学术投稿

靶向hVEGF165基因shRNA质粒表达载体的构建及筛选

王卫东;蒋立新;徐江平;陆兵勋

关键词:RNA干扰, 质粒表达载体, 短发卡样RNA, hVEGF165基因
摘要:目的 构建编码hVEGF165 mRNA的shRNA质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果明显的shRNA质粒表达载体.方法 以hVEGF165 mRNA编码区中第5和第7外显子序列作为RNA干扰靶点,分别构建3个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体并通过PCR进行鉴定.经鉴定后分别转染稳定表达hVEGF165基因的BHK细胞,实时荧光定量PCR和Western blotting分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果.结果 构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出预期条带,构建成功.靶向hVEGF165基因的shRNA对所转染稳定表达hVEGF165基因的BHK细胞中hVEGF165基因mRNA和蛋白质表达均有抑制作用,其中shRNA2为明显.结论 成功构建了靶向hVEGF165基因的shRNA质粒表达载体,其中抑制效果为明显的shRNA质粒表达载体为pDC316-EGFP-U6-shRNA2质粒.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 人类结肠癌肝转移荷瘤裸鼠模型的建立及其MR成像的初步观察

    目的 建立适用于影像研究的人类结肠癌肝转移瘤裸鼠模型,观察常规MRI表现及扩散加权成像(DWI)图像质量.方法 将对数生长期的人类结肠癌SW480制成细胞悬液(1×107/ml),取0.5 ml注射至2只裸鼠胁部皮下制作种瘤鼠.将种瘤鼠麻醉,切除肿瘤制成大小约1 mm3组织块,将小肿瘤块种植于36只(雌雄各半)麻醉状态下的裸鼠肝脏制成结肠癌肝转移瘤荷瘤裸鼠模型.给予荷瘤鼠行MR T1WI、T2WI、DWI扫描.结果 2~6周后,裸鼠肝脏肿瘤长至0.7~2cm,2只伴有全肝播撒,36只裸鼠移植性人类结肠癌肝转移瘤模型成瘤率100%(36/36).T1WI、T2WI图像均能清晰显示肝脏及肿瘤,肿瘤T1WI为等信号,T2WI为高信号.与常规T2WI图像比较,DWI图像明显变形4只,表面变形不影响肿瘤观察14只,表面无变形18只.结论 本研究所建立的人类结肠癌肝转移荷瘤裸鼠模型成瘤率高,移植瘤生长良好,便于MR的常规成像与DWI观察,MRI图像可反映移植瘤的病理改变,是一种适用于分子影像学研究的动物模型.

    作者:谢琦;梁碧玲;江新青;陈明旺;张静;杨绮华 刊期: 2008年第01期

  • 偶发性肾癌临床分析

    目的 提高对偶发性肾癌的认识,达到早期诊治并了解影响预后的因素.方法 对83例已行根治性肾切除术的偶发性肾癌进行回顾性分析,并与同期住院的其他肾癌进行比较.结果 偶发肾癌的发生率为30.7%,两组在性别、年龄上无统计学意义;B超检查是诊断偶发肾癌的早手段,CT是主要的手段;偶发性肾癌分期明显低于其他肾癌(P<0.01)、体积(平均肿瘤直径3.9 cm)明显小于其他肾癌(P<0.01)、5年生存率(83.8%)明显高于其他肾癌;多变量分析显示TNM分期和肿瘤细胞的组织学分化是判断预后的指标.结论 偶发肾癌的发现率并不低,B超和CT是发现偶发性肾癌的主要手段.TNM分期低、细胞高分化、早期发现和尽早根治性肾切除术是偶发性肾癌较好的预后因素.

    作者:赵俊峰;郑少斌;张香梅;吴芃;药晨;杨旭凯;赵国志;姜耀东;赵善超 刊期: 2008年第01期

  • 99mTc-tetrofosmin显像与超声检查在乳腺癌鉴别诊断中的价值比较

    目的 探讨99mTc-tetrofosmin(99mTc-TF)平面显像、断层显像诊断乳腺癌的临床价值,并与超声检查做比较.方法 50例女性受检者均行99mTc-TF平面显像、断层显像及超声检查.以病理结果为金标准,探讨并比较99mTc-TF平面显像、断层显像及超声检查在乳腺癌良恶性鉴别诊断中的价值.结果 99mTc-TF平面、断层显像和超声检查诊断乳腺癌的灵敏度分别为74.2%、93.5%、87.1%,特异性为66.7%、73.3%、80%.结论 99mTc-TF显像尤其是断层显像是一种新的有效诊断乳腺癌的方法,可与超声检查相媲美.

