学术投稿

外源性基因经乳腺导管注射在大鼠乳腺组织中表达的机制研究

李新安;安靓

关键词:外源性基因, 乳腺, 绿色荧光蛋白
摘要:目的 研究外源性基因经乳腺导管注射在乳腺组织中表达的机制.方法 依据乳腺发育时期的不同(即9周龄未孕、妊娠7 d、妊娠12 d、妊娠18 d、产后7 d、产后14 d)将36只SD大鼠分为6个实验组(6只/组),以绿色荧光蛋白(GFP)高效表达质粒pCE-29与脂质体混合后,经乳腺管导入各组大鼠第5对乳腺.48 h后取材冰冻切片,荧光显微镜下观察各组GFP的表达情况,如有表达则对该张冰冻切片行HE染色,前后图像对比以确定GFP表达位置.另取不同发育时期正常大鼠乳腺组织制作石蜡切片,HE染色.结果 pCE-29质粒由乳头管导入后,实验组中妊娠12 d组和产后7 d组中各有2只有GFP表达,图像对比后确定GFP是在乳腺腺泡细胞中表达;石蜡切片HE染色后观察大鼠乳腺组织,在从妊娠初始到产后的发生变化过程中,在妊娠12d和产后7d时处于分裂期的腺细胞较多,而其他时期处于分裂期的腺细胞较少.结论 在妊娠12 d和产后7 d这两个时期,外源性基因经乳腺管注射可以转入腺泡上皮细胞而得到表达.表达的机制可能是在妊娠期及分娩后,由于体内激素作用,乳腺干细胞在以上两个时期不断分化,启动腺细胞分裂增殖,分裂期的腺细胞进行DNA复制,因此可能接受外源性基因的机率大.本实验为外源性基因经乳腺管注射在动物乳腺的表达提供了重要的研究资料.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 化州柚提取物对Beagle犬心血管系统和呼吸系统的影响

    目的 研究化州柚提取物对Beagle犬心血管系统和呼吸系统的影响.方法 采用生理记录仪观察灌胃给药前后Beagle犬血压、呼吸频率、呼吸幅度、Ⅱ导联P、R、T、QRS波、PR、QT间期等指标的变化.结果 给药后各时间点的指标与给药前相比,无显著性差异(P<0.05).结论 单次经口给予化州柚提取物5、50、300mg/kg,对Beagle犬心血管系统和呼吸系统无不良影响.

    作者:李沛波;田珩;王永刚;彭维;苏薇薇 刊期: 2006年第12期

  • Shh对发育中小鼠视觉传导通路的影响

    目的 探察Shh对E13-E15小鼠胚胎中视觉传导通路发育的影响.方法 E13至E15小鼠胚胎的眼至视束部分制备成脑厚片,置于含10%的小牛血清的DMEM/F1212的培养液中,在37℃恒温滚动培养箱中培养5h.实验组中将Shh抗体加入培养液中.培养结束后,将脑厚片以4%多聚甲醛固定,将DiI颗粒置于视盘.7d后,在手术显微镜下,暴露被标记的视神经纤维,在激光扫描共聚焦纤维镜下观察.结果 用Shh抗体阻抑Shh的功能,可引起E13跨越中线的视神经纤维减少以及E15投射至同侧的视束的神经纤维的增多.结论 在视交叉形成的早期,Shh引导视神经纤维跨越中线.在视交叉形成的后期,Shh引导视神经转弯.

    作者:郝彦利;陈新安;董为人 刊期: 2006年第12期

  • 新型聚乳酸/骨基质多孔复合支架材料制备及初步研究

    目的 采用CO2超临界法(SC-CO2)制备一种新型的聚乳酸(PLA)/骨基质(BMG)多孔复合型生物活性骨支架材料,并评价其理化性能及细胞相容性,确定材料佳复合比例,为进一步的实验提供实验依据.方法 采用SC-CO2法制备不同比例的PLA/BMG多孔复合型骨植入材料,通过大体观察、孔隙率测定,力学检测、SEM观察评价其理化性能,并结合体外细胞相容性检测选择佳复合比例.结果 采用SC-CO2法制备的PLA/BMG多孔复合支架材料中BMG的比例与材料的孔隙率及细胞相容性成正相关,与力学性能成负相关;含30%BMG的复合材料具有良好的综合性能.结论 采用SC-CO2法制备的PLA/BMG(7/3)多孔复合支架材料具有良好的理化性能及细胞相容性,可作为骨植入材料及骨组织工程支架进一步研究.

