学术投稿

低温缺氧条件下脂质体介导的寡核苷酸对人脐静脉内皮细胞-304的转染

丰贵文;于立新;张宏涛;赵显国

关键词:脐静脉内皮细胞, 低温缺氧保存, 脂质体, 寡核苷酸, 转染效率
摘要:目的研究在Euro-Collins溶液(ECs)中,低温(4℃)缺氧条件下体内阳离子脂质体转染剂(In vivo liposome)介导NF-κB诱捕物寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)在人脐静脉内皮细胞株ECV-304中的转染效率.方法 (1)将ECV-304在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中以37℃、5%CO2的条件培养,待生长至单层融合后,进行试验.(2)使用前配制脂质体-ODN复合物,脂质体与ODN的+/-电荷比率为2.(3)应用荧光显微镜和流式细胞仪,观察在ECs中、4℃条件下,ODN浓度分别为0.50、0.75、1.00、1.25μmo1/L时,缺氧保存2、4、6、8 h后ECV-304的平均荧光强度(MFI)和ODN的胞内分布;同时设立裸ODN转染为对照组,观察对ECV-304的转染效率.结果在ECs中、4℃缺氧保存条件下,随着保存时间的延长和脂质体-ODN浓度的升高,ECV-304的MFI增强,保存6 h后MFI基本达到了大强度,并且大部分ODN均位于细胞核内;而ODN的细胞摄取率无差异.但与裸转染相比,MFI和细胞摄取率均有显著差异性.结论在ECs中和低温缺氧条件下,脂质体可以高效地将NF-κB decoyODN转染到ECV-304细胞核,为供体器官在基因调控水平的保护研究提供了实验依据.
南方医科大学学报杂志相关文献
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    目的观察白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)抑制大鼠高危角膜移植后免疫排斥反应、促进植片存活的作用.方法对40只SD大鼠(40眼)用缝线法诱导角膜新生血管增生,选取其中的30只大鼠(30眼)并随机分为实验Ⅰ、Ⅱ组及对照组Ⅲ组,每组均接受同种异系(Wistar大鼠)供体角膜,行穿透性角膜移植术.实验组于术后第1日起分别滴用50μg/ml的IL-lra滴眼液(Ⅰ组)和1%的CsA滴眼液(Ⅱ组),每日3次.受试动物术后均每日滴用典必殊滴眼液及托品卡胺滴眼液3次,连续14 d.术后比较各组大鼠免疫排斥反应发生的时间,对角膜植片存活情况进行评分,观察其效果.结果两实验组角膜植片平均存活时间分别为(12.00±1.50)d和(10.44±1.13)d,明显高于对照组(8.00±1.25)d,差异有显著性(P<0 01);两实验组间比较,差异亦有显著性(P<0 01).结论 IL-lra可抑制高危角膜移植后的免疫排斥反应,减少新生血管的生成,减轻免疫性炎性反应,延长角膜植片的存活时间.

    作者:周瑾;陆晓和;党森涛;白浪;张永强;徐宁 刊期: 2004年第05期

  • 基于WBEM框架的通用医院网络管理技术研究与实现

    基于Web的网络管理系统WBEM是当前的研究方向.本文详细介绍了WBEM的相关标准规范、具体框架实现的技术原理以及已实现的管理模块.

    作者:满强;张海;郭文明 刊期: 2004年第05期

  • 含左氧氟沙星、力克肺疾、微卡方案治疗耐多药肺结核近期疗效观察

    目的观察含左氧氟沙星、力克肺疾、微卡联合化疗方案对耐多药肺结核(MDR-TB)的疗效.方法将97例MDR-TB患者随机分为治疗组(50例)和对照组(47例),对两组分别以不同的药物进行治疗,疗程均为6个月.观察两组痰菌阴转率、病变吸收率、空洞闭合率以及免疫功能改善情况.结果治疗组与对照组治疗后各项指标分别为:菌阴转率(84%vs 42%)、病灶显效率(83%vs 33%)、空洞闭合率(66%vs 26%).另外,治疗组CD3、CD4较治疗前明显升高;CD8较治疗前显著降低;CD4/CD8比值升高.两组药物不良反应率无显著性差异(30%vs 38%).结论应用三药联合化疗方案治疗MDR-TB疗效确切,可进一步应用于临床.

