学术投稿

多表位HBV重组DNA疫苗的构建与免疫效果评价

郭妍;王菊芳;罗小春;苏瑾;马骊;张阳德

关键词:PVAX-HS, 疫苗, 细胞免疫
摘要:目的 探讨多表位乙型肝炎DNA疫苗诱导特异性细胞免疫应答及其治疗慢性乙型肝炎的潜能.方法 筛选一组HBV的表位,并进行优化组合,辅以一定的旁侧序列,并合成目的基因片段HS.将它插入可人用的真核表达载体pVAX1中,构建出重组质粒PVAX-HS.通过重组质粒免疫小鼠,观察免疫动物体内CTL.结果 酶切结果显示成功构建了PVAX-HSDNA疫苗,ELISPOT测定证实其可以在小鼠体内诱导产生特异性T细胞,51Cr释放实验证实,所诱导的T细胞中具有很强的CTL活性.结论 PVAX-HS DNA疫苗免疫可诱导特异性细胞免疫应答,具有慢性病毒性乙型肝炎治疗性疫苗的潜能.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 胎膜早破孕妇C反应蛋白测定

    目的 通过动态观察胎膜早破孕妇血清C反应蛋白、白细胞计数的变化,分析其在胎膜早破的观察及治疗中的指导作用.方法 观察无胎膜早破产妇60例,其中妊娠不足37周、37周以上各30例做为对照组,胎膜早破孕妇35例,其中妊娠不足37周13例,37周以上22例,分别在患者破膜后第1、2、3天抽取静脉血,留取血清,在检测C反应蛋白的同时检测外周血白细胞计数.结果 本研究观察到足月胎膜早破孕妇22例,患者破膜3 d内血清白细胞计数、C-反应蛋白水平与对照组相比均无统计学差异(P<0.05).未足月胎膜早破患者破膜第1天血清白细胞计数为(14.55±4.05)×109/L,C-反应蛋白为6.82±3.52,与对照组相比无统计学差异(P<0.05).12例患者破膜第2天血清白细胞计数为(15.02±4.84)×109/L,C-反应蛋白为6.66±2.08,与第1天相比无统计学差异(P<0.05).10例患者破膜第3天血清白细胞计数为(15.31±4.36)×109/L,C反应蛋白为8.31±2.48,与第2天相比有统计学差异(P<0.05).结论 C反应蛋白的快速、准确测定,对预测胎膜早破孕妇有无感染,指导临床用药有很高的临床价值,临床可作用常规测定项目.

    作者:郭智勇;郭新宇;李文玲;于秋江;孙静 刊期: 2006年第12期

  • 新型聚乳酸/骨基质多孔复合支架材料制备及初步研究

    目的 采用CO2超临界法(SC-CO2)制备一种新型的聚乳酸(PLA)/骨基质(BMG)多孔复合型生物活性骨支架材料,并评价其理化性能及细胞相容性,确定材料佳复合比例,为进一步的实验提供实验依据.方法 采用SC-CO2法制备不同比例的PLA/BMG多孔复合型骨植入材料,通过大体观察、孔隙率测定,力学检测、SEM观察评价其理化性能,并结合体外细胞相容性检测选择佳复合比例.结果 采用SC-CO2法制备的PLA/BMG多孔复合支架材料中BMG的比例与材料的孔隙率及细胞相容性成正相关,与力学性能成负相关;含30%BMG的复合材料具有良好的综合性能.结论 采用SC-CO2法制备的PLA/BMG(7/3)多孔复合支架材料具有良好的理化性能及细胞相容性,可作为骨植入材料及骨组织工程支架进一步研究.