    作者:张育敏;李宝兴;李冀;马洪强;赵亚平;原林 刊期: 2006年第12期

  • 膨体聚四氟乙烯人工心脏瓣膜体外加速疲劳的实验研究

    目的 测试膨体聚四氟乙烯人工心脏瓣膜(ePTFEAHV)的耐久性.方法 以TH-2200型瓣膜体外加速疲劳寿命测试仪对6个ePTFE AHV进行体外加速疲劳实验,总计4亿次.以TH-1200型人工心脏瓣膜体外脉动流试验台测试瓣膜于疲劳实验前后的流体力学参数,并进行对比研究,以测试ePTFEAHV的耐久性.结果 疲劳实验前后ePTFEAHV的平均跨瓣压差、有效开口面积无明显改变,返流量及返流率较疲劳实验前减小,差异有统计学意义.结论 ePTFEAHV具有良好的耐久性.

    作者:李海波;王武军;梁勇;蔡开灿;邹小明;王振康 刊期: 2006年第12期

  • ADM基因在正常孕妇与子痫前期孕妇妊娠晚期胎盘组织表达的研究

    目的 ADM在调节母亲血管对妊娠过程和胎儿的适应性及胚胎循环等方面发挥着绝对重要的作用,为阐明ADM基因在正常孕妇与子痫前期胎盘组织的表达差异,以探索ADM及其信号通路的改变在致子痫前期发生的分子病理机制中的重要性.方法 取妊娠晚期正常孕妇(≥39周,n=7)和子痫前期孕妇胎盘组(≥35周,n=10),分别采用Northern Blotting方法和免疫组化技术比较正常孕妇与子痫前期孕妇胎盘组织中ADM基因在mRNA和蛋白质水平表达的差异.结果 与正常孕妇相比,子痫前期孕妇胎盘组织中ADM基因mRNA的表达降低了(36.2±6.3)%.采用t-检验进行统计表明二者差异显著(P<0.05);且子痫前期孕妇胎盘组织中ADM蛋白的表达也明显减少.结论 子痫前期孕妇妊娠晚期胎盘组织ADM基因的表达明显降低,这可能是子痫前期患者发病的可能机制之一.

    作者:高云飞;余艳红;李志琴 刊期: 2006年第12期

  • 胎鼠肝nestin阳性细胞的分离培养和诱导分化研究

    目的 建立胎鼠肝nestin阳性细胞的体外分离、培养和诱导分化的方法.方法 采用机械分离法结合悬滴培养法获得胎肝干细胞,原代培养2 d后改变培养基,添加含20%胎牛血清的DMEM(含25 ml/L葡萄糖,100U/ml青链霉素,pH值7.6),添加烟酰胺10mmol/L,胰岛素1 mg/L,N2添加剂,碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、干细胞因子、白血病抑制因子各20μg/L诱导分化为nestin阳性细胞.结果和结论 大鼠胎肝内存在nestin阳性细胞,在体外扩增后加入诱导剂可定向分化为胰岛β细胞.

