学术投稿

大鼠寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)基因的改造及在大肠杆菌中的表达

王海龙;王春芳;赵嘉惠;殷国荣;乔中东

关键词:寡霉素敏感相关蛋白, 亚克隆, 基因改造, 膜受体, ATP合成酶/ATP酶
摘要:目的通过将发生点突变的两个大鼠寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)基因进行改造,获得具有正确序列的OSCP基因,在大肠杆菌中表达并进行活性鉴定.方法通过限制性核酸内切酶和T4DNA连接酶将发生错义突变的两个OSCP基因的DNA克隆进行改造,获得具有正确核苷酸序列的OSCP基因;然后将该片段连接进原核表达载体pET-28c(+),构建成重组质粒PET-28c(+)-OSCP;用该重组质粒转化E.coli,转化子在37℃诱导表达相应的融合蛋白,通过Western-blot鉴定.结果酶切及测序显示对OSCP基因错义突变的纠正获得成功.酶切结果显示成功构建了原核表达载体pET-28c(+)-OSCP.IPTG诱导表达4 h后,SDS-PAGE及Western-blot显示诱导表达出分子量约23 000的大鼠寡霉素敏感相关蛋白,且该蛋白具有免疫活性.结论在国内初次表达出大鼠OSCP,表达产物具有免疫反应性,为OSCP的结构及功能研究奠定了基础.
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    作者:李明伟;林瑞庆;曹湛;魏冬霞;邹丰才;宋慧群;朱兴全 刊期: 2006年第03期

  • 同型半胱氨酸和胱硫醚-β合成酶基因多态性与Alzheimer病的关系

    目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)和胱硫醚-β合成酶基因CBS 844ins 68基因多态性与阿尔茨海默病(alheimer disease,AD)的关系.方法运用多聚酶链反应技术和荧光偏振法(FPIA)检测66例阿尔茨海默病及143例正常人CBS 844ins 68基因多态性和血浆总Hcy水平.结果AD组CBS844ins 68 D/D、D/I、I/I基因型频率(%)分别为78.79、19.69、1.52,对照组分别为78.32、18.88、2.8,CBS844ins 68各种基因型频率在患者组与正常对照组之间的差异无显著性(P>0.05).AD病例组与对照组血浆Hcy分别为(14.72±6.2)μmol/L和(10.9±2.4)μmol/L,两者差异有显著性(P<O.05).AD患者血浆总Hcy水平显著高于正常组.结论胱硫醚-β合成酶多态性与AD无明显相关,高同型半胱氨酸血症与Alzheimer病发生有一定关系.

    作者:黄绍宽;陈盛强;王延平;柳息洪 刊期: 2006年第03期

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    目的了解广州市东山、荔湾、越秀、海珠区公务员、医务人员及银行等职业人群的华支睾吸虫病分布状况及流行特点,为今后制定防治策略提供依据.方法用改良加藤氏厚涂片法粪检华支睾吸虫虫卵.结果4个区共粪检1 204人,华支睾吸虫感染150人,感染率为12.46%.远高于全国感染率(0.40%)和1998~2003广州市平均感染率(6.59%).结论这4个区部分职业人群华支睾吸虫感染率较高,应加强宣教工作,改变人们的不良饮食习惯,提高个人防护意识;采取综合防制措施,阻断华支睾吸虫传播流行.

    作者:冯月菊;周端华;刘小宁;潘志明;任文锋;高雨藩;郭荣同 刊期: 2006年第03期

  • 犯罪嫌疑人HIV/AIDS知识认知程度调查

    目的了解犯罪嫌疑人对HIV/AIDS知识的认知程度,为这一高危人群的AIDS健康教育与行为干预提供依据.方法采用问卷调查法对某监所376名犯罪嫌疑人进行HIV/AIDS的知识认知程度和该人群的文化程度、犯罪类型、吸毒史进行调查.结果376名犯罪嫌疑人以20~40岁占78.99%为多.对AIDS基本概念认知正确率与男女性别、文化程度有关,均有显著性差异(P<0.05),但与犯罪嫌疑人是否吸毒和犯罪类型无明显关系(P>0.05).对AIDS传播途径的认知正确率以文盲者为低,其次为小学、初中者,以高中、大专者为高;在吸毒者和非吸毒者中并无差别;犯罪类型中的涉毒卖淫者对多性伴性行为认知正确率低(62.83%).结论HIV/AIDS的预防控制,应将高危人群和具有高危行为的特殊群体犯罪嫌疑人列为监测重点,在监所哨点开展HIV/AIDS知识的宣教,以降低HIV的感染率.

