学术投稿

慢病毒介导的shRNA靶向干扰nestin鼻咽癌稳定细胞株的建立

李川;马纪;张越;安靓

关键词:Nestin, 鼻咽癌细胞, 慢病毒, 重组质粒, RNA干扰
摘要:目的 检测nestin基因在8种鼻咽癌细胞中的表达差异,寻找高表达的细胞株.构建nestin基因的shRNA表达载体,建立nestin稳定干扰的鼻咽癌细胞株.方法 应用Real-time PCR和免疫荧光技术检测nestin在鼻咽癌细胞株中的表达水平.构建带GFP的重组靶向nestin shRNA慢病毒表达质粒,筛选阳性克隆,测序鉴定.293T细胞包装病毒,收集病毒上清,测定滴度.经Real-time PCR内源筛靶,选择佳靶点.将重组慢病毒感染5-8F细胞,Western blotting和Real-time PCR检测nestin的表达.结果 在8种鼻咽癌细胞株中,5-8F细胞中nestin表达较高.PCR和测序验证重组质粒构建成功.慢病毒感染5-8F细胞后,与阴性对照组和空白组相比,nestin的mRNA和蛋白水平明显受到抑制.结论 成功构建了干扰nestin的慢病毒重组质粒,并建立了稳定靶向干扰nestin表达的5-8F鼻咽癌细胞株.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 抗MICA抗体的致敏因素分析及其对肾移植的影响

    目的 探讨抗MICA抗体的致敏因素及其对肾移植的影响.方法 采用液相芯片分析技术检测98例尿毒症患者血清中10种抗MICA抗体及其抗体特异性,根据抗MICA抗体分为抗MICA抗体(+)组和抗MICA抗体(-)组,分析MICA致敏原因;对其中已行同种异体肾移植手术患者,比较抗MICA抗体(+)组和抗MICA抗体(-)组两组急性排斥反应(AR)发生率,移植肾功能恢复时间等资料.结果 98例尿毒症患者中,16例检测到抗MICA抗体,阳性率为16.3%,抗MICA抗体(+)组和抗MICA抗体(-)组输血、妊娠、移植、PRA等因素有显著性差异(P<0.05).38例肾移植受者,6例发生AR,经甲基强的松龙冲击治疗后均逆转.其中抗MICA抗体(+)组10例,4例发生AR;抗MICA抗体(-)组28例,2例发生AR.两组间AR发生率有显著性差异(40%vs7%,P=0.031).抗MICA抗体(+)组移植肾功能恢复时间(14.6±4.7 d)高于抗MICA抗体(-)组(8.2±t4.5 d)(P=0.001).结论 输血、妊娠、移植等因素可以引起抗MICA抗体产生.对于抗MICA抗体(+)患者,需要严格的配型和更强有力的免疫抑制药物,来预防排斥反应,提高移植肾存活率.

    作者:于立新;王贵;付绍杰;肖露露;徐健;杜传福 刊期: 2011年第04期

  • 孕期及产后妇女高危型人乳头状瘤病毒感染状况分析

    目的 探讨孕期及产后妇女高危型人乳头状瘤病毒(HPV)检测的临床意义.方法 采用快速导流杂交技术和基因芯片技术检测3806例清远地区孕期及产后妇女的宫颈标本,以5岁间隔分组,对不同年龄组进行高危型HPV-DNA检测,以4080例同期非孕期妇科普查妇女作为对照.结果 在7886例标本中高危型HPv感染率为12.5%,孕期、产后及非孕期组分别为14.3%、10.5%、11.7%,4个年龄组分别为16.9%、12.1%、13,5%和22.1%.结论 孕期高危型HPV感染率与产后及同期非孕期妇女比较差异有显著性,在各年龄组之间比较差异显著,孕期行宫颈HPV筛查安全可行.

