学术投稿

人视网膜母细胞瘤蛋白真核表达载体的构建及其在前列腺癌细胞中的表达与定位

陆斌;宋先璐;宋方丽;赵善超;姜勇

关键词:人视网膜母细胞瘤蛋白, 真核表达载体, 定位, 前列腺肿瘤
摘要:目的 构建人视网膜母细胞瘤(retinoblastoma 1,RB-1)基因真核表达载体,并在前列腺癌细胞株PC-3中表达,为进一步研究其在前列腺癌发病中的作用和机制打下基础.方法 采用PCR方法 扩增RB-1基因编码区的全长序列,并加上FLAG标签,利用分子克隆技术将其重组于CMV载体中.利用酶切、序列分析鉴定克隆正确性.转染PC-3细胞,用Western Blot检测其表达,用免疫荧光检测其在细胞中的定位.结果 克隆的RB-1真核表达载体完全正确,Western Blot检测到RB-1有表达,免疫荧光检测其主要定位于细胞核内.结论 成功地构建了RB-1真核表达载体,其能够在PC-3中高效表达,并主要定位于细胞核内.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • ZD6474联合阿霉素对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用

    目的 探讨ZD6474联合阿霉素对乳腺癌细胞MCF-7的抑制及杀伤作用.方法 用MTT法检测ZD6474、阿霉素单药及其联合对MCF-7细胞的增殖抑制程度,同时采用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况.结果 ZD6474单药及阿霉素单药对MCF-7细胞均有明显抑制作用,两药联合具有协同作用(P<0.05).ZD6474主要使细胞阻滞于G0/G1期,阿霉素则使细胞阻滞于S期.两药联用后同时阻滞于G0/G1及S期.联合组凋亡率明显高于单药组(P<0.05),差异有统计学意义.结论 ZD6474和阿霉素对乳腺癌MCF-7细胞有增殖抑制及促凋亡作用,两药联合表现为协同或相加作用.

    作者:沈洁;何本夫;阮健;赵鹏;缪景霞;郑航;罗荣城 刊期: 2010年第03期

  • TACE联合大分割 3D-CRT治疗原发性肝癌的初步临床研究

    目的 初步观察原发性肝癌经皮肝动脉栓塞化疗(TACE)联合大剂量分割的三维适形放射治疗(3D-CRT)的疗效和毒性,探讨这种治疗模式的可行性与价值.方法 对8例患者共13个病灶行1~4程TACE后,采用大分割模式的共面或非共面多野X线3-DCRT治疗,3~8 Gy/次,3次/周,总剂量40~60 Gy,LQ模型生物等效剂量52~84 Gy.结果 放疗结束1个月后复查,全部病灶中完全消退、部分消退和稳定者各占23.1%(3/13)、46.1% (6/13)和30.8%(4/13).总有效率69.2%(9/13),临床获益率100%.随访1~5个月,全组中有1例发生放射性肝病.结论 TACE联合大剂量分割3-DCRT治疗原发性肝癌安全并有好的近期疗效,值得设置前瞻性随机临床试验研究其远期疗效及影响预后的因素.

    作者:欧涛;高兴旺;韦海珠;陆海文;陈海金;向阳 刊期: 2010年第03期

  • 臭氧化盐水对四氯化碳诱导的大鼠急性肝损伤的保护作用

    目的 研究静脉注射臭氧盐水(OS)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠急性肝损伤的保护作用及其机制.方法 91只健康SD大鼠随机分OS组、模型组和对照组.OS组给予30 μg/ml OS、模型组给予氧气盐水尾静脉注射,每日1次,连续15 d.第16天腹腔注射CCl4,对照组不予任何预处理,仅同期给予植物油2 ml/kg腹腔注射.注射CCl4后第1、2、3、5、7天检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALD、谷草转氨酶(ASD、肝组织总抗氧化能力(TAOC)、还原型谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA),以及肝脏病理、不良反应及生存率.结果 注射CCl4后大鼠ALT、AST、MDA先升后降,TAOC、GSH、CAT先降后升,对照组保持稳定;与模型组比较,OS组ALT、AST峰值低42.9% (P<0.05),TAOC谷值高25%(P<0.05),峰/谷期延后,峰期肝损伤面积低(44.8% vs 28.9%.P<0.05),生存率高(7.7%vs46.2%,P<0.05);大鼠注射OS无明显不良反应.结论 OS静脉注射能预防减轻CCl4致大鼠肝损伤,提高生存率;OS减轻CCl4中毒作用机制可能与其提高大鼠总抗氧化能力有关.

