学术投稿

降钙素原的克隆、表达及多抗制备

陈跃瑜;吴英松;徐伟文;王穗海;姜永玮;彭娟;李明

关键词:降钙素原, 融合蛋白, 多引物人工一步合成基因技术, 克隆
摘要:目的 合成降钙素原的全长基因,表达出降钙素原的融合蛋白并制备多抗,为降钙素原(PCT)的功能研究及单抗制备提供有力的实验基础.方法 采用多引物人工一步合成基因技术合成降钙素原的全长基因,克隆至原核表达载体pGEX-4T-1表达出重组蛋白,将初步纯化的蛋白免疫小鼠制备多抗并进行Westernblot鉴定.结果 成功表达降钙素原重组蛋白并制备其多抗,Western blot证实所制备的PCT多抗可与所获得的融合蛋白和病人血清发生特异性反应.结论 成功表达降钙素原重组蛋白并制备其多抗,为明确降钙素原来源和病理生理作用的研究奠定了基础,以及为制备其单克隆抗体提供实验材料.
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  • 高压液相色谱分析法在β-地中海贫血筛查中的应用

    目的 研究高压液相色谱分析法(HPLC)在β-地中海贫血筛查中的应用价值.方法 对350例婚检、产检人员的血样分别运用HPLC、琼脂糖凝胶电泳及碱变性方法测定HbA2、HbF.结果 HPLC与Hb电泳测定HbA2,两者相关回归分析的结果,y=0.362+0.861x,相关系数为0.89,t检验:P>0.05;HPLC与抗碱实验测定HbF,两者相关回归分析的结果显示,y=0.138+0.951x,相关系数为0.98,t检验:P>0.05.结论 高压液相色谱分析法(HPLC)可以替代血红蛋白电泳及抗碱方法应用于筛查β-地中海贫血.

    作者:魏小平;徐霞;廖伟娇;张东梅;李云峰;吴颉 刊期: 2007年第03期

  • 伯氏疏螺旋体与嗜吞噬细胞无浆体混合感染的实验研究

    目的 应用动物模型探讨蜱传病原体伯氏疏螺旋体和嗜吞噬细胞无浆体混合感染对组织螺旋体载量、莱姆关节炎严重性、宿主免疫功能的影响.方法 建立伯氏疏螺旋体和嗜吞噬细胞无浆体混合感染和伯氏疏螺旋体单一感染小鼠模型,在不同时间点研究各组小鼠组织中的螺旋体载量、关节炎严重性和血清IgG效价,并对数据进行统计学分析.结果 与单一感染组相比,在螺旋体感染后18 d和30 d,混合感染组小鼠组织螺旋体载量显著增高,关节炎明显严重,血清IgG效价显著偏低.结论 伯氏疏螺旋体和嗜吞噬细胞无浆体混合感染显著增加小鼠组织螺旋体载量、加重关节炎症状和病理改变,且抑制体液免疫功能.

    作者:宝福凯;Erol Fikrig 刊期: 2007年第03期

  • 人巨细胞病毒部分抗原基因的克隆及表达

    目的 克隆表达人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)特异性强的抗原决定簇基因,制备特异性抗原.方法 从感染HCMV的细胞上清液中提取病毒基因组DNA,用PCR扩增HCMVpp150(ppUL32)、gp52(UL44)、pp65(ppUL83)、ppUL80a蛋白IgM抗原决定簇编码区DNA序列,将其克隆至pMD-18T载体并测序,然后克隆至表达载体pGEX-4T-1诱导表达,采用免疫印迹法(Western blotting)检测表达产物的抗原性.结果 经序列测定各基因片段序列正确,并在pGEX-4T-1表达载体中得到了高效表达,表达的融合蛋白经Westernblotting和ELISA分析,具有良好的抗原性,能够与HCMV IgM阳性血清发生特异性反应.结论 通过基因工程技术可以有效地获取纯度较高、特异性强的HCMV抗原,为HCMV感染者的早期诊断提供检测用抗原.

