学术投稿

枯草杆菌芽孢抵抗胃肠道环境的耐性评估

周珍文;胡旭初;邓秋连;马长玲;陈晓湘;胡凤玉;徐劲;余新炳

关键词:枯草杆菌, 芽孢, 耐性, 口服疫苗
摘要:目的 对益生菌一枯草杆菌芽孢进行耐性评估,为研制口服枯草杆菌芽孢载体疫苗奠定基础.方法 采用耗竭法,DSM培养基长时间振荡培养(24 h)获得芽孢,使用pH 2.0盐酸胃蛋白酶液模拟胃液,胆酸盐、胰液素混合液模拟肠液,对枯草杆菌芽孢进行体外耐受实验.结果 在DSM培养基中,80%~90%的枯草杆菌WB600可形成芽孢,每升DSM液所生成芽孢约1×1011.在模拟胃液中1 h后,仅0.0024%枯草杆菌WB600繁殖体细菌仍成活,大肠杆菌JM109活力完全丧失,而枯草杆菌芽孢基本不受影响,93.3%仍成活.在模拟小肠环境中3 h后,枯草杆菌WB600繁殖体细菌活力显著降低(仅0.0013%存活),枯草杆菌芽孢基本不受影响(92%仍存活),而大肠杆菌JM109有一定量的增殖.结论 枯草杆菌芽孢能耐受模拟胃肠道环境,有望成为新型的口服疫苗载体.
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  • 鼻咽癌中上皮间充质改变现象观察

    目的 观察鼻咽癌中上皮间充质改变(EMT)现象,初步探讨上皮间充质改变在鼻咽癌侵袭转移中的作用.方法 对58例鼻咽癌和29例鼻咽黏膜慢性炎免疫组化SP法检测Vimentin抗体,根据结果.Vimentin阳性病例再用相同的方法分别检测E-cadherin、β-catenin和Snail的表达.结果 58例鼻咽癌中8例边缘部位癌细胞Vimentin阳性表达,29例慢性炎上皮细胞均为阴性(P=0.037).在8例阳性病例中.Vimentin阳性的区域癌细胞E-cadherin染色明显弱于Vimentin阴性部位,甚至呈阴性;Snail在肿瘤周边区的阳性细胞数量明显多于中央区,阳性强度也强于中央区;β-catenin在肿瘤中央区为细胞间连接部位膜阳性,周边区部分细胞,尤其是散在于间质中单个癌细胞呈现阳性表达向胞质胞核内移现象.结论 鼻咽癌在侵袭和转移过程中存在EMT现象,EMT现象的发现为研究鼻咽癌转移机制提供了新的理论基础,为鼻咽癌的治疗提供了新途径.

    作者:江庆萍;王爽;邹桂华;方唯意;姚开泰 刊期: 2008年第03期

  • 广州市一起登革热家族聚集性暴发事件的调查与分析

    目的 探讨登革热家庭聚集性发病的流行病学特点及传播效率,为今后进行有效的预防和控制登革热暴发提供参考.方法 采用现场流行病学调查方法对广州市一起登革热家庭聚集性暴发事件进行调查和分析:采用ELISA、RT-PCR和病毒分离的方法对标本进行检测.结果 2006年8月广州市荔湾区发生一起登革热家庭聚集性暴发事件,该家族15名家庭成员先后共有6人发病,罹患率40.0%,其中6例患者登革热抗体IgM或IgG阳性3例,病毒分离阳性3例,荧光PCR检测阳性者1例,基因序列测序和病毒分离结果终确定为登革I型病毒.结论 根据临床表现、实验室检测结果以及流行病学调查,虽然该家族部分患者登革热抗体为阴性,但病例发病均在一个长潜伏期内,因此可以确定该家族发生了登革热聚集性暴发,荔湾区龙津中路龙兴里有可能是共同感染地,感染来源不明,感染时间为家庭聚会日可能性大.

