学术投稿

人巨细胞病毒部分抗原基因的克隆及表达

姜永玮;吴英松;徐伟文;陈跃瑜;彭娟;李明

关键词:人巨细胞病毒, IgM, PCR, 克隆与表达
摘要:目的 克隆表达人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)特异性强的抗原决定簇基因,制备特异性抗原.方法 从感染HCMV的细胞上清液中提取病毒基因组DNA,用PCR扩增HCMVpp150(ppUL32)、gp52(UL44)、pp65(ppUL83)、ppUL80a蛋白IgM抗原决定簇编码区DNA序列,将其克隆至pMD-18T载体并测序,然后克隆至表达载体pGEX-4T-1诱导表达,采用免疫印迹法(Western blotting)检测表达产物的抗原性.结果 经序列测定各基因片段序列正确,并在pGEX-4T-1表达载体中得到了高效表达,表达的融合蛋白经Westernblotting和ELISA分析,具有良好的抗原性,能够与HCMV IgM阳性血清发生特异性反应.结论 通过基因工程技术可以有效地获取纯度较高、特异性强的HCMV抗原,为HCMV感染者的早期诊断提供检测用抗原.
热带医学杂志相关文献
  • STAg和霍乱毒素不同程序滴鼻免疫小鼠诱导抗弓形虫作用

    目的 观察弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)和霍乱毒素(choleratoxin,CT)佐剂不同程序滴鼻免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染能力,确定STAg和CT滴鼻免疫的佳程序.方法 BALB/c小鼠随机分为3组:1次、2次和3次免疫组,用20μgSTAg+1μgCT/只分别滴鼻免疫1次,2次或3次,前2次间隔2周,末次间隔1周.末次免疫后第14天,用4×104个速殖子/只灌胃攻击所有小鼠,观察小鼠健康及死亡情况,攻击后第30天处死,ELISA法检测血清IgG和粪便IgA,计数肝、脑组织内弓形虫速殖子,分离并计数派伊尔结(Peyer's patches,PP)和脾淋巴细胞数.结果 2次和3次免疫组小鼠存活率明显高于1次免疫组(P<0.05),肝、脑组织内虫荷显著低于1次免疫组(P<0.001),血清IgG和粪便IgA高于1次免疫组,PP和脾淋巴细胞数无显著性变化.结论 STAg和CT佐剂滴鼻免疫2次或3次能有效诱导小鼠抗弓形虫感染.

    作者:殷国荣;孟晓丽;张建红;申金雁;刘红丽 刊期: 2007年第03期

  • 32 046例住院患者医院感染的调查与分析

    目的 调查住院患者医院感染发病情况,分析其发病特点.有效预防和控制医院感染.方法 对2005年1月至12月32 046例患者医院感染发生的时间、年龄、部位、科室、菌种等资料进行回顾性调查.结果 32 046例住院患者发生医院感染1 128例,医院感染发生率为3.52%.主要感染科室:普通外科5.48%、烧伤科5.32%、心血管内科5.28%;主要感染部位:下呼吸道35.40%、上呼吸道18.68%、泌尿道12.05%;临床分离的致病菌中革兰氏阴性菌占61.8%、革兰氏阳性菌占22.9%、真菌占15.3%,其中大肠埃希氏菌占13.57%、铜绿假单胞菌占12.06%、金黄色葡萄球菌占9.55%.结论 医院感染的主要科室是普通外科、烧伤外科、心内科,主要部位是呼吸道和泌尿道,病原菌以革兰氏阴性杆菌为主,大肠埃希氏菌占首位.