    作者:姜永玮;吴英松;徐伟文;陈跃瑜;彭娟;李明 刊期: 2007年第03期

  • 28例妊娠期重型病毒性肝炎的临床研究

    目的 探讨妊娠期重型病毒性肝炎(以下简称妊娠重肝)的病原分型及临床特点.方法 回顾性分析28例妊娠重肝患者的临床表现及实验室资料.结果 本组病例病原感染率分别为:HAV 3.57%,HBV64.29%,HCV 7.14%,HDV 3.57%,HEV 25.00%,重叠感染率为28.57%;病死率为67.86%,妊娠并急性、亚急性及慢性重型肝炎的病死率分别为87.50%、80.00%、53.33%;早孕仅1例,存活;而中孕、晚孕并重型肝炎病死率分别为75.00%、68.42%;存活组和死亡组在凝血酶原时间、血清总胆固醇及肝脏萎缩的比较上有统计学差异(P<0.05);肝性脑病、感染、肝肾综合征、DIC、产后大出血发生率分别为78.57%、78.57%、50.00%、35.71%、25.00%;胎儿死亡率46.43%.结论 本组妊娠重肝以HBV感染常见,孕产妇及胎儿死亡率高;妊娠并重型肝炎转归与凝血酶原时间、血清总胆固醇、肝脏体积是否进行性缩小、伴并发症的数量有关.

    作者:朱建芸;陈幼明;谢仕斌;高志良 刊期: 2007年第03期

  • 梅州城区旅店业卫生现状调查

    目的 了解梅州城区旅店业卫生状况,为公共卫生提供科学依据.方法 依照<公共场所卫生管理条例>和<公共场所卫生管理条例实施细则>的要求,按<公共场所卫生监测技术规范>和<公共场所卫生标准检验方法>对37家旅店业进行调查.结果 城区37家旅店业均建立了健全的卫生管理制度,32家旅店业有较完善的洗涤消毒等卫生设施,客房各项卫生指标监测检验总合格率为96.70%.结论 城区旅店业卫生状况良好,卫生设施较完善,但管理上仍有欠缺,卫生管理制度落实率较低.

    作者:钟玉梅;李涛;巫峤;谢建志;李晓棠 刊期: 2007年第03期

  • 胎盘α1-微球蛋白的检测在诊断胎膜早破的价值

    目的 探讨阴道液中α1-微球蛋白(PAMG-1)定性检测诊断胎膜早破的价值.方法 分析62例胎膜早破病例和38例胎膜未破病例的阴道液中PAMG-1、pH和HCG检测结果.结果 PAMG-1检测胎膜早破的灵敏度、特异性和准确性分别为98.39%、100%和99.00%,阳性预测值为100%,阴性预测值为97.44%,灵敏度、准确度和阴性预测值明显高于pH和HCG方法,差异有显著性(P<0.01).结论 少量阴道液PAMG-1检测对胎膜早破的诊断优于pH和HCG,且同样具有简单、快速、无创伤、实用的优点.

    作者:廖启洪;吕程;潘柳吟 刊期: 2007年第03期

  • SARS冠状病毒M基因膜内区的克隆、表达与鉴定

    目的 对SARS冠状病毒M蛋白膜内部分(Mc蛋白)的基因(Mc区)进行克隆、表达及鉴定.方法 采用PCR技术从SARS-CoV GD322株M基因全长片段上扩增得到Mc区,克隆至pGEM-T载体.利用引物上的EcoRⅠ/XhoⅠ酶切位点切下Mc区插入至pET-32a(+)表达载体,转化原核表达系统BL21,表达His-融合蛋白,利用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行鉴定.结果 扩增的Mc区长度为360 bp,重组子经PCR,双酶切和测序鉴定,获得pET-32a(+)/Mc原核表达菌株并可进行高效表达,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot验证为相对分子质量约43 000的融合蛋白,与预期理论值相符.结论 实现了Mc蛋白的高效表达,为进一步研究SARS冠状病毒Mc蛋白的生物学作用奠定了基础.