    作者:张育敏;李宝兴;李冀;马洪强;赵亚平;原林 刊期: 2006年第12期

  • 袋血辐照对淋巴细胞凋亡及红细胞活性的影响

    目的 研究不同剂量辐照对淋巴细胞凋亡及红细胞活性影响.方法 流式细胞仪检测淋巴细胞的凋亡,检测红细胞膜功能和红细胞免疫功能的变化反映红细胞活性.结果 淋巴细胞的凋亡率具有量效和时效关系,辐照可以有效的导致淋巴细胞的凋亡:在剂量达到35 Gy时红细胞的活性与对照组比较没有显著性差异.结论 适当剂量的辐照可以有效的减少血液中有活性淋巴细胞的数量,同时又对红细胞的活性没有显著的损伤,是有效的预防TA-GVHD的方法之一.

    作者:吴燕飞;余晋林;聂凯声;何其通;罗海玲;段朝晖;朱振宇 刊期: 2006年第12期

  • 刺蒺藜对小鼠毛囊黑素细胞刺激素表达的影响

    目的 观察刺蒺藜水提物对C57BL/6J小鼠毛囊黑素细胞刺激素表达的影响,探讨刺蒺藜在毛囊休眠期黑素细胞活化、增殖及移行至表皮过程中的作用.方法 选择在离体实验中对酪氨酸酶有激活作用、对黑素细胞有增殖作用及在临床应用中对白癜风有治疗作用的中药刺蒺藜,用SPF级C57BL/6J小鼠为实验动物,采用免疫组织化学技术观察高剂量(相当于成人1g/(kg·d)刺蒺藜水提物灌服后小鼠毛囊黑素细胞刺激素水平的变化,并用χ2检验进行统计学分析.结果 黑素细胞刺激素在试验组小鼠毛囊细胞中阳性表达率为75.00%,在对照组小鼠毛囊细胞中阳性表达率为18.75%,两者比较有显著性差异(P<0.01).结论 高剂量刺蒺藜水提物可以提高小鼠毛囊黑素细胞刺激素的表达水平,并可能通过上调毛囊黑素细胞刺激素表达这一途径来活化酪氨酸酶、促进毛囊休眠期黑素细胞的增殖、移行及黑素合成.

    作者:杨柳;路建伟;安靓;姜萱 刊期: 2006年第12期

  • 非体外循环下冠状动脉搭桥手术

    目的 探讨非体外循环下冠状动脉搭桥手术的可行性和安全性.方法 164例病人在无体外循环支持下进行搭桥手术,共搭桥356支,平均2.2支,其中左前降支146支,对角支66支,右冠状动脉91支,钝园支53支.手术均在全身麻醉,正中纵劈胸骨切口,用Medtronic Octopus Ⅱ固定器辅助下进行.结果 本组164例病人中有7人因低血压或严重心律不失常改为体外循环下完成手术,其中2人死亡,死亡率1.2%.术后心排出量由手术前(3.6±0.8)L/min上升到(5.3±1.9)L/min,心脏指数由手术前的(2.0±0.9)L/(min·m2)上升到3.2±1.3 L/(min·m2).本组37人与体外循环下搭桥52人术后心肌酶作了比较,发现不停跳组心肌酶上长升的幅度小、恢复快.结论 非体外循环下冠状动脉搭桥术对某些冠心病 病人的手术是安全可行的,尤其适用于单支或两支病变、心功能差、射血分数低和高龄病人.可降低术后死亡率和并发症的发生,且费用低.

    作者:姬尚义;杨建安;姚滨;陈伟新;王小雷;陈长春;王志伟;谭敏;张玉萍 刊期: 2006年第12期

  • 携带人分泌型内皮抑素基因重组腺病毒的制备和鉴定

    目的 制备包含人分泌型内皮抑素基因的重组腺病毒,为下一步探讨其在血管生成依赖性疾病的治疗研究中的应用提供基础.方法 以T-Endostatin质粒为模板,通过PCR扩增回收hEndostatin,将hEndostatin连接到pShuttle2中,构建pShuttle2-hEndostatin表达质粒,将此表达质粒连接到缺陷型腺病毒载体,构建Ad-hEndo.其线性化后转染HEK293T细胞,纯化后的重组腺病毒Ad-hEndo在HEK293T细胞中大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,并测定其滴度.结果 利用PCR反应进行鉴定,扩增得到的hEndostatin经酶切鉴定,DNA测序证实为重组腺病毒,测定病毒滴度为5.2×109PFU/ml.结论 本实验成功构建了人分泌型内皮抑素重组腺病毒Ad-hEndo,可直接用于血管生成依赖性疾病基因治疗的实验研究.