    作者:李杰;冯捷;陈立明 刊期: 2007年第03期

  • 含结核分枝杆菌Ag85A基因的2型重组腺相关病毒的构建和免疫原性

    目的 构建含结核分枝杆菌Ag85A基因的2型重组腺相关病毒并初步研究其免疫原性.方法 采用PCR法从结核杆菌H37Rv株扩增Ag85A基因,将PCR扩增产物克隆于2型腺相关病毒(AAV-2)表达质粒pSNAV中,构建重组质粒pSNAV-Ag85A;用脂质体转染的方法将重组质粒转入BHK-21细胞中,G418筛选得到能表达目的基因混合细胞系BHK-Ag85A;用具有rAAV-2包装功能的辅助病毒感染BHK-Ag85A,纯化后得到rAAV-2-Ag85A;Western blotting检测重组病毒Ag85A基因在BHK-21细胞中的表达;rAAV-2-Ag85A免疫Balb/c小鼠,ELISA法检测血清中抗-Ag85A抗体,51Cr释放分析检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性.结果 PCR扩增的Ag85A基因唐列与GenBank公布的序列一致,纯化后得到的rAAV-2-Ag85A滴度为1×1012 virus particles/ml;Western blotting检测到rAAV-2-Ag85A在BHK-21细胞中能够表达出一相对分子质量为32 000的多肽;rAAV-2-Ag85A免疫的Balb/c小鼠,抗-Ag85A抗体的滴度可达1∶l 024,同时还可激发Ag85A特异性的CTL产生.结论 rAAV-2-Ag85A构建成功,rAAV-2-Ag85A免疫小鼠可以同时诱导体液和细胞免疫反应的出现.rAAV-2-Ag85A对于防止结核分枝杆菌感染,尤其是作为结核病的治疗性疫苗可能具有潜在的应用价值,值得进一步深入研究.

    作者:孙海峰;俞守义;欧程山;胡贵方 刊期: 2007年第03期

  • ELISA法检测江门地区性病门诊患者生殖支原体抗原

    目的 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测性病门诊患者泌尿生殖道生殖支原体(Mg)抗原,探讨江门地区性传播疾病(STD)门诊患者Mg感染状况.方法 采用Mg多克隆抗体,标记酶结合物,建立检测Mg抗原的双抗体夹心ELISA法,对性病门诊患者泌尿生殖道分泌物进行Mg抗原检测.结果 双抗体夹心ELISA法可检测到5μg/ml蛋白浓度,除肺炎支原体外与其他泌尿生殖道常见支原体和细菌无交叉反应;共检测了174例标本,Mg抗原阳性33例,阳性率为18.97%,其中男性和女性阳性率分别为19.88%和7.69%;男性患者中,非淋菌性尿道炎(NGU)、淋病、前列腺炎患者的Mg抗原阳性率分别为13.43%、62.5%和4.84%.结论 STD门诊患者存在Mg感染,应用双抗体夹心ELISA法检测Mg抗原具有一定的灵敏度,且具有快速、简便的特点,适合临床筛查Mg抗原.

    作者:黄澍杰;王蓓;赵季文 刊期: 2007年第03期

  • 广东省湛江市农村人群肠道蠕虫感染调查

    目的 了解湛江市农村人群肠道蠕虫感染现状.方法 随机采集村民新鲜粪便,用直接涂片法及饱和盐水浮聚法检查虫卵,用盐酸左旋咪唑驱虫法检查感染钩虫种类.结果 粪检190人,虫卵阳性78人,总感染率为41.1%.检出3种肠道蠕虫卵,其中钩虫感染率25.8%,蛔虫感染率12.1%,鞭虫感染率10.5%,有2种或3种虫卵阳性率为6.8%;不同地点各虫感染率不同;钩虫以50~70岁人群感染率较高,蛔虫、鞭虫以20岁以下人群常见;女性的钩虫感染率明显高于男性.药物驱虫后检获有十二指肠钩虫成虫、美洲钩虫成虫及雄性蛔虫,其中,十二指肠钩虫占钩虫比例87.4%,美洲钩虫占钩虫比例12.6%.结论 湛江市农村人群感染蛔虫、鞭虫及钩虫常见,其中以钩虫感染为严重.钩虫感染率较高与旱作生产生活方式密切相关.十二指肠钩虫在该地钩虫流行中占了重要地位.

    作者:彭礼飞;何天文;郑冼华;何庆丰;梁晓东 刊期: 2007年第03期

  • 弓形虫分子生物学诊断和基因型鉴定的研究进展

    弓形虫病是一种呈世界性分布的人兽共患寄生虫病,严重危害人体健康并给全世界的畜牧业造成巨大的经济损失.但弓形虫病缺乏特异性临床症状和体征,诊断较为困难.传统的检测方法如病原学诊断、免疫学检测等费时且不够稳定.而以核酸扩增技术为基础的分子生物学技术的迅速发展,如实时定量PCR(RTPCR)、巢式-pCR和PCR-RFLP等的应用,不仅为弓形虫病的诊断提供了快速、灵敏、特异及稳定的检测方法,而且通过对病原基因型的分析鉴定为弓形虫群体生物学、流行病学、疫苗研究及对基因型和疾病模式之间潜在的相关性研究等提供重要的依据.

