申屠路媚；卢敏；王燕；牟艳玲
目的:探讨长链非编码RNA MALAT1(lncRNA-MALAT1)是否可通过靶向下调微小RNA-570-3p(miR-570-3p)促进胃癌细胞增殖.方法:将体外培养的人胃癌细胞株SGC7901分为3组:空白对照组、si-MALAT1组和si-MALAT1 NC组,其中空白对照组为单纯的SGC7901细胞株,si-MALAT1组和si-MALAT1 NC组分别转染ln-cRNA-MALAT1 siRNA及其阴性对照.MTS法检测各组细胞的增殖情况.RT-qPCR检测单纯的SGC7901细胞株培养不同时点的miR-570-3p及不同组别lncRNA-MALAT1和miR-570-3p的表达情况.通过生物信息学软件RegRNA预测获取lncRNA-MALAT1与miR-570-3p潜在的互补结合位点.将MALAT1及其突变体克隆到萤光素酶载体psi-CHECK-2中,构建MALAT1野生型和突变型质粒,并采用酶切和测序方法鉴定psiCHECK-2-MALAT1载体是否构建成功.将MALAT1野生型和突变型质粒分别与miR-570-3p模拟物、miR-570-3p抑制剂、miR-570-3p模拟物阴性对照、miR-570-3p抑制剂阴性对照在293T细胞中共转染,收集细胞后通过双萤光素酶报告系统检测不同组别的萤光素酶活性,从而对lncRNA-MALAT1与miR-570-3p的靶向调节关系进行验证.结果:与空白对照组和si-MALAT1 NC组相比较,si-MALAT1组在不同时点(24、48和72 h)的A490值显著降低(P<0.01).在单纯的SGC7901细胞株中,随着时间的推移,miR-570-3p的表达量逐渐下降(P<0.05).si-MALAT1组lncRNA-MALAT1的表达水平显著降低,而miR-570-3p表达显著升高(P<0.01).双萤光素酶报告基因检测显示,与miR-570-3p模拟物阴性对照组相比,miR-570-3p模拟物组MALAT1野生型报告基因的萤光素酶活性显著降低(P<0.01),而miR-570-3p抑制剂组MALAT1野生型报告基因的萤光素酶活性较miR-570-3p模拟物组明显增高(P<0.01);miR-570-3p模拟物、miR-570-3p抑制剂、miR-570-3p模拟物阴性对照及miR-570-3p抑制剂阴性对照对MALAT1突变型的表达均无明显影响.结论:lncRNA MALAT1能够通过靶向结合并下调miR-570-3p促进胃癌细胞增殖.
作者：侯婧瑛；凌辉；金小岩；罗信；李楚强；王凌云 刊期： 2018年第12期
目的:研究KDM5 B基因在乳腺癌组织中的表达情况,并探讨其表达差异与患者临床病理资料和预后的关系.方法:从肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中收集113例正常乳腺组织和1090例乳腺癌数据集,下载KDM5B mRNA表达谱资料;收集中山大学附属第三医院甲乳外科2015年～2016年乳腺癌切除标本共90例,采用real-time PCR的方法检测乳腺癌及其癌旁组织中KDM5B mRNA的表达量,取中位数分为高表达组与低表达组,分析其与临床资料及病例特征的关系;利用Kaplan-Meier plotter分析KDM5B mRNA表达与乳腺癌患者预后的相关性.结果:KDM5B在乳腺癌中的表达均显著高于正常乳腺组织(P<0.01).在TCGA的乳腺癌数据中,KDM5B的表达与人表皮生长因子受体2(HER2)、雌激素受体(ER)、年龄、病理组织类型及淋巴结转移显著相关(P<0.01),与孕激素受体(PR)、绝经及远处转移无显著相关.在我们收集的乳腺癌样本中,KDM5B的表达与HER2、年龄及淋巴结转移显著相关(P<0.05),而与ER、PR、绝经、病理组织类型和远处转移无显著相关.KDM5B表达越高,乳腺癌患者总生存时间(HR=1.39,P=0.005)和无病生存时间(HR=1.32,P<0.001)越短.结论:在乳腺癌组织中KDM5B高表达,且与患者的预后相关;KDM5B的表达与乳腺癌患者HER2表达、年龄和淋巴结转移显著相关.
