李海波；王武军；梁勇；蔡开灿；邹小明；王振康
目的 在嗜肺军团菌主要外膜蛋白S基因(mompS)和鞭毛亚单位蛋白基因(flaA)基因间加入一段柔性链接头(Linker),以构建mompS-Linker-flaA融合表达载体,并使其在大肠杆菌中表达.方法 以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR分别扩增获得嗜肺军团菌mompS基因和faA基因,与带有硫氧还蛋白(Trx)基因的高效原核表达质粒pET32a(+)定向重组,构建含mompS-Linker-flaA基因的重组质粒pET-LpSLF,经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,以IPTG诱导表达Trx-MOMPS-Linker-F1aA融合蛋白,用SDS-PAGE及Western blotting进行鉴定.结果 限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,我们扩增出了嗜肺军团菌906bp的mompS及1440bp的flaA基因,成功构建了重组质粒pET-LpSLF,SDS-PAGE及Western blot分析显示重组质粒pET-LpSLF在原核系统中得到了表达.结论 嗜肺军团菌mompS-Linker-flaA基因在大肠杆菌中得到了表达,为进一步从分子水平研究其免疫原性、免疫保护性及其在临床诊断上的应用价值提供研究基础.
作者：张雷；陈建平；张莉；王涛；刘明杰；田玉 刊期： 2006年第12期
目的 探讨非体外循环下冠状动脉搭桥手术的可行性和安全性.方法 164例病人在无体外循环支持下进行搭桥手术,共搭桥356支,平均2.2支,其中左前降支146支,对角支66支,右冠状动脉91支,钝园支53支.手术均在全身麻醉,正中纵劈胸骨切口,用Medtronic Octopus Ⅱ固定器辅助下进行.结果 本组164例病人中有7人因低血压或严重心律不失常改为体外循环下完成手术,其中2人死亡,死亡率1.2%.术后心排出量由手术前(3.6±0.8)L/min上升到(5.3±1.9)L/min,心脏指数由手术前的(2.0±0.9)L/(min·m2)上升到3.2±1.3 L/(min·m2).本组37人与体外循环下搭桥52人术后心肌酶作了比较,发现不停跳组心肌酶上长升的幅度小、恢复快.结论 非体外循环下冠状动脉搭桥术对某些冠心病 病人的手术是安全可行的,尤其适用于单支或两支病变、心功能差、射血分数低和高龄病人.可降低术后死亡率和并发症的发生,且费用低.
作者：姬尚义；杨建安；姚滨；陈伟新；王小雷；陈长春；王志伟；谭敏；张玉萍 刊期： 2006年第12期
目的 探讨Slingshot-1L(SSH-1L)在哮喘病人外周血嗜酸粒细胞(EOS)的表达及其功能.方法 抽取15例正常自愿者(正常组)及30例哮喘病人(未经糖皮质激素治疗组15例,已予糖皮质激素治疗15例)外周静脉血各30ml进行EOS的分离纯化并计数,提取其总RNA及总蛋白进行特异性片段SSH-lL的RT-PCR扩增及Western blotting,从基因和蛋白水平比较不同组别之间SSH-1L表达的变化.结果 未治疗组EOS的SSH-1L/β-Actin灰度值比与正常组及治疗组比较均显著升高(P＜0.05),治疗组EOS的SSH-1L/β-Actin灰度值比与正常组比较无显著差异(P＜0.05),未治疗组蛋白样品SSH-1L光密度值(Dλ值)比正常组及治疗组显著升高(P＜0.05),正常组蛋白样品SSH-1LOD值与治疗组比较无显著差异(P＜0.05).结论 SSH-1L在急性发作期哮喘病人外周血EOS表达明显增高,可能在EOS激活、迁移上发挥重要作用.
作者：张卫珍；蔡绍曦；邹飞；赵海金；李文军 刊期： 2006年第12期
目的 研究不同剂量辐照对淋巴细胞凋亡及红细胞活性影响.方法 流式细胞仪检测淋巴细胞的凋亡,检测红细胞膜功能和红细胞免疫功能的变化反映红细胞活性.结果 淋巴细胞的凋亡率具有量效和时效关系,辐照可以有效的导致淋巴细胞的凋亡:在剂量达到35 Gy时红细胞的活性与对照组比较没有显著性差异.结论 适当剂量的辐照可以有效的减少血液中有活性淋巴细胞的数量,同时又对红细胞的活性没有显著的损伤,是有效的预防TA-GVHD的方法之一.
