学术投稿

药用植物白木香高质量总RNA提取方法的研究

吴宏清;王磊;郭维;高晓霞;白玲;章卫民

关键词:白木香, 总RNA提取, 改良异硫氰酸胍-CTAB法
摘要:目的:白木香次生代谢产物成分复杂,干扰其总RNA的提取,一般的提取方法无法获得总RNA或总RNA降解严重.为获得高质量的总RNA,本实验开展了白木香正常及结香组织采集及高质量总RNA提取方法的研究.方法:对从野外采集的白木香样品,用改良CTAB-LiC1法、去温浴的改良CTAB-LiC1法、SDS酸酚法、改良异硫氰酸胍-CTAB法和EASYspin RN09试剂盒5种方法分别对白木香叶、白木香枝条、白木香树干中的白木样品和结香样品进行RNA提取.结果:研究表明白木香枝条的离体样品室温保存5h内不影响总RNA质量,确定EASYspin RN09试剂盒是白木香叶RNA的佳提取方法,改良异硫氰酸胍-CTAB法是其他白木香组织RNA的佳提取方法.结论:用改良异硫氰酸胍-CTAB法大量提取白木香树干中的白木样品及结香样品RNA,其28S:18S为1.2~1.4,RIN值为6.8~7.5,并应用于转录组测序.
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  • 粤北南方红豆杉HPLC指纹图谱研究

    目的:建立粤北南方红豆杉不同采收季节、不同采收部位的HPLC指纹图谱分析方法,为南方红豆杉的综合利用提供科学依据.方法:采用超临界CO2萃取技术提取南方红豆杉有效部位,按HPLC法建立指纹图谱,使用指纹谱图相似度软件进行评价分析.结果:建立了粤北南方红豆杉指纹图谱,对不同采收季节、不同采收部位的12批南方红豆杉样品提取物进行了指纹图谱分析,得出主要共有峰相对保留时间、相对峰面积作为南方红豆杉指纹图谱相关技术参数.结论:南方红豆杉指纹图谱可用于评价其药材质量.

    作者:卢慧勤;郑妮;兰树敏;李海波 刊期: 2013年第07期

  • ICP-MS法测定三丫苦药材中5种重金属的残留量

    目的:建立三丫苦药材铜(Cu)、铅(Pb)、汞(Hg)、砷(As)、镉(Cd)5种重金属残留的电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)测定方法.方法:样品经过微波消解程序进行高压湿法消化后,分别以锗(72Ge)、铟(115In)、铋(209Bi)为内标,采用ICP-MS同时测定样品中Cu、Pb、Hg、As、Cd的含量.结果:对国家一级标准物质柑橘叶的分析结果与所给的标准值吻合,对于所测元素,标准曲线的相关系数在0.9996~0.9999范围之内,线性关系良好,方法的平均回收率为93.4% ~ 96.6%,RSD为4.6% ~9.4%.结论:本方法快速、简便、灵敏度高,适用于三丫苦药材中5种重金属残留量的测定.

    作者:隆颖;陈浩桉;栗建明;江仁望;叶文才 刊期: 2013年第07期

  • 车前子的化学成分与药理活性研究进展

    车前子为常用中药,主要化学成分为多糖、苯乙醇苷、环烯醚萜、黄酮类及生物碱类等化合物,具有抗菌、消炎、调节免疫、降血脂、降血糖、止咳祛痰平喘等功能.本文概述近年来车前子的化学成分、药理活性研究进展,旨在为车前子的进一步开发利用提供化学与药理学参考.

    作者:郑秀棉;杨莉;王峥涛 刊期: 2013年第07期

  • 山茱萸种实性状的相关性及通径分析

    目的:研究山茱萸果实主要生物学性状的相关性,为山茱萸优良种源的筛选及培育提供重要参考依据.方法:以山茱萸三大主产区,65份山茱萸种质资源为研究对象,对其9个性状(出皮率、果实百粒重、果实纵径、果实横径、果形指数、种子千粒重、种子纵径、种子横径、种形指数)进行相关性、多元回归及通径分析.结果:相关性分析表明,山茱萸出皮率与种实部分性状有显著(P>0.05)或极显著(P>0.01)的相关性.多元逐步回归分析表明,果实百粒重、种子千粒重、种子纵径和种形指数是影响出皮率的主要因子.通径分析结果表明,果实百粒重、对出皮率的直接正影响较大;种子千粒重、对出皮率的直接负影响较大.结论:在实际生产及良种选育过程中应关注果实百粒重大,同时种子千粒重小的材料.