    作者:彭福江;屈丹丹;郭亚兵 刊期: 2010年第03期

  • 腺病毒载体介导凋亡素基因联合阿霉素与顺铂对种植性肝癌的治疗研究

    目的 探讨腺病毒介导凋亡素基因联合阿霉素(ADM)与顺铂(CDDP)对种植性肝癌的治疗.方法 建立c57BL/6小鼠皮下荷肝细胞癌模型(n=64),计算成瘤率,观察肿瘤内注射含凋亡素基因的重组腺病毒、ADM及CDDP后种植瘤的体积变化、毒副作用和组织学变化,同时计算抑瘤率.结果 在治疗7d后腺病毒AdAFPvp3联合ADM与CDDP治疗组的种植瘤体积、重量均显著低于对照组,比较差异均具有统计学意义,在治疗期间没有观察到毒副作用.结论 携带凋亡素基因的重组腺病毒联合ADM与CDDP对肝细胞癌具有治疗作用.

    作者:刘清;罗永胜;耿岚;王伟;赖卓胜;李富荣 刊期: 2010年第03期

  • 下颌骨放射性骨坏死并发下齿槽动脉破裂引起大出血的救治:1例报告

    头颈部恶性肿瘤放射治疗后发生颌骨放射性骨坏死并不少见,但并发下齿槽动脉破裂引起大出血甚为罕见,笔者遇到一例,现报道如下.

    作者:吴洁妹;吴乃强;曾伟鹏;刘军 刊期: 2010年第03期

  • 不同胱抑素方程对我国慢性肾脏病患者的适用性评估

    目的 评价在血清胱抑素C(Cys-C)含量基础上开发的肾小球滤过率(GFR)评估方程在我国慢性肾脏病(CKD)患者的适用性.方法选择2008年1月至2009年11月我院肾内科就诊的412例CKD患者,将简化MDRD方程、Cys-C方程1~5计算的GFR值与~(99m)Tc-DCPA测定的GFR(sGFR)进行比较.结果 各方程计算的GFR与sGFR总体上均呈显著性相关(P<0.001),Cys-C方程4和Cys-C方程5估算的GFR与sGFR的一致性佳,Cys-C方程4、5的准确性和精确度均高于其他方程.在CKD1~5期,Cys-C方程4、5的准确性高于其它方程(P<0.001).所有方程中仅Cys-C方程5的偏差一致性限度在事先规定的专业界值60 ml·min~(-1)·1.73m~(-2)之内.结论Cys-C方程4、5的准确性、精确度均优于以往的GFR评估方程,并在不同CKD分期病人中有较好的适用性.但该方程的一致性限度仍存在不足,有必要进行进一步的检验和方程,为临床提供更加准确和适用的肾功能评估方法.

    作者:黎晓磊;梁敏;杨小兵 刊期: 2010年第03期

  • 中西医结合对鼻内镜手术后鼻黏膜的影响

    目的 鼻内镜术后应用自制中药液加西药液冲洗鼻腔,观察对鼻腔黏膜的影响.方法 鼻内镜手术患者100例,随机分为两组:对照组50例患者用生理盐水250 ml加庆大霉素(80000 U)和地塞米松(5mg),于术后第2天取出鼻腔油纱条开始鼻腔冲洗,前两个月2次/d,第3个月1次/d.实验组50例患者在对照组基础上给予自制中药洗液250 ml冲洗.术中、术后3个月用鼻内镜取患者鼻道窦口周围黏膜,采用免疫组化技术观察术后黏膜iNOS表达情况.结果 实验组疗效明显优于对照组,术中实验组及对照组iNOS无统计学差异,术后3个月实验组阴性率明显高于对照组(P<0.05).结论 术后用中西药液结合冲洗鼻腔可以通过调节鼻腔黏膜的iNOS修复鼻息肉术后黏膜,提高鼻内镜手术的疗效.

