学术投稿

低温缺氧条件下脂质体介导的寡核苷酸对人脐静脉内皮细胞-304的转染

丰贵文;于立新;张宏涛;赵显国

关键词:脐静脉内皮细胞, 低温缺氧保存, 脂质体, 寡核苷酸, 转染效率
摘要:目的研究在Euro-Collins溶液(ECs)中,低温(4℃)缺氧条件下体内阳离子脂质体转染剂(In vivo liposome)介导NF-κB诱捕物寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)在人脐静脉内皮细胞株ECV-304中的转染效率.方法 (1)将ECV-304在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中以37℃、5%CO2的条件培养,待生长至单层融合后,进行试验.(2)使用前配制脂质体-ODN复合物,脂质体与ODN的+/-电荷比率为2.(3)应用荧光显微镜和流式细胞仪,观察在ECs中、4℃条件下,ODN浓度分别为0.50、0.75、1.00、1.25μmo1/L时,缺氧保存2、4、6、8 h后ECV-304的平均荧光强度(MFI)和ODN的胞内分布;同时设立裸ODN转染为对照组,观察对ECV-304的转染效率.结果在ECs中、4℃缺氧保存条件下,随着保存时间的延长和脂质体-ODN浓度的升高,ECV-304的MFI增强,保存6 h后MFI基本达到了大强度,并且大部分ODN均位于细胞核内;而ODN的细胞摄取率无差异.但与裸转染相比,MFI和细胞摄取率均有显著差异性.结论在ECs中和低温缺氧条件下,脂质体可以高效地将NF-κB decoyODN转染到ECV-304细胞核,为供体器官在基因调控水平的保护研究提供了实验依据.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 消化道肿瘤患者肠道通透性研究

    目的测定晚期消化道肿瘤患者肠道通透性的改变,探讨消化道肿瘤是否影响肠粘膜屏障功能.方法健康志愿者、晚期消化道肿瘤患者各16名,每人口服乳果糖、甘露醇液后采集6 h尿样.尿样和乳果糖、甘露醇的标准样经肟化处理后通过气相色潜分析仪进行检测分析.结果甘露醇峰、乳果糖峰出峰时间稳定,峰面积与含量呈线性相关;消化道晚期肿瘤患者与健康志愿者尿样中的乳果糖含量和乳果糖/甘露醇比值存在显著差异(P<0.05),乳果糖含量增高,而甘露醇含量2组无显著差异.结论晚期消化道肿瘤患者肠粘膜通透性增加,存在肠粘膜屏障功能障碍.

    作者:姚玉川;陈村龙;王继德;张亚历;姜泊;熊德鑫 刊期: 2004年第05期

  • 尾加压素Ⅱ对培养的心脏成纤维细胞增殖和胶原基因表达的影响

    目的观察尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)在体外对乳鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖和Ⅰ型胶原(CoL-Ⅰ)基因表达的直接影响,以探讨UⅡ在心力衰竭心肌重塑中的作用.方法以胰酶消化和差速贴壁法分离和纯化SD乳鼠的CFs,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖,RT-PCR测定CoL-ⅠmRNA表达水平.结果 UⅡ对CFs增殖呈浓度依赖性,随着UⅡ作用浓度的增加,MTT光吸收值呈先升高后降低的趋势,其中1×10-8mol/L和1×10-9mol/L的UⅡ作用显著(P<0.05);1×10-7mol/L、1×10-8mol/L和1×10-9mol/L浓度的UⅡ能促进CFs的CoL-ⅠmRNA表达(P<0.01).结论 UⅡ可直接促进CFs的增殖及CoL-Ⅰ mRNA表达,作用大小与UⅡ浓度有关,提示UⅡ在心力衰竭心肌重塑的病理生理过程中可能发挥重要作用.

    作者:何艳华;洪介民;郭衡山;韦建瑞;陈辉;左辉华;李志樑 刊期: 2004年第05期

  • 含左氧氟沙星、力克肺疾、微卡方案治疗耐多药肺结核近期疗效观察

    目的观察含左氧氟沙星、力克肺疾、微卡联合化疗方案对耐多药肺结核(MDR-TB)的疗效.方法将97例MDR-TB患者随机分为治疗组(50例)和对照组(47例),对两组分别以不同的药物进行治疗,疗程均为6个月.观察两组痰菌阴转率、病变吸收率、空洞闭合率以及免疫功能改善情况.结果治疗组与对照组治疗后各项指标分别为:菌阴转率(84%vs 42%)、病灶显效率(83%vs 33%)、空洞闭合率(66%vs 26%).另外,治疗组CD3、CD4较治疗前明显升高;CD8较治疗前显著降低;CD4/CD8比值升高.两组药物不良反应率无显著性差异(30%vs 38%).结论应用三药联合化疗方案治疗MDR-TB疗效确切,可进一步应用于临床.

