学术投稿

应用抗SjP38的单克隆抗体建立血吸虫感染的胶体金免疫层析检测体系

吴锦雅;杨培良;周晓红;李华;陈晓光

关键词:血吸虫, 日本, P38, 单克隆抗体, 胶体金免疫层析方法
摘要:目的建立一种检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析方法.方法将已获得的单抗用protein-G亲和层析纯化,通过间接ELISA测定每株单抗的亲和常数.按改良过碘酸钠标记法,8株单抗标记辣根过氧化物酶(HRP)后进行不同株单抗配对,选出亲和力高、稳定性强的单抗配对组合.胶体金标记4株抗体,选择佳反应模式,建立胶体金免疫层析方法,并对弓形虫感染鼠血样、血吸虫感染前和感染后2、3、4、5、6周的鼠血样进行检测.结果 8株抗SjP38单克隆抗体经纯化后纯度达95%以上,其亲和常数介于1×10-8mol/L~2.82×10-10mol/L.根据配对实验,1A6与9H6、1A6与9G7、6G12与9H6、6G12与9G7以及9H6与9G7为佳配对组合.标记1A6、6G12、9H6与9G7这4株单抗后筛选出佳反应模式,即以9G7为包被抗体,包被浓度为2.5μg/μl;当1A6为金标抗体,抗体稀释浓度为1:4时,检测效果佳.对rSjp38的低检测量为12.5 ng/ml.抗检测感染3、4、5、6周小鼠血清,阳性率分别为40%、50%、60%、80%,而弓形虫感染鼠和血吸虫感染前小鼠血样的检测结果为100%阴性.结论通过抗体配对、佳包被量和金标抗体稀释倍数条件的优化,建立了快速、简便、特异的胶体金免疫层析方法,自制的rSjP38试纸条能检测血吸虫早期感染鼠血清中的循环抗原SjP38.
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    作者:王斌会;俞守义 刊期: 2005年第05期

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    作者:梁振涛;郭军;余小平;张斌;张卫星;朱仲生;罗华;黄磊 刊期: 2005年第05期

  • 高盐对SD大鼠肾脏骨调素mRNA表达的影响

    目的观察高盐饮食对大鼠肾脏骨调素mRNA及其蛋白表达的影响,旨在研究高盐对大鼠肾脏的损伤作用.方法选取10周龄正常盐饮食雄性Sprague-Dawley大鼠48只,随机分为高盐(4%NaCl)或正常盐(0.6%NaCl)饮食组,每组24只.每周测量大鼠鼠尾血压、体质量.于第4、8、12周末每组各处死6只大鼠,测量大鼠肾质量.采用免疫组化方法测定大鼠肾脏OPN表达;荧光定量PCR方法测定大鼠肾脏骨调素mRNA表达.结果两组大鼠血压、体质量及肾质量/体质量比无明显差异(P<0.05),12周后高盐饮食大鼠肾脏骨调素mRNA(0.27±0.16vs 0.15±0.13,P<0.05)及其蛋白表达明显升高(0.78±0.15vs 0.61±0.P<0.01),与正常盐饮食大鼠比较有显著统计学差异.结论高盐饮食摄人增加大鼠肾脏骨调素mRNA及其蛋白表达,表明高盐对大鼠肾脏有一定损伤作用,并且这种损伤作用不依赖于大鼠血压升高.

    作者:郑勇;刘治全;叶涛;何岚;王毅;方园;李建宁;刘萍;叶枫 刊期: 2005年第05期

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    作者:许辉;肖建秋 刊期: 2005年第05期

  • 成人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的逆转化现象

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    作者:姚晓黎;张成;冯善伟;冯慧宇;刘祖国;邓宇斌 刊期: 2005年第05期

  • 宫颈癌腔内放射治疗的光子运输

    子宫颈癌是我国常见的妇科恶性肿瘤之一,每年新发病例为13万左右,对妇女健康构成严重的威胁.目前临床治疗宫颈癌仍是行手术、放疗、化疗三者综合治疗,放疗扮演着重要的角色.只有提高放疗水平,才能提高患者的生存率,而准确的放疗剂量资料,来源于直接测量.由于女姓盆腔及周围组织的解剖学结构复杂,在实施放射测量过程中需要一系列测量设备、实验技术、照射参数等等,测量成本高,工作程序繁琐.本工作采用随机光子跟踪模拟方法,进行宫颈癌腔内放射治疗时组织中光子通量的计算,简单、灵活、准确、受条件影响不大,对复杂的女性盆腔结构、组织参数随能量的剧烈变化及散射各向异性均能很好地处理,值得推广.