作者：吴燕飞；余晋林；聂凯声；何其通；罗海玲；段朝晖；朱振宇 刊期： 2006年第12期
目的 克隆人类免疫缺陷病毒Ⅰ型B亚型包膜糖蛋白gp120基因,构建真核表达载体,并在真核细胞中表达,进一步为制备自行设计的以λ噬菌体作为载体的HIV核酸疫苗奠定基础.方法 以克隆好的HIV-1B亚型U26942全基因质粒DNA作为模板,根据Genbank中gp120基因的核苷酸序列设计引物,并在引物的5′端分别引入BamH Ⅰ及Xho Ⅰ酶切位点,特异性地扩增gp120基因.TA克隆后经双酶切、测序等鉴定重组质粒,再经双酶切、连接构建含gp120编码基因的真核表达载体,并进行酶切鉴定分析pcDNA3.1(+)/gp120.在脂质体介导下转染HepG2细胞,经G418压力筛选建立稳定转染gp120基因的细胞系,用RT-PCR及Western boltting检测其在HepG2细胞中的表达.结果 重组质粒经BamH Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切成5.4kb与1.44 kb的片断,表明表达载体pcDNA3.1(+)中插入了gp120基因片断,测序结果表明编码框正确.RT-PCR及Westernblotting证实稳定转染gp120基因的HepG2细胞系中有该基因的表达.结论 成功构建了HIV-1B亚型包膜糖蛋白gp120基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/gp120,并在HepG2细胞中获得稳定表达.
作者：李德良；马文丽；师永霞；李凌；张宝；郑文岭 刊期： 2006年第12期
目的 探讨定量组织速度成像(QTVI)技术检测冠心病局部室壁运动异常的临床应用价值.方法 应用QTVI技术对45例健康者(正常对照组)及48例冠心病组(异常组)进行左室壁各段心肌运动速度检测,并将异常组与对照组进行显著性检验.结果 冠心病组可检出运动异常节段,表现为速度的降低和波形的改变.结论 QTVI能敏感定量评价局部室壁运动异常,对冠心病无创诊断具有重要应用价值.
作者：赵毅兰；林英忠；李泓 刊期： 2006年第12期
目的 观察刺蒺藜水提物对C57BL/6J小鼠毛囊黑素细胞刺激素表达的影响,探讨刺蒺藜在毛囊休眠期黑素细胞活化、增殖及移行至表皮过程中的作用.方法 选择在离体实验中对酪氨酸酶有激活作用、对黑素细胞有增殖作用及在临床应用中对白癜风有治疗作用的中药刺蒺藜,用SPF级C57BL/6J小鼠为实验动物,采用免疫组织化学技术观察高剂量(相当于成人1g/(kg·d)刺蒺藜水提物灌服后小鼠毛囊黑素细胞刺激素水平的变化,并用χ2检验进行统计学分析.结果 黑素细胞刺激素在试验组小鼠毛囊细胞中阳性表达率为75.00%,在对照组小鼠毛囊细胞中阳性表达率为18.75%,两者比较有显著性差异(P＜0.01).结论 高剂量刺蒺藜水提物可以提高小鼠毛囊黑素细胞刺激素的表达水平,并可能通过上调毛囊黑素细胞刺激素表达这一途径来活化酪氨酸酶、促进毛囊休眠期黑素细胞的增殖、移行及黑素合成.
作者：杨柳；路建伟；安靓；姜萱 刊期： 2006年第12期
目的 构建靶向性干扰人端粒酶逆转录酶表达的特异性小干扰RNA的真核表达载体.方法 采用PCR法分别扩增增强型绿色荧光蛋白的DNA序列、U6启动子序列和靶向性干扰人端粒酶逆转录酶的特异性小干扰RNA对应的DNA序列,随后将与之相应的DNA序列片断依次克隆人真核表达载体pLXSN中,并通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体进行鉴定.以荧光显微镜和利用流式细胞仪分析重组病毒表达EGFP蛋白的情况.以MTT方法检测初步分析重组病毒对人Hela细胞的RNAi效果.结果 限制性内切酶酶切和测序结果均表明成功构建了靶向人端粒酶逆转录酶的小干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U6-siTERT.以磷酸钙共转染法制备的重组逆转录病毒滴定了病毒滴度后,重组病毒感染人Hela细胞24 h时用流式细胞仪测得EGFP表达的阳性率为24.1%.重组逆转录病毒感染人Hela细胞48 h时,MTT实验测得细胞死亡率为53.2%.结论 成功构建了针对人端粒酶逆转录酶小干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U6-siTERT,并制备了重组逆转录病毒,初步观察了效应,为进一步利用小干扰RNA技术研究肿瘤的基因治疗奠定了基础.