    作者:刘军;安靓;陈金拳 刊期: 2006年第12期

  • Galectin-3在大肠癌组织中的表达及其临床意义

    目的 研究Galectin-3在大肠癌组织、癌旁组织及转移组织中的表达,初步探讨其与大肠癌发生发展,侵袭转移的关系.方法 (1)用SP免疫组化法检测158例临床石蜡组织标本(癌旁组织30例,腺瘤组织25例,大肠癌组织65例,淋巴结转移性大肠癌38例)中的Galectin-3蛋白的表达.(2)用RT-PCR法分析Galectin-3 mRNA在31对新鲜大肠癌组织及相应癌旁组织中的表达情况.结果 (1)Galectin-3蛋白在大肠癌组织、癌旁组织及腺瘤中的表达具有明显差异(P<0.001);在浸润程度深、分化程度低及发生淋巴结转移的大肠癌组织中的表达明显高于浸润程度浅、分化程度高及未发生淋巴结转移的大肠癌组织(P<0.05).(2)在31对大肠癌组织中浸润程度深、分化程度低及发生淋巴结转移的组织中的表达明显高于浸润程度浅、分化程度高及未发生淋巴结转移的组织,其表达量的平均倍比关系分别为2.67、1.98、1.91.结论 Galectin-3的差异表达,可能与大肠癌的发生发展及转移有关.

    作者:张楠;丁彦青;梁莉 刊期: 2006年第12期

  • 氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织血管紧张素Ⅱ及其1型受体mRNA表达的影响

    目的 研究氯沙坦对实验性糖尿病大鼠肾组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体mRNA表达的影响.方法 纯种雄性Wistar大鼠分为3组,A组(n=11)为正常对照组,B组(n=11)为糖尿病为干预组,C组(n=9)为糖尿病大鼠氯沙坦干预组.以链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型.饲养18周后取出肾脏检测AngⅡ水平、AngⅡ1型受体mRNA表达,收集24 h尿测定尿白蛋白排泄及肌酐并心脏内取血检测血AngⅡ及肌酐.AngⅡ1型受体mRNA表达采用RT-PCR,以-actin作为内对照.尿白蛋白排泄采用大鼠白蛋白特异的酶免疫分析试剂盒.结果 血、肾组织AngⅡ在A、B、C三组间无显著性差异.肾组织AngⅡ1型受体mRNA表达在B组大鼠(0.62±0.17)显著低于A组(1.13±0.82,P<0.01)及C组(1.13±0.62,P<0.01).尿白蛋白排泄在B组大鼠(2.18±1.98mg/d)显著高于A组(0.41±0.47 mg/d,P<0.01)及C组(0.65±0.89 mg/d,P<0.01).结论 氯沙坦处理能升高糖尿病大鼠肾组织的AngⅡ1型受体mRNA表达,但不改变血液及肾组织AngⅡ水平.

    作者:吴文;丁鹤林;陈黎红;傅祖植 刊期: 2006年第12期

  • mompS-linker-flaA融合基因原核表达载体的构建及诱导表达

    目的 在嗜肺军团菌主要外膜蛋白S基因(mompS)和鞭毛亚单位蛋白基因(flaA)基因间加入一段柔性链接头(Linker),以构建mompS-Linker-flaA融合表达载体,并使其在大肠杆菌中表达.方法 以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR分别扩增获得嗜肺军团菌mompS基因和faA基因,与带有硫氧还蛋白(Trx)基因的高效原核表达质粒pET32a(+)定向重组,构建含mompS-Linker-flaA基因的重组质粒pET-LpSLF,经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,以IPTG诱导表达Trx-MOMPS-Linker-F1aA融合蛋白,用SDS-PAGE及Western blotting进行鉴定.结果 限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,我们扩增出了嗜肺军团菌906bp的mompS及1440bp的flaA基因,成功构建了重组质粒pET-LpSLF,SDS-PAGE及Western blot分析显示重组质粒pET-LpSLF在原核系统中得到了表达.结论 嗜肺军团菌mompS-Linker-flaA基因在大肠杆菌中得到了表达,为进一步从分子水平研究其免疫原性、免疫保护性及其在临床诊断上的应用价值提供研究基础.