    作者:徐海荣 刊期: 2005年第05期

  • 钩吻素子对免疫磁珠分离纯化的小鼠CD4+T细胞体外增殖的影响

    目的探讨小鼠脾脏CD4+T细胞的分离方法,观察钩吻素子(Kou)对小鼠脾脏CD4+T细胞体外增殖的影响.方法以免疫磁珠分选法从小鼠脾脏细胞中分离CD4+T细胞,流式细胞术检测所得细胞的纯度,台盼蓝法检测细胞活力.将10~320μg/ml Kou分别作用于经刀豆蛋白A或植物血凝素刺激的小鼠T淋巴细胞,四唑盐比色法检测细胞增殖情况,用酶联免疫法检测细胞上清中IL-2的含量.结果经过流式细胞仪测定分离后的小鼠脾脏CD4+T细胞纯度达到90.3%±5.8%:0.2%台盼兰染色细胞活力为94.9%±3.6%;增殖试验表明分离后未加Kou的CD4+T细胞对刀豆蛋白A、植物血凝素的刺激保持了良好的增殖能力,当浓度范围为20~320μg/ml时,Kou均能抑制淋巴细胞的增殖(P<0.05),且表现出一定的剂量相关性;不同浓度的Kou(20、100、200μgm1)作用后,CD4+T细胞培养上清中的IL-2水平明显低于对照组(P<0.05).结论免疫磁珠阴性分选法操作简单、快速,可获得较高纯化率、有活性的CD4+T细胞;Kou明显抑制小鼠CD4+T淋巴细胞增殖反应,此抑制作用可能与Kou抑制小鼠CD4+T细胞IL-2的分泌及免疫抑制作用相关.

    作者:王志睿;黄昌全;张忠义;张兰兰;林敬明 刊期: 2005年第05期

  • 晚期氧化蛋白产物通过活性氧诱导单核细胞分泌肿瘤坏死因子

    目的探讨晚期氧化蛋白产物(AOPP)对单核细胞分泌肿瘤坏死因子(TNFα)的影响及可能机制.方法以THP-1和人外周血单核细胞为单核细胞模型,与用次氯酸氧化牛血清白蛋白(BSA)制备的AOPP-BSA共同培养,用ELISA法检测培养上清TNFα的释放量,用VICTOR Wallac1420多标记分析系统检测细胞氧化2,7-二氢二氯荧光素产生的荧光量反映活性氧的产生量:用抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC),NADPH氧化酶抑制剂apocynin和P38磷酸化抑制剂SB203580预处理细胞,探讨AOPP诱导单核细胞分泌TNFα的可能机制.结果AOPP-BSA能诱导单核细胞TNFα的分泌和细胞内活性氧(ROS)的产生.用PDTC预处理细胞,可以清除AOPP-BSA诱导产生的ROS,同时抑制TNFα的分泌.用apocynin抑制NADPH氧化酶及用SB203580抑制P38磷酸化均能有效地抑制AOPP-BSA诱导的TNFα分泌.结论 AOPP可能通过激活单核细胞NADPH氧化酶,释放ROS,使P38磷酸化,导致TNFα的分泌.

    作者:张志辉;刘尚喜;侯凡凡;田建伟;王力;刘志强;陈瑗 刊期: 2005年第05期

  • 双阴性选择法纯化培养人骨髓多能成体祖细胞

    目的建立体外分选纯化及培养人骨髓来源多能成体祖细胞(MAPCs)的方法.方法取健康成人志愿者适量骨髓采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞,贴壁培养后,将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45、血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)负分选,流式细胞术鉴定分选后细胞纯度;对传代到不同阶段的细胞进行CD45、GlyA流式细胞分析,初步了解MAPCs在培养、增殖过程中的免疫学稳定性.结果通过miniMACS分选,平均每1×106/ml骨髓贴壁细胞可分选出约(5~10)×104/ml的MAPCs,分选前后细胞活力分别为(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,无明显差异;自制的培养基培养分选后的MAPCs生长良好,长传代到第16代;流式细胞仪分析获取的CD45、G1yA-细胞纯度大于98%;流式细胞仪分析传代第4、8、12代MAPCs,CD45-、G1yA-细胞纯度大于98%.结论CD45、GlyA miniMACS负分选可从骨髓中分离高纯度的MAPCs;MAPCs在本室自制的人MAPCs培养基中体外有较强的增殖能力,且能保持较长时间的稳定状态.

