模型可以部分模拟关节外不对称因素造成的颞下颌关节改建和病变:包括嚼肌功能紊乱、单侧的颌而肌肉挛缩、疤痕收缩以及正畸不对称牵引治疗等.
作者：许跃；吴拓江；陈扬熙 刊期： 2009年第09期
目的 了解湖北省电力系统职工血吸虫病感染状况,为评价和制定防治策略提供依据.方法 用血清免疫学方法,从34 051名受检者血清中筛查日本血吸虫病阳性病例;阳性者用B超检查肝脏病变.结果 34 051名受检者血清中筛查出日本血吸虫病阳性者775例,感染率为2.28%.其中,荆州地区的感染率高,为7.15%;除武汉市以外,其他接受调查的各地级市电力系统职工也有不同程度的血吸虫感染,但感染率均低于2%.对血清阳性者进一步作B超检查发现,血吸虫肝病者419人,占阳性人数的54.1%.与2004年的调杳结果相比,各地的血吸虫病感染率有明显下降.结论 湖北省电力系统职工血吸虫病防治工作效果明显,但还须加强.
作者：张冬妮 刊期： 2009年第09期
目的 克隆奶牛主要过敏原β-乳球蛋白(BLG)基因及其原核表达载体的构建.方法 RT-PCR克隆奶牛主要过敏原BLG的全长基因,根据序列设计带有酶切位点的特异性引物,扩增奶牛BLG基因的完整开放阅读框,与pET-28a载体连接,构建原核表达载体.结果 克隆了奶牛主要过敏原BLG基因,且构建了其原核表达载体.该基因含有长度为537 bp的开放阅读框,编码178个氨基酸.该蛋白质的相对分子质量为19 883,等电点为5.14(GenBank数据库中的登录号为EU883598).序列同源性分析发现其与数据库中已知的BLG基因同源性很高.结论 成功克隆了奶牛主要过敏原BLG基因及其原核表达载体的构建,为进一步奶牛主要过敏原BLG的重组表达和免疫活性鉴定等奠定基础.
作者：邬玉兰；刘志刚；陈小文 刊期： 2009年第09期
目的 研究7～17岁儿童生长激素分泌水平,并探讨血清铁、血清锌和血铅含量对生长激素分泌的影响.方法 采取分层整群抽样对济宁市744名7～17岁青少年儿童,空腹采集静脉血5 ml,运用放射免疫法测定血清生长激素含量,分光光度法测定血清铁含量,电位溶出法测定血清锌和全血中铅的含量.结果 男、女童生长激素分泌的突增年龄分别为11岁和9岁;9～10岁年龄段女童分泌量显著高于男童,12岁以后男童分泌水平反超女童;随着血清铁含量的增加,生长激素分泌量呈逐渐增大趋势,低、中、高3个血清铁含量组生长激素分泌量差异有统计学意义(F=18.78,P<0.05);锌充足组生长激素分泌量高于缺乏组,差异有统计学意义(t=9.338,P<0.01);随着血铅含量增加,生长激素分泌水平逐渐降低,经方差分析显示:相对安全组、超标组和高铅组生长激素分泌量差异有统计学意义(F=6.68,P<0.05).结论 女童生长激素分泌的突增期早于男童;血清中铁、锌含量的增加能促进生长激素的分泌,血铅的增加则抑制生长激素的分泌.
