学术投稿

美洲大蠊若虫变应原的基因克隆及序列测定

刘志刚;黄炯烈;周珍文;李金生;杨慧

关键词:美洲大蠊若虫, 重组变应原, cDNA文库, 免疫学筛选, 序列分析
摘要:目的对美洲大蠊若虫cDNA表达文库进行免疫学筛选,分离和鉴定美洲大蠊若虫特异性重组变应原克隆,并测定其基因序列,从而为美洲大蠊若虫重组变应原疫苗候选基因的筛选提供科学依据.方法选用对美洲大蠊若虫过敏的变态反应疾病患者(如哮喘、过敏性鼻炎)阳性血清,对美洲大蠊若虫cDNA文库进行免疫学筛选.使用按照重组载体入ExCell NotI/EcoRI/CIP 臂插入位点邻近区域的上、下游碱基序列设计的引物,扩增阳性噬菌斑中插入的cDNA片段.并对cDNA插入片段进行序列测定.结果经用阳性血清对2.3×104噬菌体斑的免疫学筛选,获得了5个阳性克隆,PCR直接序列分析表明这5个阳性克隆均为美洲大蠊若虫变应原未知基因克隆.结论该研究发现了美洲大蠊若虫变应原新基因,为进一步开展美洲大蠊若虫特异性重组变应原的研究奠定了基础.
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    作者:王思琛;张振路;邹燕薰;柯彩霞 刊期: 2002年第01期

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    作者:赵杨;佘若菁;闻良珍;苏春宏 刊期: 2002年第01期

  • 美洲大蠊若虫变应原的基因克隆及序列测定

    目的对美洲大蠊若虫cDNA表达文库进行免疫学筛选,分离和鉴定美洲大蠊若虫特异性重组变应原克隆,并测定其基因序列,从而为美洲大蠊若虫重组变应原疫苗候选基因的筛选提供科学依据.方法选用对美洲大蠊若虫过敏的变态反应疾病患者(如哮喘、过敏性鼻炎)阳性血清,对美洲大蠊若虫cDNA文库进行免疫学筛选.使用按照重组载体入ExCell NotI/EcoRI/CIP 臂插入位点邻近区域的上、下游碱基序列设计的引物,扩增阳性噬菌斑中插入的cDNA片段.并对cDNA插入片段进行序列测定.结果经用阳性血清对2.3×104噬菌体斑的免疫学筛选,获得了5个阳性克隆,PCR直接序列分析表明这5个阳性克隆均为美洲大蠊若虫变应原未知基因克隆.结论该研究发现了美洲大蠊若虫变应原新基因,为进一步开展美洲大蠊若虫特异性重组变应原的研究奠定了基础.

    作者:刘志刚;黄炯烈;周珍文;李金生;杨慧 刊期: 2002年第01期

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    目的探讨腹膜透析中真菌性腹膜炎的易感因素、临床特点、诊治和转归、护理.方法回顾分析了我院1979~1999年间970例腹膜透析患者中15例真菌性腹膜炎患者的临床及有关实验室资料.结果本组真菌性腹膜炎患者占腹膜炎的3.5%,均发生在细菌性腹膜炎之后,接受免疫抑制药治疗者发生真菌性腹膜炎的危险性显著增高.结论近期发生细菌性腹膜炎并长期不恰当使用抗菌药治疗是真菌性腹膜炎的主要易感因素,真菌性腹膜炎病死亡率高且治疗效果仍未令人满意,故护理上应严格培训病人,加强无菌操作,及时处理细菌性腹膜炎,防止真菌性腹膜炎的发生.

    作者:林芳宇;谢文;郑志惠;伍基颜;郑淑君 刊期: 2002年第01期

  • 80例急性血吸虫病人吡喹酮疗效的追踪观察

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    作者:刘月美 刊期: 2002年第01期

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    目的探讨育龄妇女解脲脲原体(UU)及沙眼衣原体(CT)感染与异位妊娠的关系.方法分别采用培养法及单克隆抗体法检测63例异位妊娠患者宫颈分泌物中的解脲脲原体及沙眼衣原体,同时取同期体检的病例78例作对照.结果异位妊娠组宫颈分泌物UU阳性率42.86%,CT阳性率17.46%,明显高于对照组UU阳性率17.95%,CT阳性率2.56%(P均<0.05).结论育龄妇女生殖道UU及CT感染增加异位妊娠的发生率.

    作者:陈敦金;赵杨;翁慧男;佘若菁;陈淑桂;麦燕明 刊期: 2002年第01期

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    目的评价应用重氮乳凝试验诊断结核病的临床实用价值.方法以胶体金法和聚合酶链反应(PCR)为对照,分别用重氮乳凝法和胶体金法检测91份临床诊断为结核病的患者血清标本,以PCR法检测患者相应的痰标本.结果重氮乳凝法与胶体金法和PCR比较,阳性符合率分别为98.1%和89.8%;敏感性分别为96.3%和72.9%;特异性分别为97.3%和68.8%.结论重氮乳凝法可用于结核病实验室诊断,尤其适用于现场血清学初筛和基层单位使用.