    作者:慕宁;高毅;唐力军 刊期: 2005年第05期

  • 具有免疫反应性的弓形虫多表位抗原在大肠杆菌中的可溶性表达和鉴定

    目的获得弓形虫多表位基因在原核系统中可溶性表达产物,为弓形虫病重组抗原试剂盒的制备及疫苗的研究奠定基础.方法以PCR法扩增弓形虫多表位基因,使其两端带有与载体pET32a相匹配的酶切位点,插入载体pET32a,酶切并测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行诱导,SDS-PAGE分析和鉴定该基因的表达水平、表达产物的可溶性及其相对分子质量,Western-blot分析表达产物的免疫反应性.结果该基因在原核表达系统中经诱导,得到了Mr31000的可溶性融合表达产物.经Ni-NTA纯化,纯度可达90%以上.免疫印迹实验表明该产物能够被弓形虫B36感染的小鼠血清和弓形虫RH感染的兔血清特异识别.结论弓形虫多表位基因在原核中的可溶性表达产物在弓形虫病诊断及疫苗研究中有潜在的应用价值.

    作者:杨培梁;陈晓光;王元占;李华;周晓红;吴焜;言慧 刊期: 2005年第05期

  • 超声诊断近端指间关节伸指肌中央腱断裂的临床研究

    目的从临床上评价超声检查对诊断近端指间关节伸指肌中央腱断裂的准确性.方法 67名近端指间关节受伤的病人接受了超声检查.超声采用5~10MHz实时线性变曲探头.并采用了3种临床体格联合检查方法,对伤情进行了判断.以手术探查结果为标准,对超声检查结果和临床体格检查结果进行了比较.结果手术探查结果证实39名病人有伸指肌中央腱断裂.超声检查结果与手术探查结果有非常好的一致性.超声检查和临床体格检查的敏感性分别为100%和89.74%,特异性为96.4%和82.14%.两种检查方法经统计学处理有显著差异(P<0.01).结论超声检查是一种非侵入性早期准确诊断近端指间关节伸指肌中央腱断裂的方法.

    作者:杨华;周初松 刊期: 2005年第05期

  • 定量测定血清心肌肌钙蛋白Ⅰ、肌红蛋白在急性心肌梗死诊治中的应用

    目的探讨心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)、肌红蛋白(Mb)两种生化指标在急性心肌梗死诊治中的应用价值.方法对胸痛发作后2~4 h的50例急性心肌梗死患者,定量检测血清cTnI、Mb、肌酸激酶(CK)和肌酸激酶同功酶(CK-MB)浓度,并对结果进行统计分析.结果急性心肌梗死患者Mbc、TnI、CK、CK-MB明显升高;峰值时间:Mb,(8±2.2)h;CK-MB,(18.1±3.2)h;CK,(19.4±4.1)h;cTnI,(18.6±2.9)h.病情恶化时各项指标持续上升,病情好转时降至正常范围.对照组的cTnI、Mb、CK和CK-MB4项指标均正常.结论 cTnI是诊断急性心肌梗死较理想的指标,同时Mb可对急性心肌梗死的早期诊断提供一种快速、可靠的生化指标,具有临床应用价值.

