学术投稿

长期体外培养对人脂肪源性间充质干细胞生物学特性的影响

李慧武;戴尅戎;汤亭亭;夏胜利;干耀恺;毛远青

关键词:脂肪源性间充质干细胞, 生物学, 体外培养, 人
摘要:目的 通过观察长期体外培养对人脂肪源性间充质干细胞(ADSCs)生物学特性的影响,鉴定ADSCs作为组织工程种子细胞的优越性.方法 通过流式细胞技术观察长期体外培养对人ADSCs表面抗原表达和凋亡的影响.通过碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色及RT-PCR检测长期体外培养对人ADSCs成骨分化潜能的影响.结果 原代ADSCs表面高表达间充质干细胞表面标记物,而不表达血源性细胞表面标记物,标记物不随传代次数变化.早期ADSCs凋亡率为1%~2%,随传代次数增多凋亡率逐渐增加,但幅度不大.碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色和RT-PCR检测显示ADSCs传至第8代时仍能保持成骨分化潜能.结论 ADSCs生物学特性稳定,是较为理想的组织工程及再生医学研究的种子细胞.
中华创伤骨科杂志相关文献
  • 膝关节外侧入路治疗胫骨外侧平台骨折

    目的 探讨膝关节外侧入路治疗胫骨外侧平台骨折的可行性及初步临床效果.方法 2001年9月~2004年3月采用膝关节外侧入路手术治疗43例Schatzker分型Ⅰ~Ⅲ型胫骨平台骨折患者,观察手术操作时间、术中出血量及术后功能结果.结果 41例患者获12~42个月(平均23.5个月)随访.手术时间平均为75 min,出血量平均为300 mL.2例患者术后2周拆线时出现局部皮缘浅层坏死,3例出现深静脉血栓,1例出现肺栓塞.术后膝关节外侧稳定,未见松弛.按Rasmussen疗效评分标准评定疗效:优22例,良13例,可4例,差2例,优良率为85.4%.结论 膝关节外侧入路手术操作简单、损伤小、术后功能恢复快,是SchatzkerⅠ~Ⅲ型胫骨外侧平台骨折手术治疗比较可靠的方法.

    作者:魏万富;辛景义;张铁良 刊期: 2006年第10期

  • 兔骨髓基质干细胞成骨诱导及增强型绿色荧光蛋白基因腺相关病毒体外转染的研究

    目的 探讨重组增强型绿色荧光蛋白基因腺相关病毒(AAV-EGFP)对细胞生物学行为的影响,为组织工程寻找一种理想的病毒载体及细胞示踪标记方法.方法 采用全骨髓法分离培养BMSCs,诱导培养液诱导细胞成骨转化,行细胞形态学检查、细胞表面抗原鉴定、碱性磷酸酶(ALP)染色及Von Kossa染色,评价细胞成骨情况.在此基础上转染AAV-EGFP,观察细胞形态学改变及荧光表达的时间与强度,计算转染效率,确定转染的较佳感染复数(MOI)值,MTF法描记细胞生长曲线,观察AAV载体对细胞活性的影响.结果 细胞扩增迅速、形态良好、纯度较高,经诱导后呈现明显的成骨改变.实验确定AAV转染细胞的较佳MOI值为1×105,以此值转染AAV-EGFP后细胞荧光持续高效稳定表达(>8周),并可随细胞有丝分裂传至子代,可以满足示踪标记的需要,AAV转染效率高,对细胞活性影响小.结论 AAV长期稳定表达目的基因,是一种理想的组织工程病毒载体;基于基因转染方法高效稳定表达EGFP,可作为种子细胞良好的示踪标记方法.

