学术投稿

稳定表达新抑癌基因WTX的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞株的建立

陈可绪;王啓名;黄怡哲;吴焕;张庆玲

关键词:WTX, 293FT细胞, 载体构建
摘要:目的 构建含有全长WTX(Wilms tumor gene on the X chromosome)目的 基因的表达载体,建立稳定表达WTX基因的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞系,为WTX基因功能研究提供保障.方法 以人胚肾293FT细胞为模板,经PCR扩增获得全长WTX cDNA序列,将全长WTX目的 基因序列克隆人带有绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP-NI表达载体,建立pEGFP-WTX表达载体.经限制性内切酶酶切鉴定、测序并转染293FT细胞观察报告基因表达情况,判断pEGFP-WTX表达载体构建是否成功.构建成功的pEGFP-WTX表达载体转染人胃癌BGC-823细胞,建立稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞.qRT-PCR及免疫组化检测转染细胞WTX表达.结果 PCR方法从人胚肾293FT细胞扩增获得全长WTX cDNA,经测序鉴定序列完全正确;pEGFP-WTX质粒DNA经酶切鉴定片段大小正确、转染294FT细胞可见清晰的绿色荧光表达.BGC-823/WTX-EGFP细胞能够稳定表达WTX.结论 本研究成功构建了含有全长WTX cDNA的表达载体系统,建立了稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞,为WTX基因功能研究奠定了良好基础.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 沃特杆菌败血症1例报告

    沃特杆菌是一种革兰阴性杆菌,国外与其相关的临床病例甚少,而国内未见报道.我科在1例败血症患者血液和骨髓中分离出该菌.

    作者:高方;薛耀明;陆雯;魏伟平 刊期: 2011年第03期

  • 来自不同地区的两组鼻咽癌活检组织样本共同失调的基因功能及通路

    目的 探究两组鼻咽癌活检组织样本中差异基因表达谱所显示的失调基因功能及通路的相同之处.方法 利用生物信息学的方法分析两组差异表达基因谱,对比其失调的基因功能及通路,同时探索其相同的失调功能与两组数据问相同的基因的关系.结果 两样本中显著上调的基因主要与细胞的周期调控、增殖、DNA损伤修复、细胞的粘附迁移、代谢及蛋白质结合等相关,但是显著下调的基因无明显的功能聚类;两差异基因表达谱显示出的相同失调基因功能并不是完全由它们的相同基因引起;两者共同失调的通路有10条,排在前4位的为白细胞内皮迁移、细胞粘附分子、粘着斑和磷脂酰肌醇信号系统.结论 来自两个不同地区的鼻咽癌活检组织样本的比较发现,其差异表达的基因多与细胞周期调控、DNA损伤修复、粘附迁移等相关,这与临床治疗首选放疗的原因相符;通路分析得出4条差异显著的共同通路也与肿瘤粘附迁移相关,通过干扰其在肿瘤中的病理作用,特别是磷脂酰肌醇信号系统在肿瘤发生、粘附及转移等关键步骤中的信号传导作用,有望提高鼻咽癌的治疗效果及预后.

    作者:熊艺颖;黄仲曦 刊期: 2011年第03期

  • 小电导钙激活钾通道在人心房肌细胞中的表达及功能

    目的 探讨小电导钙激活钾通道在人心房肌细胞巾的表达情况和功能意义.方法 收集行心内直视手术的窦性心律先心病患者8例,取右心耳组织,行免疫组化分析3种SK通道亚型(SK1、SK2和SK3)表达情况;使用经典两步酶解法分离心房肌细胞,应用穿孔膜片钳和传统电压钳技术分别记录心房肌细胞动作电位(APs)和全细胞的钙激活钾电流(IK,Ca),比较给予SK通道特异性阻断剂apamm(100 nmol/L)前、后动作电位时程(APD)变化.结果 SK1、SK2和SK3通道亚型在心房肌细胞中均呈阳性表达,膜片钳记录证实IK,Ca的存在,且apamin明显延长复极化90%的动作电位时程(APD90),而对APD50无明显影响.结论 3种SK通道亚型在人心房肌细胞中均有表达;与SK通道在神经元细胞中介导动作电位后超极化过程的功能小同,在心房肌细胞中,SK通道是参与APs复极未期过程的重要离子通道.