作者：熊志勇；吴珏堃；林良奕 刊期： 2018年第12期
目的:探讨Krüppel样因子4(KLF4)对结直肠癌细胞活力、凋亡及顺铂化疗敏感性的影响.方法:Western blot法检测KLF4在结直肠癌Caco2、SW480和HCT116细胞中的表达.将SW480细胞分为pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1空质粒)、pcDNA3.1-KLF4组(转染构建的pcDNA3.1-KLF4过表达质粒)和pcDNA3.1-KLF4+顺铂组(转染pcDNA3.1-KLF448 h后用1 mg/L顺铂处理细胞48 h),Western blot检测KLF4、p-IκBα、细胞周期素D1(cyclin D1)和生存素(survivin)的蛋白水平;CCK-8法检测各组细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;DCFH-DA探针检测活性氧簇(ROS)含量.结果:KLF4在结直肠癌细胞中的表达均显著低于在人结肠黏膜上皮NCM460细胞的表达(P<0.05).与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-KLF4组的KLF4蛋白表达显著增高(P<0.05),细胞活力及cyclin D1和survivin的蛋白表达均显著降低,细胞凋亡率、ROS含量及p-IκBα的蛋白表达均显著增高;而pcD-NA3.1-KLF4+顺铂组细胞活力及cyclin D1和survivin的蛋白表达均显著低于pcDNA3.1-KLF4组,细胞凋亡率、ROS含量及p-IκBα的蛋白表达均显著高于pcDNA3.1-KLF4组(P<0.05).结论:上调结直肠癌细胞KLF4基因表达可降低肿瘤细胞活力,诱导细胞凋亡,增强顺铂化疗敏感性,其机制可能与提高细胞内ROS含量及下调NF-κB信号关键分子IκBα的磷酸化水平有关.
作者：杨洲；刚海菊；覃先蓬；贾贵清；王波；杨春；赵高平 刊期： 2018年第12期
目的:检测含F框/WD重复域蛋白7(FBXW7)在1型糖尿病大鼠心肌中的表达,探究其在糖尿病心肌病发生发展中的作用.方法:实验将大鼠分为非糖尿病组(ND组)及糖尿病4、8和12周模型组(DM组),采用链脲佐菌素(60 mg/kg)一次性腹腔注射建立1型糖尿病大鼠模型.HE染色法观察心肌病理结构变化,Western blot和免疫组化法检测心肌中FBXW7蛋白的表达变化.结果:显微镜下可见糖尿病组大鼠心肌局灶性心肌细胞变性、坏死.Western blot和免疫组化结果均显示,4周、8周及12周DM组大鼠心肌中的FBXW7表达相对于ND组显著增加(P<0.01),但是相比于4周和8周DM组,12周DM组大鼠心肌中的FBXW7表达相对下降(P<0.05).结论:随着糖尿病病程的延长,FBXW7在糖尿病心肌病大鼠心肌组织中的表达呈现先升高后降低的趋势,提示其在糖尿病心肌病发生发展中发挥了一定的作用.