    作者:王耀辉;强毅;康杰芳 刊期: 2013年第07期

  • 外源脱落酸对盐胁迫下灰毡毛忍冬幼苗生理特性的影响

    目的:提高灰毡毛忍冬的耐盐性,为其耐盐逆境栽培提供参考.方法:用不同浓度的脱落酸(ABA)进行预处理后再用浓度为200 mmol/L的NaC1进行盐胁迫7d,研究外源ABA在盐胁迫下对灰毡毛忍冬幼苗生理特性的影响.结果:外源ABA预处理灰毡毛忍冬幼苗能显著降低MDA含量,提高叶绿素、可溶性糖、可溶性蛋白含量,增强POD、CAT、SOD等植物细胞保护酶活性.结论:外源ABA可以诱导提高灰毡毛忍冬幼苗的抗盐能力、减轻和缓解盐伤害,ABA具有浓度效应.

    作者:朱菲菲;刘奕清;陈泽雄;兰建彬 刊期: 2013年第07期

  • 栀子柏皮汤及其拆方保肝利胆作用实验研究

    目的:研究栀子柏皮汤及其拆方的保肝利胆作用,为探讨栀子柏皮汤的组方原理提供实验依据.方法:采用四氯化碳(CCl4)引起的急性肝损伤小鼠模型观察栀子柏皮汤及其拆方的保肝作用;采用正常大鼠胆总管引流的方法,观察药物的利胆作用.结果:栀子柏皮汤及各含栀子配伍药对均可降低CCl4所致肝损伤小鼠血清ALT、AST及肝组织中MDA水平,并显著提高正常大鼠胆汁流量及胆汁内胆红素含量,其中栀子黄柏配伍保肝利胆作用效果佳.结论:栀子柏皮汤具有保肝利胆作用,其君药栀子在方中发挥重要作用,栀子和黄柏交互协同,发挥清热利湿作用.

    作者:肖旭;朱继孝;罗光明;李磊;朱玉野;曾金祥;王晓云;吴波 刊期: 2013年第07期

  • 三七总皂苷对肝纤维化大鼠细胞因子的影响

    目的:观察三七总皂苷(PNS)对肝纤维化大鼠细胞因子产生的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制.方法:SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、PNS(50、100、200 mg/kg)组和秋水仙碱(Col)组.除正常对照组外其余各组大鼠采用CCl4皮下注射的方法诱导肝纤维化模型,2次/w,连续18w.于造模第9周起,给药组分别灌胃给予相应的受试药物,正常对照组和模型组给予等体积生理盐水,1次/d,疗程10w.实验结束后,放射免疫法测定血清IL-1、IL-6、IL-10、TNF-α的含量;同时取固定部位肝脏组织,HE染色观察肝组织病理学改变,免疫组化技术测定肝组织中NF-κB、转化生长因子(TGF)-β蛋白的表达,RT-PCR技术测定肝组织中TGF-β、TNF-α mRNA表达.结果:与模型组比较,PNS(100、200 mg/kg)不仅能减轻大鼠肝纤维化程度,还能显著抑制IL-1、IL-6、NF-κB、TNF-α、TGF-β的表达,升高IL-10的水平.结论:PNS对肝纤维化大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与下调促炎因子,上调抑炎因子的产生,调控细胞因子网络平衡有关.

    作者:姜辉;汪永忠;刘晓闯;薛雪 刊期: 2013年第07期

  • 落地梅化学成分研究

    目的:研究落地梅的化学成分.方法:采用各种色谱分离技术,运用多种波谱分析手段进行化合物结构鉴定.结果:从落地梅中共分离得到7个化合物,分别鉴定为:豆甾醇(1)、齐墩果酸(2)、β-香树脂醇(3)、槲皮素(4)、木犀草素(5)、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷(6)、β-胡萝卜苷(7).结论:化合物1~7均为首次从该植物中分离得到.