    作者:于涛;吴若彬;郭惠明;邓春玉;郑少忆;邝素娟 刊期: 2011年第03期

  • 慢病毒介导的ebv-miR-BART7稳定过表达鼻咽癌细胞株CNE1的建立

    目的 构建ebv-miR-BART7慢病毒表达载体.建立其稳定表达的鼻咽癌细胞株CNE1-pLVTHM/BART7.方法 构建慢病毒表达质粒pLVTHM/BART7.用293FT细胞包装后产生的成熟慢病毒颗粒感染CNE1细胞.经流式细胞仪筛选后,建立稳定表达ebv-miR-BART7鼻咽癌细胞株.后用荧光定量PCR检测其表达水平.结果 PCR和测序验证pLVTHM/BART7重组质粒构建成功;经293FT细胞病毒包装,感染CNE1细胞后,与阴性对照组和未感染组相比,其表达水平明显升高.结论 成功构建了pLVTHM/BART7慢病毒重组质粒,建立了稳定表达ebv-miR-BART7的鼻咽癌细胞株CNE1-pLVTHM/BART7,为研究ebv-miR-BART7在鼻咽癌发生发展过程中的基因调控和相应的作用机制提供了有用的细胞模型.

    作者:袁存存;蔡红兵;黄宇琦;叶艳芬;赵曼丽;吕晓明;李欣 刊期: 2011年第03期

  • 光滑脑患者11例临床表现及磁共振成像特点

    目的 分析总结不同类型光滑腩畸形的临床表现及磁共振成像特点,为本病临床诊断及分型提供临床和影像学参考依据.方法 同顾性分析2005年7月~2009年7月我科诊断的11例光滑脑畸形患儿的症状、体征、神经行为评估资料、实验室结果及核磁共振成像发现.结果 11例光滑脑中孤立性光滑脑4例,MilJer-Dieker综合征3例,鹅卵石样光滑脑3例,光滑脑伴小脑发育不全1例.临床表现以精神发育迟滞、运动障碍、小头畸形、癫痫、听力障碍、面部畸形等为主.鹅卵石样光滑脑还伴有先天性肌营养不良及眼球发育异常.光滑脑伴小脑发育不全型患儿伴有共济失调表现.经典型光滑脑患者头颅MRJ表现为大脑半球脑回消失或增宽,脑皮层增厚,白质减少,灰-白质界面光滑.鹅卵石样光滑脑畸形患者大脑皮层增厚,脑回少而呈鹅卵石样外观.光滑脑伴小脑发育不全型表现为巨脑回畸形,伴小脑半球体积缩小,海马发育不良.结论 光滑脑是异质性明显的脑发育畸形,临床表现及MRI特点可作为本病临床诊断及分型的参考依据.

    作者:李冰肖;郭丽;宋元宗 刊期: 2011年第03期

  • 应用冠状动脉CTA图像测定冠心病患者心包内、外脂肪体积

    目的 探讨应用冠状动脉CT血管造影(CTA)图像测定冠心病患者心包内(PAT)、外(IAT)脂肪体积的可行性,并总结其分布特点.方法 收集109例(59.1±11.7岁)经临床确诊冠心病患并的冠状动脉CTA图像,应用半自动Volume软件程序逐层手动描画心包内、外脂肪轮廓,并计算出相应脂肪体积.判断冠心病患者心包内、外脂肪体积的相关因素,分析心包内、外脂肪体积的性别差异.结果 所有病例冠状动脉CTA图像的心包结构显示清楚,可准确测定心包内、外脂肪体积.心包内、外脂肪体积与体质量、BMI成正相关,与年龄无关,心包外脂肪体积与身高成正相关.男性冠心病患者心包外脂肪体积大于女性患者67%(P<0.05),而心包内脂肪体积无性别差异(P>0.05).结论 应用冠状动脉CTA图像叮以准确测定心包内、外脂肪体积.冠心病患者心包内、外体积与BMI、体质量呈正相关,心包内脂肪体积无性别差异.