    作者:曾年华;王志斌;李兴国;王珊珊;肖红 刊期: 2002年第01期

  • 新形势下护理质量管理的改革对策

    随着社会经济的飞速发展和医学模式的转变,人们对身心整体的健康更加重视,对护理的需求也日益扩大.同时,护理学科和医院管理学科的发展,使传统的护理质量管理机制面临挑战.挑战与机遇并存,现代护理管理者应及时抓住机遇,迎接挑战,谋求发展,使护理的质量管理机制不断完善,以适应新形势的需要.

    作者:陈志群 刊期: 2002年第01期

  • 实验感染肝片吸虫大鼠组织抗氧化功能的动态变化

    目的本文通过大鼠感染肝片吸虫复制感染模型,研究肝片吸虫感染后组织器官抗氧化功能的动态变化.方法将60只大鼠随机分成感染组(n=30)和对照组(n=30),感染组大鼠一次口服25个囊蚴,对照组不感染,于感染前(0w)和感染后(1、3、5、7、9w)宰杀采集肝、肺、心、肾和脾组织,检测感染后GSH-Px、SOD、CAT活性和MDA含量的变化.结果大鼠感染肝片吸虫后,肝组织的GSH-Px活性变化不明显,SOD活性缓慢下降后又缓慢升高;CAT活性降低;MDA含量开始有所升高,稍后有轻微下降.肾脏的GSH-Px活性先缓慢升高,以后则低于对照组;SOD活性呈现平稳下降的趋势,CAT活性开始升高,随后降至低于对照组,MDA含量开始缓慢下降,以后则上升.心组织的GSH-Px活性开始升高,以后迅速下降;SOD活性逐渐升高,然后又缓慢下降;CAT活性逐渐升高,然后又有所下降;MDA含量感染后有所下降.肺组织中的GSH-Px活性逐渐升高,以后逐渐下降;SOD活性5w后开始急剧下降;CAT活性的变化在整个实验期间,除第7w外,其他各周和对照组相比差异均不显著;MDA含量在感染后开始升高,以后又缓慢下降.脾组织中GSH-Px和SOD活性下降;试验组CAT活性先下降,然后升高;MDA含量在前3w变化不明显,基本上处于同一水平,随后缓慢下降,且在第7、9w与对照组差异极显著.结论自由基参与了肝片吸虫病的发病过程,肝片吸虫感染后机体的器官组织发生了脂质过氧化损伤.

    作者:顾有方;毛鑫智;沈永林;J.Gonzalez-Gallego 刊期: 2002年第01期

  • 深圳市福田区传染病漏报情况调查

    目的了解我区多年执行<中华人民共和国传染病防治法>情况,探讨法定传染病疫情的报告执行程度和漏报原因,为我区制订传染病防治策略提供科学依据.方法采用随机抽样方法对辖区内医疗机构进行流行病学调查.结果 1988年医疗机构法定传染病漏报率为54.90%,1988~1991年平均医疗机构漏报率为14.80%;1997年医疗机构漏报率为1.13%,1997~2000年平均医疗机构漏报率为0.98%.1988~1991年甲乙类传染病漏报率为15.06%,丙类传染病漏报率为13.70%,漏报较严重的病种是病毒性肝炎,漏报率为24.20%;而1997~2000年甲、乙类传染病漏报率为0.98%,丙类传染病漏报率为2.10%,漏报较严重的病种是流腮,漏报率为4.86%.医疗机构传染病报告卡填写完整率、报告及时率都相应提高.结论我区传染病疫情报告工作已取得了较好的成绩,但传染病疫情报告仍存在漏报、迟报情况,并存在报告卡填写不完整等情况,应不断完善报告制度,提高报告质量.

    作者:彭秀儒;李学云;周联 刊期: 2002年第01期

  • 人源蓝氏贾第虫(Giardia lamblia)病毒部分基因的克隆及序列分析

    目的从我国蓝氏贾第虫(Giardia lamblia)中寻找贾第虫病毒.方法对人源贾第鞭毛虫北京株进行了体外纯培养,将其总核酸电泳,并用DNA酶和RNA酶处理.根据已发表的蓝氏贾第虫病毒基因序列合成一对引物并进行RT-PCR,将产物回收后连接到Pmd18-T载体上进行克隆并测序,通过BLAST对Gen Bank进行同源性搜索.结果在贾第虫总核酸电泳图谱上观察到一个分子量约7.0kb的片段.该核酸不能被DNA酶(100μg/ml)降解.但可被RNA酶(10μg/ml)降解.经RT-PCR扩增后得到1条预计856bp的片段,所得序列与蓝氏贾第虫病毒基因同源性为98%.结论在我国人源贾第鞭毛虫北京株中发现贾第虫病毒,该病毒属于蓝氏贾第虫病毒.