    作者:刘志伟;胡族琼;赵卫;张文炳;龙北国 刊期: 2007年第03期

  • 北京市科普活动人群热带病健康知识现状和需求调查

    目的 了解北京地区一般人群对热带病健康知识了解的状况和需求,探讨一般人群健康教育的佳教育和服务模式.方法 采用科普活动现场随机抽样、现场问卷的调查方法,运用软件包进行统计分析.结果 对问卷所列11种常见热带病认知程度较高的是:广州管圆线虫病、麻风病、疟疾、登革热、血吸虫病,但高认知度也只达到所调查人群的50%.文化程度大学及以上与其他组人群相比,在大部分热带病的认知度上(P<0.05),差异有统计学意义:而对20~39岁年龄组与其他年龄组进行分析,只有一项结果显示显著性差异;在获取知识途径上,分析大学以上文化程度和20~39岁年龄组人群,通过网络、书籍、报刊获取知识比率较大.调查人群中有291(69%)人不了解也不知道北京热带医学研究所是专看热带病的医院.95%(399/420)的人认为很有必要开展热带病的健康普及教育.结论 相关部门应关注,向一般人群提供适宜的热带病健康教育普及、咨询和服务.

    作者:温艳;潘春枝;陈小华;张素辉;刘健;袁联潮 刊期: 2007年第03期

  • 32 046例住院患者医院感染的调查与分析

    目的 调查住院患者医院感染发病情况,分析其发病特点.有效预防和控制医院感染.方法 对2005年1月至12月32 046例患者医院感染发生的时间、年龄、部位、科室、菌种等资料进行回顾性调查.结果 32 046例住院患者发生医院感染1 128例,医院感染发生率为3.52%.主要感染科室:普通外科5.48%、烧伤科5.32%、心血管内科5.28%;主要感染部位:下呼吸道35.40%、上呼吸道18.68%、泌尿道12.05%;临床分离的致病菌中革兰氏阴性菌占61.8%、革兰氏阳性菌占22.9%、真菌占15.3%,其中大肠埃希氏菌占13.57%、铜绿假单胞菌占12.06%、金黄色葡萄球菌占9.55%.结论 医院感染的主要科室是普通外科、烧伤外科、心内科,主要部位是呼吸道和泌尿道,病原菌以革兰氏阴性杆菌为主,大肠埃希氏菌占首位.

    作者:李杰;冯捷;陈立明 刊期: 2007年第03期

  • 广州增城市一起输入性登革热暴发的流行病学调查分析

    目的 分析广州增城市2006年一起输入性登革热暴发的流行病学特征,为制定预防控制措施以及在暴发疫情中进行索源调查提供科学依据.方法 采用流行病学调查和回顾性病例搜索,对该起登革热疫情调查分析;采用间接免疫荧光法对病例血清进行登革热抗体检测;用布雷图指数(BI)进行蚊媒密度调查.结果 病例刘某为实验室确诊病例,无外出史;索源调查发现的病例黄某及其侄子血清登革热IgM、IgG均阳性,有疫区活动史,发病时间与刘某发病在一个潜伏期内.结论 该病例为增城市2006年首例报告登革热确诊的本地感染病例,感染来源为区外输入性;早期被误诊,传染源未被及时发现是导致本次疫情的重要原因;迅速灭蚊和消除伊蚊孳生地是控制疫情的有效措施;多部门参与、组织专业队及时扑救疫情是迅速控制登革热流行的主要原因.

    作者:李铁钢;刘于飞;秦鹏哲;陈雄飞;杨智聪 刊期: 2007年第03期

  • 撞击法和自然沉降法监测室内空气细菌总数捕获效果的研究

    目的 探讨自然沉降法和撞击法监测室内细菌总数的捕获效果.方法 使用自然沉降法(平皿暴露10 min)和撞击法(FA-1型撞击式空气微生物采样器)对课室、实验室、办公室同步采样;同时用撞击法以28.3 L/min分别进行1 min、10 min、15 min空气采样结果的监测.结果 撞击法和自然沉降法测得空气细菌总数间存在显著的正的线性相关关系;与自然沉降法比较,撞击法捕获空气细菌的效率更高(F方法=147.825,P=0.000);撞击法采样15 min时所采空气细菌总数下降(F=17.171,P<0.001).结论 撞击法的灵敏度更高,能客观地反映出不同清洁程度场所的室内细菌含量的差异;撞击法采样时间较长时,捕获空气细菌效率下降.