作者：申屠路媚；卢敏；王燕；牟艳玲 刊期： 2018年第12期
目的:基于CRISPR/Cas9技术构建SETD2基因敲除鼻咽癌(NPC)细胞株,并对该细胞株的增殖特性进行分析.方法:采用RT-PCR及Western blot检测永生化鼻咽黏膜细胞系NP-69及不同分化NPC细胞系CNE1、CNE2Z和C666-1中SETD2的表达情况,筛选出SETD2高表达细胞系CNE1.应用CRISPR/Cas9技术敲除CNE1细胞中的SETD2基因,筛选SETD2稳定敲除细胞株.采用CCK-8和平板集落形成实验分析SETD2基因敲除前后CNE1细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期的分布,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达.结果:与NP-69细胞相比,随着细胞分化程度的降低,SETD2在CNE1、CNE2Z和C666-1细胞中的表达逐渐下降(P<0.01).基于CRISPR/Cas9方法成功地从15个转染了小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)的CNE1细胞单克隆中筛选出2个SETD2稳定敲除的细胞株CNE1-SETD2-KO-#5和#9.CCK-8及平板集落形成实验结果证实,相对于CNE1-WT细胞,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞的增殖能力增强(P<0.05);流式细胞术分析表明,CNE1-SETD2-KO-#5和#9细胞G1期减少而G2/M和S期均增加(P<0.05);Western blot证实,SETD2敲除后增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素D1(cyclin D1)、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)和CDK4表达增加,p21表达减少(P<0.05).结论:基于CRISPR/Ca9技术成功构建SETD2基因敲除NPC细胞株.NPC细胞中SETD2表达与细胞分化程度有关;SETD2表达缺失通过上调cyclin D1、cyclin B1、cyclin A2、cyclin E1、CDK2和CDK4并下调p21表达而促进细胞增殖.
作者：王思思；廖晓敏；邵钟铭；袁建玲；封慕茵；哈艳平；李汝佳；申志华；揭伟 刊期： 2018年第12期
目的:研究微小RNA-497(miR-497)抑制甲状腺乳头状癌(PTC)细胞活力、侵袭和迁移的作用机制.方法:采用TargetScan 6.0软件预测miR-497的靶基因,通过萤光素酶报告基因检测法、RT-qPCR和Western blot进行靶基因验证,再通过RT-qPCR检测PTC组织中miR-497及其靶基因的表达,并通过基因转染研究miR-497及其靶基因对PTC细胞活力、侵袭和迁移的影响.结果:TargetScan 6.0软件预测、萤光素酶报告基因检测法、RT-qPCR和Western blot均证明AKT3是miR-497的直接靶基因.此外,PTC组织中的AKT3表达水平较正常组织高(P<0.05),且与miR-497表达呈负相关(r=-0.5737,P<0.01).下调AKT3可以抑制PTC细胞的活力、迁移和侵袭,与miR-497过表达在PTC细胞中具有相似的作用.结论:miR-497通过直接靶向调节AKT3抑制甲状腺乳头状癌细胞的活力、侵袭和迁移.
作者：张莉君；叶颖；张遂亮；庄菊花；夏伟 刊期： 2018年第12期
目的:探讨低压低氧暴露对小鼠海马CA1区神经元树突棘形态及细丝蛋白A表达的影响.方法:6～8周龄C57BL/6雄性小鼠分为常氧暴露7 d组、常氧暴露14 d组、低压低氧暴露7 d组和低压低氧暴露14 d组.低压低氧暴露组置于低压舱模拟6000 m海拔高原进行低压低氧暴露.Golgi染色法观察小鼠海马CA1区树突的分支数,以及基树突棘和顶树突棘长度和密度的变化;Western blot方法检测小鼠海马细丝蛋白A表达水平的变化;免疫组织荧光染色法检测小鼠海马CA1区细丝蛋白A的表达及分布变化.结果:与常氧暴露组相比,低压低氧暴露后,小鼠海马CA1区树突分支数的差异无统计学显著性,但基树突棘和顶树突棘的长度显著增加(P<0.05),密度显著降低(P<0.01).低压低氧暴露后,小鼠海马细丝蛋白A表达水平低于常氧暴露组(P<0.01或P<0.05).免疫组织荧光染色显示细丝蛋白A在小鼠海马CA1区表达,低压低氧暴露后,海马CA1区细丝蛋白A表达水平降低(P<0.05).结论:慢性低压低氧暴露可影响小鼠海马CA1区细丝蛋白A表达,并导致海马CA1区神经元树突棘形态发生改变.