    作者:陈青;安秀艳;梁宏;丛淑珍;岳殿超;吴克宁 刊期: 2008年第01期

  • 下颌骨撞击试验与有限元分析

    目的 利用MTS-858生物材料试验机进行下颌骨撞击试验和三维有限元分析方法揭示下颌骨骨折生物力学机制.方法 根据Hanau合架原理,3例标本分别制备成下颌骨撞击模型,MTS-858生物材料试验机进行下颌骨颏部水平方向撞击试验.人体下颌骨标本利用激光三维扫描系统获得下颌骨模型,有限元软件ANSYS7.0分析.结果 3例标本均在颏部骨折,下颌骨颏部撞击力峰值为(2151.10±125.18)N;响应时间为(17.3±2.3)ms.ANSYS动态显示下颌骨颏部受到撞击后下颌骨内部的应力变化,颏部撞击点应力大,应力变化曲线显示在颏部距上缘1.92 cm处出现峰值,大应力为3201.35 kPa.结论 下颌骨撞击试验和三维有限元方法结合量化了颏部受力下颌骨骨折的有关参数,为揭示任意合位下颌骨撞击下颌骨骨折的生物力学机制奠定基础.

    作者:刘阳;李鉴轶;赵卫东;姜楠;张美超;钟世镇 刊期: 2008年第01期

  • 共聚物微泡造影剂的制备与体外二次谐波特性研究

    目的 用PLLA-PEG-PLLA共聚物为外壳材料制备微泡造影剂,建立体外声学性质测定装置和方法.方法 用开环聚合方法合成三嵌段共聚物;用双乳化法制备空心造影剂微泡;使用光学显微镜和扫描电镜观察形貌;测定微泡的粒径分布;体外测试微泡的二次谐波特性.结果 获得一系列在生理盐水中分散性很好的空心微泡,在低机械指数下呈现很好的二次谐波增强信号增强.结论 以共聚物PLLA-PEG-PLLA为外壳材料,采用双乳化法得到的空心微泡可以用作为超声造影剂.

    作者:靳巧锋;钟跃;罗祥林;罗燕;彭玉兰 刊期: 2008年第01期

  • 马尔尼菲青霉对巨噬细胞模式识别受体TLR-2、TLR-4、Dectin-1的表达及TNF-α分泌的影响

    目的 研究马尔尼菲青霉对巨噬细胞模式识别受体TLR-2、TLR-4、Dectin-1的表达及促炎因子TNF-α分泌的影响.方法 马尔尼菲青霉酵母相菌液与小鼠腹腔巨噬细胞共培养24 h,采用流式细胞技术检测巨噬细胞TLR-2、TLR-4及Dectin-1的平均荧光强度;共聚焦显微镜观察荧光染色的受体;ELISA法测定培养液上清中TNF-α的浓度;Real time PCR检测不同时间段TNF-α的mRNA表达.结果 马尔尼菲青霉可使巨噬细胞TLR-2、TLR-4、Dectin-1的平均荧光强度均增高,并激活巨噬细胞产生TNF-α.结论 马尔尼菲青霉上调了巨噬细胞模式识别受体TLR-2、TLR-4及Dectin-1的表达,巨噬细胞的激活与TLR-2、TLR-4及Dectin-1的表达上调相关.

    作者:赵文杰;席丽艳;马黎;张军民;李希清;鲁长明;李飞;曾翰翔 刊期: 2008年第01期

  • 肉桂油固体分散体的制备及体外释放

    目的 以硬脂酸、聚乙二醇6000和单硬脂酸甘油酯为辅料,制备肉桂油缓释胶囊.方法 应用熔融法制备固体分散体后,以溶出度的测定为主要评价指标,采用正交设计对工艺及处方优化,并用红外光谱法考察药物与载体是否具有相互作用.结果 所得优化处方体外释放符合Higuchi模型,体外可持续释药12 h,红外光谱分析表明药物与辅料发生了相互作用,形成了固体分散体.结论 通过以上处方和工艺制得的固体分散体胶囊具有明显缓释作用,工艺简单,重现性好.