    作者:魏金凤;陈琳;王微;康文艺 刊期: 2013年第07期

  • 黔产药用植物泽漆中化学成分及其抗肿瘤活性研究

    目的:对黔产药用植物泽漆Euphorbia helioscopia L.中的化学成分以及其体外抗肿瘤作用进行研究.方法:应用正、反相硅胶(RP-18型)柱层析;葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20型)柱层析,结合重结晶方法进行分离纯化,运用1 H-NMR、13C-NMR、ESI-MS和EI-MS等现代波谱技术对化合物的结构进行鉴定;采用磺酰罗丹明蛋白染色法对部分化学成分进行体外抗肿瘤活性的测试.结果:从黔产药用植物泽漆乙醇提取物中分离纯化了9个化合物,分别鉴定为:euphohelioscopin A(1)、euphoscopin (2)、9,19-cyclolanost-23 E-ene-3,25-diol(3)、euphoscopin C (4)、euphomin A (5)、euphoheliosnoid A(6)、ent-kaurane-3-oxo-16β,17-diol (7)、9,19-cyclolanost-25-ene-3β,22-diol(8)和helioscopinolide A (9);化合物9对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖有一定的抑制作用.结论:其中,化合物3、7、8和9为首次从泽漆中分离得到,化合物9具有潜在的抗肿瘤活性.

    作者:穆淑珍;尚上;晏晨;杨付梅;郝小江 刊期: 2013年第07期

  • 虫草属真菌的生物活性

    虫草属真菌的生物活性非常广泛,主要表现为对外界侵袭因素的防御作用和具有调节机体整体功能的功效.涉及抗微生物和抗肿瘤作用,调节机体的代谢与内分泌系统,对重要脏器和系统具有保护性作用,同时对机体功能具有激活作用,如抗疲劳和雄性激素样作用,免疫调节是上述多种生物活性的重要机制之一.本文对虫草属真菌的相关活性及其作用的物质基础和机制进行了综述.

    作者:孙忠华;肖建辉 刊期: 2013年第07期

  • 参苓白术散对脾虚泄泻大鼠SGLT1 mRNA表达的影响

    目的:研究参苓白术散对脾虚泄泻大鼠的治疗作用及对SGLT1 mRNA表达的影响.方法:制作大鼠脾虚泄泻模型,以不同剂量的参苓白术散治疗,观察实验大鼠的一般症状、稀便率、体质量、D-木糖排泄及肠黏膜SGLT1 mRNA的表达.结果:参苓白术散能明显改善脾虚泄泻大鼠的一般状态、减少稀便率、减少体质量下降、促进D-木糖排泄及SGLT1 mRNA的表达,并具有一定的量效关系.结论:脾虚泄泻大鼠SGLT1 mRNA表达下调,参苓白术散可通过上调SGLT1 mRNA的表达治疗脾虚泄泻.

    作者:王桂香;黎同明;王素军;杨智承 刊期: 2013年第07期

  • 不同盐碱胁迫对党参种子萌发和幼苗生理特性的影响

    目的:研究不同盐碱胁迫对党参种子萌发和幼苗生长的影响,探寻提高其抗性能力的途径.方法:测定不同盐碱胁迫下党参种子的发芽势(Gv)、发芽率(Gr)、发芽指数(Gi)和复萌率,幼苗含水量、叶绿素含量、可溶性蛋白质含量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)活性.结果:对党参种子萌发的抑制影响为Na2CO3>NaCl+ Na2CO3> NaCl.随着3种盐碱处理的浓度逐渐增大,党参幼苗中叶绿素含量、幼苗含水量、可溶性蛋白质含量逐渐降低,且与对照组间均有显著性差异(P<0.05),均与盐碱处理浓度呈负相关性.但丙二醛(MDA)含量逐渐增大,与盐碱处理浓度呈正相关性.SOD、POD的活性均随盐碱处理浓度的增大而出现“先上升,后下降”的趋势.结论:不同盐碱胁迫对党参种子的萌发及幼苗的生长都有抑制作用,但抑制程度不同,其中Na2CO3> NaCl+ Na2CO3> NaCl.