作者：周杨；赵再华；沈学锋；骆文静；曹子鹏 刊期： 2018年第12期
目的:设计针对肺癌抗原环加氧酶2(COX-2)的长肽,并鉴定这些长肽的免疫活性.方法:通过NetCTL 1.2、SYFPEITHI和IEDB软件预测打分来选取COX-2的HLA-A2限制性表位;对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位集中区域选取合适长度的长肽,通过体外活性实验验证长肽是否具有免疫活性.树突状细胞(DC)荷肽实验和ELISPOT检测荷长肽DC诱导的外周血单个核细胞(PBMCs)中干扰素γ(IFN-γ)的释放;胞内因子染色检测表位肽诱导CTL的能力;乳酸脱氢酶(LDH)实验和CFSE法检测CTL对靶细胞的杀伤活性.结果:ELISPOT和胞内因子染色实验结果显示,长肽P315-338和P375-401诱导的CTL具有分泌IFN-γ的能力.CFSE和LDH细胞毒实验结果显示表位P315-338和P375-401对靶细胞有一定的杀伤作用.结论:成功筛选并鉴定出针对肺癌抗原COX-2的2条长肽.这2条长肽具有用作免疫治疗疫苗的潜能.
作者：范双莉；任亚丽；赵志华 刊期： 2018年第12期
目的:探讨内质网应激后原代海马神经元树突棘密度及突触蛋白表达的变化,以及通过内质网应激分子伴侣4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)抑制内质网应激对这种神经元损伤的抑制作用.方法:原代培养新生大鼠海马神经元,将表达增强型绿色荧光蛋白的质粒转染到原代培养5～7 d(DIV 5～7)的大鼠海马神经元内持续培养,DIV 20时分为对照组、衣霉素(tunicamycin,Tm)处理组和Tm+4-PBA预处理组(Tm处理前1 h给予4-PBA),采用Western blot法检测内质网应激标志蛋白BiP和突触蛋白的表达水平,激光共聚焦显微镜下观察神经元,分析树突棘密度,采用MTT法分析细胞活力.结果:Tm处理后使BiP蛋白水平明显升高,而4-PBA预处理使BiP蛋白水平显著下降(P<0.05).Tm引起的原代海马神经元树突棘密度下降及突触蛋白的表达下降能够被4-PBA抑制.Tm引起的细胞活力下降可被4-PBA抑制.结论:Tm能够通过诱导内质网应激而引起原代海马神经元树突棘密度下降及突触蛋白表达下降,而提前给予4-PBA预处理可明显降低内质网应激反应,抑制树突棘密度下降及突触蛋白表达下降,从而减轻原代海马神经元的损伤.
作者：柳秀平；吕凌云；李夏春 刊期： 2018年第12期
目的:观察并探讨人参皂苷Rh1(G-Rh1)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾纤维化的抑制作用及其机制.方法:雄性SD大鼠40只,分为假手术组(sham组)、UUO组、G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组.手术后第2天开始,G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组分别每日灌胃50 mg/kg和100 mg/kg G-Rh1,连续2周.给药2周后,收集24 h尿测定尿蛋白,收集血清测定血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN).HE染色观察肾组织病理变化并对肾组织损伤程度评分.利用免疫组化和Western blot法观察肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白和结缔组织生长因子(CTGF)的表达.结果:肾功能检测显示,各组大鼠24 h尿蛋白定量的差异无统计学显著性.UUO组BUN和SCr明显高于sham组(P<0.05),G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组BUN和SCr明显低于UUO组(P<0.05),同时G-Rh1高剂量组BUN和SCr低于G-Rh1低剂量组(P<0.05).光镜下观察,与sham组比较,UUO组病理改变显著,肾组织损伤明显,G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组与UUO组比较,肾损伤明显改善,G-Rh1高剂量组改善程度较G-Rh1低剂量组更显著.肾组织免疫组化显示,与sham组比较,UUO组肾小管及肾间质中TGF-β1表达明显增多,G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组与UUO组比较,TGF-β1表达明显下降,G-Rh1高剂量组较G-Rh1低剂量组降低更明显.Western blot检测显示,与sham组比较,UUO组Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA和CTGF蛋白表达明显增多(P<0.01),G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组与UUO组比较,Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA表达明显下降(P<0.05),G-Rh1高剂量组较G-Rh1低剂量组α-SMA和CTGF蛋白表达明显降低(P<0.05),而Ⅰ型胶原蛋白表达无显著差异.结论:人参皂苷Rh1可缓解UUO大鼠肾组织纤维化,改善肾功能,其主要机制可能是抑制TGF-β1信号通路中纤维化相关因子的表达.