作者：张璟；王文军；李晶；孔庆胜 刊期： 2009年第09期
目的 通过检测现症生殖器疱疹(genital herpes,GH)病人皮损部位的单纯疱疹2型病毒(HSV-2)载量,并检测其细胞免疫功能,分析GH患者HSV-2病毒载量与细胞免疫功能的相关性.方法 采用荧光定量聚合酶链反应(fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)定量检测28例现症GH患者皮损部位HSV-2 DNA载量,采用流式细胞计数的方法监测28例现症病人外周血具有分泌活性的Th及Tc所占比例,运用直线相关回归方法分析现症GH患者病毒载量与细胞免疫功能的相关性.结果 ①GH患者皮损内疱液HSV-2检出率为100%,病毒载量为(6 190 714±1 962 085)拷贝/mL.HSV-2病毒载量与患者复发次数呈显著正相关(P<0.05).②GH组Th1、Tc1细胞数和Th1/Th2、Tc1/Tc2比值均明显低于对照组(P<0.01),而Th2细胞数显著高于对照组(P<0.01).GH患者皮损HSV-2病毒载量与患者外周血Th1、Tc1细胞数和Th1/Th2、Tc1/Tc2比值呈显著的负相关,与Th2细胞数呈显著正相关.结论 GH患者存在明显的细胞免疫功能抑制及Th、Tc细胞亚群分化失衡;GH患者的细胞免疫功能抑制可能是由于外周血T淋巴细胞亚群的变化和NK细胞减少,以及Th、Tc细胞亚群分化失衡造成,这种状态不利于机体抑制病毒复制和增殖,造成GH反复发作.
作者：林路洋；李常兴；曹开源；张锡宝；武明昌；颜景兰；李嘉彦；毕超；梁艳华；何玉清；宋卫忠 刊期： 2009年第09期
目的 了解医学生对狂犬病知识的认知情况,为进一步开展健康教育和行为干预提供依据.方法 通过分层随机抽样对广州某高校240名医学本科生进行问卷调查.结果 共回收有效问卷213份,仅58.7%的医学生知道狂犬病病死率接近100%.传播途径方面知晓率为64.8%～90.1%,了解伤口处理程序的学生占54.0%.医学生狂犬病相关问题平均得分13.77分,总及格率为65.7%,Logistic回归分析发现男生及格率高于女生,低年级及格率低于高年级(P=0.012、0.000,OR=2.365、0.087).医学生健康教育需求率为76.3%～90.6%.结论 医学生对狂犬病有一定了解,但在传播途径、伤口处理、预防控制等方面存在误区和盲点,且健康教育需求率高,社会及高校应加强狂犬病知识的宣传教育.
作者：吴蒙；方秀珠；陆家海 刊期： 2009年第09期
目的 掌握广州市越秀区食品中化学污染物的现状.方法 随机抽取越秀区内部分市场、超市及餐饮企业的各类食品开展金属及有害元素、甲醛、抗生素、农药、添加剂等30余项污染物的检测.结果 2007-2008年的监测结果显示,铅含量平均合格率为95.28%,粮食和皮蛋合格率低,为87.5%,水产品镉的合格率为85%;鸡蛋的土霉素榆出率为66.67%.禽畜肉中四环素、土霉素和氯霉素检出率分别为27.27%、15.91%和4.55%;保鲜食品甲醛的检出率高,达76.19%,水发食品中甲醛平均含量为538.64 mg/kg,检出率为66.67%:水产中六六六的检出率为36.11%,其他食品中均未检出农药;乳制品中苯甲酸的超标率为28.57%:凉拌菜和熟肉中存在违规添加胭脂红、柠檬黄、日落黄的现象,熟肉中柠檬黄的超标率为7.84%.结论 越秀区部分食品受到铅、甲醛、抗生素及添加剂的污染,存在食品安全的风险.应加大监督监测的力度.
作者：曾玉梅；朱紫杭；卢嘉明 刊期： 2009年第09期
目的 了解男性泌尿生殖道感染的病原学分布,为男性泌尿生殖道感染的预防和治疗提供可靠依据.方法 对2 123例男性泌尿生殖道标本的微生物学检验进行回顾性总结.结果 2 123例男性泌尿生殖道标本中共检出病原菌1 082株,检出率为50.96%,其中解脲支原体检出率高,为24.30%.所有送检标本中,尿道拭子标本的病原菌检出率高,为60.09%,混合感染率为12.74%;精液标本中无乳链球菌检出率明显高于前列腺液(P<0.05).结论 解脲支原体是男性泌尿生殖道感染的主要病原菌,男性泌尿道标本的病原学检查以尿道拭子为宜,男性不孕是否与无乳链球菌的感染有关还有待进一步研究.