    作者:郑召民;董智勇;邝冠明;李佛保 刊期: 2006年第10期

  • 小肠粘膜下层表面肝素化及肝素化后其抗凝血性能的研究

    目的 研究等离子体引发血管组织工程支架--小肠粘膜下层(SIS)表面肝素化及肝素化后SIS膜的抗凝血性能.方法 利用等离子体引发技术在SIS膜表面结合肝素,通过体外凝血时间检测及循环血流下观察肝素化SIS管腔的长期通畅性,以评价SIS膜的血液相容性.结果 肝素结合到低温等离子体引发的SIS膜表面,肝素化SIS膜表面水接触角降低,亲水性增强,表面自由能增大,其凝血酶原时间、部分凝血活酶时间及凝血酶时间明显延长,肝素化SIS小口径血管支架保持通畅达6周.结论 SIS膜表面通过等离子体进行肝素固化处理后具有良好而持久的抗凝血性能,表现出良好的血液相容性.

    作者:韩本松;范存义;刘生和 刊期: 2006年第10期

  • 剪切应力诱导成骨相关基因表达的研究

    目的 探讨剪切应力对成骨细胞基因表达的影响,以期将剪切应力应用于组织工程.方法 给予成骨细胞剪切应力的刺激以观察细胞内信息传递的改变,并进一步研究成骨相关基因的表达.使用MG63细胞株进行体外培养,给予12 dynes/cm2的剪切应力,用Western blot观察信号转导分子的改变,包括促分裂原活化蛋白激酶[细胞外信号调节激酶、c-Jun氨基端激酶及P38]受到剪切应力后的情况,应用RT-PCR检测成骨相关基因COX-2,Egr-1,c-fos及骨桥蛋白的表达.结果 剪切应力能促使MG63细胞内部的信号转导分子促分裂原活化蛋白激酶(细胞外信号调节激酶、c-Jun氨基端激酶及P38)磷酸化,进一步诱使成骨相关基因COX-2,Egr-1,c-fos及骨桥蛋白大量表达,此诱导表达可持续24 h.结论 剪切应力能启动成骨细胞内部的信息传递,进一步诱使成骨相关基因表达,此现象可以应用于组织工程,即应用剪切应力以体外培养的方式增加成骨细胞的生理活性.

    作者:李定宇;郑诚功;裘正健 刊期: 2006年第10期

  • 低温保存对人骨髓基质干细胞在脱钙骨上体外增殖及成骨能力的影响

    目的 研究低温保存对人骨髓基质干细胞(BMSCs)在脱钙骨(DBM)上生长特性及成骨能力的影响.方法 取3例志愿者骨髓(3~5 mL),密度梯度离心、差速贴壁法获得BMSCs.第3代BMSCs在-196℃下保存24 h,37℃复苏,测定细胞成活率.低温保存前、后的BMSCs分别用成骨诱导液诱导培养,至90%融合时,收集细胞接种在DBM支架上,并测定细胞在DBM上的粘附率.DiI荧光染料标记BMSCs,倒置相差显微镜、荧光显微镜和SEM观察低温保存前、后的BMSCs在DBM上的生长及基质分泌情况,MTT法测定细胞在DBM上的增殖活性.通过测定碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OCN)含量观察细胞在DBM上的成骨能力.结果 复苏细胞的存活率为(90.24±0.02)%.低温保存前、后的BMSCs在DBM上的粘附率分别为(97.25±1.17)%和(97.00±1.09)%.倒置相差显微镜及SEM观察显示低温保存前、后的BMSCs在DBM上粘附、生长良好,有大量细胞外基质分泌、沉积.低温保存前、后的BMSCs在DBM上MTY吸光度值和ALP活性的检测结果差异无显著性意义(P>0.05);体外培养12 d时,MTT吸光度值及ALP活性同时达到峰值.低温保存前、后的BMSCs在DBM上分泌OCN的量差异无显著性意义(P>0.05),OCN含量随着培养时间延长而不断上升,在观察期(16 d)内未出现平台期.结论 低温保存对人BMSCs在DBM上的体外增殖、粘附及成骨能力影响差异无显著性意义,低温保存的人BMSCs可作为组织工程骨的种子细胞.