    作者:金燕;陈彩蓉;郭晓燕;胡庆兰;覃碧芳 刊期: 2011年第04期

  • 高表达Ck2β与大肠癌发生和转移的相关性研究

    目的 探讨ck2β蛋白在正常大肠粘膜、大肠腺瘤和大肠癌组织中的表达及其在大肠癌发生及转移中的作用.方法 采用免疫组化方法检测46例正常大肠粘膜组织、20例大肠腺瘤及66例大肠癌组织中ck2β蛋白的表达.用RNA干扰技术沉默大肠癌细胞中ck2β蛋白表达,Western blot实验检测干扰效果;平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化;Transwell侵袭小室实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 ck2β在正常大肠粘膜组织中不表达或弱表达,核表达阳性率为8.7%,浆表达阳性率为13.0%;在大肠腺瘤组织中中度表达,60%呈核阳性表达,40%呈浆阳性表达;而在大肠癌组织中,ck2β呈强阳性表达,核表达阳性率为75.8%,浆表达阳性率为62.1%,三者间差异有统计学意义(P<0.05).ck2β蛋白表达与大肠癌的淋巴结转移密切相关,伴发淋巴结转移的大肠癌组织ck2β阳性表达明显高于无淋巴结转移者(P<0.05).体外实验发现,沉默大肠癌细胞中ck2β的表达能显著抑制细胞的增殖及侵袭能力.结论 ck2β蛋白的表达与大肠癌的发生和转移密切相关.

    作者:邹金金;罗何三;黄志勇;董忠谊;曾钦;吴德华 刊期: 2011年第04期

  • 自主研发的毛囊单位样结构可移植假发的组织相容性及长期移植效果的实验研究

    目的 研发出携带同种异体毛发的毛囊单位样假发可移植物,观察其植入后的组织相容性及长期移植的稳定性,探索其工业化生产并应用于临床的可能.方法 将人发和医用聚丙烯按毛囊单位样结构挤压成型,并加工成毛囊单位样假发可移植物.移植于新西兰大白兔,通过HE和电镜扫描观察聚丙烯及人发的组织相容性及长期移植效果.结果 移植后早期可见轻度炎症反应细胞浸润于聚丙烯和人发周围,并伴有局部上皮细胞增生.移植后1年仍保持良好的组织相容性,未发现人发的降解.假发一年脱落率为(4.1±4.0)%,毛发仿真外观效果好.结论 同种异体人发及聚丙烯均具有良好的组织相容性,移植后外观效果好,脱落率低,具有工业化生产并应用于临床的潜能.

    作者:孙宇;胡志奇;冯传波;鲁峰;刘戈;张志丹 刊期: 2011年第04期

  • 鸭乙型肝炎病毒YMDD突变株体外耐药模型建立

    目的 构建鸭乙型肝炎病毒(DHBV)YMDD点突变的复制质粒,研究其在鸡肝癌细胞中的复制及拉米夫定抗性.方法 以广东樱桃谷鸭DHBV分离株为模板,将3631 bp的片段克隆至载体pBluescript Ⅱ KS(+)中,构建含1.2倍病毒全基因的重组质粒,经PCR定点突变获得YMDD突变株.将构建质粒经FuGENETM 6瞬时转染鸡肝癌细胞,分析变异株的复制能力及拉米夫定耐药性.结果 PCR鉴定、酶切鉴定及序列测定均证实成功获得1.2倍DHBV全基因YMDD突变质粒.Southern印迹杂交表明重组质粒转染细胞后可检测到病毒复制中间体;野生株的复制能力是突变株的2.7倍.拉米夫定对变异株的IC50=37.12+8.81 ng/ml,高于野生株的IC50=10.90±4.80 ng/ml.结论 与野生株相比,YMDD突变株质粒体外复制活性减弱,对拉米夫定敏感性下降.

