李冰肖；郭丽；宋元宗
目的 构建ebv-miR-BART7慢病毒表达载体.建立其稳定表达的鼻咽癌细胞株CNE1-pLVTHM/BART7.方法 构建慢病毒表达质粒pLVTHM/BART7.用293FT细胞包装后产生的成熟慢病毒颗粒感染CNE1细胞.经流式细胞仪筛选后,建立稳定表达ebv-miR-BART7鼻咽癌细胞株.后用荧光定量PCR检测其表达水平.结果 PCR和测序验证pLVTHM/BART7重组质粒构建成功;经293FT细胞病毒包装,感染CNE1细胞后,与阴性对照组和未感染组相比,其表达水平明显升高.结论 成功构建了pLVTHM/BART7慢病毒重组质粒,建立了稳定表达ebv-miR-BART7的鼻咽癌细胞株CNE1-pLVTHM/BART7,为研究ebv-miR-BART7在鼻咽癌发生发展过程中的基因调控和相应的作用机制提供了有用的细胞模型.
作者：袁存存；蔡红兵；黄宇琦；叶艳芬；赵曼丽；吕晓明；李欣 刊期： 2011年第03期
目的 区分不同转移能力的鼻咽癌细胞哑群,对于探讨鼻咽癌转移的分子机制、脏器亲和性具有重要的临床和生物学意义.我们拟应用基因芯片技术来分析鼻咽癌细胞株5-8F-EGFP和肝转移亚群5-8F-H3B-EGFP的基因表达谱差异.方法 分别提取鼻咽癌细胞株5-8F-EGFP和肝转移亚群5-8F-H3B-EGFP的总RNA,逆转录成荧光标记的cDNA,与Affymetrix(R) Human Genome U_133A2.0寡核苷酸芯片杂交(每株重复3次),用专业的软件和聚类分析法分析基因表达谱.结果 得到差异表达基因3767个,其中差异表达2倍以上的基因281个,进一步筛选出16个可能与鼻咽癌肝转移关系密切的基因16个.结论 这16个基因能够很好的区分5-8F-EGFP和肝转移亚群5-8F-H3B-EGFP,为进一步寻找鼻咽癌肝转移的临床分子标志物、判断预后缩小了范围.
作者：韩春；杨俊兰；姚开泰 刊期： 2011年第03期
目的 通过腺病毒载体体外转染人气道平滑肌细胞(HASMC),使肿瘤抑制基因PTEN过表达和RNA干扰表达,观察其对HASMC迁移的影响,并探讨其作用机制.方法 利用携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-GFP-PTEN)和针对PTEN基因的腺病毒短发夹状RNA(shRNA)载体(Ad-GFP-shRNA-PTEN)转染HASMC细胞,并以感染空载腺病毒Ad-GFP和空白组(DMEM)作为对照,用流式细胞计数确立佳转染复数后,通过Transwell趋化小室和细胞划痕实验检测HASMC跨膜迁移能力和横向迁移能力的变化.Western blotting检测PTEN蛋白的表达和AKT、ERK1/2通路的活化情况,并加入两通路的抑制剂作为阳性对照.结果 腺病毒搭载的PTEN基因过表达和干扰载体能成功改变PTEN基因的表达.上调PTEN表达能显著抑制HASMC迁移;蛋白水平上抑制PI3K/AKT通路,而MAPK/ERK通路未见变化.下调PTEN表达不能明显促进HASMC迁移;但在蛋白水平能使P13K/AKT通路激活,而MAPK/ERK通路却受到抑制.结论 上调PTEN表达能有效抑制HASMC的迁移,可能主要是通过抑制P13K/AKT通路起作用.
作者：高杨；钟浩海；罗雅玲；赖文岩；徐健；张达成；蓝海兵 刊期： 2011年第03期
目的 探讨应用冠状动脉CT血管造影(CTA)图像测定冠心病患者心包内(PAT)、外(IAT)脂肪体积的可行性,并总结其分布特点.方法 收集109例(59.1±11.7岁)经临床确诊冠心病患并的冠状动脉CTA图像,应用半自动Volume软件程序逐层手动描画心包内、外脂肪轮廓,并计算出相应脂肪体积.判断冠心病患者心包内、外脂肪体积的相关因素,分析心包内、外脂肪体积的性别差异.结果 所有病例冠状动脉CTA图像的心包结构显示清楚,可准确测定心包内、外脂肪体积.心包内、外脂肪体积与体质量、BMI成正相关,与年龄无关,心包外脂肪体积与身高成正相关.男性冠心病患者心包外脂肪体积大于女性患者67%(P<0.05),而心包内脂肪体积无性别差异(P>0.05).结论 应用冠状动脉CTA图像叮以准确测定心包内、外脂肪体积.冠心病患者心包内、外体积与BMI、体质量呈正相关,心包内脂肪体积无性别差异.