    作者:刘广鹏;舒朝锋;尹烁;李宇琳;崔磊;曹谊林 刊期: 2006年第10期

  • Cervifix内固定系统在寰椎骨折合并Hangman骨折中的应用

    目的 探讨Cervifix内固定系统治疗寰椎骨折合并Hangman骨折的价值和作用.方法 2000年1月~2004年4月采用后路融合、Cervifix内固术治疗6例寰椎骨折合并Hangman骨折患者.寰椎骨折Landell分型:Jeffcrson骨折3例,Ⅰ型1例,Ⅲ型2例.Hangman骨折Levine-Edwards分型:Ⅰ型1例,Ⅱ型4例,Ⅱa型1例.脊髓损伤Frankel分级:A级2例,B级1例,D级2例,E级1例.结果 6例患者术后获3~48个月(平均22个月)随访.所有患者术后3~6个月均获骨性愈合,无感染、脑脊液漏、内固定物断裂或松动、局部疼痛及不适等并发症发生.3例患者神经压迫症状有一定程度改善(2例由原来的D级恢复到E级,1例由B级恢复到D级),无神经系统症状加重者,但术后颈椎活动功能受一定影响.结论 Cervifix内固定可提供坚强有效的节段性固定,提高融合率,同时可预防单纯减压融合术后早期失稳导致的高位脊髓损伤加重.

    作者:邵增务;杨述华;杜靖远;郑启新;廖翔;郭晓东;段德育;刘建湘 刊期: 2006年第10期

  • 加压滑动鹅头钉联合空心拉力螺钉内固定治疗股骨转子间骨折

    目的 探讨加压滑动鹅头钉加空心拉力螺钉内固定治疗股骨转子间骨折的疗效.方法 2003年1月~2005年6月采用加压滑动鹅头钉加空心拉力螺钉内固定治疗47例股骨转子间骨折患者.按Even分型:均为一类,其中Ⅱ型26例,Ⅲ型12例,Ⅳ型9例.结果 所有患者术后获6~24个月随访,参照髋关节功能评定标准评定疗效:优39例,良8例,优良率为100%.无死亡、髋内翻、患肢短缩畸形、内固定物断裂、螺钉切割及迟发性感染等并发症发生.结论 加压滑动鹅头钉加空心拉力螺钉内固定治疗股骨转子间骨折,加强了静压力和动压力的加压作用及抗扭转力,操作简单,使患者可早期进行功能锻炼及部分负重,减少了并发症的发生,临床效果满意.

    作者:吴献伟;戴建辉;占鲤生;林海滨;郑祖高;陈国立 刊期: 2006年第10期

  • 自锁型带锁髓内钉治疗股骨、胫骨多段骨折

    目的 探讨应用自锁型带锁髓内钉治疗股骨、胫骨多段粉碎性骨折的疗效.方法 2001年3月~2004年8月采用自锁型带锁髓钉治疗38例股骨、胫骨多段粉碎性骨折患者,其中股骨13例,胫骨25例,按照AO分型均为C2型;闭合性骨折17例,开放性骨折21例.结果 35例患者获1~3年(平均2年)随访.所有患者均获骨性愈合,其中30例患者骨折愈合(85.7%),5例患者延迟愈合(14.2%),骨折愈合时间平均为18周(11~25周).未见骨折畸形愈合.并发症:1例锁钉断裂,3例浅表感染,2例局部皮肤坏死,1例骨感染.结论 自锁型带锁髓内钉治疗股骨、胫骨多段骨折,固定坚强、骨折愈合率高,是一种较好的内固定方法.