    作者:付喜花;梁蔚芳;吴小东;沈国俊;何海棠;陈金军;侯金林 刊期: 2011年第04期

  • 不同单肺通气模式对呼吸功能及七氟醚FA/FI的影响

    目的 通过观察开胸手术患者,探讨不同单肺通气模式对肺顺应性、肺内分流、动脉血氧合以及吸人麻醉药七氟醚FA/FI变化趋势的影响,为临床麻醉选择合适的通气方式提供理论依据.方法 选择30例首次择期行开胸肺叶切除术需单肺通气(one-lung ventilation,OLV)的肺癌患者,随机分为A、B和C3组.A组(定容通气组):VT=8ml/kg,Rf=12次/min,PEEP=0);B组(定压通气组):先将患者进行VCV单肺通气,参数设置同A组,气道压稳定后,在气道峰压相同的条件下,更改通气模式为PCV,Rf=12次/min,PEEP=0;C组(小潮气量+PEEP组):VT=6 ml/kg,Rf=16次/min,PEEP=5cm H2O.分别于双肺通气(total lung ventilation,TLV)后10min及OLV后20、45、70min四个时间点记录患者生命体征、气道压,并采集桡动脉血和颈内静脉血各1 ml行血气分析.OLV 20 min时,以挥发罐浓度1.5%七氟醚吸入,20 min后停止吸入,期间记录七氟醚肺泡浓度和吸入浓度比(FA/FI).结果 (1)单肺通气后,各组患者气道峰压明显升高,顺应性下降,动脉血氧分压降低,肺内分流率明显增高.(2)B组在初的8minFA/FI上升快,C组慢,A组介于两者之间.随着吸入时间的延长,三组曲线接近并趋于一致.结论 单肺通气时,定压通气模式有助于提高肺顺应性,但终三种通气模式吸入麻醉药的FA/FI在各时间点无差异.

    作者:叶昉帆;李利文 刊期: 2011年第04期

  • 小剂量右美托咪啶复合芬太尼时七氟烷低肺泡有效浓度的测定

    目的 测定复合右美托咪啶和芬太尼时七氟烷抑制切皮体动反应的呼气末肺泡50%有效浓度(effective concentrationsin 50%,EC50)和95%有效浓度(EC95).方法 选择ASAI或Ⅱ级,年龄18~60岁腰椎后路融合手术病人,输注右美托咪啶0.5 mg/kg后8%七氟烷和芬太尼3 mg/kg诱导,病人意识消失后七氟烷浓度降至5%,同时给琥珀胆碱1~2 mg/kg肌松后行气管内插管.七氟烷和右美托咪啶0.2 mg/(kg·h)维持麻醉,七氟烷呼气末浓度稳定10 min后开始手术.第1个病人的呼末七氟烷浓度为1.5%.七氟烷低肺泡有效浓度(MAC)按改良序贯法增加或减少0.2%.用概率单位回归法计算七氟烷抑制切皮反应的EC50、EC95及相应的95%可性区间(CI).结果 七氟烷抑制切皮体动反应的EC50为0.94%,95%CI为0.76%~1.07%;EC95为1.23%,95%CI为1.09%~2.05%.结论 复合小剂量右美托咪啶和芬太尼时,七氟烷抑制切皮体动反应EC50为0.94%和EC95为1.23%.

    作者:陈兆芸;屠伟峰;何洹;黄静霞;施冲 刊期: 2011年第04期

  • 一种恶性梗阻性黄疸介入治疗的新方法-经皮肝穿刺胆道内射频消融内支架置入术

    目的 探讨介入治疗恶性梗阻性黄疸的新方法:经皮肝穿刺胆道射频消融内支架置入术的临床经验.方法 经临床筛选2例晚期恶性梗阻性黄疸患者,其中肝门部胆管癌1例,胰头癌1例.采用经皮肝穿刺胆道内肿瘤射频消融,然后置入相匹配的金属内支架.结果 2例患者均完成手术,血清总胆红素明显下降,其中一例CA-199降至正常,临床症状显著改善.结论 经皮肝穿刺胆道内射频消融内支架置入术率先在国内开展,是一种安全可行的新的手术方式.相对于传统的介入治疗方式,射频消融能减少操作时肿瘤的出血,进一步阻止肿瘤的局部增长,从而延长内支架的通畅期和患者的存活期,改善患者生存质量.