    作者:姚琳;邓康颖;罗佳波 刊期: 2008年第01期

  • 芬太尼透皮贴剂在预防肝癌动脉栓塞术后疼痛中的作用

    目的 探讨采用芬太尼透皮贴剂在预防肝癌经导管肝动脉化疗栓塞术(TACE)后严重腹痛的作用.方法 55例中晚期肝癌患者,男52例,女3例,平均年龄53.6(28~72)岁.分为两组行超选择性TACE,其中A组(n=25)术后给予用芬太尼透皮贴剂5 mg贴于锁骨下皮肤,每3 d 1贴.组B(30例)患者术后常规肌注盐酸曲马注射液0.1 g,2次/d,疼痛加重时,加用盐酸哌替定注射液10 mg肌注.比较两组患者疼痛程度,将疼痛程度分为:0级为病程中无疼痛,1级为轻度疼痛,2级为中度持续性疼痛,3级为强烈持续剧痛.结果 A组患者中无、轻、中、重度疼痛例数分别为15、7、2、1例,B组分别为6、12、8、4例,两组有显著差异(χ2=10.203,P=0.017).两组均未出现严重副反应.结论 芬太尼透皮贴剂可以预防肝癌TACE后严重腹痛,疗效明显优于常规止痛治疗,副反应小,值得提倡.

    作者:卢伟;何晓峰;陈勇;梅雀林;赵剑波;李彦豪 刊期: 2008年第01期

  • 不同分辨率影像诊断显示器对孤立性肺结节识读影响的ROC评价

    目的 通过对胸部DR影像上孤立性肺结节检出准确率的比较来评价PACS影像诊断工作站所应用的不同分辨率的医用显示器的诊断效能.方法 选取经CT证实的具有非钙化孤立性肺结节(DR胸片上直径<30 mm=100例,多发肺结节(直径<30 mm,两肺数目不超过3个并散在分布24例和疑似病例15例.2位高年资医生(工作经验≥10年)和3位低年资医生(工作经验≤4年)在PACS系统的2种显示器(Barco MGD521 MKII(2560×2048,75Hz)21英寸医用单色RCT和EIZO RadiForce G20(1200×1600,60Hz)21英寸医用单色LCD)上分别使用或不使用放大后处理功能集中进行4次独立阅片,分别对胸片上是否有肺结节及结节个数进行判断,并记录结节的具体位置,评价的标准采用5分法:肯定有、可能有、不确定、可能没有、肯定没有;每次阅片时间间隔为1个月,每位医师每次均可根据需要使用窗宽、窗位调节功能,阅片时间不限.数据结果采用SPSS 13.0软件受试者工作特征(ROC)曲线法进行统计分析,计算和比较采用每种显示系统的诊断精确度(用曲线下面积-Az值来表示).结果 ①采用放大后处理功能后,各位医师的诊断准确率都能得到一定程度的改善,尤其在低年资医师更明显,在两种显示器上的Az值增加幅度都明显高于高年资医师(P<0.05);而高年资医师采用2 k显示器阅片时,在使用放大后处理功能前后其Az值基本相同(Az=0.765~0.769,平均P=0.314>0.05).在各种情况下阅片,高年资医师的诊断准确率都明显高于低年资医师(P<0.05).②2位高年资医师在1 k显示器加用放大功能时所获得Az值(平均Az=0.742)都达不到2 k显示器不加用放大功能时的Az值(平均Az=0.771),之间存在小的但具有统计学显著性意义的差别(P=0.042<0.05);而3位低年资医师使用1 k显示器加用放大功能,其平均Az值(Az=0.674)高于2 k显示器不加用放大功能时的平均Az值(Az=0.651),之间亦存在小的但具有统计学显著性意义的差别(P=0.044<0.05).对所有医师而言,使用1 k显示器加用放大功能(Az=0.702)与2 k显示器不加用放大功能(Az=0.703)的诊断效能无明显差别(P=0.475>0.05).结论 ①使用放大功能可以提高影像分辨率,进而提高诊断效能.相比于高年资医师而言,影像分辨率的增加更能改善低年资医师的诊断水平,并在一定程度上能减低诊断医师个体差别所造成的影响.②出于成本效益的考虑,科室可以安排低年资医师使用1 k医用显示器完成初步诊断,但是要求常规使用放大后处理功能,高年资医师应使用2 k医用显示器以保证终诊断结果的可靠性;低年资医师在处理急诊报告时,仍然应当采用1k医用显示器.