    作者:张翰;廖申权;宋慧群;朱兴全 刊期: 2007年第03期

  • 滴金免疫渗滤法检测广州管圆线虫抗体的实验研究

    目的 建立一种检测广州管圆线虫抗体的简便、快速、敏感、特异的新方法.方法 以广州管圆线虫成虫抗原为包被抗原,金标记SPA为显色剂,建立检测广州管圆线虫抗体的滴金免疫渗滤法(DIGFA);并以ELISA平行检测比较.结果 用DIGFA检测广州管圆线虫实验感染鼠血清50份,其阳性检出率为96.0%,50份正常鼠血清的阴性符合率达100%,DIGFA分别检测蛲虫阳性鼠血清13份,绦虫阳性鼠血清11份和粪类圆线虫阳性鼠血清18份,前二者均为阴性,后者交叉反应率为5.6%;DIGFA与ELISA平行检测30份广州管圆线虫阳性鼠血清,两法符合率达96.7%.结论 DIGFA与ELISA有相似的敏感性和特异性,且具有简便、快速、不需特殊仪器设备等优点,是一种检测广州管圆线虫抗体的新方法.

    作者:曾肖芃;丁建祖;沈丽英;陈翠娥 刊期: 2007年第03期

  • 广州增城市一起输入性登革热暴发的流行病学调查分析

    目的 分析广州增城市2006年一起输入性登革热暴发的流行病学特征,为制定预防控制措施以及在暴发疫情中进行索源调查提供科学依据.方法 采用流行病学调查和回顾性病例搜索,对该起登革热疫情调查分析;采用间接免疫荧光法对病例血清进行登革热抗体检测;用布雷图指数(BI)进行蚊媒密度调查.结果 病例刘某为实验室确诊病例,无外出史;索源调查发现的病例黄某及其侄子血清登革热IgM、IgG均阳性,有疫区活动史,发病时间与刘某发病在一个潜伏期内.结论 该病例为增城市2006年首例报告登革热确诊的本地感染病例,感染来源为区外输入性;早期被误诊,传染源未被及时发现是导致本次疫情的重要原因;迅速灭蚊和消除伊蚊孳生地是控制疫情的有效措施;多部门参与、组织专业队及时扑救疫情是迅速控制登革热流行的主要原因.

    作者:李铁钢;刘于飞;秦鹏哲;陈雄飞;杨智聪 刊期: 2007年第03期

  • 降钙素原的克隆、表达及多抗制备

    目的 合成降钙素原的全长基因,表达出降钙素原的融合蛋白并制备多抗,为降钙素原(PCT)的功能研究及单抗制备提供有力的实验基础.方法 采用多引物人工一步合成基因技术合成降钙素原的全长基因,克隆至原核表达载体pGEX-4T-1表达出重组蛋白,将初步纯化的蛋白免疫小鼠制备多抗并进行Westernblot鉴定.结果 成功表达降钙素原重组蛋白并制备其多抗,Western blot证实所制备的PCT多抗可与所获得的融合蛋白和病人血清发生特异性反应.结论 成功表达降钙素原重组蛋白并制备其多抗,为明确降钙素原来源和病理生理作用的研究奠定了基础,以及为制备其单克隆抗体提供实验材料.

    作者:陈跃瑜;吴英松;徐伟文;王穗海;姜永玮;彭娟;李明 刊期: 2007年第03期

  • 东莞市2005-2006年突发公共卫生事件流行病学分析

    目的 了解东莞市突发公共卫生事件的流行病学特征,为预防控制及有效处理突发公共卫生事件提供科学依据.方法 对2005-2006年东莞市疾病预防控制中心报告的突发公共卫生事件数据、资料进行统计分析.结果 东莞市2005-2006年共报告突发公共卫生事件14起,传染病暴发疫情9起,占64.29%,食物中毒5起,占35.71%;发生在工厂的有8起(占57.14%)、中小学有5起(占35.71%)、幼儿园1起(占7.14%);4月份(5起)、12月份(4起)发生突发事件数分别占35.71%、28.57%;学生和民工是高发人群,年龄以4.5~14岁为主.结论 东莞市突发公共卫生事件主要发生在工厂、中小学、托幼机构,严重危害中小学生的身体健康和生命安全.