作者：张春晶；张越；王小龙；郭红艳；徐晶；李淑艳；赵正林 刊期： 2018年第12期
目的:研究过表达吞蛋白A2(endophilin A2,EndoA2)对异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)诱导的心肌肥大的影响.方法:取健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、Ad-EndoA2组、ISO模型组及ISO+Ad-EndoA2组,其中Ad-EndoA2组和ISO+Ad-EndoA2组于给药前1 d左心室壁注射Ad-EndoA2腺病毒,假手术组和ISO组注射磷酸缓冲盐溶液,然后分别连续7 d皮下注射生理盐水或ISO.7 d后用小动物超声测定心功能指标,然后处死大鼠,收集心脏,以心脏重量指数、HE染色及胚胎基因表达水平评价心肌肥大情况,Western blot法检测自噬相关蛋白LC3和P62的表达.结果:小动物超声结果显示,与假手术组相比,ISO组大鼠处于心肌肥大代偿期(左室收缩期前壁厚度、左室收缩期后壁厚度、射血分数和短轴缩短率升高,左室收缩内径及心输出量下降,均P<0.05),心脏重量指数、HE染色及RT-qPCR结果也均显示心脏发生了明显肥大(P<0.05),过表达EndoA2可明显减轻ISO诱导的心肌肥大,改善心功能(P<0.05).Western blot结果显示,过表达EndoA2明显逆转ISO引起的自噬水平降低(P<0.05).结论:过表达EndoA2可减轻ISO诱导的大鼠心肌肥大,可能与加强自噬有关.
作者：王昕秋悦；湛青平；刘芸 刊期： 2018年第12期
目的:研究传统中药提取物nodosin对人肝细胞癌HepG2细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法:将nodosin设置为1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L不同浓度组,作用于HepG2细胞24 h后,用Hoechst 33258染色和电镜观察不同浓度的药物对细胞形态学的影响,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用RT-qPCR检测凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)mRNA的表达,用Western blot检测caspase-3及其前体和活化体的蛋白水平.结果:形态学结果显示,随着用药剂量的增加,细胞皱缩和细胞核偏移越明显,凋亡小体在5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L剂量组明显增多.Apaf-1 mRNA的表达增加,caspase-3及其前体的表达和cleaved caspase-3的蛋白水平随着用药剂量的增加逐渐增加(P<0.01).结论:Nodosin能够诱导HepG2细胞凋亡.该作用可能是通过增加Apaf-1 mRNA的表达继之激活caspase-3实现的.
作者：海广范；张慧；马敬；郭兰青；王海燕 刊期： 2018年第12期
目的:探讨黄酒多酚化合物(YWPC)减轻阿霉素(即多柔比星,DOX)所致心脏毒性的作用及其机制.方法:将40只雄性SD大鼠随机分成4组:对照组、YWPC组、DOX组和DOX+YWPC组.干预4周后,超声心动图检测大鼠心功能;病理学染色观察心脏组织病理学改变;比色法、DHE染色、TUNEL染色和Western blot法检测心肌组织中心肌酶、氧化应激和凋亡水平的改变.结果:与对照组相比,DOX组左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短分数(LVFS)明显下降,而收缩期左室内径(LVIDs)和舒张期左室内径(LVIDd)明显增加;而与DOX组相比,DOX+YWPC组LVEF和LVFS增加,LVIDs和LVIDd下降(P<0.05).DOX组血清心肌损伤指标乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、天冬氨酸转氨酶(AST)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)较对照组明显增加;而DOX+YWPC组上述指标较DOX组下降(P<0.05).与对照组比较,YWPC组无明显病理学改变,DOX组出现心肌纤维排列紊乱、细胞核溶解和肌纤维解体,而DOX+YWPC组上述情况明显改善.与对照组比较,DOX组活性氧簇(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽(GSH)水平下降,丙二醛(MDA)水平增加;与DOX组相比,DOX+YWPC组上述指标均得到逆转(P<0.05).同时,DOX组较对照组心肌细胞凋亡水平、Bax/Bcl-2比和cleaved caspase-3水平增加,而DOX+YWPC组心肌细胞凋亡明显受到抑制(P<0.05).结论:黄酒多酚可以通过减少氧化应激和抑制心肌细胞凋亡拮抗阿霉素所致的心脏毒性.