    作者:袁瑷芹;何援利;杨芳;刘木彪 刊期: 2006年第12期

  • MFAC治疗初发难治性CD33+急性淋巴细胞白血病1例报告

    MFAC方案由抗CD33单抗及FLAC(氟达拉滨、阿糖胞苷、环孢素A)组成,我们应用MFAC成功诱导治疗1例初发难治CD33+急性淋巴细胞白血病(ALL),现报告如下.

    作者:翁建宇;杜欣 刊期: 2006年第12期

  • 鳖甲煎丸对 H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及对增殖细胞核抗原表达的影响

    目的 研究鳖甲煎丸对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及机制探讨.方法 建立H22荷瘤小鼠动物模型,随机分成4组:鳖甲煎丸高剂量组、鳖甲煎丸低剂量组、阴性对照组、环磷酰胺组.连续用药15 d.第15天处死小鼠,计算胸腺指数、脾指数;剥离瘤块称重并计算抑瘤率;用免疫组织化学方法检测各组荷瘤小鼠肿瘤组织的增殖细胞核抗原的表达强度.结果 鳖甲煎丸有较好的抑瘤作用;鳖甲煎丸对H22荷瘤小鼠肿瘤组织的增殖细胞核抗原有显著的抑制作用.结论 鳖甲煎丸抑瘤作用机制之一可能是通过抑制肿瘤组织的增殖细胞核抗原来实现的.

    作者:张绪慧;陈达理;罗荣城 刊期: 2006年第12期

  • 妊娠合并心律失常379例临床分析

    目的 探讨各种心律失常对妊娠及分娩的影响.方法 对1997年1月-2006年5月间分娩的379例妊娠合并心律失常孕产妇的临床资料进行回顾性分析.结果 无器质性病变的心律失常对妊娠一般无不良影响,有病理原因的器质性病变的心律失常对妊娠有严重影响;心律失常产妇足月分娩率90.3%,其中剖宫产率32%,自然分娩率68%.新生儿低于胎龄儿为9.7%,新生儿窒息率4.5%.结论 大多数妊娠合并心律失常能顺利通过妊娠期和分娩期,对有器质性病变的严重心律失常宜采取有效措施,以确保母婴安全.

    作者:熊鹰;周娅 刊期: 2006年第12期

  • 左旋炔诺酮宫内缓释系统治疗子宫腺肌病的临床研究

    目的 探讨左旋-18甲基炔诺酮宫内缓释系统(LNG-IUS)治疗子宫腺肌病的临床疗效及其副反应.方法 对70例子宫腺肌病的患者,宫内放置LNG-IUS治疗,观察月经情况、痛经程度、子宫体积变化及对人体肝功能、血脂等的影响.结果 放置LNG-IUS后,月经量显著减少,第1个月为原来的(35±12)%(P<0.01),12个月后为(7±4)%(P<0.01);治疗3个月后子宫体积平均缩小18.6%(P<0.05);痛经显著缓解或完全消失;贫血迅速改善,对人体肝功能、血脂无明显不良副作用.结论 LNG-IUS治疗子宫腺肌病疗效显著,安全性好.