    作者:张雷;陈建平;张莉;王涛;刘明杰;田玉 刊期: 2006年第12期

  • 饮食加硼治疗维甲酸诱导骨质疏松模型大鼠的效果观察

    目的 观察饮食加硼治疗维甲酸诱导的骨质疏松模型大鼠的效果,为硼临床治疗骨质疏松症提供实验依据.方法 SD大鼠32只,随机分为正常组(n=8)和骨质疏松模型组(n=24).以维甲酸80mg.kg-1.d-1灌胃15 d,诱导骨质疏松模型.模型复制成功后,骨质疏松模型组又随机分为无措施对照组(n=8)、饮食加硼治疗组(n=8)和雌二醇治疗组(n=8).治疗30 d后,测定大鼠血清钙、磷、硼含量,及碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(TRAP)活性,测量大鼠全身、腰椎和胫骨骨密度,并观察大鼠股骨形态计量学变化.结果 四组大鼠血清Ca和P含量无显著性差异,而硼含量硼治疗组明显高于其它三组.对照组大鼠血清AKP和TRAP活性增加,股骨松质骨和皮质骨骨量减少,破骨细胞数量增加,腰椎、胫骨骨密度下降,呈现骨质疏松变化.饮食加硼和雌激素治疗组大鼠血清TRAP活性显著下降,股骨平均骨小梁数、平均骨小梁宽度、骨小梁面积百分比、皮质骨面积百分比和全身、腰椎、胫骨骨密度等显著增加,松质骨区破骨细胞数明显减少,与正常组大鼠骨质无明显差异.硼治疗组大鼠血清AKP活性及松质骨区活跃成骨细胞数显著增加.结论 饮食加硼可提高大鼠血清硼含量,增加骨形成,减少骨吸收,对骨质疏松有明显的治疗作用.

    作者:许鹏;胡万彪;郭雄;张银刚;李幼芬;姚建锋;蔡乾坤 刊期: 2006年第12期

  • 全氟丙烷人血白蛋白微球注射剂静脉给药后试验犬气体采集方法的建立

    目的 建立一种新型全氟丙烷人血白蛋白微球注射剂静脉给药后定时、定量采集试验犬呼出气体的方法,为该药的药代动力学研究奠定基础.方法 试验犬在麻醉、呼吸机通气状态下,定时、定量采集其呼出气体样本.采用气相色谱--二级质谱法测定样本浓度.结果 试验犬呼出气体中全氟丙烷的AUC与注射剂量基本呈线性关系,y=1162.5X-417.38(r2=0.9499).全氟丙烷总体回收率为(119.49±27.62)%,与回收率100%比较,P>0.05,无显著性差异;全氟丙烷累积百分率个体差异较大.GC-MS-MS方法测定全氟丙烷气体,准确、灵敏、精确,能充分满足实验需要.结论 该方法能反应全氟丙烷气体在试验犬体内的药代动力学特征,可用于全氟丙烷或包含其他气体药物的药代动力学研究.

    作者:杨凌;陈志良;刘世霆;杨莉 刊期: 2006年第12期

  • 袋血辐照对淋巴细胞凋亡及红细胞活性的影响

    目的 研究不同剂量辐照对淋巴细胞凋亡及红细胞活性影响.方法 流式细胞仪检测淋巴细胞的凋亡,检测红细胞膜功能和红细胞免疫功能的变化反映红细胞活性.结果 淋巴细胞的凋亡率具有量效和时效关系,辐照可以有效的导致淋巴细胞的凋亡:在剂量达到35 Gy时红细胞的活性与对照组比较没有显著性差异.结论 适当剂量的辐照可以有效的减少血液中有活性淋巴细胞的数量,同时又对红细胞的活性没有显著的损伤,是有效的预防TA-GVHD的方法之一.