    作者:吴坚;张兴华;具海月;张帆;杨立 刊期: 2011年第03期

  • Gluc-Fluc双荧光素酶质粒转染MB49细胞后荧光表达特性

    目的 利用生物发光成像技术对Glue-Flue双荧光素酶质粒转染MB49膀胱癌细胞后双荧光表达变化特性进行研究.方法 用pAAV2neo-Gluc和pAAV2neoCAG-Gluc-2A-Fluc分别转染MB49细胞,利用荧光照度计来研究双荧光素酶质粒中Gluc、Fluc的特性;利用体外活体成像系统对双荧光素酶质粒Glue-Flue转染MB49膀胱痛细胞后荧光表达情况的检测.结果 荧光照度计检测结果显示:Glue随着细胞数的增多或时间的延长,荧光表达量呈相应的增加.Fluc随细胞数目的 增多,荧光表达量增加;但随时间的延长,荧光表达量变化不大.体外活体成像结果显示:Gluc-Fluc双荧光素酶质粒已转染入MB49膀胱癌细胞,经过G418加压筛选获得稳定表达的细胞株.结论 双荧光索酶基因的构建并未改变Glue的自身荧光表达特性.转染双荧光索酶质粒的MB49膀胱癌细胞,由于其Fluc在活体成像时的定位优势和Glue易分泌、检测灵敏度高的定量优势,为后期动态检测肿瘤生长变化以及评价药物治疗效果提供了一个可靠的基石和平台.

    作者:张信基;石小军;孙鹏宇;张哲欢;付昕阳;谭万龙 刊期: 2011年第03期

  • HIV-1gp41胞外域对新生隐球菌致人脑微血管内皮细胞骨架改变的影响

    目的 探讨HIV-1 gp41胞外域gp41-I90肽对新生隐球菌致人脑微血管内皮细胞骨架改变的影响.方法 以人脑微血管内皮细胞作为体外血脑屏障模型,在细胞培养玻片或transwell小室上长成单层,用HIV-1 gp41-I90预处理后,再用新生隐球菌感染细胞单层,免疫荧光方法检测细胞骨架蛋白actin(肌动蛋白)和filamin(肌动蛋白连接蛋白)的形态变化,并测定gp41-I90处理的人脑微血管内皮细胞单层对辣根过氧化物酶和新生隐球菌的通过率.结果 gp41-I90能明显增强新生隐球菌所致的人脑微血管内皮细胞骨架蛋白actin和filamin的改变,actin和filamin的丝状排列扭曲,纹理稀疏;gp41-I90处理的人脑微血管内皮细胞单层通透性增强,对辣根过氧化物酶和新生隐球菌的通过率明显增加.结论 HIV-1 gp41胞外域gp41-I90肽促进新生隐球菌黏附和侵人血脑屏障,与其增强新生隐球菌所致人脑微血管内皮细胞骨架改变有关.

    作者:龙敏;曹虹;Ambrose Jong 刊期: 2011年第03期

  • 免疫吸附治疗全身型重症肌无力的疗效及作用机制研究

    目的 观察免疫吸附联合激素治疗茕症肌无力患者的疗效,探讨该治疗方法的作用机制.方法 收集全身型重症肌无力患者40例及健康对照者15例,根据给予不同的治疗方法分为3组即免疫吸附联合激素治疗组、单一激素治疗组和正常对照组.用ELISA法榆测各组患者治疗前后外周血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)及白介素-18(IL-18)含量变化,应用临床记分法评价不同治疗方法的效果.结果 在免疫吸附联合激素治疗组中其临床评分较单一激素治疗组降低,临床症状好转明显;各治疗组外周血清中TNF-α及IL-18含量均较正常对照组高,各组相比较差异均有显著性(P<0.05).免疫吸附治疗组较单一激素治疗组明显降低.两组各指标相比较差异有显著性(P<0.05).结论 免疫吸附不仅可以清除体内自身免疫抗体,还可以直接清除免疫炎性细胞因子达到保护血-脑屏障,发挥改善重症肌无力患者的临床症状的作用.