    作者:韩多红;郑秀芳;王恩军;晋玲;张勇;戴琳 刊期: 2013年第07期

  • 葡萄皮中白藜芦醇提取工艺初步研究

    目的:对葡萄皮中白藜芦醇的提取工艺进行研究.方法:采用乙醇回流提取法从葡萄皮中提取白藜芦醇.对提取温度、提取时间、料液比、乙醇浓度进行单因素考察,采用三水平四因素正交试验优化白藜芦醇的提取工艺.结果:在提取温度为80℃,提取时间为5h,料液比为1∶20,乙醇浓度为70%的提取条件下,白藜芦醇得率高.结论:该优化工艺适用于葡萄皮中白藜芦醇的提取.

    作者:林勇;陈静 刊期: 2013年第07期

  • 丹红注射液治疗胸痹(冠心病心绞痛)瘀血闭阻证的临床疗效观察

    目的:进一步观察丹红注射液治疗胸痹(冠心病心绞痛)瘀血闭阻证的临床有效性和安全性.方法:采用随机试验、阳性药平行对照、多中心临床研究的方法,按国家药品临床研究相关要求,参考新药Ⅲ期临床试验,试验组与对照组比例按3∶1的原则,考虑小于10%的退出率,共确定264例患者(试验组198例,对照组66例),分别给予丹红注射液治疗和舒血宁注射液治疗,连续用药1疗程(14 d),观察结果.结果:心绞痛疗效的有效率在试验组和对照组分别为77.7%和72.7%,心电图疗效的有效率在试验组和对照组分别为37.9%和40.9%,硝酸甘油停减率在试验组和对照组分别为94.7%和97.8%,中医证候疗效的有效率在试验组和对照组分别为86.9%和84.8%,各项指标的组间差异均无统计学意义(P>0.05),且两组均未发现明显的不良反应.结论:丹红注射液治疗胸痹(冠心病心绞痛)瘀血闭阻证安全有效.

    作者:王婷;曹影;曾令霞 刊期: 2013年第07期

  • 酶法辅助提取鸭儿芹总黄酮的工艺优化研究

    目的:优化酶法辅助提取鸭儿芹总黄酮的工艺条件.方法:以鸭儿芹总黄酮提取率为主要指标,通过单因素试验和正交试验,确定佳工艺条件.结果:酶法辅助提取鸭儿芹总黄酮的佳工艺条件为:酶用量为1 U/mL,酶解pH值5.5,酶解温度为60℃,酶解时间为1h,料液比1∶30,提取温度为70℃,浸提时间为1 h,总黄酮提取率可达4.76%.结论:酶法辅助提取鸭儿芹总黄酮具有较高的提取率,是一种安全可靠的提取方法.

    作者:陆俊;许妍妍;容欧;李尚斌;周驰;李忠海 刊期: 2013年第07期

  • 双参通冠方对急性心梗模型大鼠血流动力学的影响

    目的:研究双参通冠方对急性心肌梗死模型大鼠血流动力学的影响.方法:SD大鼠分为假手术组、模型组及双参通冠低(2.5 g/kg)、中(5g/kg)、高(7.5 g/kg)剂量组,结扎冠状动脉左前降支建立大鼠心肌梗死模型,于十二指肠给药后0、15、30、60、90、120、180 min,采用PowerLab血流动力学信号采集与分析系统,分别检测大鼠的HR、MAP、LVSP、LVEDP、LVdp/dtmax、LVdp/dtmin.结果:与假手术组比较,模型组各时间点HR、MAP均升高,LVSP、LVEDP、LVdp/dtmax、LVdp/dtmin降低(P<0.05).与模型组比较双参组用药15 min后HR、MAP均降低,LVSP、LV-EDP、LVdp/dtmax、LVdp/dtmin均显著升高(P<0.05).双参通冠高剂量组LVSP、LVEDP、LVdp/dtmax、LVdp/dtmin改变与中低剂量组有显著差异(P<0.05).结论:双参通冠方能增加急性心梗模型大鼠心脏搏出量、降低心肌耗氧量和血管外周阻力,从而改善心功能.