    作者:郑献民;李松梅;邢宝春 刊期: 2004年第05期

  • 人组织型纤溶酶原激活剂牛乳腺生物反应器的研究

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    作者:安靓;李振林;黄伟民;黄吴键;李进 刊期: 2004年第05期

  • 海马注射淀粉样蛋白β大鼠与正常大鼠脑蛋白质组双向电泳图谱比较

    目的比较海马注射淀粉样蛋白β(Aβ)大鼠与正常大鼠脑蛋白质组双向电泳(2-DE)图谱差异,从蛋白质水平初步探索阿尔茨海默病(AD)发病机制.方法以固相pH梯度等电聚焦为第1向,SDS-PAGE垂直电泳为第2向进行2-DE.以图像分析软件ImageMaster 2D-Elite分析电泳图谱.结果海马注射Aβ大鼠与正常大鼠脑组织2-DE图谱分别检出496和491个蛋白点.对2张电泳图进行匹配后,发现有11个蛋白点仅在海马注射Aβ大鼠脑蛋白2-DE图谱中表达,而有6个蛋白点只在正常对照大鼠检测到.部分蛋白在2组大鼠脑组织中含量发生了明显变化.结论初步建立了AD动物模型比较蛋白质组学的技术方法;差异点的发现为深入理解AD发病机制及研发新药提供了有益的线索.

    作者:杨国锋;王鲁宁;赵馨;聂永慧 刊期: 2004年第05期

  • 超声联合微泡对兔股动脉血栓的促溶作用

    目的探讨无溶栓药物条件下超声+微泡对血栓溶解的作用.方法建立12只兔双侧股动脉急性血栓模型,对其中6只经静脉注射白蛋白微泡,一侧动脉接受经皮超声(超声+微泡组)而另一侧接受无超声治疗(微泡组).另外6只兔一侧动脉只接受超声治疗(超声组)而另一侧不接受任何处理(对照组).结果单独超声治疗的6条动脉只有2条再通,接受超声+微泡治疗的6条动脉全部实现再通(P=0.014),微泡组和对照组动脉无再通.超声+微泡组动脉再通时间和残余血栓面积比值显著小于超声组(P=0.004,P=0.003).结论超声作用下经静脉注射微泡能有效促进在体动脉血栓溶解.这对临床急性血栓形成患者有潜在的应用意义.

    作者:区文超;修建成;谢晋国;查道刚;刘俭;郝睿;宾建平;刘伊丽 刊期: 2004年第05期

  • PTCA及支架植入术治疗心肌梗死并重症泵功能衰竭近期效果观察

    目的探讨经皮冠状动脉血管成形术(PTCA)及支架植入术治疗心肌梗死合并重症泵功能衰竭对心功能的影响.方法分析2000年5月~2002年1月在珠江医院成功接受PTCA及支架植入术治疗的73例心肌梗死合并重症泵功能衰竭患者的临床资料,按其是否有伴发症、血管病变程度及手术的复杂程度分组,比较术前和术后7 d的左室射血分数(LvEF).结果血管病变的程度和手术的复杂程度与是否有伴发症无相关(P>0.05).除合并慢性肾功能不全的患者,其余各组患者术前和术后7 d心功能的改善均有统计学意义(P<0.05).不同程度的血管病变和不同手术复杂程度的患者心功能术前和术后7 d的提高均有显著差异.结论 PTCA及支架植入术能明显改善心肌梗死合并重症泵功能衰竭患者近期的心功能.

    作者:万颂国;严全能 刊期: 2004年第05期

  • 特大面积烧伤伴重度吸入性损伤的救治

    目的总结特大面积烧伤伴重度吸入性损伤的治疗经验.方法回顾分析本科2000~2003年收治的18例特大面积烧伤伴重度吸入性损伤患者的临床资料.结果 18例患者中治愈15例,死亡3例,治愈率83.3%.结论综合运用各项治疗措施,如早期行预防性气管切开,积极气道灌洗、湿化及应用沐舒坦治疗,早期行肺保护性通气、应用生长激素等,可提高此类患者的治愈率.