    作者:肖洪广;黄泽红;刘汉欣;林勇平 刊期: 2005年第05期

  • 幽门螺杆菌热休克蛋白60脂质体疫苗的制备及其免疫预防作用

    目的探讨制备脂质体包裹重组幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白60(Hsp60)口服疫苗的方法,并用Hp感染的小鼠模型评价其在预防Hp感染中的作用.方法将PET-22(+)/Hsp60在BL21(DE3)大肠杆菌表达,Ni-NTA琼脂糖树脂纯化Hsp60重组蛋白,用薄膜分散法制备以卵磷脂和胆固醇为膜组分包裹的Hsp60重组蛋白口服疫苗,并用透射电镜测定其粒径.75只BALB/C小鼠分为5组,分别通过灌胃方法给予PBS、空白脂质体、Hsp60重组蛋白+霍乱霉素(CT)、脂质体包裹Hsp60重组蛋白、脂质体包裹Hsp60重组蛋白+CT,每周1次共4次,末次攻击2周再用活Hp攻击3次,3周后处死小鼠,行胃组织快速尿素酶试验、Hp的定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分.结果可溶性表达产物占全菌总蛋白的27%,经纯化获得纯度为95%的重组蛋白,制备的脂质体粒径为(0.7±0.4)μm.PBS组和空白脂质体组保护率均为0,而Hsp60重组蛋白+CT组、脂质体包裹Hsp60重组蛋白组、脂质体包裹Hsp60重组蛋白+CT组的保护率分别为73.3%、66.7%和86.7%,且均能使免疫小鼠胃粘膜Hp感染数目明显减少,炎症反应减轻.结论口服脂质体能分地代替免疫佐剂,作为Hp疫苗的免疫佐剂,将具有广泛的应用前景.

    作者:黄文;白杨;王继德;武金宝;李国锋;张卫民;周殿元 刊期: 2005年第05期

  • 氯沙坦对犬缺血再灌注心肌损伤的保护作用

    目的探讨氯沙坦对犬在体心肌缺血再灌注时心肌损伤的保护作用.方法 16只健康家犬,分为2组:(1)对照组(n=8),阻断左前降支主干30 min后恢复前降支血流30 min.应用单相动作电位记录技术,同步记录犬在体心肌再灌注时单相动作电位及体表心电图;(2)氯沙坦组(n=8):氯沙坦5 mg/(kg·d)经胃管灌入,持续2周后开胸,缺血再灌注方法及观察指标同对照组.结果再灌注30 min内,对照组8只犬中有5只出现了早期后除极(EAD)和再灌注室性心律失常,再灌注心律失常发生率为62.5%;氯沙坦组3只犬出现EAD和再灌注室性心律失常(37.5%,P<0.05),氯沙坦组EAD和心律失常发生率较对照组明显减小(P<0.01).结论氯沙坦可抑制再灌注时EAD的发生,可能因此而减少再灌注心律失常的发生.

    作者:杨云;霍志成;彭健;贾满盈;黄铮;王智明;陈玉兰 刊期: 2005年第05期

  • GST-PPARγC1原核表达载体的构建、表达及抗GST-PPARγC1多克隆抗体的制备

    目的在大肠杆菌中表达过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1(PPARγC1)与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并制备抗PPAR γC1的多克隆抗体.方法从肝癌细胞系Hep G2提取总RNA,用RT-PCR扩增出PPAR γ C1 cDNA的编码序列,克隆人表达载体pGEX-4T-1中,重组载体在酶切鉴定后,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-PPARγC1蛋白,SDS-PAGE分析表达产物.通过亲和层吸法纯化表达的GST-肿ARγC1融合蛋白,并以此为抗原制备多克隆抗体.Westernblotting检测重组抗原的免疫活性.结果经测序、酶切鉴定证明,PPARγC1基因已正确插入到pGEX-4T-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子量为44000的融合蛋白.Western blotting鉴定所制备的多克隆抗体可以与PPARγC1特异性结合.结论PPARγC1片段在大肠杆菌中的成功表达及制备得到的多克隆抗体,为检测PPARγC1及其在其他组织中的表达提供了一种检测途径.

    作者:张燕;薛耀明;郭爱林;张文敏 刊期: 2005年第05期

  • CT的空间分辨力测量技术及测试体模研究

    目的采用主观法和客观法测试CT机的空间分辨力,探讨与空间分辨力相关的各项参数.方法采用Catphan500和自制体模对2台CT在不同条件下进行了测试.结果分别得出了线对法和MTF方法下的结果.结论每种测试方法各有优缺点,有多种因素影响CT空间分辨力.