    作者:李跃辉;秦祖恩;王纯育;梁刚;彭勇;钟晓 刊期: 2006年第10期

  • 微创内固定系统治疗膝关节周围骨折

    目的 探讨微创内固定系统(LISS)治疗膝关节周围骨折的疗效及LISS的内涵与操作原则.方法 2002年2月~2005年12月应用LISS治疗103例膝关节周围骨折患者,其中股骨远端粉碎性骨折58例,胫骨近端粉碎性骨折45例.术后4周内每周随访1次,以后每个月随访1次,观察有无内固定松动、断钉或其它并发症.结果 103例患者获6~27个月(平均16.5个月)随访.所有患者均获骨性愈合,95例患者下肢力线满意;8例患者成角有所改善,其中5例患者矢状面上成角8°,3例冠状面上成角6°.仅1例患者出现断钉、拔钉并发症,其余患者均无感染、断钉及拔钉等并发症发生.HSS评分:优84例,良15例,可3例,差1例,优良率为96.1%.结论 LISS是治疗膝关节周围骨折较理想的内固定方式,但应正确认识和掌握LISS的内涵及操作原则,术中确保钢板位置及锁钉方向正确,术后避免过早负重.应用13孔胫骨近端LISS时,远端应切开皮肤、解剖出腓浅神经后再锁定锁钉.

    作者:刘璠;唐亮;茹江英;张驰 刊期: 2006年第10期

  • 物理性刺激对骨膜软骨生成的影响

    目的 探讨物理性刺激对骨膜软骨生成方面的影响,以期培养出一种与正常关节软骨更相似的软骨组织.方法 从新西兰大白兔胫骨近端内侧取下骨膜,将骨膜固定在支架上,然后将细胞支架悬吊在旋转瓶内,用水流产生的剪切应力去刺激骨膜.通过宏观观察、体积大小测量、组织切片染色与细胞外基质(ECM)成分的比较及生物力学测试分析软骨体外生长的佳环境.结果 宏观观察发现软骨生长的方向与水流的方向相同.组织切片染色可见有两层不同形态的软骨细胞和不同密度的ECM,免疫组织化学染色见在剪切应力的刺激下,软骨表面可分泌浅层蛋白质及润滑剂,且在不同大小的剪切应力刺激时,软骨表面还会产生不同厚度的表层.结论 剪切应力刺激能使骨膜上的干细胞分化形成软骨,同时证明力学环境不仅影响细胞的分化与生长,而且影响细胞的形态与ECM的分泌.

    作者:唐逸文;黄炳峰;苏芳庆 刊期: 2006年第10期

  • 肱骨颈型钢板治疗儿童股骨转子部骨折

    目的 探讨儿童不稳定性股骨转子部骨折的治疗方法和疗效.方法 1998年6月~2005年6月采用肱骨颈型钢板内固定治疗9例儿童不稳定性股骨转子部骨折患者,其中转子间骨折2例,转子下骨折7例.结果 9例患者术后获0.5~7.0年(平均3.6年)随访.所有患者均于11周内获骨性愈合.股骨无髋内外翻、股骨头缺血性坏死及股骨头骺滑脱等并发症发生.所有患者髋关节活动范围均恢复至正常范围.结论 肱骨颈型钢板内固定治疗儿童转子部骨折方法简单,固定准确、稳定,不损伤骨骺,可尽早行功能锻炼,愈合快,并发症少.

    作者:载建辉;林海滨;吴献伟;陈国立;占鲤生;李荣议 刊期: 2006年第10期

  • 股骨转子部解剖学研究与双爪钢板的研制及其临床应用

    目的 测量成年国人股骨上段参数,为股骨转子间骨折内固定设计提供依据.方法 随机选取120具正常成人股骨标本(左侧60具,右侧60具),测量颈干角、大转子斜坡弧长、大转子头颈轴长、颈上下缘长及颈小横径等参数.根据股骨上端解剖形态及股骨转子周围骨折的特点,研制并临床应用双爪钢板手术治疗145例股骨转子周围骨折患者.结果 正常颈干角为128.59°±6.31°,大转子斜坡弧长为(5.51±0.58)cm,大转子斜坡倾斜角为42.76°±5.20°,头颈(转子)轴长为(9.42±0.38)cm,各参数间存在相关性.145例患者术后获平均23.6个月随访,骨折均在3~6个月内获临床愈合.其中2例发生爪钩滑脱,未影响终治疗效果;3例发生髋内翻畸形,其余患者颈干角均在正常范围内.髋关节活动功能正常.无断钩、断钉及钉尖头部穿出等并发症发生.结论 股骨转子部骨折内固定物的设计必须符合股骨转子部的解剖特点及生物力学应力分布,应充分利用转子部皮质骨的握持效应.据此设计的双爪钢板临床应用效果较好.