作者：汤学夫；张水兰；何琴；蔡毅华 刊期： 2009年第09期
目的 了解重庆市6个示范村降氟除氟技术措施实施效果,为降氟除氟技术措施的推广应用提供科学依据.方法 对6个示范村降氟除氟技术设施进行质量抽查,检查8～12岁儿童氟斑牙、成人氟骨症病情,检测空气氟和尿氟,测试居民和儿童地氟病防治知识知晓情况.结果 6个示范村炉灶改造落实率为96.76%.炉改造合格率为97.0%,炉正确使用率为98.0%;灶改造合格率为97.7%.灶正确使用率为96.7%.儿童氟斑牙检出率为67.00%,缺损率为10.40%,氟斑牙指数为1.49;成人氟骨症无变化.居民与学生地氟病防治知识知晓率分别为86.4%、96.9%.空气氟旺火期0.005 9 mg/m<'3>,封火期0.002 8 mg/m<'3>.尿氟检测306份,中位数为0.69 mg/L.结论 在课题实施1年后,示范村炉灶落实率、炉灶合格率、炉灶正确使用率显著提高,降氟除氟技术措施实施达到预期效果.
作者：晏维；杨伟；黎华君；黄坤；王豫林 刊期： 2009年第09期
目的 评价头孢西丁和拉氧头孢低密度菌落法检测耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的可靠性和临床实用性.方法 临床收集的93株凝固酶阴性葡萄球菌(CNS),按法国生物学会(CASFM)推荐的头孢西丁和拉氧头孢30μg低密度菌落法检测MRCNS,并与mecA基因PCR扩增法进行比较.结果 以mecA基因PCR扩增法为金标准,其中MRCNS 56株(阳性率60.2%),低密度菌落法头孢西丁的敏感性和特异性分别为94.6%和100%,拉氧头孢的敏感性和特异性分别为100%和97.3%.结论 头孢西丁和拉氧头孢低密度菌落法是鉴定异质性MRCNS的良好方法.
作者：唐晓华；潘树根；江镜全；安薇；徐霞 刊期： 2009年第09期
Toll样受体在抗病原微生物感染和调节固有免疫和获得性免疫中起着重要的作用,是连接同有免疫与获得性免疫的重要桥梁.TLRs在乙型病毒性肝炎中的作用复杂,以其特异的模式识别方式和相互调节的网络反应参与慢性乙型肝炎、慢性重型肝炎的发病.
作者：吴红；吴晓蔓 刊期： 2009年第09期
目的 分析辖区内住院病人疾病谱,了解居民患病的主要模式、对卫生服务需求的变化情况及其特点.方法 将辖区医院1996-2006年住院病历进行综合性分析.结果 1996-2006年辖区内医院住院人次数呈上升趋势,从1996年的2 232人次,上升至2006年的18 666人次,11年间增长736.29%.目前导致居民住院的主要健康问题是损伤和中毒,妊娠、分娩和产褥期健康问题,呼吸系统疾病,消化系统疾病.在损伤和中毒类疾病中,手、腕损伤居首位,占该类疾病的44.46%,占所有住院人次的13.20%.结论 应根据住院病人疾病谱,针对性地提高公共卫生和医疗救治服务的水平,扩大服务范围;同时应进一步了解损伤类疾病的数量和构成比不断上升的原因,并采取必要的控制措施.
作者：刘义；郑庆鸣；王铁强；詹劲基；邰昌松 刊期： 2009年第09期
胸苷激酶(TK,ATP:thymidine 5'-phosphotransferase,EC.2.7.1.21,简称TK)是.DNA合成过程中的关键酶之一,在ATP和Mg2+参与下,催化脱氧胸苷(TdR)为脱氧1-磷酸胸苷酸(dTMP).TK在人类细胞中以两种同功酶形式存在:细胞质胸苷激酶(TK1)和线粒体胸苷激酶(TK2).TK1与DNA复制密切相关,在细胞周期G1期含量较低,S期逐渐升高,到G2期高,临床研究证明,TK1在95%的恶性肿瘤细胞中都有升高,故TK1被认为是一种极具生命潜力的细胞增殖标志物,它在肿瘤早期发现、肿瘤疗效评估、肿瘤预后判断等方面都有广阔的临床应用前景.有鉴于此,本文就TK1在肿瘤疾病巾的应用研究作一简要综述.