    作者:程勇;蔡裕兴;陈卫国;陈平雁;张雪林;吴元魁;王刚;刘国清 刊期: 2008年第01期

  • RNAi技术抑制乳腺癌细胞表皮生长因子受体表达的在体实验研究

    目的 探讨采用体外化学合成的小干扰RNA(siRNA)结合阳离子脂质体是否能有效在体转染乳腺癌细胞,以期为RNAi的在体实验研究提供实验数据和理论依据.方法 (1)建立裸鼠肿瘤动物模型,计算成瘤率.(2)体外转染乳腺癌细胞,常规动物接种,测量肿瘤体积和动物重量,计算肿瘤抑制率.(3)采用免疫组化和Western blotting技术测定肿瘤组织的表皮生长因子受体蛋白水平,采用Real-time PCR检测表皮生长因子受体基因水平,采用ELISA检测动物血清及肿瘤抽提蛋白中EGF含量.结果 MDA-MB-231、ZR-75细胞成瘤率依次为30.00%、88.89%,MDA-MB-231细胞的成瘤能力明显弱于ZR-75细胞.ELISA检测结果证实dsRNA-表皮生长因子受体可将血清及肿瘤组织抽提蛋白中的EGF含量分别降低16.77%、12.59%.Real-time PCR结果表明dsRNA-表皮生长因子受体可将表皮生长因子受体基因表达下调21.05%.结论 (1)采用体外化学合成的siRNA结合阳离子脂质体可有效在体转染乳腺癌细胞.(2)在体实验中RNAi效应持续的时间明显长于体外实验.(3)针对表皮生长因子受体基因序列设计的siRNA可作为极具开发前途的抗肿瘤新药,其在体实验中触发RNAi可能的作用机制尚需进一步深入探讨.

    作者:吴伟东;方驰华;杨正心;包佳巾 刊期: 2008年第01期

  • 高温复合脂多糖应激大鼠血清尿素和肌酐的变化特点

    目的 探讨高温与脂多糖(LPS)复合应激大鼠血清尿素、肌酐含量等指标的动态变化特点.方法 雄性SPF级Wistar大鼠随机分为常温+生理盐水组(C组)、高温+生理盐水组(H组)、常温+LPS组(L组)、高温+LPS组(HL组).置动物于模拟气候舱,HL组、H组暴露环境干球温度为(35.0±0.5)℃,L组、C组Tdb为(26±0.5)℃;HL组、L组动物经尾静脉注射LPS 8 mg/kg,H组、C组动物经尾静脉注射0.9% NaCl 8 ml/kg.检测动物应激0、40、80、120 min时血清尿素、肌酐等物质含量的变化.结果 肌酐在不同温度、时间、药物水平间不存在显著性差异(P>0.05);不同温度、时间、药物水平间动物血清尿素存在显著性差异(P<0.01),时间与药物、温度与药物、时间与温度交互效应显著(P<0.01).应激40 min起各组间尿素差异显著,HL组尿素显著高于其余3组(P<0.01).尿素水平与TNF-α含量存在正相关关系(r=0.730,P=0.000).结论 高温与LPS复合应激可促发、扩大全身炎症反应综合征,造成肾损伤.

    作者:刘宏华;赵廷宝;李志樑 刊期: 2008年第01期

  • 保肝宁对肝纤维化大鼠瘦素及瘦素受体的影响

    目的 探讨保肝宁抗肝纤维化的作用机制.方法 采用复合因素建立肝纤维化大鼠模型,采用同位素放射免疫分析法检测血清瘦素水平.用免疫组化方法观察保肝宁对肝纤维化大鼠肝组织瘦素、瘦素受体表达的影响.结果 与正常组比较,模型组及各药物组血清瘦素水平均明显升高(P<0.01).与模型组比较,保肝宁药物组血清瘦素水平明显下降,差异有显著性意义(P<0.01),保肝宁明显抑制模型大鼠肝组织瘦素、瘦素受体的表达.与模型组比较,差异有显著性意义(P<0.01).结论 保肝宁可有效防治大鼠肝纤维化,其作用机制可能与通过降低血清瘦素水平,抑制模型大鼠肝组织瘦素、瘦素受体的表达密切相关.

    作者:贺松其;文彬;侯丽颖;吕志平 刊期: 2008年第01期

  • 链脲佐菌素糖尿病模型动物血糖及体征动态变化的研究

    目的 探讨链脲佐菌素(streptozotocin)糖尿病模型动物血糖和体征动态变化的特点.方法 链脲佐菌素1次或多次腹腔注射,分别建立大鼠和小鼠糖尿病模型;检测血糖变化,以进食量(g)/体质量(g),饮水量(ml)/体质量(g)计算进食量系数和饮水量系数.结果 雄性大鼠链脲佐菌素60 mg/kg糖尿病成模率为65.0%,血糖在注射后15 d达到高峰,15~25 d保持在较高水平,25d后出现明显的下降.小鼠链脲佐菌素200 mg/kg分5次建立糖尿病成模率为90.0%,血糖的动态变化与大鼠类似,但血糖下降不明显.在这两个糖尿病模型中,动物的饮水量系数变化与血糖水平变化的相关性高,相关系数r>0.97.结论 链脲佐菌素糖尿病模型动物的血糖水平在造模开始后的15~25 d维持在较高水平,可作为观察降血糖药物疗效的适宜时段.饮水量系数是反映血糖的水平变化的适宜指标.