    作者:陈新宇;徐巧兰;李名钊;温倩茹;谢华凤;马婧;黄迪 刊期: 2007年第03期

  • 清远市无SARS病例地区人群SARS冠状病毒抗体血清流行病学调查

    目的 探讨清远市无SARS病例地区人群SARS冠状病毒(SARS-CoV)抗体水平.方法 采集本地区各县区不同年龄、不同职业的人群血液,用酶联免疫法检测血清中SARS-CoV抗体IgG.结果 共检测血清样本1 484份,SARS-CoV抗体IgG总阳性率为0.61%(9/1484),其中0~6岁和13~18岁年龄组SARS-CoV抗体IgG均为阴性,7~12岁年龄组的阳性率为1.82%(8/439),19岁以上年龄组的阳性率为0.10%(1/1009).在9份SARS-CoV抗体IgG阳性的血清样本中,1份为饮食服务业从业人员,阳性率为0.39%(1/257);其余8份为学生,阳性率为1.70%(8/471).结论 本地区人群SARS-CoV抗体水平比较低,低龄组0~12岁人群SARS-CoV抗体IgG阳性率高于高龄组13岁以上组人群的阳性率.提示SARS-CoV可能存在隐性感染、隐性传播和隐性感染聚集性.

    作者:陈丽萍;禤汝流;孙小康;罗文玲;刘皑莹;林燕锋;曹晓月;黄晋飞 刊期: 2007年第03期

  • 家蝇幼虫、蛹、成虫抗菌肽的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

    目的 分析家蝇幼虫、蛹、成虫的抗菌肽成分.方法 通过针刺感染大肠杆菌诱导家蝇各虫态产生抗菌肽,再经研磨、离心等步骤提取这些抗菌肽,用改进的聚丙烯酰胺凝胶电泳使其分离.结果 家蝇幼虫有7条带,成虫有5条,蛹只有4条.结论 家蝇幼虫和成虫的抗菌肽种类较蛹的多,且有一些小分子肽段,可能与其较强的抗菌效果有关;家蝇蛹处于相对静止期,其电泳图中抗菌肽条带较少,无较小的条带,抗菌效果可能较幼虫和成虫的差.

    作者:张庆华;李飞栋;赵瑞君;侯玉英 刊期: 2007年第03期

  • 应用人工神经网络技术诊断涂阴肺结核的研究

    目的 研究人工神经网络在涂阴肺结核诊断中的应用.方法 将全部研究对象随机分为建模样本和证实样本,再将建模样本分为训练样本及校验样本.利用训练样本筛选出对诊断涂阴肺结核有意义的单项参数指标来构建人工神经网络诊断模型,并用校验样本确定合适的网络结构,后用证实样本评价其泛化能力.结果 得到人工神经网络模型结构为(29-9-1)-BP型.该模型在证实样本ROC曲线下面积为(0.989±0.015),诊断准确率为93.10%,灵敏度及特异度分别为88.89%及100%.结论 (29-9-1)-BP型网络模型可作为涂阴肺结核的诊断工具,有良好的泛化能力,值得进一步探讨.

    作者:宋烨;杨本付;李芳;宋仰东 刊期: 2007年第03期

  • 慢性荨麻疹和肝炎病毒感染的相关性研究进展

    荨麻疹病因复杂,多种多样.近年来发现肝炎病毒感染不仅可以引起肝细胞的损伤,也可以引起肝外组织的损伤和相关症状,特别是乙型和丙型肝炎病毒感染,他们与慢性荨麻疹的发病也存在一定联系.本文的目的是系统的分析近年来国内外报道的慢性荨麻疹与乙型肝炎病毒及丙型肝炎病毒感染的相关性研究.通过临床表现和皮肤病理、皮肤免疫病理方面的调查研究,认为肝炎病毒感染,特别是乙型和丙型肝炎病毒感染,可能引起免疫复合物介导的肝外组织的损伤与免疫反应,与慢性荨麻疹的发生发展有相关性.