作者：林辉；倪婷娟；张杰；池菊芳；项美香；郭航远 刊期： 2018年第12期
目的:建立分析CD3+、CD4+和CD8+T细胞Vβ亚家族中免疫抑制性受体程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)分子免疫表型的方法,从而了解人体外周血T细胞谱系中PD-1表型细胞的分布频率.方法:收集健康个体(HI)外周血10例,利用抗CD45、CD3、CD4、CD8、PD-1等多色荧光流式单抗,以及T细胞受体(TCR)Vβ谱系试剂盒[IOTest?Beta Mark TCR VβRepertoire Kit,共8管,每一管均为FITC和PE偶联的复合抗体(A～H),每一管复合抗体包含3个TCR Vβ亚家族的抗体],检测T细胞亚群TCR Vβ亚家族中PD-1的分布情况.结果:在10例HI的检测中,CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞亚群中检测的24个TCR Vβ亚家族总和符合试剂盒所提供的Quick Reference Card数据,初步结果显示,HI中CD3+T细胞主要优势TCR谱系是Vβ2、Vβ3、Vβ8、Vβ9、Vβ5.1、Vβ13.1和Vβ13.2;而在CD3+CD4+T细胞中的优势利用主要集中在Vβ2、Vβ3、Vβ8、Vβ9、Vβ5.1和Vβ13.1;在CD3+CD8+T细胞中则主要为Vβ1、Vβ2、Vβ3、Vβ9、Vβ13.1和Vβ13.2等亚家族.进一步分析显示PD-1+细胞在HI的CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞24个TCR Vβ亚家族中均可以检测到,PD-1+细胞在T细胞各亚群中分布频率有个体差异,在CD4+T细胞中,以Vβ5.2+T细胞的分布频率较高,而在CD8+T细胞中,以Vβ11+和Vβ13.6+T细胞的分布频率较高.结论:本项工作利用健康人样本成功建立了多色荧光流式细胞术检测T细胞亚群TCR Vβ谱系中免疫抑制性受体PD-1分子免疫表型的方法,为进一步应用于分析白血病等病人TCR Vβ谱系的免疫抑制特点提供了新方法.
作者：陈少华；黄静颖；谭家雄；陈友纯；钟隽；卢育洪；郁志；李扬秋 刊期： 2018年第12期
目的:对(+)-2-(1-羟基-4-环己酮)乙基咖啡酸酯(HOEC)在大鼠关节炎模型上进行药效学评价,并利用大鼠全血花生四烯酸(AA)代谢模型,探究引起HOEC对关节炎的非剂量依赖性治疗作用的可能机理.方法:(1)采用大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)模型,研究3个不同剂量的HOEC对CIA的治疗情况,并用免疫组化方法检测关节组织中胞质磷脂酶A2(cPLA2)、5-脂氧合酶(5-LOX)和环氧合酶2(COX-2)的表达水平;(2)ELISA检测HOEC和其体内代谢物咖啡酸对大鼠全血AA代谢模型中代谢产物的作用.结果:(1)HOEC对大鼠CIA有治疗作用,但高剂量(10 mg/kg)组的治疗效果不如低(1 mg/kg)和中剂量(3 kg/kg)组;(2)HOEC对大鼠关节组织中cPLA2、5-LOX和COX-2的表达水平均有抑制作用;(3)HOEC对大鼠全血AA代谢模型中LOX和COX通路的代谢产物均有抑制作用,而咖啡酸对这些代谢产物的抑制作用弱于HOEC.结论:HOEC对大鼠CIA模型的抗炎作用可能与抑制关节组织中cPLA2、5-LOX和COX-2的表达有关;HOEC对治疗大鼠CIA的非剂量依赖现象可能与其代谢产物咖啡酸对AA代谢产物生成的抑制作用弱于HOEC有关.