    作者:罗雷;范健文;杨丽莉 刊期: 2008年第03期

  • PA28γ蛋白原核表达纯化及其多克隆抗体制备

    目的 蛋白酶体激活亚单位3(PA28γ)的表达、纯化及其多克隆抗体的制备.方法 利用pGEX-4T-1原核表达系统表达PA2γ蛋白,经T-A克隆、亚克隆至pGEX-4T-1表达载体;将重组质粒转化到大肠杆菌BL-21-STAR(DE3),诱导表达PA28γ蛋白,通过Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化融合蛋白(GST-PA28γ);并用其免疫BALB/c小鼠制备多抗血清,对表达产物和多抗血清进行Western-blot鉴定.结果 成功构建原核表达质粒PA28γ/pGEX-4T-1,且测序正确;获得高纯度的PA28γ蛋白及其高效价的多克隆抗体血清.并得到Western-blot证实.结论 成功利用基因重组技术制备了PA28γ蛋白和抗PA28γ多克隆血清,为该蛋白的生物学功能研究奠定了基础.

    作者:赵玉梅;王穗海;潘华政;黄湘;李明 刊期: 2008年第03期

  • 3种根管冲洗液对根管内粪肠球菌的抗菌活性的体外研究

    目的 比较和分析次氯酸钠、氯已定和EDTA等3种根管冲洗液对离体牙根管内粪肠球菌的抗菌活性.方法 将已感染粪肠球菌的80颗离体前牙的根管标本随机分为4组,第1组用5.25%次氯酸钠冲洗,第2组用2%氯已定冲洗,第3组用17%EDTA冲洗,第4组作为阴性对照组用0.9%Nacl冲洗.冲洗前和冲洗后分别取样作细菌学培养.计算并采用单因素的方差分析比较各组之间菌落形成单位CFU的变化趋势.结果 4组根管内的粪肠球菌均显著减少.其中,1、2、3组之间差异无统计学意义(P>0.05),但第1、2、3组分别与第4组比较均有显著性差异(P<0.05),并且,前3组细菌减少量远大于第4组.结论 5.25%次氯酸钠、2%氯已定和17% EDTA等3种根管冲洗液对根管内粪肠球菌均有较好的抗菌效果,但三者均不能完全杀灭根管内粪肠球菌.

    作者:李海燕;徐学良 刊期: 2008年第03期

  • 阴道镜下高频电灼术联合α-2a干扰素凝膏治疗尖锐湿疣疗效分析

    目的 探讨阴道镜下高频电灼术联合重组人干扰素α-2a治疗尖锐湿疣(CA)的效果.方法 将165例CA分为3组,A组应用阴道镜下高频电灼术联合重组人干扰素α-2a;B组单纯采用阴道镜下高频电灼治疗:C组应用NS-FⅡ型多功能光谱治疗仪联合肌注重组人干扰素α-2a.结果 治疗后3~6个月A、B、C组复发率分别为0%、4.4%、65.4%;半年后人乳头瘤病毒(HPV)转阴率分别为93.5%、85.4%、43.8%,A组明显优于B组,B组明显优于C组,3组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 阴d道镜下高频电灼术联合重组人干扰素α-2a治疗CA可明显降低CA复发率和提高HPV转阴率.

    作者:肖翠红;杨小波 刊期: 2008年第03期

  • 成人麻疹的临床表现特征研究和分析

    目的 探讨成人麻疹的临床特征、发病率增加的可能原凶和预防措施.方法 回顾性分析本院2004年至2006年收治的158例成人麻疹患者的临床资料,总结成人麻疹患者在临床表现和实验室检查方面的临床特征.结果 成人麻疹患者临床症状严重,皮疹典型为充血性斑丘疹,科普利克斑(Koplik's spots)明显且持续时间长,常常合并肝脏和心肌损伤,并发症以支气管肺炎和心肌炎为主.结论 成人麻疹发病率增加可能与麻疹病毒基因变异,缺少麻疹疫苗(MV)的保护,早期麻疹暴露,人口流动性大,儿童广泛接种麻疹疫苗等因素相关.若能够对麻疹患者早期诊断、早期隔离、早期治疗,并对易感者进行广泛的麻疹疫苗接种,成人麻疹的发病率有可能降低.