    作者:杨萍;戴传文;刘华龙;徐金汉;卫勇彪;宋坦南;陈南萍 刊期: 2006年第03期

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    目的观察急诊经皮冠状动脉介入术后血栓前状态与术后冠脉并发症的关系.方法选择2003年至2005年期间50例因急性心肌梗死(AMI)在佛山市第二人民医院行急诊经皮冠状动脉介入术(PCI)的患者,于急诊PCI术后24 h内抽取静脉血测定血栓前状态指标D-D和PAT,所有患者观察28 d,根据术后有无严重冠脉并发症将患者分为两组,并发症组(A组)和非并发症组(B组),回顾性分析A、B两组的血栓前状态指标D-D和PAT,评价急诊PCI术后血栓前状态指标D-D和PAT与术后冠脉并发症的关系.结果所有50例AMI患者的血栓前状态指标D-D和PAT均较正常值升高,其中A组术后24 h内D-D为(1.8±0.4)ng/L,B组D-D为(0.8±0.2)ng/L,B组明显低于A组(P<0.001);A组术后24h内PAT为(44±10)s,B组PAT为(16±5)s,B组明显低于A组(P<0.01).结论急诊PCI术后血栓前状态指标D-D和PAT较正常值升高,D-D和PAT升高的水平是术后严重冠脉并发症的预测指标,积极降低D-D和PAT水平有可能明显降低术后严重冠脉并发症的发生率.

    作者:梁健球;吴庆庆;余永卫;徐宁;黄永光 刊期: 2006年第03期

  • 大蒜素对卡氏肺孢子虫肺炎预防作用的实验研究

    目的观察大蒜素对大鼠卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)的预防效果.方法地塞米松连续肌肉注射Wistar大鼠,建立大鼠肺孢子虫肺炎动物模型.于模型诱导第3周起给予大蒜素治疗,剂量10 mg/(kg·d),连续5 d,后腿肌肉深部注射,以后每隔2周重复治疗一次,第10周末剖杀,同时设复方新诺明预防对照组和PCP模型对照组.以各组大鼠肺重、肺重/体重比值、Pc感染率、肺印片中每100个油镜视野肺孢子虫包囊均数等指标考核疗效.结果大蒜素预防组大鼠肺重(1.89±0.28)、肺重/体重比值(0.94±0.12)、Pc感染率(73.33%)、肺印片中每100个油镜视野肺孢子虫包囊均数(15.39±10.46)均明显低于PCP模型对照组(P<0.05或P<0.01),而与复方新诺明预防对照组无显著性差异(P>0.05).结论大蒜素对实验大鼠卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)有一定的预防和保护作用,预防效果与复方新诺明接近.

    作者:张振明;卢致民;张进顺;唐宏炜;刘金花 刊期: 2006年第03期

  • 淋球菌mtrR启动子区域回文序列基因突变与多重耐药关系的研究

    目的探讨淋球菌mtrR启动子区域回文序列基因突变与多重耐药之间的关系.方法采用纸片扩散法检测56株淋球菌对五种抗生素的敏感性.以PCR扩增mtrR启动子区域中包含有13个碱基回文序列在内的157个碱基,并进行SSCP(单链构象多态性)分析.根据SSCP的结果,选取12株标本进行测序分析,将其核苷酸序列与标准敏感株ATCC19424进行比较.结果56株细菌中有5株对五种抗生素都敏感,对一种抗生素耐药的有22株,对两种抗生素耐药的有19株,其中有2株mtrR启动子区域中回文序列基因发生了突变;对三种抗生素、四种抗生素和五种抗生素耐药的株菌分别是7株、2株和1株,它们的mtrR启动子区域中回文序列基因均发生了突变.并且这12株标本突变的类型一致,在13个碱基的回文序列中发生了单个A/T碱基的缺失.结论mtrR启动子区域中回文序列基因突变介导淋球菌的多重耐药,回文序列单个A/T碱基的缺失与淋球菌多重耐药有密切的关系.