    作者:何淑明;张阳德 刊期: 2006年第12期

  • 膨体聚四氟乙烯人工心脏瓣膜体外加速疲劳的实验研究

    目的 测试膨体聚四氟乙烯人工心脏瓣膜(ePTFEAHV)的耐久性.方法 以TH-2200型瓣膜体外加速疲劳寿命测试仪对6个ePTFE AHV进行体外加速疲劳实验,总计4亿次.以TH-1200型人工心脏瓣膜体外脉动流试验台测试瓣膜于疲劳实验前后的流体力学参数,并进行对比研究,以测试ePTFEAHV的耐久性.结果 疲劳实验前后ePTFEAHV的平均跨瓣压差、有效开口面积无明显改变,返流量及返流率较疲劳实验前减小,差异有统计学意义.结论 ePTFEAHV具有良好的耐久性.

    作者:李海波;王武军;梁勇;蔡开灿;邹小明;王振康 刊期: 2006年第12期

  • 犬颈总动脉和股静脉输注异丙酚至脑电静息对循环和呼吸的影响

    目的 比较犬颈总动脉和股静脉持续输注异丙酚至脑电静息时循环、呼吸变化及异丙酚的用量.方法 杂种犬8条,通过颈总动脉或股静脉持续输注异丙酚直至麻醉深度指数(CSI)等于零,并维持CSI在0-5之间波动持续60 min停药.记录意识消失、恢复时间及异丙酚用量,观察犬血流动力学和呼吸的变化.结果 达脑电静息所用时间和停药后苏醒时间,颈总动脉给药明显快于静脉给药(P<0.05).颈总动脉和股静脉给药在意识消失时、CSI=0-5持续10 s、30 min和60min时异丙酚的用量分别为(76.1±24.3)mg和(146.9±48.3)mg(P=0.000)、(221.3±47.4)mg和(3533±89.2)mg(P=0.000)、(474.9±122.5)mg和(845.8±206.8)mg(P=0.000)以及(721.3±204.0)mg和(1401.4±410.4)mg(P=0.000).在脑电静息各时点,颈总动脉给药对平均动脉压和呼吸的影响与静脉给药比较统计学差异非常显著,动脉给药血流动力学和呼吸指标变化更平稳.结论 异丙酚颈动脉麻醉至脑电静息比静脉麻醉用药量少,对循环、呼吸影响小.

    作者:盖成林;陈卫民;郑晓春;冉德春;艾长良;孙正清 刊期: 2006年第12期

  • 严重腹腔感染时肠黏膜β-catenin的表达及意义

    目的 探讨严重腹腔感染时大鼠肠黏膜β-连环蛋白(β-cat)表达的变化规律及意义.方法 健康成年Wistar大鼠40只,随机分为空白对照组(仅行单纯剖腹手术)和腹腔感染[采用盲肠结扎加穿孔法(CLP)制作严重腹腔感染模型]术后12、24、48 h组,每组10只,应用免疫组织化学及RT-PCR检测大鼠小肠隐窝严重腹腔感染前后β-cat表达的变化,以及严重腹腔感染后不同时期β-catmRNA水平的改变.结果 正常大鼠肠黏膜隐窝底部细胞中β-cat仅有微弱表达,而感染后肠黏膜隐窝底部细胞中强表达β-cat;RT-PCR结果表明与对照组比较,β-catmRNA在CLP术后12 h明显上升(0.74±0.10vs0.52±0.06,P<0.01),在CLP术后24 h后达到峰值(0.90±0.09vs0.52±0.06,P<0.01),随后逐渐下降,到48 h仍显著高于对照组(0.80±0.09vs0.52±0.06,P<0.01).结论 严重腹腔感染早期可诱导β-cat表达,提示β-cat可能与肠上皮干细胞的增殖分化密切相关.

    作者:刘晋峰;吴承堂 刊期: 2006年第12期

  • 高效液相色谱-电喷雾串联质谱法测定肿节风中异秦皮啶的含量

    目的 建立异秦皮啶的高效液相色谱-电喷雾串联质谱含量测定方法.方法 肿节风药材及清热消炎宁胶囊中异秦皮啶分别用乙酸乙酯和氯仿萃取,以高效液相色谱-电喷雾串联质谱进行分析,多反应监测扫描,母/子离子对为223/162.结果 异秦皮啶保留时间为6.60min,标准曲线在484-9680 ng/ml范围内线性关系良好(r=0.9996),回收率96.7%,RSD 4.49%,低检测限1 ng/m1.结论 该方法快速、准确、选择性好,灵敏度高,可为异秦皮啶的含量测定提供参考.