    作者:邱学文;王甲汉;李志清 刊期: 2004年第05期

  • DNA芯片技术筛选K562肿瘤细胞特异性基因

    目的应用DNA芯片技术筛选人白血病K562细胞中的肿瘤特异性基因.方法提取正常人白细胞和K562细胞基因组DNA,并用限制性内切酶Sau3AI酶切.其中K562细胞基因组酶切产物经DNA聚合酶Ⅰ补平加A后克隆到T-载体,挑选阳性克隆,用PCR扩增,以纯化的PCR产物做探针,制备K562细胞基因组DNA芯片.正常人白细胞基因组酶切产物加上人工通用接头,用限制性标记技术标记上荧光标记物Cy3,与制备的K562细胞基因组DNA芯片杂交.结果芯片杂交结果经扫描分析,发现42个K562细胞肿瘤特异性基因,进一步用序列分析证实,其中有1个为BCR(breakpoint cluster gene)基因.结论我们自制的K562细胞基因组DNA芯片可以成功地用于筛选肿瘤特异性基因,为更好地从基因组水平研究肿瘤发生的分子机制提供了新的技术途径.

    作者:彭桂福;马文丽;宋艳斌;彭翼飞;石嵘;毛向明;郑文岭 刊期: 2004年第05期

  • hs-CRP与TC/HDL-C联合检测在冠心病诊断中的应用

    目的探讨超敏C-反应蛋白(hs-CRP)和总胆固醇/高密度脂蛋白胆固醇比值(TC/HDL-C)联合检测对冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)的预测价值.方法对240例CHD患者和40例健康对照者进行血清hs-CRP和TC、HDL-C测定、分析.结果 CHD患者血清hs-CRP浓度和TC/HDL-C比值均显著高于对照组(P<0.01).联合应用hs-CRP和TC/HDL-C比值2种指标判别,对CHD患者的诊断阳性率(95.0%)高于分别应用hs-CRP(85.0%)、TC/HDL-C(76.7%)单一指标.结论应用hs-CRP和TC/HDL-C比值联合检测,更有助于冠心病的早期诊断.

    作者:姜朝新;李志樑;严全能 刊期: 2004年第05期

  • 上颌骨骨折合并鼻泪管损伤1例报告

    1临床资料患者男,28岁,因高空坠地,右侧颌面部损伤半小时后急诊收入院.查体:一般情况较差,神志朦胧.右眼眉弓及右下唇可见多处软组织撕裂伤口,右侧上颌骨LefortⅢ型骨折,右侧下颌骨颏部骨折,咬合关系错乱.CT检查:右侧上颌窦前壁骨折,窦腔积血,右侧下颌骨颏部骨折.

    作者:李毅;李少萍;薛宏宇 刊期: 2004年第05期

  • 老年心脏病患者血清柯萨奇病毒B特异性抗体和核酸的检测

    目的了解柯萨奇B组病毒(CVB)在老年人中的感染状况,探讨CVB感染与心血管疾病的内在关系.方法采用间接酶联免疫吸附试验(EUSA)和反转录PCR方法对230例老年人进行了CVBIgG抗体和核酸检测.结果心脏病组CVBIgG抗体阳性率为43.61%(75/172),对照组抗体阳性率为15.52%(9/58),两者比较有显著性差异(P<0.01).CVBRNA检测结果显示,心脏病组阳性率为20.93%(36/172),对照组为3.45%(25/58),两者比较有显著性差异(P<0.01).结论在老年心脏病患者中CVB感染较为普遍,应引起重视.

    作者:孙芸芸;蒋文玲;罗宪玲 刊期: 2004年第05期

  • 骨髓间质干细胞移植治疗DKO鼠后肌组织的超微结构改变

    目的观察Duchenne型肌营养不良症模型DKO小鼠经骨髓间质干细胞(MSC)移植治疗后肌组织的超微结构改变情况.方法用体外培养纯化的第五代SD大鼠MSC经尾静脉移植治疗DKO鼠,在移植后15 w取鼠后肢腓肠肌组织进行透射电镜超微结构的观察.结果传5代后的MSC均一性好,免疫源性低;移植治疗后DKO鼠的运动功能有所改善,生存时间也有延长.肌组织的超微结构观察发现,肌细胞膜断裂、膜下组织分离水肿、核中移、局部肌原纤维松散、炎症细胞浸润和结缔组织增生等病变情况较对照鼠有改善,并出现肌膜下多个幼稚核融合现象.结论 MSC具有强大的可塑性,通过血循环可趋向病变肌组织并参与鼠肌萎缩组织的修复与再生作用.