    作者:余传林;朱正光;雷林生;陈娜娜;吴曙光 刊期: 2008年第01期

  • 父方否决细胞对小鼠半相合干细胞移植模型移植物抗宿主病的预防作用

    目的 探讨父方否决细胞对小鼠半相合干细胞移植模型移植物抗宿主病(GVHD)是否起预防作用.方法 以B6CF1(H-2 b/d)作为半相合干细胞移植的受鼠,给予9.0 Gy全身照射后4 h,单纯照射组经尾静脉注射0.3 ml D-Hank's 液,不进行细胞移植;对照组经尾静脉注射C57BL/6小鼠混合细胞悬液(4.5×106骨髓细胞+3.0×107脾细胞),但不进行其他治疗处理;实验组于移植4 d后经尾静脉注射BALB/c小鼠脾细胞悬液(数量分别为5.0×106、1.0×107),然后观察其造血恢复、植入及移植物抗宿主病(GVHD)的情况.结果 由于没有给予GVHD防治措施,对照组受鼠GVHD的发生率和死亡率分别为10/10和10/10;而1/6量否决细胞组小鼠GVHD的发生率为5/10,30 d生存率增加至5/10(P<0.01),5只因GVHD死亡的受鼠中位生存期为20 d,较对照组(中位生存期14 d)有显著性差异(P<0.05);1/3量否决细胞组小鼠GVHD的发生率为2/10,30 d生存率增加至8/10,中位生存期延长至30 d以上(P<0.05).结论 半相合干细胞移植后输注父方否决细胞,可以诱导特异性免疫耐受,显著降低半相合干细胞移植GVHD的发生率.

    作者:王三斌;郭坤元;胡灯明;尹波 刊期: 2008年第01期

  • PET显像剂18F-NaF骨骼分布的实验研究

    目的 探讨18F-NaF在骨质疏松症实验研究中的应用价值.方法 用过量地塞米松磷酸钠注射法制作大鼠骨质疏松模型,对动物模型注射18F-NaF,进行生物分布研究,测定大鼠各器官对18F-NaF的摄取值.对8例健康志愿者进行胸部动态及全身PET显像,测定骨骼对18F-NaF的摄取.结果 骨质疏松大鼠骨骼对18F-NaF的摄取值低于对照组,其中实验组股骨颈、腰椎、第七肋骨及胫骨对18F-NaF的摄取明显低于对照组(P<0.05);健康志愿者胸部动态PET显像发现,在注射后.20 s,脊柱骨、肱骨、肋骨有明显的18F-NaF摄取,随着时间的延长,骨骼对18F-NaF的摄取逐渐增加,60 min摄取达峰值.60 min行全身PET显像发现,全身骨骼明显摄取18F-NaF,骨骼/肌肉比值高,平均为8.12.结论 18F-NaF是理想的骨血流和代谢显像剂,18F-NaF在正常骨和实验性骨质疏松症骨骼中的分布有明显差异,提示18F-NaF在骨质疏松症的研究中具有潜在应用价值.

    作者:王鹏;李钦宗;王明芳 刊期: 2008年第01期

  • RNAi对人类皮肤成纤维细胞COL1A1及COL3A1表达的影响

    目的 研究RNA干扰(RNAi)技术对人类皮肤成纤维细胞(HSF)COL1A1及COL3A1表达的影响.Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原是构成皮肤结缔组织的主要成份,其异常是造成真皮结缔组织以及纤维增生性疾病病理变化的主要因素.RNAi技术可有效抑制特定基因的表达.方法 利用小干扰RNA(siRNA)表达框(SEC)快速筛选有效干扰序列,再将有效SEC的siRNA片段连接入表达载体并转染HSFs,获得稳定抑制效果.结果 经过筛选的有效SEC可特异性抑制HSFs中COL1A1和COL3A1的表达(分别至野生株的5.00%和6.48%),载体介导的有效干扰序列可稳定抑制HSFs中COL1A1和COL3A1的表达,抑制效果达30 d(分别至阴性对照的25.21%和22.12%).结论 SEC和载体介导的RNAi均可有效并且特异性抑制COL1A1和COL3A1在HSFs中的表达.