作者：吴坚；张兴华；具海月；张帆；杨立 刊期： 2011年第03期
目的 研究冻干对重组人三突变型HIF-1α病毒(Ad-HIF-1α-564/402/803)生物学效应的影响.方法 将前期构建的Ad-HIF-1α-564/402/803在HEK293A细胞中进行扩增,用氯化铯浓度梯度离心法进行腺病毒纯化,X-Gal染色法测定重组腺病毒转染效率,在适宜的条件下制成冻于剂.采用MTS试剂盒观察冻干前后Ad-HIF-1α-564/402/803对hMvECs增殖的影响.分别在冻干前、冻干后1 d、6月、12月四个时间点提取病毒DNA,进行PCR及PCR产物测序鉴定重组人三突变型HIF-1α腺病毒基因;并在4个时间点以Ad-HIF-1α-564/402/803转染hMVECs,提取蛋白进行western blot检测HIF-1α蛋白的表达.结果 X-gal染色显示MOI为100pfu/cell时,转染效率趋于稳定.冻干前后重组人三突变型HIF-1α腺病毒对hMVECs增殖影响无显著差异(P>0.05).经PCR及基因测序鉴定,在四个时间点,腺病毒所携带的目的 基因信息无丢失或突变,HIF-1α蛋白表达无差异(P>0.05).结论 冻干能够长期保持重组人三突变型HIF-1α腺病毒的高生物活性.
作者：陶宇；王月刚；魏旋；刘城；陈冬冬；吴平生 刊期： 2011年第03期
目的 研究血清脂肪细胞脂肪酸结合蛋白(A-FABP)水平与社区人群2型糖尿病的相关性.方法 在广州市海珠区整群分层随机抽样法抽取255名45～85岁社区居民,平均年龄63.90岁,测定空腹血糖(FPG)、餐后2小时血糖(2hPG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、体重指数(BMI)、腰围(WC)、臀围(HC)、腰臀比(WHR)、血压(BP)、甘油三脂(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清A-FABP及空腹胰岛素(FINs)水平,根据血糖情况分为3组:血糖正常组(A组):90例,糖耐量受损组(B组):85例,糖尿病组(C组):80例,比较各组A-FABP的水平.结果 与A组相比,B组、C组FPG、2hPGh、HbA1C、HOMA-IR、SBP、WC、WHR均明显升高(P=0.001,FINs、DBP、TG、HDL-C也显著增高(P=0.038、0.047、0.01、0.046);与B组相比,C组FPG、2hPG、HbA1c、TG、SBP均明显升高(P=0.00),FINS、BMI、WC、DBP、HDL-C也显著增高(P=0.012、0.006、0.03、0.019、0.029).A-FABP在A组、B组和C组的浓度差异有统计学意义(P=0.00),呈升高趋势.而以上3组年龄差异对A-FABP的影响无统计学意义(P＞0.05).A-FABP浓度与FPB、2hPG、FINS、WHR、BMI、WC、SBP、HOMA-IR呈直线正相关,与TG、HDL-C呈负相关(P=0.00).结论 血清A-FABP表达升高与糖调节异常相关,是社区人群2型糖尿病发生、发展的重要标志物.