    作者:郭童雷 刊期: 2010年第03期

  • 玄参佳采收期的研究

    目的 确定玄参的佳采收期.方法 采用Hypersil BDS C18柱(4.6 mm×200 mm,5 μm),乙腈-1%冰醋酸溶液(28:72)为流动相,流速为1.0 ml·min~(-1).用高效液相色谱法在278 nm处测定哈巴俄苷的含量.结果 玄参药材中的哈巴俄苷含量以11月底为高.结论 玄参药材的佳采收期为11月底.

    作者:陈仕恒;谢昭明;李顺祥;何慧玲;李峰名 刊期: 2010年第03期

  • 组织化卒中管理模式对脑卒中患者临床疗效的影响

    目的 研究组织化卒中管理模式对脑卒中患者临床疗效的影响.方法 自2002年1月至2006年12月的脑卒中患者共2637例,随机进入组织化卒中病房(研究组)和普通神经科病房(对照组),比较两组的病死率、未愈率、好转率、治愈率.结果 研究组病死率、未愈率、好转率、治愈率分别为2.00%、0.90%、74.94%和22.16%;对照组则为3.26%、1.02%、74.01%及21.71%.研究组的病死率较对照组明显减少(P<0.05),而研究组与对照组的未愈率、好转率、治愈率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 组织化卒中管理模式对减少脑卒中患者病死率较普通神经科病房更具有优越性.

    作者:吴婉玲;卢锡林;郑民缨;梁伟;姚晓黎;胡正路 刊期: 2010年第03期

  • 瑞舒伐他汀对轻度胆固醇升高原发性高血压患者左心功能及动脉粥样硬化的影响

    目的 探讨他汀类药物瑞舒伐他汀对合并轻度胆固醇升高的原发性高血压患者左心功能及动脉粥样硬化的影响.方法 入选50~79岁原发性高血压伴心血管危险因素者79例,随机分分两组:他汀组40例及非他汀组39例,他汀组在使用氨氯地平十替米沙坦基础上加用瑞舒伐他汀(阿斯利康制药有限公司10~20 mg/d,睡前),非他汀组在使用氨氯地平十替米沙坦基础上不用他汀类药物.入组时,两组患者低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)为2.6-3.6 mmol/L.入组时和12个月后行超声心动图、核素心血池和64排螺旋CT冠状动脉钙化检查及测定血浆高敏C-反应蛋白(hs-CRP),比较治疗前后血浆hs-CRP、左室功能指数、冠状动脉钙化积分(LN)及颈动脉内膜中层厚度(IMT).结果 他汀组12月后,LDL-C较入组时下降33,2%.非他汀组较入组时无变化.他汀组12个月后,左室高峰充盈率(LVPFR)较入组时明显增加(P值<0.05);而高敏C-反应蛋白、LN及IMT显著下降(P值均<0,05).结论 对于轻度LDL-C升高的原发性高血压患者,常规降压药物基础上加用瑞舒伐他汀能明显改善左心室舒张功能及稳定或逆转动脉粥样硬化斑块.