作者：王全师；王欣璐；李华；王巧愚；王全颖；杨广笑 刊期： 2006年第12期
目的 探讨肝动脉化学药物栓塞(TACE)、B超引导无水酒精瘤内注射(PEI)和微波射频消融(RFA)对肝癌病人在肝移植前等待期间的作用.方法 将本组在2001年1月至2004年12月间的27例肝癌肝移植病人分为术前抑瘤组(18例)和非抑瘤组(9例);抑瘤组TACE 9例(其中TACE+PEI1例)、PEI 7例和RFA 2例.结果 抑瘤组肝移植平均等待时间为14.56±5.29周(3-21周),非抑瘤组为4.67±2.74周(2-11周),二者有显著性差异(P=0.042);抑瘤组病人的肝移植手术率100%(18/18),非抑瘤组81.8%(9/11);抑瘤组肿瘤复发率50%(9例),非抑瘤组肿瘤复发率77.8%(7例);抑瘤组和非抑瘤组术后2年累计生存率49.3%和32.3%(P=0.065),而术后2年累计无瘤生存率为43.5%和11.8%(p=0.044).结论 肝癌病人在肝移植前等待期间行TACE、PEI和RFA等治疗有较好抑瘤作用.
作者：简志祥；侯宝华；孙建；区应亮；区金锐 刊期： 2006年第12期
目的 研究化州柚提取物对Beagle犬心血管系统和呼吸系统的影响.方法 采用生理记录仪观察灌胃给药前后Beagle犬血压、呼吸频率、呼吸幅度、Ⅱ导联P、R、T、QRS波、PR、QT间期等指标的变化.结果 给药后各时间点的指标与给药前相比,无显著性差异(P＜0.05).结论 单次经口给予化州柚提取物5、50、300mg/kg,对Beagle犬心血管系统和呼吸系统无不良影响.
作者：李沛波；田珩；王永刚；彭维；苏薇薇 刊期： 2006年第12期
原发于心脏恶性淋巴瘤非常罕见,合并上腔静脉综合征者尚未见报道,现报告我院2005年经急诊床旁彩色多普勒超声心动图(心脏彩超)诊断并经手术和病理结果证实的原发于右房恶性淋巴瘤合并上腔静脉综合征1例,并探讨心脏彩超在该病诊断中的临床价值.
作者：谢志斌；耿穗娜；许顶立；王武军 刊期： 2006年第12期
目的 制备包含人分泌型内皮抑素基因的重组腺病毒,为下一步探讨其在血管生成依赖性疾病的治疗研究中的应用提供基础.方法 以T-Endostatin质粒为模板,通过PCR扩增回收hEndostatin,将hEndostatin连接到pShuttle2中,构建pShuttle2-hEndostatin表达质粒,将此表达质粒连接到缺陷型腺病毒载体,构建Ad-hEndo.其线性化后转染HEK293T细胞,纯化后的重组腺病毒Ad-hEndo在HEK293T细胞中大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,并测定其滴度.结果 利用PCR反应进行鉴定,扩增得到的hEndostatin经酶切鉴定,DNA测序证实为重组腺病毒,测定病毒滴度为5.2×109PFU/ml.结论 本实验成功构建了人分泌型内皮抑素重组腺病毒Ad-hEndo,可直接用于血管生成依赖性疾病基因治疗的实验研究.
作者：袁瑷芹；何援利；杨芳；刘木彪 刊期： 2006年第12期
目的 通过正交设计筛选出制备红霉素明胶微球的佳工艺.方法 测定红霉素明胶微球的平均粒径、载药量、包封率,并对工艺重现性进行研究.结果 红霉素明胶微球的形态圆整,且药物确已包裹在微球中,微球的平均粒径为(14.15±0.20)μm,载药量(5.83±0.38)%,包封率为(65.70±0.56)%,7-28μm占总数的90.16%以上,佳工艺条件重现性良好.结论 获得了制备红霉素明胶微球较为满意的工艺.