作者：叶文慧；彭湘杭；艾雅琴；陈宏；张桦；蔡德鸿 刊期： 2011年第03期
目的 分析总结不同类型光滑腩畸形的临床表现及磁共振成像特点,为本病临床诊断及分型提供临床和影像学参考依据.方法 同顾性分析2005年7月～2009年7月我科诊断的11例光滑脑畸形患儿的症状、体征、神经行为评估资料、实验室结果及核磁共振成像发现.结果 11例光滑脑中孤立性光滑脑4例,MilJer-Dieker综合征3例,鹅卵石样光滑脑3例,光滑脑伴小脑发育不全1例.临床表现以精神发育迟滞、运动障碍、小头畸形、癫痫、听力障碍、面部畸形等为主.鹅卵石样光滑脑还伴有先天性肌营养不良及眼球发育异常.光滑脑伴小脑发育不全型患儿伴有共济失调表现.经典型光滑脑患者头颅MRJ表现为大脑半球脑回消失或增宽,脑皮层增厚,白质减少,灰-白质界面光滑.鹅卵石样光滑脑畸形患者大脑皮层增厚,脑回少而呈鹅卵石样外观.光滑脑伴小脑发育不全型表现为巨脑回畸形,伴小脑半球体积缩小,海马发育不良.结论 光滑脑是异质性明显的脑发育畸形,临床表现及MRI特点可作为本病临床诊断及分型的参考依据.
作者：李冰肖；郭丽；宋元宗 刊期： 2011年第03期
目的 探讨2型糖尿病(T2DM)尿酸升高与代谢紊乱的关系及其危险因素.方法 收集159例T2DM住院患者[年龄40～80岁,SCr水平51～159 μmol/L(0.6～1.8 mg/dl)]临床实验室资料,明确高尿酸血症(HUA)与T2DM代谢紊乱的关系及其危险因素.结果 159例患者中HUA患者40例,占25.2%;单因素分析发现男性、体质指数(BMI)≥25 kg/m2、高血压、血肌酐(SCr)≥110 μmol/L、血尿素氮(BUN)≥7.0 μmol/L、尿微量白蛋白(U-MA)≥11.2 mg/L、血甘油三酯(TG)≥1.70 mmol/L、血高密度脂蛋白(HDL)＜1.04mmol/L、血低密度脂蛋白(LDL)≥3.37 mmol/L等因素影响HUA的发生(P＜0.05);Logistic回归分析提示SCr、BMI、TG水平是影响T2DM发生HUA的独立危险因素;各主要危险因素在T2DM中均有较高的发生率;T2DM合并HUA患者冠心病、颈动脉粥样硬化、脑梗死、糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变发生率明显增高(P＜0.05).结论 T2DM尿酸升高与多种危险因素有关,HUA与T2DM代谢紊乱及并发症密切关联.
作者：邬丹；刘宏；李申恒 刊期： 2011年第03期
目的 评价胃大部切除术后Roux-en-Y吻合对非肥胖2型糖尿病患者的临床疗效.方法 同顾性分析我院2005年1月～2010年1月收治的16例因为胃癌或胃溃疡接受Roux-en-Y胃肠转流术,且不合并肥胖的糖尿病患者的临床资料.结果 所有患者随访6个月,空腹血糖、餐后2 h血槠、糖化血红蛋白较术前下降(P＜0.05).8例病人不需要药物和饮食控制达到糖尿病治愈标准(50%),5例病人治疗药物较前订减少,糖尿病明显改善(31.25%).总体有效率81.25%.结论 Roux-cn-Y胃肠转流术可以改善非肥胖2型糖尿病患者的糖尿病症状,为糖尿病的治疗提供了一种新的手段.
作者：冯超；姚若全；黄飞舟；聂晚频；刘浔阳 刊期： 2011年第03期
目的 筛选可以与悬浮状态下曲霉孢子结合的特异性单克隆抗体.方法 采用流式细胞术检测与曲霉活孢子结合的单抗.结果 2株单抗MA3和Con2可特异性结合悬浮状态下的烟曲霉孢子,其中单抗MA3可结合烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、土曲霉等常见致病曲霉孢子.结论 成功筛选到2株特异性结合曲霉孢子的单抗.
作者：余楠；袁小澎；晋晶；郝卫；王艳芳；车小燕 刊期： 2011年第03期
目的 观察富血小板血浆对体外培养的人脂肪来源干细胞增殖与成脂能力的影响.方法 用酶消化法获取人脂肪来源干细胞,二次离心法制备自体富血小板血浆,将细胞分为实验组与对照组,实验组以含5%、10%、20%自体富血小板血浆的条件培养液干预,对照组不进行富血小板血浆干预.观察细胞形态学,以XTT比色法测定细胞增殖状况,油红O染色检测细胞成脂活性.结果 寓血小板血浆实验组较对照组细胞形态饱满、密度增大;XTT比色法显示实验组细胞增殖明显(P<0.01);实验组油红O染色阳性率较对照组增高明显(P<0.01).结论 富血小板血浆对体外培养的人脂肪来源干细胞增殖与成脂分化活性具有显著的促进作用.