    作者:郑献民;李松梅;邢宝春 刊期: 2004年第05期

  • 骨髓间质干细胞移植治疗DKO鼠后肌组织的超微结构改变

    目的观察Duchenne型肌营养不良症模型DKO小鼠经骨髓间质干细胞(MSC)移植治疗后肌组织的超微结构改变情况.方法用体外培养纯化的第五代SD大鼠MSC经尾静脉移植治疗DKO鼠,在移植后15 w取鼠后肢腓肠肌组织进行透射电镜超微结构的观察.结果传5代后的MSC均一性好,免疫源性低;移植治疗后DKO鼠的运动功能有所改善,生存时间也有延长.肌组织的超微结构观察发现,肌细胞膜断裂、膜下组织分离水肿、核中移、局部肌原纤维松散、炎症细胞浸润和结缔组织增生等病变情况较对照鼠有改善,并出现肌膜下多个幼稚核融合现象.结论 MSC具有强大的可塑性,通过血循环可趋向病变肌组织并参与鼠肌萎缩组织的修复与再生作用.

    作者:李中;张成;陈国俊;刘晓蓉 刊期: 2004年第05期

  • hs-CRP与TC/HDL-C联合检测在冠心病诊断中的应用

    目的探讨超敏C-反应蛋白(hs-CRP)和总胆固醇/高密度脂蛋白胆固醇比值(TC/HDL-C)联合检测对冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)的预测价值.方法对240例CHD患者和40例健康对照者进行血清hs-CRP和TC、HDL-C测定、分析.结果 CHD患者血清hs-CRP浓度和TC/HDL-C比值均显著高于对照组(P<0.01).联合应用hs-CRP和TC/HDL-C比值2种指标判别,对CHD患者的诊断阳性率(95.0%)高于分别应用hs-CRP(85.0%)、TC/HDL-C(76.7%)单一指标.结论应用hs-CRP和TC/HDL-C比值联合检测,更有助于冠心病的早期诊断.

    作者:姜朝新;李志樑;严全能 刊期: 2004年第05期

  • 少酸链球菌性大量腹腔积液1例

    妇科腹腔大量积液多见于结核性和卵巢恶性肿瘤,致病菌为少酸链球菌者实属罕见.2003年3月10日,我科收治腹腔大量积液1例,术后积液经细菌学检查,培养结果为少酸链球菌,现报道如下.

    作者:张广亮;钱沁佳 刊期: 2004年第05期

  • 抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞侵袭表型和VEGF表达的影响

    目的探讨特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞侵袭表型和VEGF表达的影响.方法以脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,分别为CaSKi-R和CaSKi-P.测定CaSKi,CaSKi-R和CaSKi-P3种细胞的生长曲线、软琼脂克隆形成率和裸鼠体内成瘤性,RT-PCR检测3种细胞中VEGF的表达.结果 CaSKi、CaSKi-P细胞生长速率和软琼脂克隆形成率相近,CaSKi-R细胞的生长速度和软琼脂克隆形成率明显降低.CaSKi、CaSKi-P致瘤性无显著差异,而CaSKi-R致瘤性显著低于CaSKi(P<0.05).RT-PCR检测CaSKi-R细胞的VEGF mRNA的表达水平明显低于CaSKi、CaSKi-P细胞的表达,而后者的VEGF mRNA的表达水平相近.结论特异性抗HPV16E6核酶的导入降低了宫颈癌CaSKi细胞的增殖和侵袭表型,可能与宫颈癌CaSKi细胞内VEGF的表达下降有关.

    作者:刘柯;王丽莉;郑燕芳;张积仁 刊期: 2004年第05期

  • 低温缺氧条件下脂质体介导的寡核苷酸对人脐静脉内皮细胞-304的转染

    目的研究在Euro-Collins溶液(ECs)中,低温(4℃)缺氧条件下体内阳离子脂质体转染剂(In vivo liposome)介导NF-κB诱捕物寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)在人脐静脉内皮细胞株ECV-304中的转染效率.方法 (1)将ECV-304在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中以37℃、5%CO2的条件培养,待生长至单层融合后,进行试验.(2)使用前配制脂质体-ODN复合物,脂质体与ODN的+/-电荷比率为2.(3)应用荧光显微镜和流式细胞仪,观察在ECs中、4℃条件下,ODN浓度分别为0.50、0.75、1.00、1.25μmo1/L时,缺氧保存2、4、6、8 h后ECV-304的平均荧光强度(MFI)和ODN的胞内分布;同时设立裸ODN转染为对照组,观察对ECV-304的转染效率.结果在ECs中、4℃缺氧保存条件下,随着保存时间的延长和脂质体-ODN浓度的升高,ECV-304的MFI增强,保存6 h后MFI基本达到了大强度,并且大部分ODN均位于细胞核内;而ODN的细胞摄取率无差异.但与裸转染相比,MFI和细胞摄取率均有显著差异性.结论在ECs中和低温缺氧条件下,脂质体可以高效地将NF-κB decoyODN转染到ECV-304细胞核,为供体器官在基因调控水平的保护研究提供了实验依据.