作者：李桃；杨帆；佃少娜；伍善广；陈颖；刘星辰；傅英梅 刊期： 2006年第12期
目的 探讨严重腹腔感染时大鼠肠黏膜β-连环蛋白(β-cat)表达的变化规律及意义.方法 健康成年Wistar大鼠40只,随机分为空白对照组(仅行单纯剖腹手术)和腹腔感染[采用盲肠结扎加穿孔法(CLP)制作严重腹腔感染模型]术后12、24、48 h组,每组10只,应用免疫组织化学及RT-PCR检测大鼠小肠隐窝严重腹腔感染前后β-cat表达的变化,以及严重腹腔感染后不同时期β-catmRNA水平的改变.结果 正常大鼠肠黏膜隐窝底部细胞中β-cat仅有微弱表达,而感染后肠黏膜隐窝底部细胞中强表达β-cat;RT-PCR结果表明与对照组比较,β-catmRNA在CLP术后12 h明显上升(0.74±0.10vs0.52±0.06,P＜0.01),在CLP术后24 h后达到峰值(0.90±0.09vs0.52±0.06,P＜0.01),随后逐渐下降,到48 h仍显著高于对照组(0.80±0.09vs0.52±0.06,P＜0.01).结论 严重腹腔感染早期可诱导β-cat表达,提示β-cat可能与肠上皮干细胞的增殖分化密切相关.
作者：刘晋峰；吴承堂 刊期： 2006年第12期
目的 探讨以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体的口服细胞因子基因治疗防治小鼠肿瘤的可行性.方法 通过电转化法将真核表达载体pCMVmIL-12、EGFPN1导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261中,经由胃管饲于BALB/c和C57BL/6小鼠.6周后分别用4T1乳腺癌细胞和Lewis肺癌细胞进行攻击.通过流式细胞仪、共聚焦显微镜检测绿色荧光蛋白在小鼠各组织中的表达,通过PCR和ELISA方法检测mIL-12基因的整合和表达情况,并考察肿瘤的受抑情况和小鼠的生存期.结果 在小鼠的肝、脾、小肠、肾脏和肿瘤中可检测到绿色荧光蛋白的表达和相应细胞因子基因的整合.血清中相应的细胞因子水平较对照组升高(P＜0.05),生存期超过对照组小鼠(P＜0.05).结论 减毒沙门氏菌可作为口服基因治疗载体,为肿瘤的预防和治疗提供一条简便、安全、有效的途径.
作者：齐桓；李玉华；郑少斌 刊期： 2006年第12期
目的 应用RNA干扰技术(RNAi)针对凋亡抑制因子survivin存活素的siRNA抑制Hela细胞株内源survivin基因的表达以及可促进Hela细胞凋亡.方法 构建重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2并分别转染Hela细胞株,通过免疫荧光和半定量RT-PCR检测survivin蛋白表达及mRNA转录水平的变化,并通过流式细胞仪使用PI-AnnexinV双染法检测Hela细胞株的凋亡.结果 构建的2种重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2均能明显抑制survivin基因的表达;应用免疫荧光检测survivin基因的表达,转染重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2的实验组survivin荧光强度明显低于转染空载体pGE-1和pshRNA阴性非特异对照质粒;通过半定量RT-PCR检测到survivin基因mRNA转录明显减少;通过PI-Annexin V双染法检测Hela细胞的凋亡分别达(36.02±2.12)%(P＜0.01)和(35.29±2.02)%(P＜0.01).结论 重组质粒pshRNA-survivin-1和pshRNA-survivin-2均可明显抑制Hela细胞内源survivin的表达和mRNA的转录均可并明显促进Hela细胞的凋亡,为survivin介导的肿瘤基因沉寂疗法提供良好的实验基础.
作者：蒋鸿超；孙强明；赵丹；孙茂盛；吕琳；李鸿钧 刊期： 2006年第12期
目的 研究外源性基因经乳腺导管注射在乳腺组织中表达的机制.方法 依据乳腺发育时期的不同(即9周龄未孕、妊娠7 d、妊娠12 d、妊娠18 d、产后7 d、产后14 d)将36只SD大鼠分为6个实验组(6只/组),以绿色荧光蛋白(GFP)高效表达质粒pCE-29与脂质体混合后,经乳腺管导入各组大鼠第5对乳腺.48 h后取材冰冻切片,荧光显微镜下观察各组GFP的表达情况,如有表达则对该张冰冻切片行HE染色,前后图像对比以确定GFP表达位置.另取不同发育时期正常大鼠乳腺组织制作石蜡切片,HE染色.结果 pCE-29质粒由乳头管导入后,实验组中妊娠12 d组和产后7 d组中各有2只有GFP表达,图像对比后确定GFP是在乳腺腺泡细胞中表达;石蜡切片HE染色后观察大鼠乳腺组织,在从妊娠初始到产后的发生变化过程中,在妊娠12d和产后7d时处于分裂期的腺细胞较多,而其他时期处于分裂期的腺细胞较少.结论 在妊娠12 d和产后7 d这两个时期,外源性基因经乳腺管注射可以转入腺泡上皮细胞而得到表达.表达的机制可能是在妊娠期及分娩后,由于体内激素作用,乳腺干细胞在以上两个时期不断分化,启动腺细胞分裂增殖,分裂期的腺细胞进行DNA复制,因此可能接受外源性基因的机率大.本实验为外源性基因经乳腺管注射在动物乳腺的表达提供了重要的研究资料.