    作者:李中;张成;陈国俊;刘晓蓉 刊期: 2004年第05期

  • 抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞侵袭表型和VEGF表达的影响

    目的探讨特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞侵袭表型和VEGF表达的影响.方法以脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,分别为CaSKi-R和CaSKi-P.测定CaSKi,CaSKi-R和CaSKi-P3种细胞的生长曲线、软琼脂克隆形成率和裸鼠体内成瘤性,RT-PCR检测3种细胞中VEGF的表达.结果 CaSKi、CaSKi-P细胞生长速率和软琼脂克隆形成率相近,CaSKi-R细胞的生长速度和软琼脂克隆形成率明显降低.CaSKi、CaSKi-P致瘤性无显著差异,而CaSKi-R致瘤性显著低于CaSKi(P<0.05).RT-PCR检测CaSKi-R细胞的VEGF mRNA的表达水平明显低于CaSKi、CaSKi-P细胞的表达,而后者的VEGF mRNA的表达水平相近.结论特异性抗HPV16E6核酶的导入降低了宫颈癌CaSKi细胞的增殖和侵袭表型,可能与宫颈癌CaSKi细胞内VEGF的表达下降有关.

    作者:刘柯;王丽莉;郑燕芳;张积仁 刊期: 2004年第05期

  • 泰索帝联合阿霉素治疗乳腺癌对心电图的影响

    目的探讨化疗药物泰索帝(taxotere)联合阿霉素一线治疗局部晚期或转移性乳腺癌对心电图的影响,并分析其临床意义.方法被确诊为局部晚期或转移性乳腺癌的250例患者,经静脉滴注泰索帝75 mg/m2和阿霉素5 mg/m2,每3周1次,每个疗程开始前和结束后各观测心电图1次,共动态观察10个疗程.结果 10个疗程结束后,250例患者中心率加快8例(3.2%),肢体导联QRS波低电压12例(4.8%),Q-T时间延长28例(18%),ST段压低18例(7.2%),T波低平29例(11.6%),T波倒置12例(4.8%),未发生变化143例(57.2%).结论化疗药物泰索帝和阿霉素对心脏有毒性,能够引起心包积液和心肌不同程度损伤,造成慢性心肌缺血缺氧,从而引起心电图QRS波群及ST-T的异常改变.

    作者:黄邹琴;李活霞;王嘉丽;万颂国 刊期: 2004年第05期

  • 腹腔镜检查对围绝经和绝经后妇女盆腔肿块的诊断价值

    目的评价腹腔镜检查对围绝经和绝经后妇女盆腔肿块的诊断价值.方法对1983年1月~2002年12月在我科就诊的117例围绝经期和绝经后妇女患盆腔肿块患者的腹腔镜检查结果进行回顾性分析.结果 117例盆腔肿块经腹腔镜检查,诊断出卵巢恶性肿瘤17例,输卵管癌2例;其余为良性肿瘤,并在腹腔镜下做了相应处理.结论对围绝经和绝经后妇女,腹腔镜检查是一种安全、诊断准确率高的检查方法,可及早明确肿块存在及其性质,有利于早期诊断、早期治疗.