    作者:吴燕飞;余晋林;聂凯声;何其通;罗海玲;段朝晖;朱振宇 刊期: 2006年第12期

  • 妊娠合并心律失常379例临床分析

    目的 探讨各种心律失常对妊娠及分娩的影响.方法 对1997年1月-2006年5月间分娩的379例妊娠合并心律失常孕产妇的临床资料进行回顾性分析.结果 无器质性病变的心律失常对妊娠一般无不良影响,有病理原因的器质性病变的心律失常对妊娠有严重影响;心律失常产妇足月分娩率90.3%,其中剖宫产率32%,自然分娩率68%.新生儿低于胎龄儿为9.7%,新生儿窒息率4.5%.结论 大多数妊娠合并心律失常能顺利通过妊娠期和分娩期,对有器质性病变的严重心律失常宜采取有效措施,以确保母婴安全.

    作者:熊鹰;周娅 刊期: 2006年第12期

  • 靶向人端粒酶逆转录酶进行RNAi的逆转录病毒载体的构建

    目的 构建靶向性干扰人端粒酶逆转录酶表达的特异性小干扰RNA的真核表达载体.方法 采用PCR法分别扩增增强型绿色荧光蛋白的DNA序列、U6启动子序列和靶向性干扰人端粒酶逆转录酶的特异性小干扰RNA对应的DNA序列,随后将与之相应的DNA序列片断依次克隆人真核表达载体pLXSN中,并通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体进行鉴定.以荧光显微镜和利用流式细胞仪分析重组病毒表达EGFP蛋白的情况.以MTT方法检测初步分析重组病毒对人Hela细胞的RNAi效果.结果 限制性内切酶酶切和测序结果均表明成功构建了靶向人端粒酶逆转录酶的小干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U6-siTERT.以磷酸钙共转染法制备的重组逆转录病毒滴定了病毒滴度后,重组病毒感染人Hela细胞24 h时用流式细胞仪测得EGFP表达的阳性率为24.1%.重组逆转录病毒感染人Hela细胞48 h时,MTT实验测得细胞死亡率为53.2%.结论 成功构建了针对人端粒酶逆转录酶小干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U6-siTERT,并制备了重组逆转录病毒,初步观察了效应,为进一步利用小干扰RNA技术研究肿瘤的基因治疗奠定了基础.

    作者:王全师;王欣璐;李华;王巧愚;王全颖;杨广笑 刊期: 2006年第12期

  • 红霉素明胶微球制备工艺研究

    目的 通过正交设计筛选出制备红霉素明胶微球的佳工艺.方法 测定红霉素明胶微球的平均粒径、载药量、包封率,并对工艺重现性进行研究.结果 红霉素明胶微球的形态圆整,且药物确已包裹在微球中,微球的平均粒径为(14.15±0.20)μm,载药量(5.83±0.38)%,包封率为(65.70±0.56)%,7-28μm占总数的90.16%以上,佳工艺条件重现性良好.结论 获得了制备红霉素明胶微球较为满意的工艺.

    作者:李桃;杨帆;佃少娜;伍善广;陈颖;刘星辰;傅英梅 刊期: 2006年第12期

  • KCNE2对Kv4.3通道功能的调节作用

    目的 研究KCNE2对人类心肌细胞瞬间外向钾电流的主要α亚基-Ky4.3功能的调节.方法 通过基因转染技术将Kv4.3或Kv4.3与KCNE2 cDNA转入COS-7细胞株,采用膜片钳全细胞记录方式记录通道电流.结果 KCNE2对Ky4.3功能有明显调控作用:减小Kv4.3通道电流密度;Ky4.3单独表达组通道电流密度为375.13±112.87 pA/pF(n=11),KCNE2与Ky4.3共表达组电流密度为152.96±33.71 pA/pF(n=16);减慢Kv4.3通道激活和衰减,在+60 mV电压刺激下通道激活达峰值的时间由4.82±0.32ms(n=11)延长至20.41±2.13ms(n=16),P<0.05;通道电压依赖性失活发生正向移位,半数失活电压由-53.62±1.24mV(n=8)移至-46.58±1.6mV(n=10);通道从失活中恢复的速度加快,恢复时间常数由193.43±17.98 ms缩短137.71±18.29 ms,(n=7,P<0.05).结论 KCNE2可能作为人类心肌细胞膜Kv4.3钾离子通道一个重要的辅助亚基-β亚基参与Ito通道功能的调节.