作者：杨文；刘远儒；李洪林；王蕊 刊期： 2018年第12期
目的:检测程序性细胞死亡蛋白4(PDCD4)在肺纤维化模型中的表达水平及对细胞活力和肺纤维化指标的影响及其机制.方法:Western blot和RT-qPCR检测PDCD4、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原蛋白(COL-I)在人胚肺成纤维细胞系HFL-1组和HFL-1+TGF-β1组的表达水平.将质粒pEZ-M03-PDCD4和空质粒pEZ-M03转染进肌成纤维细胞(MB),应用Western blot检测PDCD4的蛋白表达水平;应用Western blot检测空白对照组、pEZ-M03-PDCD4组、pEZ-M03组和LY294002组PI3K/AKT信号通路相关分子p-AKT和AKT的蛋白水平及周期相关蛋白c-Myc和cyclin D1的表达情况;CCK-8法检测PDCD4对MB活力的影响;羟脯氨酸消化法检测HFL-1细胞和转染后MB上清液羟脯氨酸含量.Western blot检测小鼠模型组与对照组中肺组织PDCD4的表达水平.结果:与HFL-1组比较,HFL-1+TGF-β1组α-SMA和COL-I的mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.01),PDCD4 mRNA表达无明显变化,PDCD4的蛋白表达明显下调(P<0.01).与空白对照组及pEZ-M03组比较,pEZ-M03-PD-CD4组的PDCD4蛋白表达水平明显上调(P<0.05),c-Myc和cyclin D1的蛋白表达都显著减少(P<0.05),细胞活力明显受到抑制(P<0.01),上清液中羟脯氨酸的含量显著减少(P<0.05).与空白对照组相比,pEZ-M03-PDCD4组及LY294002组中的p-AKT蛋白水平显著减少(P<0.05),pEZ-M03组的差异无统计学显著性.在小鼠体内模型实验中,与对照组相比,模型组的PDCD4表达减少(P<0.01).结论:PDCD4在肺纤维化过程中低表达.过表达PDCD4可抑制MB活力,减少羟脯氨酸含量,抑制PI3K/AKT信号通路.
作者：向莱；江涛 刊期： 2018年第12期
目的:探索二甲双胍联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞活力和凋亡的影响及其可能的机制.方法:采用不同浓度(2、5、10、20、40和80 mmol/L)二甲双胍作用于体外培养的MCF-7细胞,MTT法检测细胞的活力.采用2 mmol/L二甲双胍和2.4 mg/L紫杉醇单独或联合处理细胞,并加入一磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)信号转导通路抑制剂compound C.实验分为对照组、二甲双胍组、紫杉醇组、联合组和联合+compound C组;流式细胞术检测细胞的凋亡率,采用RT-qPCR和Western blot法检测Bax、Bcl-2和caspase-3的mRNA和蛋白表达量,Western blot检测AMPK和P21蛋白的表达量.结果:不同浓度二甲双胍(2、5、10、20、40和80 mmol/L)显著抑制乳腺癌细胞的活力(P<0.05),且具有一定浓度依赖性.与对照组相比,2 mmol/L二甲双胍和2.4 mg/L紫杉醇单独或联合均可显著抑制细胞活力并诱导其凋亡(P<0.05),显著下调Bcl-2水平(P<0.05),上调Bax和caspase-3水平(P<0.05),促进AMPK和P21蛋白表达.联合使用的效果优于单独使用.加入AMPK抑制剂可削弱此作用.结论:二甲双胍联合紫杉醇可抑制乳腺癌MCF-7细胞活力,诱导其凋亡.此作用与激活AMPK信号转导通路并调节细胞凋亡信号通路有关.