    作者:彭运生;袁建辉;徐立中;潘春燕;钟素霞;汪小娟 刊期: 2006年第03期

  • 住院肿瘤患者健康教育需求的调查

    目的了解住院肿瘤患者健康教育需求情况,更好地开展患者健康教育.方法采用随机整群抽样的方法,对住院肿瘤患者进行无记名的问卷调查.问卷包括4大项40小项,用EXCEL8.0建立数据库,用Spss10.0 forWindows软件进行统计学处理,采用非参数Kruskal-Wall's检验及x3检验进行分析.结果收到有效问卷193张,欢迎开展健康教育者占93.8%.对健康教育的内容以提高生活质量知识的需求为多,男性较偏重康复训练知识的需求,女性较偏重了解有关疾病的知识;患者住院期间对有关疾病的知识较关心,出院后对继续用药相关知识、饮食指导、康复训练等较关心,出院后咨询以返院咨询受欢迎,不同年龄、职业、文化程度、病种和科室的患者所需求的健康教育内容无差异.结论住院肿瘤患者渴望健康教育.健康教育的方式应因人而异,健康教育应贯穿于医疗、护理和康复过程中,有效提高患者的治疗质量和生存质量.

    作者:邱卫黎;黄华兰;蔡秀英;丘德林;辛丽华;江敏霞 刊期: 2006年第03期

  • 院内感染SARS医护人员特异性IgG抗体水平的影响因子

    目的探讨院内感染严重急性呼吸道综合征(SARS)医护人员特异性IgG抗体水平的影响因素.方法回顾性收集20例院内感染SARS医护人员的人口特征、流行病学史、临床表现、实验室检查和主要治疗措施等资料作为研究因素,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测20例SAPS患者在发病后第1~36周的血清特异性IgG抗体.分类变量的研究因素比较不同结局患者之间抗体水平采用方差分析;通过一元线性回归、逐步回归分析和偏相关分析数值变量的研究因素与抗体水平之间的关系.结果SARS特异性IgG抗体水平在女性患者高于男性患者,结果有统计学意义(P=0.044);与患者在病程中的高中性粒细胞计数呈中等程度负相关(偏相关系数=-0.636,P=0.008);与病毒唑治疗的总剂量呈高度正相关(偏相关系数=0.811,P=0.000).结论SARS特异性IgG;抗体水平的影响因素可能与病毒在体内被抑制、病毒血症的持续时间和患者发病后的中性粒细胞反应水平有关,SARS特异性IgG抗体水平与性别的关系值得进一步探讨.

    作者:罗瑞虹;陈雪娟;陈文思;马会慧;李刚 刊期: 2006年第03期

  • 前S1蛋白在乙型肝炎的诊断和治疗中价值探讨

    目的通过几种模式的乙型肝炎患者的前S1蛋白及HBV-NDA的情况分析,了解前S1蛋白对乙肝的诊断和预后的价值.方法收集几种不同HBVM模式的乙肝患者共201例,检测其前S1蛋白及HBV-DAN.结果HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)患者共87例,前S1和HBV-DNA的阳性率分别是87.4%和94.2%.HBsAg(+)、HBeAg(+)患者共11例,前S1和HBV-DNA阳性率均为81.8%,这两组患者存在着病毒复制.HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)患者85例,前S1和HBV-DNA的阳性率分别为35.3%和40%.HBsAg(+)、抗-HBe患者18例,前S1和HBV-DNA阳性率分别为33.3%和44.4%.结论前S1蛋白与HBV-DNA的阳性率较为一致,在作为HBV病毒复制指标方面比HBeAg能更敏感.