    作者:罗奇志;戴开金;马安德 刊期: 2006年第12期

  • 青风藤及青藤碱对吗啡依赖小鼠位置偏爱效应和脑内组胺水平的影响

    目的 探讨中药青风藤及其有效成分青藤碱对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱(CPP)及脑内组胺(HA)水平的影响.方法 采用位置偏爱箱法,连续皮下注射吗啡(9 mg/kg·b.w.)6d,引起小鼠产生显著的条件性位置偏爱效应.实验分空白对照组、吗啡模型组(9mg/kg·b.w.)、青风藤醇提液组(10g/kg·b.w.)、青藤碱组(60mg/kg·b.w.)、苯海拉明组(30mg/kg·b.w.)、CP48/80组(5mg/kg·b.w.)和L-组氨酸组(750mg/kg·b.w.),后5个给药组分别在位置偏爱训练的第4天开始给药,连续用药3 d.脑内组胺含量采用荧光分光光度法测定.本实验同时检测青风藤、青藤碱、苯海拉明、CP48/80及L-组氨酸对小鼠的奖赏效应或厌恶效应.结果 吗啡模型组小鼠在伴药箱中停留的时间明显延长,小鼠脑内HA水平显著升高(P<0.01).青风藤或青藤碱连续用药可显著抑制吗啡引起的小鼠位置偏爱的形成,降低脑内的HA含量.青风藤、青藤碱及L-组氮酸对正常小鼠脑内组脑水平有升高作用(P<0.01),但3药本身并不使小鼠产生奖赏或厌恶效应.CP 48/80能使正常及吗啡依赖小鼠脑内组胺含量明显减少(P<0.01),但该药对CPP无明显影响.结论 吗啡诱导的小鼠位置偏爱效应与脑内HA水平升高、中枢组胺能神经系统激活有关.青风藤及青藤碱能消除吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱的形成,对脑内组胺水平的改变具有调节作用.

    作者:莫志贤;安胜利;周吉银 刊期: 2006年第12期

  • 氨甲喋呤联合米非司酮治疗异位妊娠的Meta分析

    目的 评价氨甲喋呤联合米非司酮治疗异位妊娠的有效性和安全性.方法 按照循证医学的要求全面检索中国知识期刊网(1994.1-2005.5)、中国生物医学光盘数据库(1995.1-2005.5)及Pubmed(1995.1-2005.5),收集氨甲喋呤联合米非司酮与单用氨甲喋呤治疗异位妊娠的随机对照试验.结果 检索到符合纳入标准的随机对照试验文章23篇,共1706例病人.Meta分析结果显示,氨甲喋呤联合米非司酮能有效治疗异位妊娠[OR合并=2.84,95%CI(2.18,3.69),P=0.0000].在森林图中,OR合并的95%CI横线落在无效竖线右侧,可认为氨甲喋呤联合米非司酮治疗异位妊娠有效.结论 目前较低质量研究的Meta分析提示,氨甲喋呤联合米非司酮治疗异位妊娠与单用氨甲喋呤比较,疗效的差异有高度显著性;在森林图中,,OR合并的95%CI横线落在无效竖线右侧,可认为氨甲喋呤联合米非司酮治疗异位妊娠有效,安全性可能较高,副作用较小,但还需要严格设计的、大样本的随机双盲对照试验来进一步验证和支持.