作者：邓日辉；陈曲波 刊期： 2009年第09期
目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者在服用拉米夫定后发生YMDD变异与否其HBV DNA与HBeAg定量值之间是否存在相关关系.方法 聚合酶链反应(PCR)荧光定量法测定CHB患者治疗前后的HBV DNA、YMDD变异,同时微粒子酶免疫分析法检测其HBeAg定量值.结果 218份标本同时检测HBV DNA和HBeAg定量值,对两指标前后两次的升降率进行相关性分析,发现无显著相关性(r=0.3153,P>0.05).12例发生YMDD变异(变异组)和25例YMDD野生型(野牛组)发生HBeAg血清转换者分别为3例和15例,差异有统计学意义(X2=3.976,P<0.05);变异组和野生组HBV DNA对数值分别为(4.15±1.78)和(2.72±1.58),差异有统计学意义(P<0.01);变异组和野生组HBV DNA、HBeAg定量值分别做相关性分析,发现变异组r=0.5552,有显著相关性(P<0.05),野生组r=0.2683,无显著相关性(P>0.05).结论 拉米夫定抗病毒治疗过程中HBV DNA和HBeAg滴度变化无显著相关性,YMDD变异组血清转换率和持续转换率明显低于无变异组,HBV DNA和HBeAg始终维持在较高水平.
作者：雷秀霞；李国豪；陈斌；李志芳；莫云丹 刊期： 2009年第09期
<分子医学技能>课程涵盖了免疫学、生物化学及分子生物学多项实验技术,是一门实用性极强的基础医学实验学科.为了使免疫学与生物化学实验教学更好地融合在一起,利用学生业余科研探索出免疫学和生物化学的综合性实验项目,使学生在系统学习和掌握基本技术的同时,能够综合地分析实验结果,及时联系医学应用,既提高了学生的学习兴趣.又培养学生的动手能力、应用能力和独立工作能力的综合性创新能力.
作者：袁广卿；周俊宜；骆晓枫；黄小荣；徐霖；李苏华；沈泳芝；皮艳娜；乔中原 刊期： 2009年第09期
目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)对鼠肌成纤维细胞(C2C12细胞)分泌膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)的影响,探讨其内在机制.方法 用不同浓度的TGF-β1(0、1、5、10 ng/mL)干预C2C 12细胞5h,200 pmol/L siRNA-smad3转染C2C12细胞24 h,用Western blot和Northern blot方法测定MT1-MMP及其mRNA表达.结果 0、1、5、10 ng/mL TGF-β1干预C2C12细胞5 h,Western blot半定量检测MT1-MMP的结果分别为2.86±0.28、2.05±0.31、1.60±0.21、1.02±0.24,F=224.9,P<0.01;Northern blot定性结果显示,mRNA条带显示逐渐变弱.5 ng/mL TGF-β1干预C2C12细胞4、12、24 h,Western blot半定量检测结果分别为1.02±0.29、0.80±0.21、0.4±0.12,各时间点值比较,均P<0.05.Northern blot定性结果显示,mRNA条带显示随时间延长而逐渐变弱.200 pmol/L siRNA-smad3转染C2C12细胞24 h,再用5 ng/mL TGF-β1干预C2C12细胞5 h,半定量Western blot检测结果显示:内对照组0.82±0.12(siRNA-control+5 ng/mL TGF.131)、空白对照组1.61±O.21(siRNA-control)、实验组1.84±0.23(siRNA-Smad3+5 ng/mL TGF-β1),内对照组和实验组比较差异有统计学意义(P<0.05);Northern blot定性结果显示:MT1-MMP mRNA表达在实验组和空白对照组较强,而内对照组较弱.结论 TGF-β1抑制鼠C2C12细胞分泌MT1-MMP,呈剂量和时间依赖性:siRNA阻断Smad3表达可消除TGF-β1对MT1-MMP的抑制作用.
作者：朱萍；邓长柏 刊期： 2009年第09期
热带医学杂志
主管:广东省科学技术协会
主办：广东省寄生虫学会 中华预防医学会