    作者:司徒瑞儒 刊期: 2006年第03期

  • 外源性端粒酶催化亚单位对人视网膜血管内皮细胞的影响

    目的探讨外源性人端粒酶催化亚单位(hTERT)对人视网膜血管内皮细胞(hRCEC)端粒酶活性、相关基因表达和体外生存时间的影响.方法阳离子脂质体介导hRCEC转染;RT-PCR法检测人类端粒酶RNA组份(hTR)、端粒酶相关蛋白1(TEP1)及hTERT基因的表达;TRAP法检测端粒酶活性;细胞计数法绘制生长曲线.结果hTR、TEP1基因在hTERT转染hRCEC前后都表达,hTERT基因在转染前不表达,转染后24 h及稳定转染克隆形成时表达,细胞停止分裂时又失去表达;转染前无端粒酶活性,转染后24h及稳定转染克隆形成时可检测到端粒酶活性,细胞停止分裂时端粒酶活性消失;稳定转染了hTERT基因后hRCEC的生存时间没有延长.结论hTERT转染可显著提高hRCEC中hTERT基因表达水平,hTERT基因表达与端粒酶活性一致,但只用hTERT转染的方法不能使hRCEC细胞生存时间延长.

    作者:杜贻鹏;陈展辉;陈淑杰;何霞;柏云;谢金卫;周俊宜 刊期: 2006年第03期

  • 大鼠缺铁性贫血模型建立及各指标观察研究

    目的探讨给大鼠喂以低铁饲料辅以少量放血,快速建立缺铁性贫血的动物模型并观察动物营养状况及几种微量元素在脏器中的变化.方法将雌雄各半的SD大鼠随机分为两组(正常对照组:喂以正常饲料,饮用自来水;缺铁组:于塑料不锈钢笼内饲养,喂以低铁饲料,铁含量为8.01 mg/kg,饮用去离子水).每周测定血红蛋白浓度,当血红蛋白降低,确定模型建立后,每组随机取出8只大鼠,取其脏器,测定脏器系数(与体重比)及微量元素含量变化.结果缺铁性贫血大鼠的一般体态发生变化,体重明显下降.一个月后,缺铁性贫血大鼠组的血红蛋白浓度低至86.9 g/L,其红细胞及全血铁指标也有显著的下降.活杀其中的8只大鼠,取出其心脏、肺脏、肝脏、脾脏、肾脏等器官测量脏器重量,计算出脏器系数值.缺铁组大鼠心脏和脾脏系数与正常组比较显著增高,差异明显,肝脏、肺脏、肾脏无明显差异.测定肝脏及大脑组织中微量元素铁、锌、硒、锰、镉、铅、铜等的含量.发现缺铁组大鼠肝脏及脑组织总铁含量明显低于正常组,锰的含量高于正常组,缺铁组肝脏铜高于正常组,脑锌含量低于正常组,其它几种元素变化不明显.结论给大鼠喂以低铁饲料辅以少量放血,可以成功建立缺铁性贫血的动物模型.其各项指标有明显的变化,尤其缺铁对脏器中微量元素含量有一定的影响.

    作者:杨真;罗海吉;卢晓翠;邓红;孔亮 刊期: 2006年第03期

  • 医学遗传学课程在药学教育中的思考和深化

    医学遗传学课程是医药院校开展教育培养的重要基础课程,对于21世纪药学生的基础科学素质和能力素质的培养具有重要作用.随着分子生物学等现代科学技术的发展,要求在医学遗传学课程的教育方面注入新的活力和思想,本文对医学遗传学课程在药学教育中所应发展和建设的方向进行了概括和探讨,以期在今后的教学工作中明确方向,抓住机遇,全面提高教学质量.