    作者:刘杰;邓建新;潘秉兴;黄巧冰 刊期: 2006年第12期

  • MFAC治疗初发难治性CD33+急性淋巴细胞白血病1例报告

    MFAC方案由抗CD33单抗及FLAC(氟达拉滨、阿糖胞苷、环孢素A)组成,我们应用MFAC成功诱导治疗1例初发难治CD33+急性淋巴细胞白血病(ALL),现报告如下.

    作者:翁建宇;杜欣 刊期: 2006年第12期

  • 严重腹腔感染时肠黏膜β-catenin的表达及意义

    目的 探讨严重腹腔感染时大鼠肠黏膜β-连环蛋白(β-cat)表达的变化规律及意义.方法 健康成年Wistar大鼠40只,随机分为空白对照组(仅行单纯剖腹手术)和腹腔感染[采用盲肠结扎加穿孔法(CLP)制作严重腹腔感染模型]术后12、24、48 h组,每组10只,应用免疫组织化学及RT-PCR检测大鼠小肠隐窝严重腹腔感染前后β-cat表达的变化,以及严重腹腔感染后不同时期β-catmRNA水平的改变.结果 正常大鼠肠黏膜隐窝底部细胞中β-cat仅有微弱表达,而感染后肠黏膜隐窝底部细胞中强表达β-cat;RT-PCR结果表明与对照组比较,β-catmRNA在CLP术后12 h明显上升(0.74±0.10vs0.52±0.06,P<0.01),在CLP术后24 h后达到峰值(0.90±0.09vs0.52±0.06,P<0.01),随后逐渐下降,到48 h仍显著高于对照组(0.80±0.09vs0.52±0.06,P<0.01).结论 严重腹腔感染早期可诱导β-cat表达,提示β-cat可能与肠上皮干细胞的增殖分化密切相关.

    作者:刘晋峰;吴承堂 刊期: 2006年第12期

  • 颈动脉粥样硬化性狭窄的血管内支架治疗

    目的 总结32例颈动脉粥样硬化性狭窄血管内支架治疗的经验.方法 经筛选的32例症状性颈动脉粥样硬化性狭窄患者,临床表现为反复的脑缺血发作或脑梗死,在路径图指引下将过滤伞放入狭窄远端并释放,视情决定是否行后扩张,对病人随访5-18月,平均10.7月,均未再有脑缺血发作或脑梗死,临床症状明显改善.结果 无手术失败,支架定位准确.32例共41处狭窄成功植入自膨式支架41枚,平均狭窄程度从(76±10)%降至(15±8)%.结论 血管内支架治疗是治疗颈动脉粥样硬化性狭窄的安全有效手段.

    作者:林爱龙;马廉亭;李俊;余泽;秦尚振;李爱冰;林俊明;宋朝理 刊期: 2006年第12期

  • 多表位HBV重组DNA疫苗的构建与免疫效果评价

    目的 探讨多表位乙型肝炎DNA疫苗诱导特异性细胞免疫应答及其治疗慢性乙型肝炎的潜能.方法 筛选一组HBV的表位,并进行优化组合,辅以一定的旁侧序列,并合成目的基因片段HS.将它插入可人用的真核表达载体pVAX1中,构建出重组质粒PVAX-HS.通过重组质粒免疫小鼠,观察免疫动物体内CTL.结果 酶切结果显示成功构建了PVAX-HSDNA疫苗,ELISPOT测定证实其可以在小鼠体内诱导产生特异性T细胞,51Cr释放实验证实,所诱导的T细胞中具有很强的CTL活性.结论 PVAX-HS DNA疫苗免疫可诱导特异性细胞免疫应答,具有慢性病毒性乙型肝炎治疗性疫苗的潜能.

    作者:郭妍;王菊芳;罗小春;苏瑾;马骊;张阳德 刊期: 2006年第12期

南方医科大学学报杂志

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