作者：张云松；何井华；肖冠英；黎庆梅 刊期： 2011年第03期
目的 比较不同类型超声仪对小鼠压力负荷下心脏重构的评价结果.方法 C57 BL/6小鼠18只,随机分为假手术(sham)组和主动脉弓缩窄(TAC)组,每组9只.手术8周后,首先应用连接15L8高频探头的临床用西门子超声仪测定TAC组小鼠心功能,并比较清醒和麻醉状态下的差异.然后比较西门子超声仪和小动物用高分辨超声仪(Vevo770)对心功能评价的影响.结果 与清醒状态相比,异氟烷吸入麻醉小鼠的心率和左室短轴缩短率显著降低(P<0.001),而左室内径显著增加(P<0.05).但与相应的sham组比较,两种仪器都可以较敏感地反映TAC组的心脏重构.与西门子超声仪相比,小动物超声仪的分辨率明显增高,并可通过二尖瓣血流频谱图评价左室舒张功能,但暂不能在小鼠清醒状态下评价心功能.结论 麻醉本身会降低心功能,但在反映干预手段对心脏重构的影响程度上与清醒状态下有可比性.高分辨小动物超声仪在评价左室舒张功能方面优于西门子超声仪.
作者：赵静；曾智；颜亮；纪丽景；罗滔；宾建平；廖禹林 刊期： 2011年第03期
目的 比较健康儿童与肠系膜淋巴结炎患儿腹腔肿大淋巴结的差异情况.方法 以淋巴结短径>0.5 cm作为淋巴结肿大的诊断标准,对健康儿童137例及148例临床诊断为肠系膜淋巴结炎患儿腹腔肿大淋巴结行同顾性研究,并进行统计学分析.结果 淋巴结多位于右下腹和脐周(46.3%位于右下腹,19.2%位于脐周,13.6%位于左下腹).3个以上成簇的淋巴结健康儿童53%(72/137),淋巴结炎患儿47%(69/148),无差异(P=0.3771) 两组间肿大的淋巴结在各个年龄段及性别间没有统计学差异,长径及长径/短径均没有统计学差异,仅两组间短径有统计学差异.结论 很多健康儿童存在腹腔肿大的成簇的淋巴结,所以不能主观认为这些淋巴结的存在就是异常现象.6岁儿童腹腔肿大淋巴结出现达到高峰,然后随着年龄的增长逐渐减少.短径超过0.8 cm的腹腔淋巴结也许能够直接提示肠系膜淋巴结炎的诊断.
作者：王文刚；田晖；闫记英；李涛；张彤迪；赵雅培；张丽艳；邢恒国 刊期： 2011年第03期
目的 构建含有全长WTX(Wilms tumor gene on the X chromosome)目的 基因的表达载体,建立稳定表达WTX基因的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞系,为WTX基因功能研究提供保障.方法 以人胚肾293FT细胞为模板,经PCR扩增获得全长WTX cDNA序列,将全长WTX目的 基因序列克隆人带有绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP-NI表达载体,建立pEGFP-WTX表达载体.经限制性内切酶酶切鉴定、测序并转染293FT细胞观察报告基因表达情况,判断pEGFP-WTX表达载体构建是否成功.构建成功的pEGFP-WTX表达载体转染人胃癌BGC-823细胞,建立稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞.qRT-PCR及免疫组化检测转染细胞WTX表达.结果 PCR方法从人胚肾293FT细胞扩增获得全长WTX cDNA,经测序鉴定序列完全正确;pEGFP-WTX质粒DNA经酶切鉴定片段大小正确、转染294FT细胞可见清晰的绿色荧光表达.BGC-823/WTX-EGFP细胞能够稳定表达WTX.结论 本研究成功构建了含有全长WTX cDNA的表达载体系统,建立了稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞,为WTX基因功能研究奠定了良好基础.