    作者:林泽鹏;张志伟;张荣奎;舒平春;吴仕琴 刊期: 2010年第03期

  • 丹参多酚酸盐注射液对猝死型冠心病复苏过程中的心肌保护作用

    目的 探讨丹参多酚酸盐注射液对猝死型冠心病复苏过程中的心肌保护作用及其作用机制.方法 60例心脏骤停患者被随机分为两组:丹参多酚酸盐注射液治疗组30例,对照组30例.均给予两组患者基本的抢救措施,包括心肺复苏及药物治疗.治疗组在常规抢救措施基础上加用肾上腺素1 mg,静脉推注,同时给予丹参多酚酸盐注射液400 mg静脉推注.观察两组病例复苏前、复苏即刻、再灌注0.5h、再灌注1h心肌肌酸激酶(CK)、肌酸激酶.同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、血清谷草转氨酶(AST)及超氧物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)的情况.结果 对照组复苏后各时期血清MDA及SOD水平与复苏前比较均有显着性差异(P<0.05).与对照组比较,丹参多酚酸盐注射液组复苏后各时期血清MDA水平较低,SOD、NO水平较高(P<0.05);两组复苏后其他心肌酶水平均呈上升趋势,但治疗组的升高显著低于同期对照组(P<0.05).结论 丹参多酚酸盐注射液能使血清NO水平升高,SOD活性增加,MDA水平降低,并使LDH、CK、CK-MB水平降低,抑制对心肌的损伤,保护缺血再灌注细胞.

    作者:刘志宁;赵庆霞;尤莉 刊期: 2010年第03期

  • 中西医结合治疗小儿支原体肺炎及细胞因子变化

    目的 观察中西医结合治疗小儿支原体肺炎的疗效并探讨支原体肺炎患儿血清中细胞因子的变化.方法 采用随机分组法,设立治疗组45例,口服中药加阿奇霉素10 mg/(kgod)静脉点滴,对照组45例,单纯应用阿奇霉素静脉点滴,两组均以7d为1个疗程.并观察两组的有效率、症状体征消失时间及血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化.结果 两组的总有效率分别为93.33%和73:33%.治疗组疗效明显高于对照组(P<0.05).治疗组在发热消失时间、咳喘及罗音消失时间等方面都明显优于对照组(P<0.05).治疗组细胞因子水平明显低于对照组(P<0.05).结论 中西医结合治疗小儿支原体肺炎能缩短病程,提高疗效,明显减轻患儿的痛苦,降低血清中细胞因子含量.

    作者:刘迪军;郑彬;蔡保欢;周望梅;余壁湘 刊期: 2010年第03期

  • PET/CT对评价非小细胞肺癌纵隔淋巴结转移的诊断价值

    目的 探讨PET/CT显像对非小细胞肺癌纵隔淋巴结转移的诊断价值,分析其在肺癌临床分期中的作用.方法 收集我院2005年8月至2009年12月进行手术根治或纵隔淋巴结活检的非小细胞肺癌患者158例,所有患者术前均行PET/CT检查,并根据手术或纵隔镜结果 进行诊断及分期.对照病理结果 ,分别计算出CT及PET/CT对诊断纵隔淋巴结转移灶的敏感性、特异性,阳性和阴性预测值及准确性.结果 158例患者通过纵隔镜活检及手术切除病理证实的淋巴结共937枚(N1、N2及N3),CT诊断的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值分别为51.0%、76.1%、49.0%、77.6%,准确度为68.4%; PET/CT显像的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值分别为83.7%、89.0%、77.4%和92.4%,准确度为87.3%.结论 PET/CT显示为阳性的淋巴结,有必要行纵隔镜检查,阴性者则可能不需行此项检查.