    作者:李麒麟;谢富华;罗永胜 刊期: 2011年第03期

  • 胃大部切除术后Roux-en-Y吻合对非肥胖2型糖尿病的临床疗效观察

    目的 评价胃大部切除术后Roux-en-Y吻合对非肥胖2型糖尿病患者的临床疗效.方法 同顾性分析我院2005年1月~2010年1月收治的16例因为胃癌或胃溃疡接受Roux-en-Y胃肠转流术,且不合并肥胖的糖尿病患者的临床资料.结果 所有患者随访6个月,空腹血糖、餐后2 h血槠、糖化血红蛋白较术前下降(P<0.05).8例病人不需要药物和饮食控制达到糖尿病治愈标准(50%),5例病人治疗药物较前订减少,糖尿病明显改善(31.25%).总体有效率81.25%.结论 Roux-cn-Y胃肠转流术可以改善非肥胖2型糖尿病患者的糖尿病症状,为糖尿病的治疗提供了一种新的手段.

    作者:冯超;姚若全;黄飞舟;聂晚频;刘浔阳 刊期: 2011年第03期

  • 富血小板血浆对体外培养人脂肪来源干细胞增殖及成脂分化的作用

    目的 观察富血小板血浆对体外培养的人脂肪来源干细胞增殖与成脂能力的影响.方法 用酶消化法获取人脂肪来源干细胞,二次离心法制备自体富血小板血浆,将细胞分为实验组与对照组,实验组以含5%、10%、20%自体富血小板血浆的条件培养液干预,对照组不进行富血小板血浆干预.观察细胞形态学,以XTT比色法测定细胞增殖状况,油红O染色检测细胞成脂活性.结果 寓血小板血浆实验组较对照组细胞形态饱满、密度增大;XTT比色法显示实验组细胞增殖明显(P<0.01);实验组油红O染色阳性率较对照组增高明显(P<0.01).结论 富血小板血浆对体外培养的人脂肪来源干细胞增殖与成脂分化活性具有显著的促进作用.

    作者:张云松;何井华;肖冠英;黎庆梅 刊期: 2011年第03期

  • 小动物超声仪与临床用超声仪评价小鼠心脏重构的对比分析

    目的 比较不同类型超声仪对小鼠压力负荷下心脏重构的评价结果.方法 C57 BL/6小鼠18只,随机分为假手术(sham)组和主动脉弓缩窄(TAC)组,每组9只.手术8周后,首先应用连接15L8高频探头的临床用西门子超声仪测定TAC组小鼠心功能,并比较清醒和麻醉状态下的差异.然后比较西门子超声仪和小动物用高分辨超声仪(Vevo770)对心功能评价的影响.结果 与清醒状态相比,异氟烷吸入麻醉小鼠的心率和左室短轴缩短率显著降低(P<0.001),而左室内径显著增加(P<0.05).但与相应的sham组比较,两种仪器都可以较敏感地反映TAC组的心脏重构.与西门子超声仪相比,小动物超声仪的分辨率明显增高,并可通过二尖瓣血流频谱图评价左室舒张功能,但暂不能在小鼠清醒状态下评价心功能.结论 麻醉本身会降低心功能,但在反映干预手段对心脏重构的影响程度上与清醒状态下有可比性.高分辨小动物超声仪在评价左室舒张功能方面优于西门子超声仪.

    作者:赵静;曾智;颜亮;纪丽景;罗滔;宾建平;廖禹林 刊期: 2011年第03期

  • 糖皮质激素治疗对早期肝衰竭患者转归的影响

    目的 观察短疗程糖皮质激素治疗早期亚急性肝功能衰竭患者的临床疗效及安全性.方法 选择乙型病毒性肝炎早期亚急性肝功能衰竭患者87例;分治疗组43例,对照组44例;其中埘照组采用拉米夫定抗乙型肝炎病毒及常规综合治疗,治疗组在采用与对照组相同治疗的基础上联合短疗程糖皮质激素治疗;分别观察其救治成功率、平均住院日及不良反应,并进行相互比较.结果 治疗组患者救治成功率明显高于对照组,住院日中位数明显小于对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05);两组患者并发症发生率差异无统计学意义(P>0.05).结论 短疗程糖皮质激素治疗乙型病毒性肝炎早期亚急性肝功能衰竭,可以提高患者救治成功率,缩短患者病程;严格把握糖皮质激应用指征及治疗时机,并联合有效的抗HBV治疗,临床应用比较安全.