    作者:李萍;余晓锷;杨克柽;占杰 刊期: 2005年第05期

  • 输卵管原因不孕患者IVF-ET周期中子宫内膜的超声监测及年龄对妊娠的预测价值

    目的评价输卵管原因不孕患者IVF-ET中子宫内膜的超声监测及年龄对妊娠的预测价值.方法输卵管原因不孕妇女305例,男方精液正常,采用长周期控制性超促排卵方法,于hCG注射日行阴道超声监测子宫内膜厚度、回声类型及临床妊娠情况.结果妊娠组与未妊娠组子宫内膜厚度、内膜回声类型均无差异,但是妊娠所需的子宫内膜厚度至少为7 mm;而且20~34岁组的妊娠率高于≥35岁以上组.结论 hCG日超声监测子宫内膜厚度与回声类型对ⅣF-ET结局无明显预测性,但妊娠所需的子宫内膜厚度至少为7 mm,20~34岁组的妊娠率高于≥35岁以上者.

    作者:刘红梅;邢福祺;陈士岭;李红 刊期: 2005年第05期

  • 经左锁骨下静脉起搏脉冲引导紧急床边临时心脏起搏

    目的经左锁骨下静脉途径研究起搏脉冲引导行紧急床边临时心脏起搏技术的优越性及可行性.方法以Seldinger法穿刺左锁骨下静脉置入鞘管.设置起搏器频率超过患者自主心率20次/min、输出电流为5 mA、感知电压为3mV,沿鞘管推送电极至心电监护显示脉冲信号及起搏心律.结果 18例患者获良好的起搏效果(操作时间5~10min,平均6.9 min).1例患者开始时起搏效果不良,约2 h后好转;2例患者起搏效果差;后3例操作时间均超20 min.21例患者术后均无并发症.结论由起搏脉冲引导、经左锁骨下静脉行紧急床边临时心脏起搏起效迅速、成功率高且较安全.

    作者:马明远;誉铁鸥;方滨;温伟标;毛克江 刊期: 2005年第05期

  • 应用抗SjP38的单克隆抗体建立血吸虫感染的胶体金免疫层析检测体系

    目的建立一种检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析方法.方法将已获得的单抗用protein-G亲和层析纯化,通过间接ELISA测定每株单抗的亲和常数.按改良过碘酸钠标记法,8株单抗标记辣根过氧化物酶(HRP)后进行不同株单抗配对,选出亲和力高、稳定性强的单抗配对组合.胶体金标记4株抗体,选择佳反应模式,建立胶体金免疫层析方法,并对弓形虫感染鼠血样、血吸虫感染前和感染后2、3、4、5、6周的鼠血样进行检测.结果 8株抗SjP38单克隆抗体经纯化后纯度达95%以上,其亲和常数介于1×10-8mol/L~2.82×10-10mol/L.根据配对实验,1A6与9H6、1A6与9G7、6G12与9H6、6G12与9G7以及9H6与9G7为佳配对组合.标记1A6、6G12、9H6与9G7这4株单抗后筛选出佳反应模式,即以9G7为包被抗体,包被浓度为2.5μg/μl;当1A6为金标抗体,抗体稀释浓度为1:4时,检测效果佳.对rSjp38的低检测量为12.5 ng/ml.抗检测感染3、4、5、6周小鼠血清,阳性率分别为40%、50%、60%、80%,而弓形虫感染鼠和血吸虫感染前小鼠血样的检测结果为100%阴性.结论通过抗体配对、佳包被量和金标抗体稀释倍数条件的优化,建立了快速、简便、特异的胶体金免疫层析方法,自制的rSjP38试纸条能检测血吸虫早期感染鼠血清中的循环抗原SjP38.

    作者:吴锦雅;杨培良;周晓红;李华;陈晓光 刊期: 2005年第05期

  • 微囊藻毒素LR对小鼠的急性毒性研究

    目的了解微囊藻毒素对小鼠的急性损伤作用.方法以BALB/C小鼠为材料,腹腔注射22μg./kg·b.w.和43μg/kg·b.w.剂量的微囊藻毒素LR,测定脏器系数和一系列生化指标.结果肾脏指数与肝脏指数明显增加,表明两种器官都受到损伤;血清中天冬氨酸转氨和丙氨酸转氨酶活力上升,尿素含量下降预示着肝脏损伤,尿酸含量上升则预示肾脏损伤的发生.结论肾脏也可能是易受微囊藻毒素损伤的器官.

    作者:雷腊梅;宋立荣 刊期: 2005年第05期

南方医科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学