    作者:陈婉雯;刘艳璋;张泽武 刊期: 2007年第03期

  • 家蝇幼虫、蛹、成虫抗菌肽的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

    目的 分析家蝇幼虫、蛹、成虫的抗菌肽成分.方法 通过针刺感染大肠杆菌诱导家蝇各虫态产生抗菌肽,再经研磨、离心等步骤提取这些抗菌肽,用改进的聚丙烯酰胺凝胶电泳使其分离.结果 家蝇幼虫有7条带,成虫有5条,蛹只有4条.结论 家蝇幼虫和成虫的抗菌肽种类较蛹的多,且有一些小分子肽段,可能与其较强的抗菌效果有关;家蝇蛹处于相对静止期,其电泳图中抗菌肽条带较少,无较小的条带,抗菌效果可能较幼虫和成虫的差.

    作者:张庆华;李飞栋;赵瑞君;侯玉英 刊期: 2007年第03期

  • 28例妊娠期重型病毒性肝炎的临床研究

    目的 探讨妊娠期重型病毒性肝炎(以下简称妊娠重肝)的病原分型及临床特点.方法 回顾性分析28例妊娠重肝患者的临床表现及实验室资料.结果 本组病例病原感染率分别为:HAV 3.57%,HBV64.29%,HCV 7.14%,HDV 3.57%,HEV 25.00%,重叠感染率为28.57%;病死率为67.86%,妊娠并急性、亚急性及慢性重型肝炎的病死率分别为87.50%、80.00%、53.33%;早孕仅1例,存活;而中孕、晚孕并重型肝炎病死率分别为75.00%、68.42%;存活组和死亡组在凝血酶原时间、血清总胆固醇及肝脏萎缩的比较上有统计学差异(P<0.05);肝性脑病、感染、肝肾综合征、DIC、产后大出血发生率分别为78.57%、78.57%、50.00%、35.71%、25.00%;胎儿死亡率46.43%.结论 本组妊娠重肝以HBV感染常见,孕产妇及胎儿死亡率高;妊娠并重型肝炎转归与凝血酶原时间、血清总胆固醇、肝脏体积是否进行性缩小、伴并发症的数量有关.

    作者:朱建芸;陈幼明;谢仕斌;高志良 刊期: 2007年第03期

  • 梅州城区旅店业卫生现状调查

    目的 了解梅州城区旅店业卫生状况,为公共卫生提供科学依据.方法 依照<公共场所卫生管理条例>和<公共场所卫生管理条例实施细则>的要求,按<公共场所卫生监测技术规范>和<公共场所卫生标准检验方法>对37家旅店业进行调查.结果 城区37家旅店业均建立了健全的卫生管理制度,32家旅店业有较完善的洗涤消毒等卫生设施,客房各项卫生指标监测检验总合格率为96.70%.结论 城区旅店业卫生状况良好,卫生设施较完善,但管理上仍有欠缺,卫生管理制度落实率较低.

    作者:钟玉梅;李涛;巫峤;谢建志;李晓棠 刊期: 2007年第03期

  • 临床分离4 364株细菌的分布特征和耐药性变迁分析

    目的 了解2003-2005年分离的4 364株细菌的分布特征及耐药性变迁,为合理使用抗菌药物提供依据.方法 大多数分离细菌的鉴定和药敏试验利用BD Phoenix仪,少数利用手工鉴定和K-B法药敏试验.数据分析用WHONET 5.0软件.结果 葡萄球菌对万古霉素和替考拉宁的敏感率一直为100%,对其他抗菌药物的耐药率大多逐年上升,甲氧西林耐药率也逐年上升,金黄色葡萄球菌从40.8%上升到61.6%,表皮葡萄球菌从69.7%上升到79.8%.G-杆菌合计,大多数抗菌药物的耐药率逐年升高,耐药率一直低于30%的为美洛培南、亚安培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦和头孢他啶.大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌体外产ESBLs的检出率一直居高不下,为29.5%~45.5%.结论 本院肠杆菌科产ESBLs比例、葡萄球菌甲氧西林耐药率和非发酵菌碳青霉烯类耐药率均较高,应加强抗菌药物的合理使用和采取有效的隔离措施以降低耐药率及多重耐药菌的扩散.

    作者:芮勇宇;耿穗娜;王前;裘宇容 刊期: 2007年第03期

  • 高压液相色谱分析法在β-地中海贫血筛查中的应用

    目的 研究高压液相色谱分析法(HPLC)在β-地中海贫血筛查中的应用价值.方法 对350例婚检、产检人员的血样分别运用HPLC、琼脂糖凝胶电泳及碱变性方法测定HbA2、HbF.结果 HPLC与Hb电泳测定HbA2,两者相关回归分析的结果,y=0.362+0.861x,相关系数为0.89,t检验:P>0.05;HPLC与抗碱实验测定HbF,两者相关回归分析的结果显示,y=0.138+0.951x,相关系数为0.98,t检验:P>0.05.结论 高压液相色谱分析法(HPLC)可以替代血红蛋白电泳及抗碱方法应用于筛查β-地中海贫血.