    作者:何国林;徐小平;周陈杰;程远;潘明新;高毅;蒋泽生 刊期: 2011年第04期

  • 间歇性缺氧时结肠癌细胞的晚期氧化蛋白产物与血管内皮生长因子、转化生长因子β1的关系

    目的 研究间歇性缺氧时结肠癌SW480细胞其晚期氧化蛋白产物(AOPP)的水平和其他氧化应激指标的关系,以及与血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGFβl)的相关性.方法 建立细胞缺氧模型,SW480细胞按缺氧条件的不同分为:间歇性缺氧组(A组)、持续性缺氧组(B组)、常氧对照组(C组).采用ELISA方法检测AOPP和VEGF,黄嘌呤羟胺法测定超氧化物岐化酶(SOD),分光光度法测定丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX),用免疫荧光染色方法及Western blok方法测定TGFβ1的表达.结果 ①与对照组C组比较,A组和B组的AOPP、MDA均升高(P均<0.05);SOD、GSH-PX下降(P均<0.05).A组与B组比较时两者的差异也具有统计学意义(P均<0.05),间歇性缺氧较持续缺氧时AOPP、MDA明显升高,SOD、GAH-PX显著下降(P均<0.05).②间歇性缺氧时AOPP水平与MDA、VEGF、TGFβ1呈正相关(P均<0.05),与SOD为负相关关系(P均<0.05),而与GSH-PX无明显相关性.结论 间歇性缺氧时SW480细胞的蛋白氧化损伤增强,较持续缺氧时明显,并且与氧化应激状态有关.缺氧时血管生成因子VEGF和TGFβ1均表达,以间歇性缺氧时显著,且其表达与AOPP水平密切相关.

    作者:冼乐武;李涛平;韦伊尔;伍思培;马磊 刊期: 2011年第04期

  • Ghrelin对肾功能不全大鼠胃肠移行性复合运动的影响

    目的 探讨ghrelin对肾功能不全(CRF)大鼠胃肠移行性复合运动(MMC)的影响.方法 健康雄性SD大鼠30只,随机取出6只做假手术组,其余24只根据是否预先应用ghrelin受体GHS-R的抑制剂D-Lys3-GHRP-6以及ghrelin剂量不同而分为ghrelin 1~4组.采用5/6肾切除法建立CRF大鼠模型.采用多道生理记录仪在大鼠清醒、禁食状态下监测消化间期MMC,观察腹腔注射不同剂量ghrelin对MMC周期的影响,以及给予D-Lys3-GHRP-6对ghrelin作用的影响.结果 慢性肾功能不全大鼠存在胃肠动力障碍,表现为胃肠道形态异常的MMC增加,MMC周期缩短,频率增加,Ⅲ相振幅减低;ghrelin可以明显增加MMC出现的频率、增加Ⅲ相出现的时间、频率和振幅,且呈剂量依赖性(P<0.05);D-Lys3-GHRP-6可以抑制ghrelin的作用.结论 ghrelin可以明显改善CRF大鼠MMC周期紊乱,进而改善其胃肠动力障碍.

    作者:付荣国;王莉;张军;周戬平;姚纲练;欧妍;祁彩霞;桂保松 刊期: 2011年第04期

  • 三种示踪技术标记人脂肪组织来源干细胞的对照研究

    目的 比较3种不同的荧光示踪技术标记人脂肪组织来源干细胞(ASCs)的效率,以寻找脂肪组织来源干细胞佳的标记示踪方法.方法 吸脂术获取人脂肪组织,胶原酶消化法后体外贴壁法培养,获得的长梭形细胞经鉴定为脂肪组织来源干细胞.分别使用5μlDiI,10μg/ml的脱氧尿苷BrdU及50 MOI的携带绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒进行标记,荧光显微镜观察不同时间点及不同代数的脂肪干细胞的标记效率及形态变化.结果 成功分离获得ASCs,经鉴定其表达间充质干细胞表面标志,并能被成功实现成脂、成骨及成软骨的诱导分化.DiI标记ASCs 48 h后,荧光显微镜下观察可见100%细胞浆呈现红色荧光,胞核未染,保持了良好的正常形态.但细胞传代后荧光衰减迅速.10μg/ml BrdU标记ASCs 48h后,90%的胞核呈绿色荧光,传代后胞核荧光逐渐衰减.携带GFP重组腺病毒转染ASCs 24 h后胞浆内即可见绿色荧光,5 d后90%以上的细胞呈现绿色荧光.反复传代后未见明显的荧光衰减.结论 DiI,BrdU及携带GFP的重组腺病毒均能有效的标记人脂肪组织来源干细胞.DiI示踪技术为细胞膜标记,BrdU为细胞核标记,两项技术均操作简单,但传代后衰减迅速,适合于短期标记示踪.携带GFP的腺病毒标记方法较为复杂,但反复传代后仍不衰减,适合于长期的标记示踪观察.