    作者:王永刚;钟伟;于远望;郑刚;尚俊平;齐婧;尤金枝 刊期: 2013年第07期

  • 羟基红花黄色素A对AngⅡ诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用

    目的:研究羟基红花黄色素A(hydroxy-safflor yellow A,HSYA)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的保护作用及机制.方法:体外培养第4~6代HUVECs,分为正常对照组、AngⅡ损伤组(1μmoL/L)及HSYA低(10 μmoL/L)、中(30 μmoL/L)、高(100 μmoL/L)浓度预处理3h加AngⅡ损伤组.用MTT检测HUVECs活力,激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧(ROS),试剂盒检测细胞色素c氧化酶活性,流式细胞仪分析细胞凋亡率,western blot检测Caspase-3的表达.结果:与空白对照组比较,AngⅡ损伤模型组细胞活力显著降低、ROS生成显著增加、细胞色素c活性显著增强、细胞凋亡率显著升高、Caspase-3表达显著增加(P<0.01),提示AngⅡ可诱导HUVECs凋亡.HSYA能使模型细胞增殖活力显著增加、ROS生成显著减少、细胞色素c活性明显降低、细胞凋亡率和Caspase-3表达显著降低(P<0.05或P<0.01),提示HYSA可抑制AngⅡ引起的内皮细胞凋亡.结论:HSYA可以抑制AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡,抑制ROS生成保护细胞线粒体可能是其机制之一.

    作者:刘永刚;李芳君 刊期: 2013年第07期

  • 益气养阴活血法治疗糖尿病肾病5期的临床观察

    目的:观察益气养阴活血中药在糖尿病肾病5期治疗中的临床效果.方法:通过自身前后对照研究方法,患者在原西医常规保守治疗及针对原发病治疗的基础上加用中药口服治疗.结果:患者肾功能与治疗前相比,显效15例,有效11例,无效9例,总有效率74.29%.治疗后患者肾功能指标及24h尿蛋白量均有显著改善(P<0.01),血红蛋白改变无显著性差异(P>0.05).结论:益气养阴活血法治疗糖尿病肾病5期能显著降低血清肌酐、尿素氮及24h尿蛋白量,延缓肾脏透析的到来.

    作者:熊莉华;曾建勋;李瑞明 刊期: 2013年第07期

  • 丹参酮ⅡA对I/R大鼠脑组织NF-κB和IκB活性的影响

    目的:观察TanⅡA干预缺血-再灌注(I/R)大鼠脑组织病理学特征的变化,以及NF-κB、IκB的表达,研究TanⅡA对血管性痴呆的影响及其作用机理.方法:将80只大鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血-再灌注7d和15 d模型组及TanⅡA低、高剂量7d和15 d组,每组10只.TanⅡA低剂量组(4 mg/kg)和高剂量组(8 mg/kg)分别于术后连续腹腔注射给药7d和15 d,1次/d,假手术组和模型组给予等体积生理盐水腹腔注射.后用HE染色观察大脑组织的病理学变化,免疫组织化学染色法检测TanⅡA处理后各组NF-κB和IκB表达水平的改变.结果:TanⅡA组脑组织病变程度较MCAO模型组有不同程度减轻,其中以15 d高剂量组改变为明显,免疫组化结果也显示模型组的NF-κB和IκB表达水平在显著高于TanⅡA组和正常对照组(P<0.05).结论:TanⅡA能有效降低缺血-再灌大鼠模型脑组织NF-κB和IκB蛋白的表达水平,其机制可能是通过抑制NF-κB和IκB的活性和生成有效的降低大脑中炎性反应的发生,从而发挥保护大脑神经元,改善缺血-再灌脑组织损伤的作用.

    作者:周丽;刘艳平;王芳;杨凤真 刊期: 2013年第07期

  • 蜂海绵Haliclona sp.的化学成分研究

    目的:对蜂海绵Haliclona sp.的化学成分进行研究.方法:利用硅胶、凝胶柱色谱及薄层制备色谱等方法进行分离纯化,根据理化常数及现代波谱技术鉴定其结构.结果:从蜂海绵Haliclona sp.中分离得到5个化合物,分别鉴定为:吲哚-3-乙醇[2-(1 H-indol-3-yl) ethanol,1]、吲哚-3-乙胺[(1H-indol-3-yl) ethan-amine,2]、β-苯乙胺(2-phenylethanamine,3)、正十三烷(tridecane,4)、胆甾-3-羟基-5-烯-7-酮(5-cholesten-3β-ol-7-one,5).结论:以上5个化合物均为首次从该属植物中分离得到.

    作者:李云秋;王宾;刘永宏 刊期: 2013年第07期

中药材杂志

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