    作者:魏小平;徐霞;廖伟娇;张东梅;李云峰;吴颉 刊期: 2007年第03期

  • 撞击法和自然沉降法监测室内空气细菌总数捕获效果的研究

    目的 探讨自然沉降法和撞击法监测室内细菌总数的捕获效果.方法 使用自然沉降法(平皿暴露10 min)和撞击法(FA-1型撞击式空气微生物采样器)对课室、实验室、办公室同步采样;同时用撞击法以28.3 L/min分别进行1 min、10 min、15 min空气采样结果的监测.结果 撞击法和自然沉降法测得空气细菌总数间存在显著的正的线性相关关系;与自然沉降法比较,撞击法捕获空气细菌的效率更高(F方法=147.825,P=0.000);撞击法采样15 min时所采空气细菌总数下降(F=17.171,P<0.001).结论 撞击法的灵敏度更高,能客观地反映出不同清洁程度场所的室内细菌含量的差异;撞击法采样时间较长时,捕获空气细菌效率下降.

    作者:陈新宇;徐巧兰;李名钊;温倩茹;谢华凤;马婧;黄迪 刊期: 2007年第03期

  • 生物分泌抗菌物质研究进展

    分泌物是生物防御系统的组成之一,从原始的植物到细菌、真菌、两栖动物乃至高等级的哺乳动物,它们都能利用独特的分泌物来维持自身的菌群平衡及抵御外物尤其是病原微生物入侵.本文从生物分泌物抗菌物质的分类及生物学特性、抗菌机理、应用及展望几个方面对其进行了综述.

    作者:国果;吴建伟 刊期: 2007年第03期

  • 食品中沙门菌污染状况调查及VITEK微生物分析系统的应用效果评价

    目的 了解肇庆市食品中沙门菌的污染状况,建立食品中沙门菌的快速检验方法.方法 采用国标法(GB/T4789.4)对样品进行沙门菌检测,并应用VITEK 32全自动微生物分析系统对分离的可疑菌株进行鉴定.结果 监测4类120份样品,共检出沙门菌9株,检出率为7.5%,其中生肉类沙门菌检出率为20.0%,蔬菜类沙门菌检出率为5.0%,熟肉制品及水产品中均未检出沙门菌,VITEK与常规法鉴定结果相一致.结论 肇庆市生肉制品的沙门菌污染情况较严重,优势菌型为德尔卑沙门菌.VITEK全自动微生物分析系统可用于食品中沙门菌的快速检测.

    作者:黄雪珍;谭海芳;陈华 刊期: 2007年第03期

  • 游离雌三醇时间分辨免疫荧光分析法的建立

    目的 建立游离雌三醇(uE3)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法.方法 采用竞争抑制一步法建立检测uE3的TRFIA分析方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价.结果 该方法的灵敏度为0.14 nmol/L,线性范围为0.14~120 nmol/L,回收率为97.7%.分析内和分析间变异系数分别为1.6%~4.1%和4.4%~8.8%.与E2、孕酮和睾酮的交叉反应率分别为0.24%、0.36%和0.40%.149份血样用本试剂与进口的同类试剂同时检测,其相关系数为0.925.结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒.

    作者:蒋艺勤;汤永平;丁岚;李来庆;李明;吴英松 刊期: 2007年第03期

  • FQ-PCR测定HBV DNA与ELISA检测HBV-M相关性分析

    目的 探讨HBV DNA含量与HBsAgS/CO值之间的相关性.方法 分别用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测100例乙肝患者的HBV DNA含量和乙肝两对半,并记录HBsAg S/CO值.结果 100例乙肝患者HBV DNA含量对数值为(4.28±1.89),HBsAg S/CO值为(15.09±6.64),两指标间作相关性分析,r=-0.0156,P>0.05,无相关性.结论 HBV DNA是判断乙肝病毒复制的较准确、较直接的抗乙肝病毒疗效观察指标,而HBsAg S/CO值的高低与疾病的严重程度及疗效无关.

    作者:雷秀霞;李国豪;明凯华;陈小辉 刊期: 2007年第03期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会