    作者:吴锦瑜;黎明;张华 刊期: 2011年第03期

  • 小鼠早期胚胎质量与细胞凋亡的相关性

    目的 分析小鼠早期胚胎质量与细胞凋亡的关系,了解细胞凋亡调控基因在早期胚胎发育中所起的重要作用,旨在为提高胚胎质量寻找一条新途径.方法 采用脱氧核糖核苷酸未端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)原位荧光检测和Bcl-2免疫荧光检测等凋亡检测技术,以及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光检测细胞增殖程度的技术,分别对小鼠早期形态正常的胚胎、早期发育阻滞的胚胎和有碎片的胚胎进行细胞凋亡程度和增殖程度的检测,比较其凋亡和增殖程度的差异.结果 小鼠早期发育阻滞的胚胎细胞和胚胎中的碎片TUNEL阳性,Caspase活性增强,Bcl-2、PCNA表达水平降低.结论 细胞凋亡与胚胎发育阻滞及胚胎中的碎片形成密切相关.

    作者:余敏;邱卓琳;李红;曾位森;陈雷宁;李秋华;全松 刊期: 2011年第03期

  • 表达纯化糖原合成酶激酶3β的两种方法比较

    目的 建立一套高纯度、高活性表达糖原合成酶激酶3β的技术.方法 分别采用大肠杆菌和杆状病毒昆虫细胞蛋白表达系统表达糖原合成酶激酶3β,通过His和GST标签两步纯化目的 蛋白,SDS-PAGE观察目的 蛋白的纯度,激酶反应观察目的 蛋白的活性.结果 大肠杆菌表达纯化的糖原合成酶激酶3β占纯化后总蛋白的壁为54%,昆虫细胞表达纯化的糖原合成酶激酶3p占纯化后总蛋白的量为96%;昆虫细胞来源的目的 蛋白比大肠杆菌来源的目的 蛋白活性高-倍左右.结论 相比大肠杆菌表达的糖原合成酶激酶3β,昆虫细胞表达的目的 蛋白具有更高的纯度和活性.

    作者:许少飞;徐杰;黎明涛 刊期: 2011年第03期

  • 鞘内注射氯胺酮对甲醛炎性疼痛大鼠脊髓背角蛋白激酶C表达的影响

    目的 观察甲醛炎性疼痛大鼠脊髓背角蛋白激酶C(PKC)的表达,以及鞘内注射氯胺酮对甲醛炎性痛大鼠脊髓背角PKC表达的影响.方法 32只SD大鼠采用改良Yaksh法进行鞘内置管,随机分为4组(每组8只):对照组(C组)、鞘内注射生理盐水组(NS组)、氯胺酮50μg组(K1组)和氯胺酮100 μg组(K2组).NS、K1、K2组于置管5 d后,复制甲醛炎性疼痛模型.采用疼痛加权评分法(PIS)评估大鼠甲醛致痛后1 h内的疼痛行为,24 h后测量致痛足厚度并用免疫组化法观察大鼠腰5节段水平脊髓背角PKC的表达.结果 与NS组比较,K1组和K2组在甲醛炎性痛第二时相的PIS值明显降低(P<0.01);致痛24 h后,NS组大鼠致痛足厚度与对照组比较明显增加,而K1、K2组致痛足厚度与NS组比较则明显减少(P<0.05);NS组大鼠脊髓背角PKC免疫反应阳性细胞数量及免疫组化评分均较C组明显增加(P<0.01),而K1、K2组则明显低于NS组(P<0.05).结论 鞘内注射氯胺酮对甲醛炎性痛大鼠具有明显的抗伤害作用;鞘内注射氯胺酮可明显抑制甲醛炎性痛引起的脊髓背角PKC表达的增加,PKC在脊髓水平伤害性信息的传递和调节中可能发挥重要作用.