    作者:鲍晓毅;苏焊东;李维宾;应大君 刊期: 2006年第10期

  • 组织工程中胶原支架材料的研究进展

    组织工程是应用工程学、生命科学的原理和方法来制备具有生物活性的人工替代物,用以维持、恢复或提高人体组织、器官的一部分或全部功能.

    作者:施洪臣;周强;许建中 刊期: 2006年第10期

  • 非角度稳定性钢板固定治疗桡骨远端关节内背侧移位骨折的结果

    Objective Intra-articular fractures of the distal radius in young adults comprise a distinct fracture pattern that is difficult to manage and associated with a high frequency of post-traumatic arthritis. Restoration of articular congruency and alignment should improve the outcome. Methods In this study we prospectively reviewed the results of 21 consecutive cases of dorsally displaced intra-articular distal radius fractures which were treated with internal fixation after failing to achieve articular congruency with closed reduction. Results 3 patients were lost to follow-up. For the rest of 18 patients, follow-up time ranges from 18 to 75 weeks the fractures had healed with highly satisfactory radiographic and functional results. The final volar tilt averaged 4.9°; radial inclination 23.9°; radial length 14mm; and articular incongruity, 0. 1 mm. Wrist motion at final follow-up examination averaged flexion 62°, extension 60°, radial deviation 16°, ulnar deviation 27°, pronation 77°and supination 74°. Grip strength averaged 83% of the uninjured side. The overall outcome of 18 patients (94.4%) had a good or excellent result according to the system of Gartland and Werley and 18 patients (72. 2% ) had a good result according to the modified system of Green and O'Brien at the most recent evaluation. The only complication in this series was a superficial pin tract infection, which was rapidly resolved with removal of pins at 5th week of external fixation.Conclusion Thus restoration of articular congruency and alignment is possible with minimal complication using modern non-angular stable methods of internal fixation.

    作者: 刊期: 2006年第10期

  • 足部动脉系统解剖学研究与以跖底动脉为蒂足部组织游离移植术

    目的 寻求一种更为安全、有效的足部组织游离移植再造拇、手指及关节功能的新方法,进一步提高手术成功率.方法 对足部跖底与跖背动脉系统进行显微解剖学研究.设计并应用逆行游离、吻合跖底动脉的足部组织游离移植术治疗76例拇、手指及手部关节缺损患者,其中第二足趾移植58例,第二足趾复合组织移植4例,近侧趾间关节移植8例,(足母)甲瓣移植6例.分析总结其疗效.结果 第一跖底动脉解剖恒定,到第二足趾的分支粗于第一跖背动脉.75例患者全部成活,移植部位外观良好,功能明显改进,总成活率为98.7%.另1例行第二足趾游离移植再造拇指术患者因顽固性动脉痉挛而改用锁骨下皮管包埋.结论 应用逆行游离跖底动脉为蒂的足部组织游离移植术可以克服其它方法存在的血管解剖变异较大、操作复杂、费时等不足,提高了手术效率和成功率.

    作者:褚晓朝;杨诚;许拥军;朱庆生;丛锐;杜宏印;李恒 刊期: 2006年第10期

  • 胸腔镜辅助下前路手术治疗胸腰椎骨折

    目的 探讨胸腔镜辅助下小切口行胸腰椎前路手术治疗胸腰椎骨折的方法及其疗效.方法 2000年10月~2005年6月在胸腔镜辅助下小切口对15例胸腰椎骨折患者行前路椎管减压、植骨、内固定手术治疗,其中胸椎骨折7例(爆裂骨折6例、骨折脱位1例),腰椎骨折8例(爆裂骨折7例、陈旧性骨折并椎间盘突出1例).神经功能按ASIA分级:A级3例,B级4例,C级7例,D级1例.结果 术后影像学显示椎管减压彻底、植骨充分、内固定效果确切.15例患者术后获4~12个月(平均7个月)随访.神经功能恢复情况:除术前2例A级无变化外,其余13例均有1级以上改善.结论 胸腔镜辅助下小切口行胸腰椎前路手术具有微创特点,为胸腰椎骨折提供了一种新的治疗途径.