    作者:黄樱樱;陈明春 刊期: 2007年第03期

  • 滴金免疫渗滤法检测广州管圆线虫抗体的实验研究

    目的 建立一种检测广州管圆线虫抗体的简便、快速、敏感、特异的新方法.方法 以广州管圆线虫成虫抗原为包被抗原,金标记SPA为显色剂,建立检测广州管圆线虫抗体的滴金免疫渗滤法(DIGFA);并以ELISA平行检测比较.结果 用DIGFA检测广州管圆线虫实验感染鼠血清50份,其阳性检出率为96.0%,50份正常鼠血清的阴性符合率达100%,DIGFA分别检测蛲虫阳性鼠血清13份,绦虫阳性鼠血清11份和粪类圆线虫阳性鼠血清18份,前二者均为阴性,后者交叉反应率为5.6%;DIGFA与ELISA平行检测30份广州管圆线虫阳性鼠血清,两法符合率达96.7%.结论 DIGFA与ELISA有相似的敏感性和特异性,且具有简便、快速、不需特殊仪器设备等优点,是一种检测广州管圆线虫抗体的新方法.

    作者:曾肖芃;丁建祖;沈丽英;陈翠娥 刊期: 2007年第03期

  • 食品中沙门菌污染状况调查及VITEK微生物分析系统的应用效果评价

    目的 了解肇庆市食品中沙门菌的污染状况,建立食品中沙门菌的快速检验方法.方法 采用国标法(GB/T4789.4)对样品进行沙门菌检测,并应用VITEK 32全自动微生物分析系统对分离的可疑菌株进行鉴定.结果 监测4类120份样品,共检出沙门菌9株,检出率为7.5%,其中生肉类沙门菌检出率为20.0%,蔬菜类沙门菌检出率为5.0%,熟肉制品及水产品中均未检出沙门菌,VITEK与常规法鉴定结果相一致.结论 肇庆市生肉制品的沙门菌污染情况较严重,优势菌型为德尔卑沙门菌.VITEK全自动微生物分析系统可用于食品中沙门菌的快速检测.

    作者:黄雪珍;谭海芳;陈华 刊期: 2007年第03期

  • 降钙素原的克隆、表达及多抗制备

    目的 合成降钙素原的全长基因,表达出降钙素原的融合蛋白并制备多抗,为降钙素原(PCT)的功能研究及单抗制备提供有力的实验基础.方法 采用多引物人工一步合成基因技术合成降钙素原的全长基因,克隆至原核表达载体pGEX-4T-1表达出重组蛋白,将初步纯化的蛋白免疫小鼠制备多抗并进行Westernblot鉴定.结果 成功表达降钙素原重组蛋白并制备其多抗,Western blot证实所制备的PCT多抗可与所获得的融合蛋白和病人血清发生特异性反应.结论 成功表达降钙素原重组蛋白并制备其多抗,为明确降钙素原来源和病理生理作用的研究奠定了基础,以及为制备其单克隆抗体提供实验材料.

    作者:陈跃瑜;吴英松;徐伟文;王穗海;姜永玮;彭娟;李明 刊期: 2007年第03期

  • 东莞市2005-2006年突发公共卫生事件流行病学分析

    目的 了解东莞市突发公共卫生事件的流行病学特征,为预防控制及有效处理突发公共卫生事件提供科学依据.方法 对2005-2006年东莞市疾病预防控制中心报告的突发公共卫生事件数据、资料进行统计分析.结果 东莞市2005-2006年共报告突发公共卫生事件14起,传染病暴发疫情9起,占64.29%,食物中毒5起,占35.71%;发生在工厂的有8起(占57.14%)、中小学有5起(占35.71%)、幼儿园1起(占7.14%);4月份(5起)、12月份(4起)发生突发事件数分别占35.71%、28.57%;学生和民工是高发人群,年龄以4.5~14岁为主.结论 东莞市突发公共卫生事件主要发生在工厂、中小学、托幼机构,严重危害中小学生的身体健康和生命安全.

    作者:陈婉雯;刘艳璋;张泽武 刊期: 2007年第03期

  • 蟑螂重组变应原的研究进展

    根据近十年的国内外相关资料,本文对蟑螂重组变应原免疫学特性以及在临床诊断和治疗方法上的应用等方面进行了综述.

    作者:马慧;刘志刚 刊期: 2007年第03期

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