    作者:田宗成;张西臣;李建华;尹继刚;杨举 刊期: 2002年第01期

  • 中华硬蜱叮咬105kDa纯化抗原免疫接种宿主后中肠组织化学变化的动态观察

    目的观察中华硬蜱叮咬105kDa纯化抗原免疫接种宿主后,其中肠组织化学变化.方法采用茚三酮法、PAS法、Feulgen法及图像分析仪,对中华硬蜱叮咬不同免疫力宿主后中肠蛋白质、糖原及多糖定位和分布以及DNA的含量进行研究.结果中华硬蜱叮咬105kDa纯化抗原组宿主后,中肠上皮细胞蛋白质含量较对照组明显降低,但糖原及多糖含量与初次叮咬或佐剂对照组相比无显著性变化;随着叮咬时间的延长,纯化抗原组DNA含量明显低于对照组,且以2~4倍体为主.结论 105kDa纯化抗原组诱导的抗蜱免疫作用可干扰中肠消化细胞蛋白质和核酸的合成,而对中肠糖代谢无明显影响.

    作者:童华章;刘志刚;朱清仙;叶炳辉 刊期: 2002年第01期

  • 后基因组时代的疟疾研究

    恶性疟原虫基因组测序有望带来疟疾研究方法的革命.除了简单的基因发现,基因组测序将便于综合鉴定寄生虫发育阶段的基因表达、病理,以及对药物治疗和宿主遗传背景等环境变量的反应.本文综述了恶性疟原虫基因组测序计划的近况和为功能基因组学开发的生物信息学及其分析工具的应用,其目的是根据对疟原虫生物学的深入观察,确定合理的、基于信息的、新的防治策略和目标.

    作者:胡旭初;吴忠道;余新炳 刊期: 2002年第01期

  • 计算机辅助教学在医学微生物学教学中的应用

    本文阐述了医学微生物学课程教学的特点,传统教学方式的局限性和计算机辅助教学(CAI)的优越性.指出在医学微生物学中推广应用多媒体教学是适应教育发展的需要,CAI能克服传统教学中的种种弊端,优化医学生物学教学内容和方法,能大大提高教学质量和效率.

    作者:周俊梅 刊期: 2002年第01期

  • SAG1和IL-2基因佐剂混合免疫诱导鼠抗弓形虫感染的研究

    目的了解编码SAG1的重组质粒和IL-2基因佐剂在小鼠体内的免疫反应,评价该疫苗对弓形虫的保护作用.方法编码SAG1的质粒和鼠源性IL-2表达载体以100μg的剂量免疫小鼠,3w后两次以相同的剂量加强免疫,分别以PBS和空质粒pcDNA3感染.采用ELISA法测定抗体水平、亚型、IFN-γ和IL-4的含量,PCR及原位杂交检测感染鼠中DNA的整合及降解.所有鼠均由强毒力RH株弓形虫感染.结果 SAG1表达质粒3次免疫后鼠体内特异IgG水平明显增高,IL-2表达质粒的联合使用导致IgG2a水平升高和IFN-γ的产生.混合质粒注射的小鼠抗弓形虫感染的存活时间延长.结论由SAG1 DNA诱导的免疫应答因IL-2表达质粒的共同注射而增强,DNA疫苗和适当细胞因子的共注射对抵抗弓形虫感染的效果值得进一步研究.

    作者:陈观今;陈海峰;郭虹;郑焕钦;汪琦 刊期: 2002年第01期

  • 恶性疟原虫海南株节结相关组氨酸富集蛋白基因的克隆及序列分析

    目的克隆恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)节结相关组氨酸富集蛋白(KAHRP)基因,并进行序列分析.方法采用PCR技术分两段从FCC1/HN株基因组DNA中扩增出部分序列重叠的KAHRP基因片段,分别克隆入pMD-18T测序载体.用双脱氧链末端终止法测定这2个片段的序列,从而得到全长KAHRP基因序列.应用AnthProt、DNAstar软件辅助分析基因结构及进行同源性比较.结果恶性疟原虫FCC1/HN株KAHRP全基因长2358个核苷酸,在112至564位核苷酸是内含子,全基因编码634个氨基酸残基,其中赖氨酸含量为14.35%,丙氨酸含量为9.15%,组氨酸含量为7.72%;分子量为69.37kDa.序列分析表明,我国恶性疟原虫FCC1/HN株与国外的3D7、FCR3、India-1、India-2、NF17、Palo-alto、PUPSP株KAHRP基因编码的氨基酸残基有52个氨基酸残基替代位点,并存在氨基酸残基序列的增加和缺失.经多参数综合分析,可能有5个潜在的抗原表位区.结论克隆了恶性疟原虫FCC1/HN株KAHRP基因.序列测定及同源性分析表明,FCC1/HN株与其它分离株KAHRP基因编码的氨基酸序列存在一定差异.

    作者:单志新;余新炳;徐劲;吴忠道;李学荣;卞国武;马长玲 刊期: 2002年第01期

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    作者:黄宏业;杨伟;黄雪晃 刊期: 2002年第01期

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