作者：梁君伟；方志华；李青山 刊期： 2018年第12期
目的:探讨抑制骨髓间充质干细胞外泌体的释放对其生物学特性的影响及其机制.方法:利用TALEN技术靶向性敲除Rab27a基因构建外泌体释放缺失小鼠模型,随后分离、培养并鉴定骨髓间充质干细胞,用外泌体提取试剂盒提取培养基中的外泌体,并用纳米颗粒跟踪分析(NTA)计数外泌体的数量,透射电镜观察外泌体的大小及形态.利用EdU实验及检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达来评价间充质干细胞的增殖能力.通过TUNEL染色及MTS实验检测间充质干细胞对缺氧的耐受能力.结果:敲除Rab27a的间充质干细胞释放外泌体的数量明显减少,抑制间充质干细胞外泌体的释放能显著降低其增殖及对缺氧的耐受能力.结论:抑制间充质干细胞外泌体的释放可导致其增殖能力及对缺氧的耐受能力明显降低.
作者：郭贵显；成传访；顾杰蕾；周文怡；汤晓燕；钟赟；陈颜芳；刘世明 刊期： 2018年第12期
目的:探讨白细胞介素17A(IL-17A)对RAW264.7巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响.方法:用不同浓度及的IL-17A处理小鼠RAW264.7细胞6 h或24 h,或用同一浓度IL-17A处理RAW264.7细胞不同时间;采用RT-qPCR及Western blot法检测细胞ABCA1的mRNA和蛋白表达情况;采用NBD-胆固醇法检测细胞胆固醇流出情况;采用油红O染色法测定细胞脂质蓄积情况.结果:与对照组相比,IL-17A可以增加RAW264.7巨噬细胞ABCA1蛋白的表达水平,但不影响ABCA1 mRNA的表达.经IL-17A干预,RAW264.7巨噬细胞内胆固醇向ApoA-1流出增多,同时细胞脂质蓄积显著减少(P<0.01).结论:IL-17A可以增加RAW264.7巨噬细胞ABCA1的表达水平,其机制并不是通过转录水平实现的,这种影响可能与其抗动脉粥样硬化作用有关.
作者：马望歌；周栋；王丽君；刘艳；陈小莉；郭宁；周娟 刊期： 2018年第12期
目的:观察黄芪甲苷是否通过调控微小RNA-33a(miR-33a)而影响下游信号三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达,促进巨噬细胞内胆固醇流出,从而研究黄芪甲苷抗动脉粥样硬化的作用机制.方法:体内实验:采用HE染色检测各组小鼠主动脉横截面病理损伤程度real-time PCR和Western blot分别检测小鼠主动脉ABCA1的mRNA和蛋白表达.体外实验:建立THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞,然后用黄芪甲苷含药SD大鼠血清处理,采用real-time PCR检测细胞miR-33a表达;细胞随机分为空白血清组、黄芪甲苷含药血清组及黄芪甲苷含药血清+miR-33a mimic处理组,real-time PCR和Western blot法检测细胞ABCA1的mRNA和蛋白表达,油红O染色和高效液相色谱法检测细胞内脂质含量,[3 H]法检测细胞内胆固醇流出.结果:体内实验显示,黄芪甲苷组小鼠血管各层结构正常,排列整齐,局部有小灶性的钙化颗粒物沉积,病变轻,斑块小,泡沫细胞和脂质减少,弹力板基本完整,病变程度明显轻于模型组.与模型组相比,黄芪甲苷组小鼠主动脉的miR-33a表达量降低,ABCA1 mRNA和蛋白相对表达量均升高(P<0.05).体外实验显示,在不影响THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞活性的情况下,黄芪甲苷含药血清能明显上调ABCA1的mRNA和蛋白表达,但能被转染miR-33 mimic抑制;黄芪甲苷含药血清可减少细胞中的脂质蓄积,但能被细胞中转染miR-33 mimic所弱化;黄芪甲苷减少细胞内胆固醇蓄积与其促进细胞内胆固醇流出有关,细胞中转入过量miR-33a可以抑制胆固醇流出.结论:黄芪甲苷可通过减少miR-33a的生成,进而上调ABCA1表达,促进巨噬细胞中胆固醇流出,这可能是黄芪甲苷抗动脉粥样硬化作用的分子机制之一.
作者：秦合伟；李彦杰；张志鑫；任锟；李斯锦；卢永保 刊期： 2018年第12期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