    作者:李科成;常强;鲁峰 刊期: 2011年第04期

  • DC方案与PF方案化疗与同步放疗治疗中晚期食管鳞癌

    目的 观察多西紫杉醇加顺铂化疗(DC)同步放疗与顺铂加氟尿嘧啶(PF)化疗同步放疗中晚期食管癌的疗效和毒副反应.方法 将48例食管鳞癌患者随机分成多西紫杉醇加顺铂化疗同步放疗组(DC组)和顺铂加氟尿嘧啶化疗同步放疗组(PF组)各24例.DC组采用多西紫杉醇75mg/m2 iv d1,+顺铂25mg/m2 iv d1-3,28d为一周期,共4周期.PF组采用顺铂25 mg/m2 iv d1-3、氟尿嘧啶500 mg/m2,连用5d,28 d为1周期,共4周期.两组放疗方法相同,采用普通放疗总剂量60.Gy/30 f/6周.结果 两组近期疗效比较无统计学意义(Z=1.106,P=0.269).DC组和PF组的3年中位生存时间分别为26个月(95%CI:24.579~27.421)、23个月(95%CI:21.896~24.104),log ranktest差异无显著性(x2=3.4041,P=0.065).DC组与PF组的放射性食管炎比较有统计学意义(P=0.049),而骨髓抑制、胃肠道反应方面比较无统计学意义.结论 多西紫杉醇加顺铂同步放化疗可用于治疗中晚期食管鳞癌且安全可靠.

    作者:陈斯泽;陈雪梅;丁颖;王希成;张帆;莫凯岚 刊期: 2011年第04期

  • 高糖对INS-1细胞损伤存在记忆效应

    目的 观察大鼠胰岛细胞对高糖损伤是否存在记忆效应,并对其机制进行初步探讨.方法 以INS-1(大鼠胰岛瘤细胞株)细胞作为研究对象,观察INS-1细胞经历48 h持续高糖(33.3 mmol/L)刺激后,纠正高糖状态,以11.1 mmol/L糖浓度继续培养,检测细胞活力,凋亡相关基因(bax,caspase-3)的mRNA水平和活性氧(ROS)水平的变化.INS-1细胞处理组分为:对照组(11.1 mmol/L葡萄糖×7 d);高糖组(33.3 mmol/L葡萄糖×2 d);3 d记忆组(33.3 mmol/L葡萄糖×2 d+11.1mmol/L葡萄糖×3 d);5 d记忆组(33.3 mmol/L葡萄糖×2 d+11.1 mmol/L葡萄糖×5 d).Real-Time PCR检测bax,caspase-3的mRNA水平,Dihydrocthidium(DHE探针)检测ROS水平,MTT法测定细胞活力.结果 高糖组细胞活力较对照组显著降低(P<0.001).而ROS水平,bax,Caspase-3的mRNA水平较对照组显著增高(P<0.05).在3 d记忆组及5 d记忆组,细胞活力较对照组显著降低(P<0.001),ROS水平,bax,Caaspase-3的mRNA水平较对照组显著增高(P<0.05).结论 高糖对INS-1细胞的损伤存在记忆效应,主要表现为细胞活力的持续降低,促凋亡基因的持续高表达.ROS水平的持续升高可能与记忆效应产生有密切关系.