    作者:彭明;马晓程;李言杰;曹新风;张国庆;李维林 刊期: 2006年第10期

  • 自锁型可膨胀髓内钉治疗下肢长骨骨折

    目的 探讨自锁型可膨胀髓内钉治疗下肢长骨骨折的疗效.方法 2004年9月~2005年9月应用自锁型可膨胀髓内钉治疗21例下肢长骨骨折患者,其中股骨骨折9例,胫骨骨折12例.从手术情况、并发症、骨折愈合情况及功能评价等方面对疗效进行分析.结果 所有患者术后获4~15个月(平均9.6个月)随访.所有患者无感染发生,骨折端均获愈合,无骨不愈合、骨延迟愈合及内固定松动和断裂等并发症发生.功能评价参考Johner-Wruh方法:优14例,良6例,可1例,优良率为95.2%.结论 自锁型可膨胀髓内钉固定能显著减少手术创伤、明显缩短手术时间及降低术后并发症的发生率,是一种比较理想的治疗下肢长骨骨折的方法.

    作者:许超;张万忠;何滨;史晓林;宋小平;余文臣 刊期: 2006年第10期

  • 胫骨截骨骨延长治疗小腿骨缺损感染

    目的 介绍胫骨截骨骨延长方法修复小腿骨与软组织同时缺损的临床经验.方法 2002年6月~2003年12月采用Ilizarov型组合外固定架固定治疗18例小腿骨与软组织缺损感染患者,骨坏死缺损长度为4~12 mm,平均5.6 mm.对骨缺损处彻底清创,尽大限度覆盖创面,在小腿近侧干骺端处行水平截骨,骨段牵移直到与远骨折端接触并加压固定.结果 所有患者术后获5~24个月(平均14.5个月)随访,全部患者创面均得到良好的软组织覆盖,骨延长与缺损处骨性愈合,膝关节功能正常,踝关节维持术前状态,未发生神经、血管损伤.结论 小腿截骨骨延长修复术治疗创伤后小腿骨、皮缺损感染疗效良好.

    作者:戴士峰;张志刚;张军军 刊期: 2006年第10期

  • 横钉固定四股半腱肌股薄肌移植重建前交叉韧带

    目的 探讨横钉固定4股半腱肌、股薄肌重建前交叉韧带(ACL)的临床疗效.方法 2002年1月~2004年12月关节镜下采用4股自体半腱肌、股薄肌移植股骨端横钉固定法治疗18例ACL损伤患者,男15例,女3例;年龄19~34岁(平均22.4岁).结果 17例患者术后获6~26个月(平均12.1个月)随访.Lysholm评分术后为74~94分(平均81.2分),较术前[50~62分(平均56.7分)]明显增加.结论 自体4股半腱肌、股薄肌移植重建ACL避免了肌腱供区的并发症.股骨端用横钉固定方法可靠,有效地避免了因雨刷效应而导致的骨隧道扩大,术后可早期活动,疗效满意.

    作者:刘宪民;刘松波;周大鹏;韩文锋;祖启明 刊期: 2006年第10期

  • 软骨组织工程的回顾与展望

    关节软骨因损伤而导致衰退,甚至发生退化性关节炎,有近70%的65岁以上老年人受退化性关节炎的影响[1].目前,仍缺少一套治疗退化性关节炎及阻止其继续恶化的有效方法.

    作者:张至宏;黄彗婷;方旭伟;林峰辉;郭宗甫;刘华昌 刊期: 2006年第10期

中华创伤骨科杂志

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主管:中国科学技术协会

主办:中华医学会