作者：陈可绪；王啓名；黄怡哲；吴焕；张庆玲 刊期： 2011年第03期
目的 分析HLA相合程度对慢性粒细胞白血病(CML)异基因造血干细胞移植的影响.方法 121例CML患者包括:慢性期90例、加速期8例、急变期23例.85例接受相关、36例无关移植.HLA全相合91例、部分相合30例.预处理方案:37例患者用含全身放疗+环磷酰胺、84例改良Bucy(白消安+环磷酰胺+阿糖胞苷)方案,移植物抗宿主病(GVHD)预防:HLA全相合相关移植用环孢素A+甲氨蝶呤(CsA+MTX),无关及相关HLA位点不合移植者采用CsA+MTX+抗胸腺细胞球蛋白或霉酚酸酯.COX模型分析影响长生存的因素.结果 121例患者除4例死于预处理相关毒性外、其余117例病人均获造血重建;HLA全相合与不相合移植者Ⅱ～Ⅳ°急性GVHD发生率分别为26.1%和53.3%(P=0.006),3年累计慢性GVHD发生率在全相合与不相合者分别为47.4%和49.6%(P=0.947);非复发移植相关死亡(TRM)率在HLA相合与不相合者分别为16.5%和40.0%(P=0.007);5年累积白血病复发率为16.7%、其中HLA相合与不相合者复发率分别为15.3%和22.7%(P=0.396);5年累积总生存(OS)和无病生存(DFS)率分别为70.6%和63.8%,其中OS和DFS在相合者为78.2%和70.3%、不相合者为47.6%和43.3%.多因素分析显示:HLA不合为Ⅱ～Ⅳ°急性GVHD的危险因素,Ⅱ～Ⅳ°急性GVHD为TRM发生的危险因素,HLA不合、急性GVHD、疾病分期为影响生存的危险因素.结论 HLA不相合移植TRM高于相合移植,从而导致OS显著低于HLA全相合移植,长期生存与供受来源无关.
作者：张钰；陈银葵；范志平；徐丹；赵捷；江千里；凌奕文；刘灿；孙竟；刘启发 刊期： 2011年第03期
目的 探讨斜矢状位黑血MRI增强扫描对于颈动脉粥样硬化斑块内膜剥脱手术(CEA)的术前评估价值.方法 25例症状性颈动脉粥样硬化患者(26个粥样硬化颈动脉)进行了CEA.术前1周以内,对所有患者预手术侧颈总动脉远端、分叉处及颈内动脉近端进行了数字减影血管造影检奁(DSA)及斜矢状位黑血MRI增强扫描(OB-CEMRI).由2名放射科医师分别在DSA及OB-CEMRI图像上评价颈动脉(颈总动脉远端、分叉处及颈内动脉近端)大狭窄部位、斑块破溃情况、大狭窄程度、斑块累及范围,并将DSA、OB-CEMRI图像与CEA术后斑块病理切片图像进行对照,分别分析DSA和OB-CEMRI在显示上述评价指标方面的差异.结果 DSA(x=0.807)和OB-CEMRI(k=0.812)在判断颈动脉大狭窄部位方面与病理图像均有较好的一致性.DSA诊断斑块破溃的敏感性为40.0%、特异性为66.7%,而OB-CEMRI的敏感性为90.0%、特异性为83.3%.在评价颈动脉管腔大狭窄度方面,虽然DSA与OB-CEMRI无显著差异[(77.33+3.79)%vs(76.02+3.95)%,P=0.648],但与病理图像比较,OB-CEMRI低估了管腔狭窄程度(p=0.008).OB-CEMRI所显示的斑块累及范围18.96+4.96 mm更接近于病理(18.13+4.57 mm,P=0.506).明显大于DSA所显示的范围(14.80+3.78 mm,P=0.004).结论 作为一种无创的检查方法,OB-CEMRI可以较客观地评价粥样硬化颈动脉(颈总动脉远端、分叉处及颈内动脉近端)管腔大狭窄部位、斑块破溃、斑块累及范围,但在评价管腔大狭窄程度方面不如DSA准确,如果能在CEA术前联合使用OB-CEMRI和DSA对粥样硬化颈动脉进行检查,可为手术提供更加全面可靠的术前评估.