    作者:苟学萍;徐惠成 刊期: 2004年第05期

  • 低温缺氧条件下脂质体介导的寡核苷酸对人脐静脉内皮细胞-304的转染

    目的研究在Euro-Collins溶液(ECs)中,低温(4℃)缺氧条件下体内阳离子脂质体转染剂(In vivo liposome)介导NF-κB诱捕物寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)在人脐静脉内皮细胞株ECV-304中的转染效率.方法 (1)将ECV-304在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中以37℃、5%CO2的条件培养,待生长至单层融合后,进行试验.(2)使用前配制脂质体-ODN复合物,脂质体与ODN的+/-电荷比率为2.(3)应用荧光显微镜和流式细胞仪,观察在ECs中、4℃条件下,ODN浓度分别为0.50、0.75、1.00、1.25μmo1/L时,缺氧保存2、4、6、8 h后ECV-304的平均荧光强度(MFI)和ODN的胞内分布;同时设立裸ODN转染为对照组,观察对ECV-304的转染效率.结果在ECs中、4℃缺氧保存条件下,随着保存时间的延长和脂质体-ODN浓度的升高,ECV-304的MFI增强,保存6 h后MFI基本达到了大强度,并且大部分ODN均位于细胞核内;而ODN的细胞摄取率无差异.但与裸转染相比,MFI和细胞摄取率均有显著差异性.结论在ECs中和低温缺氧条件下,脂质体可以高效地将NF-κB decoyODN转染到ECV-304细胞核,为供体器官在基因调控水平的保护研究提供了实验依据.

    作者:丰贵文;于立新;张宏涛;赵显国 刊期: 2004年第05期

  • 人外周血CD68+单核细胞体外的分选及诱导分化为破骨细胞

    目的建立高纯度人活性破骨细胞方法,用于对破骨细胞生物化学和分子生物学的研究.方法用免疫磁珠法在人类外周血单核细胞中分选出CD68+细胞,用流式细胞仪分析分选效能,体外在10-8mol/L地塞米松及25μg/L巨噬细胞集落刺激因子的培养条件下用16μg/L可溶性核因子κB受体活化子配体诱导(s-RANKL)分化,用降钙素受体抗体免疫组化染色及抗酒石酸磷酸酶染色鉴定,扫描电镜观察骨片贴壁细胞及骨吸收陷窝.结果分选获得CD68+单核细胞纯度为(93.06±0.61)%(n=4),经核因子κB受体活化子配体诱导后降钙素受体抗体免疫组化染色阳性,抗酒石酸磷酸酶染色,扫描电镜观察有骨吸收陷窝形成.结论人外周血单核细胞中CD68+细胞是破骨前体细胞,在RANKL在诱导下分化为成熟破骨细胞.

    作者:曾润铭;金大地;张忠民 刊期: 2004年第05期

  • 肾衰养真胶囊对慢性肾衰竭大鼠脂代谢紊乱的影响

    目的观察肾衰养真胶囊对慢性肾衰竭(CRF)大鼠脂代谢紊乱的治疗效果并探讨其可能机制.方法对50只SD雄性大鼠采用5/6肾切除法制作CRF大鼠模型,随机分为空白模型对照组、吉非罗齐治疗组及肾衰养真胶囊高、中、低剂量治疗组;另设正常对照组.于喂药4周后,观察各组脂谱及脂蛋白谱,并用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测心肌脂蛋白脂酶信使RNA(LPLmRNA)的表达.结果两药均能降低总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇,升高高密度脂蛋白胆固醇,同时LPLmRNA表达上调,肾衰养真胶囊各治疗组之间无差异.结论肾衰养真胶囊可通过促进LPLmRNA转录而调节血脂水平,改善脂蛋白谱,这可能是肾衰养真胶囊改善CRF大鼠脂代谢紊乱的机制之一.

    作者:李玉明;魏连波;袁钢;马志刚;黄琳 刊期: 2004年第05期

  • CT图像特征的自动获取与检索新方法

    目的自动获取CT图像特征,提出实现基于内容的CT图像数据库检索新方法.方法本研究针对CT医学图像,提出应用大期望分割算法来获取其区域特征,并组合感兴趣区域的累积直方图特征、纹理和形状信息构成检索的特征向量,从而把图像表征为特征空间中的一个向量集合.结果当向数据库提交查询图像时,经过特征匹配,终按相似度由大到小的顺序返回目标图像.结论实验结果表明,本研究提出的基于内容的CT图像检索方案在满足临床需求的同时,获得了较高的查询精度和效率.

    作者:周杰;冯前进;林亚忠;陈武凡 刊期: 2004年第05期

南方医科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学