    作者:张咏莉;李红枝;黄清松;陈红梅;李白霓;丘淑玲 刊期: 2006年第03期

  • 猕猴自体骨髓干细胞移植治疗急性肝损伤的实验研究

    目的探讨自体骨髓干细胞肝门静脉移植对猕猴急性肝损伤的治疗作用和为人类肝损伤治疗提供依据和方法.方法猕猴10只,随机分为实验组和对照组,每日皮下注射40%CCL4 0.8 ml/kg,连续注射4 d,经肝功能生化指标检测及肝穿组织病理学观察确认肝损伤后,分离实验组猴的自体骨髓单个核细胞,按3×108细胞/kg将骨髓细胞植入肝门静脉,植入后60 d进行肝功能相关指标检测及组织病理学观察.结果连续注射CCL4 4 d后,血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、球蛋白(GLOB)(P<0.001),而总蛋白(TP)和白蛋白含量无变化(P>0.05),肝组织结构紊乱,大量肝细胞坏死,部分细胞变性,水肿,汇管区及周围有大量炎性细胞浸润.骨髓细胞肝门静脉移植后60 d,血清AST、ALT活性和GLOB、BIL含量显著低于对照组(P<0.05),而TP、ALB、LDL含量高于对照组(P<0.05),病理组织学观察结构清楚,而对照组有纤维增生和肝细胞有脂肪变性.结论自体骨髓细胞肝门静脉移植能对猕猴急性肝损伤有明显治疗作用,可改善急性肝损伤猕猴的肝功能及组织结构,提示该方法可能对人类急性肝损伤有一定治疗意义.

    作者:潘兴华;庞荣清;陈系古;刘建昆;何占龙;王惠萱;张步振;王鹤桦;杨勇琴;屈璐 刊期: 2006年第03期

  • 大鼠寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)基因的改造及在大肠杆菌中的表达

    目的通过将发生点突变的两个大鼠寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)基因进行改造,获得具有正确序列的OSCP基因,在大肠杆菌中表达并进行活性鉴定.方法通过限制性核酸内切酶和T4DNA连接酶将发生错义突变的两个OSCP基因的DNA克隆进行改造,获得具有正确核苷酸序列的OSCP基因;然后将该片段连接进原核表达载体pET-28c(+),构建成重组质粒PET-28c(+)-OSCP;用该重组质粒转化E.coli,转化子在37℃诱导表达相应的融合蛋白,通过Western-blot鉴定.结果酶切及测序显示对OSCP基因错义突变的纠正获得成功.酶切结果显示成功构建了原核表达载体pET-28c(+)-OSCP.IPTG诱导表达4 h后,SDS-PAGE及Western-blot显示诱导表达出分子量约23 000的大鼠寡霉素敏感相关蛋白,且该蛋白具有免疫活性.结论在国内初次表达出大鼠OSCP,表达产物具有免疫反应性,为OSCP的结构及功能研究奠定了基础.

    作者:王海龙;王春芳;赵嘉惠;殷国荣;乔中东 刊期: 2006年第03期

  • 食品过敏原指纹图谱快速检测研究(三)--花生总蛋白2-DE指纹图谱和蛋白点MALDI-TOF/MS分析

    目的建立一种简捷、准确、快速检测食品过敏原的方法.分析花生总蛋白2-DE(2-dimensionelectrophoresis)指纹图谱与蛋白点MALDI-TOF/MS分析联用的可行性.方法新鲜生花生去皮搅碎后丙酮去脂,PBS抽提总蛋白,冻干得初提样品,试剂盒精提,双向电泳IEF选择11cm非线性胶条(pH=3-10)溶胀上样,平衡后转移胶条在电泳槽中进行第二向SDS-PAGE垂直电泳(10%),考染后扫描图像进行计算机分析处理,同时在胶上任意选择两个蛋白点切胶、脱色、消化后进行MALDI-TOF/MS分析.结果2-DE指纹谱图显示花生总蛋白的分布范围较窄,主要是一些中、小分子量的中性、弱酸和弱碱性蛋白,用PDQuest 2-D Analysis分析软件对此2-DE图谱分析可以发现其中共有178个特征性蛋白点.以花生总蛋白2-DE指纹图谱为基础,进一步对单个蛋白点进行MALDI-TOF/MS指纹图谱分析,结果显示每一个蛋白点都具有自己特征的分子量峰和图谱形状,无需进行肽片段混合物的分析、检索亦可完全区分不同的蛋白点,从而可以对食品过敏原进行更深入、更准确的指纹图谱检测.结论食品过敏原总蛋白2-DE指纹图谱与蛋白点MALDI-TOF/MS指纹图谱分析联用可以更好的进行食品过敏原指纹图谱快速检测研究.

    作者:吴海强;余晓;刘志刚 刊期: 2006年第03期

  • RNA干涉技术及其在病毒方面的应用

    由双链RNA介导的RNA干涉(RNA interference,RNAi)又称为转录后基因沉默(post transcriptional silencing,PTGS),其实质是在生物体中导人双链RNA,特异性地降解相应序列的mRNA,从而阻断相应基因表达,即引起生物体内同源基因沉默(gene silencing).RNAi已被证明是破译各种生物中的基因功能的强大工具,并将为新型高效药物开发和基因治疗的发展开辟新的领域.