    作者:梁惕湖;卢罗生 刊期: 2008年第03期

  • 人血清补体C3、C4定时散射比浊分析检测试剂的研制

    目的 建立人血清补体C3、C4定时散射比浊分析方法.方法 采用定时散射比浊分析法检测临床血清标本,并对试剂的各项性能指标进行评价.结果 补体C3试剂盒的测定范围为0.945~1.776 g/L,灵敏度为0.022 g/L,批内批间的精密度分别为2.5%~4.8%,5.4%~7.1%.样本中的游离血红蛋白、胆红素、甘油三酯等干扰物浓度达到10 g/L、600 mg/L、57 g/L时对检测结果无显著性影响,42份异常血样用自制试剂盒与进口Dade Behring试剂盒同时检测,其相关系数为0.985;补体C4试剂盒的测定范围为0.096~0.435 g/L,灵敏度为0.0014 g/L,批内批间的精密度分别为1.8%~2.2%,3.8%~5.2%.样本中的游离血红蛋白、胆红素、甘油三酯等干扰物浓度达到10 g/L、600 mg/L、24 g/L时对检测结果无显著性影响,42份异常血样用本试剂盒与进口Dade Behring试剂盒同时检测,其相关系数为0.991.结论 补体C3、C4散射比浊试剂盒各项指标均达到临床检测要求,与Dade Behring同类试剂测定结果有较好的相关性,在临床上有极大的应用前景,有望替代国外同类产品试剂盒.

    作者:杨洁霞;董志宁;吴英松;李明 刊期: 2008年第03期

  • 间日疟原虫乳酸脱氢酶的表达、纯化及免疫活性的鉴定

    目的 在大肠杆菌中表达间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白,对重组蛋白进行纯化并测定其免疫活性.方法 将构建的LDH/pGEX-4T-1重组菌BL21接种于LB培养基中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白的表达,重组蛋白纯化后免疫小鼠制备特异性血清,ELISA检测血清效价,Western-blotting鉴定其免疫活性.结果 重组质粒在大肠杆菌中表达PvLDH与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白,表达产物主要以包涵体形式存在,经复性、纯化后免疫小鼠,能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,ELISA法测效价为1:51200,Western-blotting结果显示该血清能特异性与间日疟和恶性疟患者全血发生反应,而不能与正常人起交叉反应.结论 PvLDH在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性和免疫原性.

    作者:孙莉;郝文波;吴英松;王穗海;李明 刊期: 2008年第03期

  • 广州市2003-2006年乙型脑炎疫情监测结果分析

    目的 分析广州市2003-2006年乙型脑炎流行情况,为乙型脑炎预防控制提供依据.方法 收集广州市2003-2006年的乙型脑炎疑似病例血清545份,用ELISA法检测乙型脑炎IgM抗体.结果 共测出乙型脑炎抗体阳性28例,病例多分布在城乡结合部,其中增城7例占25%,天河6例占21.43%,番禺5例占17.86%,花都3例占10.71%,黄埔2例占7.14%,白云2例占7.14%,从化2例占7.14%,芳村1例占3.57%.病例年龄以15岁以下儿童居多,占总数的92.86%.结论 建立乙脑监测系统,对重点高发地区的≤15岁以下儿童开展乙脑疫苗预防接种.