    作者:王琼;彭振辉;王万卷;耿松梅;牛新武;王梅;刘平 刊期: 2008年第01期

  • 左旋精氨酸对犬深低温停循环脑组织代谢的影响

    目的 利用犬深低温停循环(DHCA)动物模型,观察左旋精氨酸(L-arg)预处理对深低温停循环中犬脑组织代谢的影响.方法 健康成年杂种犬15只,随机分为3组(n=5).对照组:生理盐水假处理;L-arg预处理组:停循环前60 min给予L-arg 100 mg/kg预处理;联合处理组:停循环前60 min给予L-arg 100 mg/kg、7-Ni 25 mg/kg联合处理.按临床方法建立体外循环转流降温至鼻咽部温18 ℃停循环,90 min后恢复循环复温.分别于停循环前30 min、停循环时(0 min)、停循环45 min、停循环90 min、复温再灌注60 min抽取颈静脉、颈动脉血测乳酸含量,取脑顶叶皮质测ATP酶活性.实验犬处死后立刻取脑测干湿重.结果 L-arg预处理和联合处理脑乳酸净生成及ATP消耗均小于对照组(P<0.05),二处理组间差异无统计学意义(P>0.05).联合处理组DHCA后脑组织含水量低,L-arg处理次之,对照组高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 DHCA前给予L-arg预处理能降低脑组织代谢水平,有助于脑保护.

    作者:高勇;邹小明;王武军;刘亚湘;毛向辉 刊期: 2008年第01期

  • 多个药物支架植入安全性和可行性的临床研究

    目的 评估多药物支架植入术的近期疗效及安全性.方法 对我院从2004年6月到2005年12月共34例多个药物支架(≥3枚)植入术进行回顾性分析,对照组为单个支架植入组(n=64)和两支架植入组(n=53),随访术后6月冠状动脉内急性及亚急性血栓形成的发生率、再狭窄和心血管事件的发生率.结果 151例患者PCI治疗均成功.介入治疗1个月随访结果显示,多支架组、两支架组及单支架组均没有发生冠状动脉内血栓形成(P>0.05),介入治疗6个月随访结果显示,再狭窄及心血管事件发生率均无统计学差异(P>0.05).结论 多个药物支架植入治疗,并不增加近期血栓形成和心血管事件的发生率.

    作者:傅强;李志樑;吴宏超;严全能;傅晓华;刘映峰 刊期: 2008年第01期

  • 靶向hVEGF165基因shRNA质粒表达载体的构建及筛选

    目的 构建编码hVEGF165 mRNA的shRNA质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果明显的shRNA质粒表达载体.方法 以hVEGF165 mRNA编码区中第5和第7外显子序列作为RNA干扰靶点,分别构建3个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体并通过PCR进行鉴定.经鉴定后分别转染稳定表达hVEGF165基因的BHK细胞,实时荧光定量PCR和Western blotting分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果.结果 构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出预期条带,构建成功.靶向hVEGF165基因的shRNA对所转染稳定表达hVEGF165基因的BHK细胞中hVEGF165基因mRNA和蛋白质表达均有抑制作用,其中shRNA2为明显.结论 成功构建了靶向hVEGF165基因的shRNA质粒表达载体,其中抑制效果为明显的shRNA质粒表达载体为pDC316-EGFP-U6-shRNA2质粒.

    作者:王卫东;蒋立新;徐江平;陆兵勋 刊期: 2008年第01期

  • 超声L/S比值诊断头颈部恶性肿瘤颈部淋巴结转移的价值

    目的 探讨超声L/S比值在诊断头颈部恶性肿瘤颈部淋巴结转移中的作用.方法 对94例患者97侧拟行颈淋巴结清扫的颈部,术前分别应用触诊及超声L/S比值评估颈部淋巴结有无发生肿瘤转移,并与术后颈清标本的病理检查结果对照.结果 触诊及超声L/S比值诊断的敏感性、特异性和准确性分别是56.7%和78.4%(P<0.05)、52.1%和65.2%(P>0.05)、55.6%和75.3%(P<0.05).结论 超声L/S比值在诊断头颈部恶性肿瘤颈部淋巴结转移方面确有一定的价值.

    作者:徐定远;刘世喜;沈强 刊期: 2008年第01期

南方医科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学