    作者:李向东;尹吉林;柳伟坤;欧阳习;周崝;乔贵宾;张积仁 刊期: 2010年第03期

  • 食源致病菌96微孔板DNA诊断芯片的研制及在一起食物中毒突发事件中的应用

    目的 研制能同时检测9种常见食源致病菌的96微孔板DNA诊断芯片.方法 针对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7(Stx1和Stx2)、志贺氏菌、产单核细胞李斯特菌、蜡样芽胞杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌等9种常见的食源性致病菌,首先选择合适的保守基因,设计种特异性的PCR引物(5'端标记生物素)和检测探针,通过参数优化建立一管多重PCR扩增体系;然后按5×5的阵列格式将探针点制到96微孔板的微孔内,通过条件优化建立稳定的PCR产物与固化探针的微孔杂交体系;采用链霉抗生物素蛋白碱性磷酸酶和化学显色底物NBT/BCIP来检测特异性的PCR杂交产物.结果 20株标准菌株验证已建立的食源致病菌微孔板DNA诊断芯片,获得比较特异和稳定的实验结果.在一起食物中毒事件中,该芯片在采样后12 h内检出金黄色葡萄球菌,与传统的细菌分离培养和生化鉴定的结果相符.结论 本研究建立的新型食源致病菌96微孔板DNA诊断芯片具有快速、准确、自动化和高通量等特点,为快速应对食物中毒等突发公共卫生事件提供了非常有价值的检测技术.

    作者:莫秋华;李强;林继灿;谭华;涂承宁;叶立青;刘志明;杜坚;孙虹;李书香;王献煌;杨泽 刊期: 2010年第03期

  • pDsRed2-Nl-SDF-1α真核表达载体的构建及在小鼠骨髓间充质干细胞中的表达

    目的 构建pDsRed2-Nl-SDF-lα真核表达载体并转染骨髓间充质干细胞(MSCs),观察其在MSCs内的表达.方法 设计并合成SDF-1α基因引物,用RT-PCR法从小鼠平滑肌细胞中扩增出带有Xhol与EcoRI酶切位点的SDF-1α基因片段,将SDF-1α基因片段克隆到真核表达载体pDsRed2-N1上,酶切和测序鉴定.培养小鼠MSCs并Vimentin蛋白免疫荧光鉴定.通过脂质体将pDsRed2-N1-SDF-1α转染入小鼠MSCs.免疫荧光检测转染后的MSCs表达SDF-1α蛋白的情况.结果 扩增出的基因片断大小与基因文库中已知的SDF-1α序列大小完全相符,酶切也得到目的 基因片断,测序结果 显示与已知的SDF-1α序列相同,成功构建pDsRed2-Nl-SDF-1α真核表达载体.培养的细胞经Vimentin蛋白免疫荧光检测为阳性,pDsRed2-N1-SDF-1α表达载体转染到MSCs,24 h后细胞免疫荧光检测可见SDF-1α融合蛋白表达.结论 pDsRed2-N1-SDF-1α真核表达载体能够在小鼠MSCs中表达SDF-1α蛋白.

    作者:李明;张世忠;邹志浩;郭燕舞;卢凤飞;姜晓丹;寇盛斌;卢国辉;李振勇 刊期: 2010年第03期

  • ER、VIM、CEA和p16四联检测在宫颈原发腺癌和子宫内膜癌诊断和鉴别中的应用

    目的 探讨ER、VIM、CEA和p16四联检测在官颈原发腺癌和子宫内膜腺癌诊断和鉴别诊断中的应用价值.方法 采用免疫组化EnVison法染色,观察ER、VIM、CEA和p16蛋白在31例官颈原发腺癌和30例子宫内膜腺癌组织中的表达情况,比较四联检测和三联检测(ER、VIM和CEA)诊断官颈原发腺癌和子宫内膜腺癌的特异性、敏感性、阳性预告值、阴性预告值和准确度.结果 ER、VIM、CEA和p16在官颈原发腺癌中的阳性表达率分别为35.5%、19.4%、77.4%和67.7%.在子宫内膜腺癌中则分别为70%、73.3%、40%和13.3%.差异均有统计学意义.四联检测对于诊断官颈原发腺癌的特异性、敏感性、阳性预告值和准确度要高于三联检测-分别为96.3%(90.2%),65.1%(57.6%),94.9%(89.4%)和85.8%(80.6%),对于诊断子宫内膜腺癌的阴性预告值和准确度要高于三联检测-分别为58.7%(51.9%)和75.4%(68.6%),其他指标则基本相当.结论 在传统三联检测中加入p16对于提高官颈原发腺癌和子宫内膜腺癌的诊断和鉴别诊断准确有重要临床意义,尽管对于诊断敏感性的提高不够显著.