    作者:张伟;吴新伟;李向忠;狄飚;谭慧峰;鲁恩洁;何丽娟 刊期: 2008年第03期

  • 慢性乙型病毒性肝炎患者红细胞参数临床价值再评价

    目的 进一步探讨慢性乙型病毒性肝炎患者红细胞参数变化的临床意义.方法 测定200例慢性乙型病毒性肝炎患者及100例健康者的红细胞参数(Hb、MCV、RDW-CV)及其肝功能(ALT、TBIL、PT、γ-GT等),所得结果进行统计学分析.结果 随着肝功损害程度的加重,血红蛋白(Hb)逐渐降低,红细胞平均体积(MCV)和红细胞体积分布宽度(RDW-CV)逐渐升高,除轻度组的Hb、RDW-CV与对照组之间和重度组的RDW-CV与肝硬化组之间比较无统计学意义(P>0.05)外,其他各组的Hb、MCV、RDW-CV与对照组和各组之间两两比较均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).Hb与PT、γ-GT呈负相关,MCV、RDW-CV与P11、γ-GT呈正相关(P<0.05,P<0.01).结论 检测乙型肝炎患者红细胞参数有助于了解肝脏功能损害程度,对肝病的诊断、治疗和预后评估有重要意义.

    作者:王潭枫;林炳亮;符永玫 刊期: 2008年第03期

  • 青蒿琥酯治疗小儿脑型疟疾48例

    目的 探讨青蒿琥酯治疗小儿脑型疟疾的疗效.方法 脑型疟疾患儿89例,随机分成治疗组(48例)和对照组(41例);治疗组给予青蒿琥酯,对照组给予奎宁,观察7 d后的疗效.结果 7 d治愈率治疗组为91.67%,对照组为85.37%,差异无统计学意义(P>0.05);两组的退热时间分别为(26.1±10.2)h和(39.5±11.6)h,昏迷苏醒时间分别为(36.2±10.1)h和(59.7±12.5)h,差异均有统计学意义(P<0.01).对照组的副作用相对较大.结论 青蒿琥酯治疗脑型疟疾疗效好而迅速,副作用少,可以作为首选药.

    作者:霍开明 刊期: 2008年第03期

  • 分子遗传学数据分析和处理平台的设计与实现

    目的 开发一个在高性能计算机的Linux环境下运行,基于B/S模式的分子遗传学数据分析与处理平台.方法 以Apache HTTP服务器为平台的WEB服务器,采用Perl语言整合许多遗传学数据分析软件和工具包,针对不同的SNPs变异数据,以提示方式简化数据输入格式和参数设置,经平台处理的结果以表格、文本或图像格式输出.结果 该平台实现了连锁不平衡的计算和绘制、挑选标签SNP和疾病对照设计或传递不平衡设计的关联分析,以及对一些群体遗传数据的估计等功能,操作简单,数据分析速度快.结论 该平台作为一个整合的遗传学研究辅助工具,克服了当前遗传分析软件或工具包在操作使用方面的不足,为遗传学研究者提供方便.目前该平台正处于测试阶级,运行状态良好.

    作者:闫微;郭云波;王胜军;刘娜;邓亲恺 刊期: 2008年第03期

  • 枯草杆菌芽孢抵抗胃肠道环境的耐性评估

    目的 对益生菌一枯草杆菌芽孢进行耐性评估,为研制口服枯草杆菌芽孢载体疫苗奠定基础.方法 采用耗竭法,DSM培养基长时间振荡培养(24 h)获得芽孢,使用pH 2.0盐酸胃蛋白酶液模拟胃液,胆酸盐、胰液素混合液模拟肠液,对枯草杆菌芽孢进行体外耐受实验.结果 在DSM培养基中,80%~90%的枯草杆菌WB600可形成芽孢,每升DSM液所生成芽孢约1×1011.在模拟胃液中1 h后,仅0.0024%枯草杆菌WB600繁殖体细菌仍成活,大肠杆菌JM109活力完全丧失,而枯草杆菌芽孢基本不受影响,93.3%仍成活.在模拟小肠环境中3 h后,枯草杆菌WB600繁殖体细菌活力显著降低(仅0.0013%存活),枯草杆菌芽孢基本不受影响(92%仍存活),而大肠杆菌JM109有一定量的增殖.结论 枯草杆菌芽孢能耐受模拟胃肠道环境,有望成为新型的口服疫苗载体.