作者：王庆军；王勇；蔡剑鸣；赵廷强；马林；蔡幼铨；陈利峰；王湛博 刊期： 2011年第03期
目的 探讨经小隐静脉(SSV)插管予以阿加曲班和尿激酶区域抗凝溶栓治疗急性下肢深静脉血栓(LDVT)的临床价值.方法 前瞻性地将56例急性LDVT随机分为两组,研究组(2l例/24条肢体)予以经SSV插管予以阿加曲班和尿激酶区域抗凝溶栓,对照组(35例/36条肢体)经外周静脉予以阿加曲班和尿激酶,分析两组血清纤维蛋白原(FBG)和D-二聚体变化,调查静脉血栓的消长、患肢周径及溶栓抗凝相关并发症.结果 经校正x2检验,研究组相关并发症发生率低于对照组1/21 vs 4/36,x2=1.92,P≤0.05).经威尔科克森检验,研究组总有效率(95.8%,23/24)和对照组(94.4%,34/36)无统计学差异(V=0.52,P＞0.05),但总显效率存在统计学差异(83.3% vs 55.6%,V=2.36,P≤0.05).经配对t检验,研究组溶栓期间血清FBG无明显变化(P＞0.05).而对照组血清FBG明显下降(P≤0.05).研究组患肢周径减少时相和血清D-二聚体下降时相早于对照组(P≤0.05).结论 经SSV插管予以区域灌注阿加曲班和尿激酶可提高溶栓疗效,减少出血风险.
作者：周忠信；潘春球；符方勇；林智琪；刘正军 刊期： 2011年第03期
目的 探讨阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)患者外周血白细胞端粒长度的变化及意义.方法 OSAS患者11例,健康对照组10例,提取外周血白细胞DNA,纯度检测合格后,用Q-PCR法检测端粒长度相对T/S比率.结果 OSAS组外周血白细胞端粒长度相对T/S比率较对照组小(P<0.05).结论 OSAS患者外周血白细胞端粒长度的缩短可能与其发病机制有关,低氧血症和高碳酸血症加速r端粒的损耗和细胞的凋亡.
作者：林里；李涛平 刊期： 2011年第03期
目的 探讨不同浓度干细胞因子对人乳牙牙髓干细胞增殖及向成骨方向分化能力的影响.方法 无菌条件下培养因发育滞留而拔除乳牙的牙髓,酶消化法培养乳牙牙髓十细胞,以浓度为3、10 μmol/干细胞因子培养液作用于乳牙牙髓干细胞,正常堵养基为对照组.MTT法检测干细胞因子对乳牙牙髓干细胞增殖能力的影响,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测干细胞因子作用于乳牙牙髓干细胞后ALP活性的改变,RT-PCR方法检测细胞内骨钙素、骨涎蛋白mRNA含量的改变.结果 MTT结果显示两种浓度的干细胞因子均可以促进乳牙牙髓干细胞增殖,且随浓度增加促进作用增强.ALP试剂盒检测结果表明干细胞因子也可以促进乳牙牙髓干细胞的ALP活性,且浓度为10μmol/的ALPOD值高.RT-PCR结果显示干细胞因子可以上调乳牙牙髓干细胞内骨钙素及骨涎蛋白mRNA的含量.结论 干细胞因子对乳牙牙髓干细胞的增殖和成骨方向分化能力具有一定的促进作用,提示干细胞因子具有促进牙齿再生的作用.
作者：路娟英；高杰；麻丹丹；陈婷 刊期： 2011年第03期
目的 通过构建磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)增强型绿色荧光蛋白真核表达载体,研究GPC3对人肝癌细胞株MHCC97-L增殖的影响.方法 用基因重组及限制性内切酶技术构建并鉴定表达载体pEGFP-c3-GPC3,通过脂质体介导转染人肝癌细胞株MHCC-97L,流式细胞术和G418筛选建立稳定细胞株;采用荧光定量PCR、Western blotting分别检测MHCC-97L中GPC3 mRNA和蛋白的表达情况,并在荧光显微镜下观察细胞荧光;MTT法检测GPC3对肝癌细胞MHCC97-L体外增殖能力的影响.结果 经酶切及测序鉴定,确认成功构建真核表达载体pEGFP-c3-GPC3,荧光显微镜下观察到绿色荧光表达;从mRNA和蛋白水平证实,GPC3基因在转染后的MHCC-97L中成功表达;MTT生长曲线证实MHCC97-L/GPC3较其他两株细胞增殖显著加强(P<0.001).结论 成功构建pEGFR-c3-GPC3真核表达载体;筛选出稳定表达GPC3基因的MHCC97-L/GPC3细胞株;GPC3基因表达升高可促进肝癌细胞株MHCC97-L的增殖.
作者：秦如斋；刘斐烨；陈斌；谢剑明；杨洋；郑大勇；罗荣城 刊期： 2011年第03期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