    作者:宋华东;陈士岭;何锦霞;裘毓雯 刊期: 2006年第12期

  • 瘢痕疙瘩家系永生淋巴细胞株的建立及其染色体分析

    目的 建立瘢痕疙瘩家系永生淋巴细胞株,并对该细胞株进行染色体核型分析,探讨用这种方法建立瘢痕疙瘩永生细胞库的可行性和可靠性.方法 采用EB病毒转化技术,把瘢痕疙瘩家系外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系(LCL).分别对建株前和建株后10、20、30、35代的细胞株进行染色体核型分析.结果 成功地对瘢痕疙瘩家系27个个体建立了永生细胞株,建株后10代、20代的细胞株染色体未发现明显异常;而培养30代、35代的细胞株染色体发生数目和结构的异常.结论 瘢痕疙瘩家系永生淋巴细胞株可以为以后的研究提供随时可取的实验材料,在用做遗传学分析时宜在转化早期进行.

    作者:宋玫;高建华;严欣;刘晓军;陈阳 刊期: 2006年第12期

  • Sonic hedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Glil蛋白在胃癌组织中的表达及其意义

    目的 探讨Sonic hedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义.方法 收集85例胃癌组织及25例正常胃粘膜组织构建成组织芯片,应用免疫组化S-P法检测胃癌组织中Smo蛋白及G1il蛋白的表达,并以正常胃粘膜组织作对照,分析两者的相关性.结果 Smo和Gli1蛋白均在正常胃粘膜中不表达或弱表达;在胃乳头状腺癌、管状腺癌、低分化腺癌中,两者的表达强度和阳性表达率显著高于正常胃粘膜(P<0.05,并随着胃腺癌分化程度下降而上升;相关分析显示Smo和Gli1蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关,相关系数为0.989,P<0.001.结论 胃癌发生过程中的Sonic hedgehog信号通路异常激活可能通过Smo蛋白高表达上调下游转录因子Gli1蛋白的表达参与部分胃腺癌的发生.

    作者:戎祯祥;方驰华;朱达坚;刘胜军 刊期: 2006年第12期

  • mompS-linker-flaA融合基因原核表达载体的构建及诱导表达

    目的 在嗜肺军团菌主要外膜蛋白S基因(mompS)和鞭毛亚单位蛋白基因(flaA)基因间加入一段柔性链接头(Linker),以构建mompS-Linker-flaA融合表达载体,并使其在大肠杆菌中表达.方法 以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR分别扩增获得嗜肺军团菌mompS基因和faA基因,与带有硫氧还蛋白(Trx)基因的高效原核表达质粒pET32a(+)定向重组,构建含mompS-Linker-flaA基因的重组质粒pET-LpSLF,经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,以IPTG诱导表达Trx-MOMPS-Linker-F1aA融合蛋白,用SDS-PAGE及Western blotting进行鉴定.结果 限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,我们扩增出了嗜肺军团菌906bp的mompS及1440bp的flaA基因,成功构建了重组质粒pET-LpSLF,SDS-PAGE及Western blot分析显示重组质粒pET-LpSLF在原核系统中得到了表达.结论 嗜肺军团菌mompS-Linker-flaA基因在大肠杆菌中得到了表达,为进一步从分子水平研究其免疫原性、免疫保护性及其在临床诊断上的应用价值提供研究基础.

    作者:张雷;陈建平;张莉;王涛;刘明杰;田玉 刊期: 2006年第12期

  • 胎鼠肝nestin阳性细胞的分离培养和诱导分化研究

    目的 建立胎鼠肝nestin阳性细胞的体外分离、培养和诱导分化的方法.方法 采用机械分离法结合悬滴培养法获得胎肝干细胞,原代培养2 d后改变培养基,添加含20%胎牛血清的DMEM(含25 ml/L葡萄糖,100U/ml青链霉素,pH值7.6),添加烟酰胺10mmol/L,胰岛素1 mg/L,N2添加剂,碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、干细胞因子、白血病抑制因子各20μg/L诱导分化为nestin阳性细胞.结果和结论 大鼠胎肝内存在nestin阳性细胞,在体外扩增后加入诱导剂可定向分化为胰岛β细胞.

    作者:刘军;安靓;陈金拳 刊期: 2006年第12期

南方医科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学