    作者:周珍文;胡旭初;邓秋连;马长玲;陈晓湘;胡凤玉;徐劲;余新炳 刊期: 2008年第03期

  • 92例大学生耐卡那霉素肠球菌的分离鉴定及其相关因素

    目的 分离鉴定健康大学生粪便中的耐卡那霉素肠球菌,并调查相关因素.方法 用卡那霉素ELB选择培养基分离培养92份健康大学生粪便中的肠球菌,调查他们的健康状况及生活习惯等.结果 共鉴定出21例携带卡那霉素抗性肠球菌,71例阴性.耐卡那霉素肠球菌的分离率与饮食辛辣的相关性具有统计学意义(X2=5.75,P<0.05);而与消化不良、胃肠不适和便秘的相关性无统计学意义(X2<3.84,P>0.05).结论 耐卡那霉素肠球菌的分离率与饮食辛辣相关,与消化不良、胃肠不适和便秘等无相关性,其机制及其临床意义有待进一步的研究和随访.

    作者:黄静丽;姜智晖;曾香玲;吴健仪;李文华;麦璟莹;苏丹红;李孜 刊期: 2008年第03期

  • 弓形虫缓殖子期特异抗原SAG2C基因的克隆、鉴定与生物信息学分析

    目的 克隆并鉴定弓形虫PRU株表面抗原SAG2C基因序列和cDNA序列,对比不同毒力弓形虫株(PRU、RH、ME49)中SAG2C基因序列,进行生物信息学分析.方法 根据SAG2C基因已知序列设计合成一对引物,应用PCR技术从Prugniaud(PRU)株弓形虫基因组DNA和总RNA中扩增SAG2C基因,克隆入pMD19-T载体并进行序列测定.应用DNAMAN软件、NCBI网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)分析3种虫株之间SAG2C基因的同源性;利用生物信息学网站ExPASy(http://us.expasy.org/)对获得的基因及推导出的氨基酸序列进行生物信息学分析.结果 PCR扩增得到弓形虫PRU株SAG2C基因及其全长cDNA序列,酶切及PCR鉴定获得了正确的重组质粒,测序结果表明,获得SAG2C基因序列1 225 bp,全长cDNA序列1 095 bp.编码364个氨基酸.同源性分析显示,弓形虫Prugniaud株和RH株SAG2C基因同源性为97.14%:Prugniaud株与ME49株cDNA序列同源性为96.89%;编码氨基酸序列同源性为92%.N端为信号肽,C端疏水序列预测它为糖基磷脂酰肌醇固着蛋白,存在13个潜在抗原表位及多个保守功能区域.结论 成功克隆了弓形虫缓殖子期特异抗原SAG2C基因序列及其全长cDNA序列,序列分析显示其为糖基磷脂酰肌醇固着蛋白.

    作者:程璐;陈晓光;吴焜;杨培梁 刊期: 2008年第03期

  • 雌激素对SLE模型小鼠脾脏细胞凋亡的影响及其机制

    目的 研究雌激素对系统性红斑狼疮(SLE)模型小鼠的脾脏细胞凋亡及其相关调控机制.方法 采用ConA活化的同系脾脏细胞诱导BALB/e小鼠SLE,同时肌注一定剂量的苯甲酸雌二醇.于第4周、第6周、第8周和第10周采用ELISA法检测血清雌二醇水平,TUNEL法检测脾脏细胞凋亡,免疫细胞化学法检测脾脏细胞Bcl-2和NFKB的表达.结果 与对照组比较,肌注雌激素的SLE模型小鼠脾脏细胞凋亡率明显降低.Bcl-2和NFKB的表达均增加(P<0.01).结论 雌激素抑制SLE模型小鼠脾脏细胞凋亡,可能是通过促进Bcl-2和NFKB的表达所致.