    作者:胡维维;陶金华;李广民;许欣;杨秀媚 刊期: 2010年第03期

  • 广州市腹泻病人香港海鸥形菌和产肠毒素性大肠杆菌感染情况调查及耐药性检测

    目的 初步了解广州市腹泻病人中香港海鸥型菌(LH)和产肠毒索性大肠杆菌(ETEC)感染情况和分离株的耐药情况.方法 2008年9月~2009年10月于广州某医院采集了646例门急诊腹泻患者的新鲜粪便标本,用EC肉汤进行增菌,并分别采用麦康凯平板及头孢哌酮麦康凯平板进行ETEC和LH的分离培养;用生物梅里埃API20NE和API20E进行生化鉴定;用PCR方法 进行基因鉴定:K-B纸片扩散法作耐药性检测.结果 646例标本中未检出LH,检出38例ETEC.检出率6%.药敏结果 显示ETEC对头孢类抗生素的敏感性较高,而对青霉素类,四环索类及磺胺类抗生素耐药率较高.结论 广州市LH的人群感染率可能较低;ETEC引起的腹泻较10年前有降低倾向,仍需进一步做多中心调查.食用水产品可能是ETEC感染的主要危险因素之一;治疗ETEC类腹泻建议首选头孢类抗生素.

    作者:贾宇静;贺小峰;张欧;朱江峰;胡静;俞守义 刊期: 2010年第03期

  • 64扫螺旋CT冠状动脉成像与冠状动脉造影诊断动脉粥样硬化的应用比较

    目的 评价64排螺旋CT冠状动脉成像技术的准确性及与冠状动脉造影检查结果 的符合率.方法 对比分析64排螺旋CT冠状动脉成像与冠状动脉造影检查的65例患者结果 .结果 65例患者455个冠状动脉节段,64排螺旋CT灵敏度、特异度及准确度分别达54.6%、95.1%、85.5%,分近、中远段比较,64排螺旋CT对于冠状动脉近段符合率高于远段.结论 64排螺旋CT诊断冠状动脉粥样硬化的敏感性及特异性较高,具有良好的临床应用前景,但也有一定的局限性.

    作者:关则劲;谭世奇;周永生;黄向明 刊期: 2010年第03期

  • CgA在人乳腺组织中的表达及意义

    目的 通过检测嗜铬蛋白A(CgA)在人乳腺组织中的表达探讨乳腺神经内分泌癌发病机制.方法 免疫组化方法 检测CgA在89例人乳腺组织中的表达情况.结果 CgA在乳腺正常和增生组织中均没有表达,在乳腺癌组织中有表达,发生率16.7%.其表达在癌组织与非癌组织中存在显著差异,在不同病理分级乳腺癌的表达无差异.结论 乳腺神经内分泌癌发生原因可能是干细胞受微环境因素影响在细胞分化不成熟的同时出现其他方向分化或转分化;可考虑将CgA作为常规检测项目筛查此类型乳腺癌的.

    作者:陈颖欣;李连宏;孙杰;王波;王丽霞 刊期: 2010年第03期

  • 人视网膜母细胞瘤蛋白真核表达载体的构建及其在前列腺癌细胞中的表达与定位

    目的 构建人视网膜母细胞瘤(retinoblastoma 1,RB-1)基因真核表达载体,并在前列腺癌细胞株PC-3中表达,为进一步研究其在前列腺癌发病中的作用和机制打下基础.方法 采用PCR方法 扩增RB-1基因编码区的全长序列,并加上FLAG标签,利用分子克隆技术将其重组于CMV载体中.利用酶切、序列分析鉴定克隆正确性.转染PC-3细胞,用Western Blot检测其表达,用免疫荧光检测其在细胞中的定位.结果 克隆的RB-1真核表达载体完全正确,Western Blot检测到RB-1有表达,免疫荧光检测其主要定位于细胞核内.结论 成功地构建了RB-1真核表达载体,其能够在PC-3中高效表达,并主要定位于细胞核内.

    作者:陆斌;宋先璐;宋方丽;赵善超;姜勇 刊期: 2010年第03期

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