    作者:魏伟平;薛耀明;高方;朱波;李晨钟 刊期: 2011年第04期

  • 特异性miR-221抑制剂对结直肠癌细胞增殖及凋亡的影响

    目的 探讨miR-221在结直肠癌细胞中的表达状况及特异性miR-221抑制剂对癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 应用实时荧光定量PCR(real-time Q-PCR)检测四种人结肠癌细胞系HT-29、Lovo、SW-480、Cac02中miRNA-221表达状况,并以人脐静脉内皮细胞HUVEC作为正常对照;设计并合成miR-221、antl-miR-221(微小RNA抑制剂)寡核苷酸,以脂质体转染Cac02细胞系,以Real-timeQ-PCR再次检测转染后细胞中miR-221表达状况,并通过噻唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪观察细胞的增殖和凋亡状态.结果 与正常细胞相比,4种人结肠癌细胞系中miR-221表达均显著增高,差异具有统计学意义(P<0.01);癌细胞转染antt-miR-221后,G0/G1期细胞比例明显增加,而S期细胞比例显著下降,并可见细胞凋亡的发生(P<0.01).结论 miR-221特异性抑制剂可通过抑制细胞增殖同时诱导凋亡而抑制结直肠癌细胞生长,提示miR-221作为结直肠癌生物治疗有效靶点有进一步研究价值.

    作者:王伟;孙凯;吴承堂;雷尚通;曾俊杰;伍颖君;李国新 刊期: 2011年第04期

  • 重型颅脑损伤急性弥漫性脑肿胀的临床特点和治疗措施

    目的 对134例重型颅脑损伤急性弥漫性脑肿胀患者的临床特点、治疗措施以及预后情况进行探讨研究,进而总结出一套较为合适的救治方案.方法 对本组134例急性弥漫性脑肿胀患者手术治疗和非手术治疗,以及预后进行回顾性分析.结果 手术组的76例患者中存活55例占手术组的72.4%,死亡21例占27.6%;非手术组的58例患者中存活43例占非手术组的74.1%,死亡15例占25.9%.结论 早期采取综合措施积极救治是提高重型颅脑损伤急性弥漫性脑肿胀患者疗效的关键.

    作者:魏璐城;李卫贤;蒋金泉;郑伟;黄文华 刊期: 2011年第04期

  • 二期翻修治疗人工髋节假体周围感染

    目的 探讨人工髋关节置换术后假体周围感染二期翻修手术疗效和假体再植入时机.方法 回顾性分析自2006年1月~2010年1月在我院采用二期翻修术治疗人工髋关节术后感染15例(15髋).一期手术彻底清创,取出感染假体,植入自制万古霉素骨水泥占位器;3~6月后二期手术,再次清创,取出骨水泥占位器后,9例植入骨水泥型,6例植入非骨水泥型假体.术后随访9~46个月(平均25个月).结果 15例患者均未发现感染复发、假体松动和脱位等.治疗前Harris评分平均为40.3分(22~55分),一期手术后Harris评分平均为54.0分(45~65分).二期翻修后Harris评分平均为88.2分(68~94分).结论 二期翻修手术治疗人工髋关节置换术后假体周围感染,能有效控制感染,关节功能明显改善,临床效果满意.一期手术后间隔3~6月再二期手术为恰当的手术时机.

    作者:邹勇根;冯宗权;邢基斯;彭智浩;罗璇 刊期: 2011年第04期

  • 可弯曲电子胸腔镜在不明原因胸膜疾病中的应用

    目的 探讨局麻下可弯曲电子胸腔镜检查能否提高胸膜疾病的诊断准确性和患者的耐受性.方法 对47例不明原因胸膜疾病(胸腔积液或胸膜增厚)患者进行内科胸腔镜肉眼观察和病理检查,统计诊断准确性、患者的耐受性.结果 胸腔镜下肉眼观:42例患者胸壁或(和)膈肌发现病变,5例未见明显异常.47例患者中胸膜恶性肿瘤为21例(44.7%),胸膜结核17例(36.2%),特发性嗜酸细胞增多性胸水1例(2.1%),奴卡菌感染1例(2.1%),缩窄性心包炎1例(2.1%),慢性脓胸2例(4.3%),脾动脉栓塞1例(2.1%),病因未明3例(6.4%),诊断准确性达93.6%.所有患者术中、术后生命体征稳定,仅1例术中出现轻度胸膜反应,1例术后伤口疼痛,5例出现轻度皮下气肿,未见其他并发症.结论 可弯曲电子胸腔镜检查及胸膜活检术是一项操作简单、安全、有效的检查方法,有助进一步明确胸膜疾病的病因;改良后的人工气胸针可进一步扩展内科胸腔镜的适应症.