    作者:唐小云;鞠宝玲;张红军;李霞 刊期: 2008年第03期

  • 吲哚-3-甲醇对甲醛合次硫酸氢钠致小鼠急性毒性及精子畸形率的影响

    目的 确定甲醛合次硫酸氢钠(又名吊白块)半数致死剂量LD50,并了解吲哚-3-甲醇对吊白块LD50及对吊白块所致小鼠精子畸形的影响.方法 采用改进寇氏法测定吊白块LD50及联合应用吲哚-3-甲醇和吊白块后并持续给予吲哚-3-甲醇,观察吊白块LD50及精子畸形的变化.结果 吊白块NIH小鼠经口灌胃LD50为8 711 mg/kg·bw,联合应用吲哚-3-甲醇和吊白块可降低吊白块急性毒性(LD50为10 000 mg/kg·bw)(P<0.05),并可显著降低吊白块致精子畸形的发生(P<0.05).结论 根据国家标准评价,吊白块毒性分级属实际无毒级;持续摄入一定浓度水平的吲哚-3-甲醇可有效降低吊白块的急性毒性,且对低剂量吊白块所致精子畸形具有一定的预防作用.

    作者:周颖;朱伟;杜琰琰;张全新 刊期: 2008年第03期

  • MSCT增强扫描与三维重建技术对原发性肝癌合并肝动脉门静脉瘘的诊断价值分析

    目的 探讨MSCT肝脏增强扫描及肝动脉血管三维重建技术对原发性肝癌合并肝动脉门静脉瘘的诊断价.方法 回顾分析32例诊断为原发性肝癌合并动脉门静脉瘘患者的MSCT双期扫描与血管三维重建技术的影像学表现.血管三维重建方法有2种:表面遮盖成像(SSD)和大强度投影(MIP).结果 中央型肝动脉门静脉瘘5例,周围型肝动脉门静脉瘘27例.根据肝癌并动脉门静脉瘘患者的MSCT增强扫描表现,其程度分为3种:轻度13例,中度15例,重度4例.结论 MSCT肝脏增强扫描与三维重建技术是诊断与评价肝癌动脉静脉瘘的有效手段,具有相当的优越性.

    作者:张军华;吴铭;叶平;谢辉;高原智 刊期: 2008年第03期

  • 抗人hnRNP A1单克隆抗体的制备及在颅咽管瘤组织中的应用

    目的 制备核不均一核糖核蛋白A1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1,hnRNP A1)的单克隆抗体,探讨hnRNP A1蛋白的生物学功能.方法 利用重组hnRNP A1蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠.取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0进行常规融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗hnRNPA1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过ELISA、Western Blot和免疫组织化学实验等方法分别对其效价和特异性进行鉴定.结果 成功地建立了3株稳定分泌抗hnRNPA1的单克隆抗体杂交瘤细胞株.分别命名为E006、E009和E012.3株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1.3株单克隆抗体通过组织化学实验和Western Blot实验都能特异性地结合真核细胞内源性的hnRNPA1蛋白.结论 获得了效价高、特异性好的抗hnRNP A1蛋白的单克隆抗体,这为进一步研究hnRNP A1的生物学功能及它在癌发生事件中的作用奠定了基础.

    作者:王穗海;赵玉梅;黄湘;潘华政;李明;姚小艳 刊期: 2008年第03期

  • 一起发生在医院病房的诺如病毒胃肠炎的调查

    目的 对一起发生在某医院内科病区的群体性胃肠炎进行调查和分析.方法 应用现场流行病学调查方法进行调查,对标本进行ELISA检测.结果 共报告病例14例,包括7名住院病人和7名医护人员,在3人的粪便标本中检出诺如病毒抗原阳性.通过隔离治疗病人、加强消毒和卫生宣教等综合措施,疫情得到有效控制.结论 本次胃肠炎暴发疫情由诺如病毒引起,感染来源尚不明确.

    作者:蔡衍珊;刘于飞;沈纪川;王大虎;麦伟麟;屈新跃 刊期: 2008年第03期

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