    作者:杨海燕;宁云山;董文其 刊期: 2006年第03期

  • 紫外线照射前后日本血吸虫尾蚴可溶性虫体蛋白组分的比较

    目的利用蛋白质组学技术分离、鉴定日本血吸虫正常尾蚴及紫外线致弱尾蚴虫体间差异表达蛋白.方法分别收集与制备血吸虫正常尾蚴和致弱尾蚴虫体总蛋白,经固相pH梯度双向凝胶电泳分离.凝胶银染并利用ImageMaster 2D Software 5.0凝胶图像分析软件进行比较分析,选取差异表达蛋白点经基质辅助激光解析离子飞行时间质谱仪进行鉴定.结果二维凝胶电泳图像分析结果显示:正常尾蚴和致弱尾蚴各分离出至少1 277、1 173个清晰、独立的蛋白点,蛋白点匹配率为72.7%,大多数蛋白点相对分子量处于22 000~95 000范围内,理论等电点为5~8.尾蚴经紫外线致弱前后共发现18个差异表达蛋白,其中5个蛋白于致弱尾蚴中表达消失,12个表达下调,1个表达增强,未见新增表达蛋白.其中13个差异表达蛋白经MALDI-TOF-MS鉴定分析,获悉其肽指纹图谱、理论等电点、分子量及表达水平变化等相关信息.结论利用二维电泳、MALDI-TOF-MS等蛋白质组学技术,共鉴定出13个致弱尾蚴差异表达蛋白,为进一步阐明致弱尾蚴诱导宿主产生高免疫保护力的分子机制提供了实验基础.

    作者:杨琳琳;吕志跃;胡旭初;胡斐;曹爱莲;郑焕钦;黎明涛;余新炳;冯明钊;吴忠道 刊期: 2006年第03期

  • 人源性抗-D基因工程抗体在真核细胞CHO中的表达

    目的于真核细胞系CHO细胞中表达人源性抗-D基因工程抗体,为人源性抗-D基因工程抗体在临床上的应用打下坚实的基础.方法脂质体法将真核表达载体pAH4604/VH和pAG4622/VL共转染体外培养的CHO细胞,经霉酚酸及组氨醇筛选阳性克隆细胞.通过ELISA法检测培养上清中人IgG的表达量.应用化学发光Western Blotting法对真核表达载体pAH4604/VH和pAG4622/VL在CHO细胞中的表达进行鉴定.结果pAH4604/VH和pAG4622/VL共转染体外培养的CHO细胞,经霉酚酸及组氨醇筛选12~14 d后有阳性克隆长出,未转染细胞则全部死亡.筛选出的各阳性细胞克隆经扩大培养及ELISA定量检测其上清人IgG含量高为4.05 ng/nl.Western Blotting显示上清和细胞内均有人IgG重链和轻链的表达.结论所构建的真核表达载体pAH4604/VH和pAG4622/VL在CHO真核细胞系表达成功,可产生人源化的IgG重链和轻链.

    作者:曹开源;徐霖;付涌水;袁广卿;黄小荣 刊期: 2006年第03期

  • 查螺人员年龄、血防健康教育与查螺质量关系的研究

    目的了解年龄、健康教育对查螺质量的影响.方法采用设置标记螺点观察不同年龄组、是否接受血防健康教育的查螺人员对标记螺查出率.结果3年(2002~2004年)现场观察,健康教育人群标记钉螺的查出率明显高于对照组,分别为56.38%(10148/18000)和41.26%(7426/18000),P<0.01;两组不同年龄段人群标记钉螺查获率均以15岁以下人群高,分别为68.95%和48.67%;51岁以上的较低,为36.67%和29.45%.结论本观察结果认为查螺前血防健康教育和查螺人员的年龄对查螺质量有明显的影响作用.

    作者:骆雄才;黄少玉;张启明;林荣幸 刊期: 2006年第03期

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主管:广东省科学技术协会

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