    作者:杨勇;郭曲练;邹望远;王锷;鄢建勤 刊期: 2011年第03期

  • 格列美脲联合二甲双胍短期内强化治疗对初诊2型糖尿病疗效的观察

    目的 对HbA1c>9%的新诊断的2型糖尿病患者进行12周的口服药物短期强化治疗,观察强化方案的疗效.方法 对HbA1c>9%的新诊断的2型精尿病患者进行格列美脲联合二甲双胍12周的短期强化治疗,观察疗效.结果 治疗后FPG、2 h G、HbA1c均显著下降(P<0.01);HOMA-IR下降、HOMA-B升高(P均<0.01);TG、CHOL、LDL均显著下降(P<0.01).结论 HbA1c>9%的新诊断的T2DM患者格列美脲联合二甲双胍短期强化方案安全有效.

    作者:汪敏;高方;薛耀明;韩亚娟;符霞军;何飞英 刊期: 2011年第03期

  • 胎儿Apert综合征1例尸检及文献汇报

    1临床资料停经31+5周,B超发现胎儿畸形4 d.我院B超示:胎儿脑部及颜面部发育异常(全前脑并喙鼻、唇裂),故于2010年5月16日在南方医院妇产科行利凡诺腔内引产术,引产一死男婴.为进一步明确胎儿畸形种类、病因,受南方医院委托和家属同意,遂于2010年5月21日上午8时在南方医院病理解剖楼对此胎儿进行病理解剖.

    作者:周洁;邓永键;司马雪琴;吴观信 刊期: 2011年第03期

  • 冻干重组人三突变型HIF-1α腺病毒生物学效应考察

    目的 研究冻干对重组人三突变型HIF-1α病毒(Ad-HIF-1α-564/402/803)生物学效应的影响.方法 将前期构建的Ad-HIF-1α-564/402/803在HEK293A细胞中进行扩增,用氯化铯浓度梯度离心法进行腺病毒纯化,X-Gal染色法测定重组腺病毒转染效率,在适宜的条件下制成冻于剂.采用MTS试剂盒观察冻干前后Ad-HIF-1α-564/402/803对hMvECs增殖的影响.分别在冻干前、冻干后1 d、6月、12月四个时间点提取病毒DNA,进行PCR及PCR产物测序鉴定重组人三突变型HIF-1α腺病毒基因;并在4个时间点以Ad-HIF-1α-564/402/803转染hMVECs,提取蛋白进行western blot检测HIF-1α蛋白的表达.结果 X-gal染色显示MOI为100pfu/cell时,转染效率趋于稳定.冻干前后重组人三突变型HIF-1α腺病毒对hMVECs增殖影响无显著差异(P>0.05).经PCR及基因测序鉴定,在四个时间点,腺病毒所携带的目的 基因信息无丢失或突变,HIF-1α蛋白表达无差异(P>0.05).结论 冻干能够长期保持重组人三突变型HIF-1α腺病毒的高生物活性.

    作者:陶宇;王月刚;魏旋;刘城;陈冬冬;吴平生 刊期: 2011年第03期

  • 原发性松果体区混合性生殖细胞肿瘤病理特点及其起源探讨

    目的 通过影像学表现、术中所见及病理成分探讨松果体区混合性生殖细胞肿瘤的起源.方法 回顾分析我院2000年1月致2010年9月间经术后病理证实的15例松果体区混合性生殖细胞肿瘤的术前影像学表现和病理标本.结果 影像学表现,12例存在钙化,10例含有囊变,5例含有脂质.矢状位类圆或类椭圆状6例,边缘均较光滑,不规则形状9例,边缘多突起;术中所见,所有肿瘤均位于大脑大静脉蛛网膜袖套包绕形成的松果体隐窝内;病理成分,13例含有生殖细胞成分,9例含有畸胎瘤成分,4例含有胚胎性癌成分,3例含有绒癌成分,7例含有卵黄囊瘤成分,3例含有横纹肌瘤成分.在7例标本边缘发现牛殖细胞瘤,10例患者生殖细胞瘤成分与其余成分相互穿插或被其它成分包绕.结论 松果体区混合性生殖细胞肿瘤起源于松果体周围残余生殖细胞,其极有可能来自单一的原始生殖细胞.

    作者:肖罡;方陆雄;邱炳辉;漆松涛 刊期: 2011年第03期

南方医科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学