作者：李新安；安靓 刊期： 2006年第12期
目的 研究氯沙坦对实验性糖尿病大鼠肾组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体mRNA表达的影响.方法 纯种雄性Wistar大鼠分为3组,A组(n=11)为正常对照组,B组(n=11)为糖尿病为干预组,C组(n=9)为糖尿病大鼠氯沙坦干预组.以链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型.饲养18周后取出肾脏检测AngⅡ水平、AngⅡ1型受体mRNA表达,收集24 h尿测定尿白蛋白排泄及肌酐并心脏内取血检测血AngⅡ及肌酐.AngⅡ1型受体mRNA表达采用RT-PCR,以-actin作为内对照.尿白蛋白排泄采用大鼠白蛋白特异的酶免疫分析试剂盒.结果 血、肾组织AngⅡ在A、B、C三组间无显著性差异.肾组织AngⅡ1型受体mRNA表达在B组大鼠(0.62±0.17)显著低于A组(1.13±0.82,P＜0.01)及C组(1.13±0.62,P＜0.01).尿白蛋白排泄在B组大鼠(2.18±1.98mg/d)显著高于A组(0.41±0.47 mg/d,P＜0.01)及C组(0.65±0.89 mg/d,P＜0.01).结论 氯沙坦处理能升高糖尿病大鼠肾组织的AngⅡ1型受体mRNA表达,但不改变血液及肾组织AngⅡ水平.
作者：吴文；丁鹤林；陈黎红；傅祖植 刊期： 2006年第12期
目的 比较芬太尼透皮贴剂与硫酸吗啡控释片治疗原发性肝癌栓塞化疗术后疼痛的疗效与副作用.方法 芬太尼透皮贴剂组41例,硫酸吗啡控释片组35例.芬太尼透皮贴剂初始剂量25-50μg/h,72 h更换;硫酸吗啡控释片初始剂量30 mg,q12 h.两组均根椐疼痛缓释情况调整剂量,直到疼痛缓解为轻度.出现暴发痛时给予即释吗啡片10 mg口服.治疗2周后,以视觉模拟量表法评价疗效,记录两组治疗过程中出现的恶心、呕吐、便秘等副反应,比较两组不良反应发生率.结果 芬太尼透皮贴剂与硫酸吗啡控释片的疼痛缓解率分别为90.2%与88.6%(χ2=.019,P＜0.05).常见的副反应有恶心、呕吐、头晕、便秘等,其中芬太尼透皮贴剂组便秘发生率低于硫酸吗啡控释片组(χ2=13.20,P＜0.05),其他副反应发生率两组无显著差异.结论 芬太尼透皮贴剂使用方便,疗效好,副作用少,更适合肝癌栓塞化疗术后中、重度疼痛的治疗.
作者：周泽健；许荣德；李伟科；庄文行；邵培坚；罗鹏飞 刊期： 2006年第12期
目的 总结32例颈动脉粥样硬化性狭窄血管内支架治疗的经验.方法 经筛选的32例症状性颈动脉粥样硬化性狭窄患者,临床表现为反复的脑缺血发作或脑梗死,在路径图指引下将过滤伞放入狭窄远端并释放,视情决定是否行后扩张,对病人随访5-18月,平均10.7月,均未再有脑缺血发作或脑梗死,临床症状明显改善.结果 无手术失败,支架定位准确.32例共41处狭窄成功植入自膨式支架41枚,平均狭窄程度从(76±10)%降至(15±8)%.结论 血管内支架治疗是治疗颈动脉粥样硬化性狭窄的安全有效手段.
作者：林爱龙；马廉亭；李俊；余泽；秦尚振；李爱冰；林俊明；宋朝理 刊期： 2006年第12期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