    作者:黄国华;程远雄;苏瑾;刘爱华;郁伟伟;吴月仙;罗雅玲;蔡绍曦 刊期: 2011年第04期

  • 15个短串联重复序列位点与大骨节病传递不平衡分析及与低硒暴露的交互作用

    目的 寻找大骨节病(KBD)的易感基因,探讨低硒暴露与KBD易感基因的交互作用.方法 在陕西省麟游县KBD病区收集23个KBD核心家系,应用聚合酶链反应技术及GeneScan Analysis 3.7和Genotyper3.7软件进行基因分析.对核心家系进行单体型相对风险分析(HRR)和传递/不平衡检验(TDT).采用原子荧光光谱法测定血清硒水平,用二项Logistic回归模型分析低硒暴露与KBD可疑易感基因的交互作用.结果 23个核心家系的HRR和TDT分析发现3个等位基因(位点D2S151的等位基因248bp、位点D2S305的等位基因320bp和位点DllS4094的等位基因194bp)与KBD关联(P<0.05).被研究人群的平均血硒浓度为0.037 μg/ml,未发现低硒暴露与多态性STR位点的交互作用(P>0.05).结论 D2S151、D2S305和D11S4094位点或其附近位点的多态性可能与KBD发病有关,可疑易感基因和低硒暴露在研究人群中无交互作用.

    作者:史晓薇;吕爱莉;任峰玲;李文荣;康龙丽;郭雄 刊期: 2011年第04期

  • shRNAmir慢病毒载体沉默环氧合酶-2对鼻咽癌细胞放疗敏感性的影响

    目的 探讨COX-2基因沉默对鼻咽癌C666-1细胞放射敏感性的影响.方法 以稳定沉默COX-2基因表达的鼻咽癌Anti-COX-2 C666-1细胞和对照细胞Anti-GL-2 C666-1为研究对象,采用克隆形成实验及曲线拟合计算不同剂量辐射后各放射生物学参数和放射增敏比;采用流式细胞仪检测辐射后细胞周期的变化;采用体内荷瘤裸鼠动物模型检测放疗后皮下移植瘤的生长曲线,并计算抑瘤率.结果 Anti-COX-2 C666-l细胞SF2、D0、Dq值较对照组均明显偏低,α/β显著增高,放射增敏比为1.4014;COX-2沉默后降低了辐射诱导的G2/M期阻滞,并增加辐射后荷瘤裸鼠的抑瘤率.结论 COX-2基因稳定沉默后可改变鼻咽癌C666-1的放射生物学参数,并降低辐射引起的G2/M期阻滞,增大抑瘤率,能够起到放疗增敏的作用.

    作者:孙权权;刘雄;刘英;王路;彭新宇;曾芳芳;李刚;袁亚维 刊期: 2011年第04期

  • 慢病毒介导的shRNA靶向干扰nestin鼻咽癌稳定细胞株的建立

    目的 检测nestin基因在8种鼻咽癌细胞中的表达差异,寻找高表达的细胞株.构建nestin基因的shRNA表达载体,建立nestin稳定干扰的鼻咽癌细胞株.方法 应用Real-time PCR和免疫荧光技术检测nestin在鼻咽癌细胞株中的表达水平.构建带GFP的重组靶向nestin shRNA慢病毒表达质粒,筛选阳性克隆,测序鉴定.293T细胞包装病毒,收集病毒上清,测定滴度.经Real-time PCR内源筛靶,选择佳靶点.将重组慢病毒感染5-8F细胞,Western blotting和Real-time PCR检测nestin的表达.结果 在8种鼻咽癌细胞株中,5-8F细胞中nestin表达较高.PCR和测序验证重组质粒构建成功.慢病毒感染5-8F细胞后,与阴性对照组和空白组相比,nestin的mRNA和蛋白水平明显受到抑制.结论 成功构建了干扰nestin的慢病毒重组质粒,并建立了稳定靶向干扰nestin表达的5-8F鼻咽癌细胞株.

    作者:李川;马纪;张越;安靓 刊期: 2011年第04期

南方医科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学