    作者:丰贵文;于立新;张宏涛;赵显国 刊期: 2004年第05期

  • 反义hTERT体外抑制白血病细胞增殖的研究

    目的研究反义hTERT基因对白血病细胞体外增殖的抑制作用.方法体外通过SuperFect将已构建好的正、反义hTERT真核表达载体转染HL60白血病细胞,再经过G418及PCR筛选鉴定分别转入了正、反义hTERT载体的抗性克隆细胞HL60-s和HL60-as.随后运用实时荧光定量RT-PCR技术及TRAP-银染法对各组细胞内源性hTERTmRNA的表达情况及端粒酶的活性进行检测.同时还采用MTT法、双层软琼脂克隆形成试验、流式细胞术观察和分析反义hTERT对白血病细胞体外生长增殖活力的影响及是否能诱导瘤细胞的凋亡.结果与空白对照、正义hTERT组相比,反义hTERT能显著地降低HL60细胞内源性hTERT mRNA的表达(P<0.01)和下词端粒酶活性.当各组细胞传至第25代后,与HL60、HL60-s比较,HL60-as细胞的生长速度和集落形成能力明显地减慢和降低,同时伴有凋亡率的显著增加.结论反义hTERT在体外能抑制白血病细胞的生长增殖能力,其潜在、广谱的抗肿瘤作用的分子生物学机制可能是首先通过抑制和下调hTERT表达(端粒酶活性)而终引发瘤细胞衰亡的途径来实现的.

    作者:孙来保;李成荣;文剑明;王国兵;张萌;杨军;李若馨 刊期: 2004年第05期

  • CT图像特征的自动获取与检索新方法

    目的自动获取CT图像特征,提出实现基于内容的CT图像数据库检索新方法.方法本研究针对CT医学图像,提出应用大期望分割算法来获取其区域特征,并组合感兴趣区域的累积直方图特征、纹理和形状信息构成检索的特征向量,从而把图像表征为特征空间中的一个向量集合.结果当向数据库提交查询图像时,经过特征匹配,终按相似度由大到小的顺序返回目标图像.结论实验结果表明,本研究提出的基于内容的CT图像检索方案在满足临床需求的同时,获得了较高的查询精度和效率.

    作者:周杰;冯前进;林亚忠;陈武凡 刊期: 2004年第05期

  • 泰索帝联合阿霉素治疗乳腺癌对心电图的影响

    目的探讨化疗药物泰索帝(taxotere)联合阿霉素一线治疗局部晚期或转移性乳腺癌对心电图的影响,并分析其临床意义.方法被确诊为局部晚期或转移性乳腺癌的250例患者,经静脉滴注泰索帝75 mg/m2和阿霉素5 mg/m2,每3周1次,每个疗程开始前和结束后各观测心电图1次,共动态观察10个疗程.结果 10个疗程结束后,250例患者中心率加快8例(3.2%),肢体导联QRS波低电压12例(4.8%),Q-T时间延长28例(18%),ST段压低18例(7.2%),T波低平29例(11.6%),T波倒置12例(4.8%),未发生变化143例(57.2%).结论化疗药物泰索帝和阿霉素对心脏有毒性,能够引起心包积液和心肌不同程度损伤,造成慢性心肌缺血缺氧,从而引起心电图QRS波群及ST-T的异常改变.

    作者:黄邹琴;李活霞;王嘉丽;万颂国 刊期: 2004年第05期

  • 碱性大环内酯类抗生素的微生物受体竞争结合分析

    目的建立不同基质中大环内酯含量的分析方法.方法血清、尿液和组织样品经MSU缓冲液稀释萃取.谷物和预混饲料经甲醇-磷酸盐溶液提取后进行微生物受体竞争性结合反应分析,缓冲液M8可消除甲醇对结合反应的干扰.结果该法族特异性强,灵敏度和精密度高,血清、尿液、组织和谷物预混饲料的限量筛选浓度为200、200、100和1200ng/g(ng/ml),相对标准偏差<8%,可对大环内酯类药物进行总量测定.结论该方法准确、快速,能实现不同基质样品的高效定性和半定量筛选.

    作者:秦燕;张美金;林峰 刊期: 2004年第05期

  • 胸脐皮瓣的应用(附33例报告)

    1996年8月~2000年6月,我们采用胸脐皮瓣修复各种软组织缺损共33例,主要适应征是四肢复杂创伤或软组织肿瘤切除后所遗较大缺损,急诊或二期手术均可.胸脐皮瓣的血供主要源于腹壁下动脉的脐旁大皮穿支--胸脐支,后者于脐旁2cm穿出斜向肩胛下角方向与后肋间动脉吻合.皮瓣切取时先于腹直肌外下缘解剖腹壁下动脉,向下追至髂外动脉、向上于腹直肌内锐性分离腹壁下动脉,直至脐旁支处.受区感染创面或需肌肉填塞空腔,可携带部分腹直肌.待受区血管解剖完毕再断蒂,血管蒂尽可能长.本组切取皮瓣长度10~40 cm,宽度8~25 cm.33例均成活,成活率100%.供区皮瓣宽度10~12 cm以内者可直接缝合,瘢痕不易觉察.皮瓣宽度超过10~12 cm者,需植皮.术后随访2年,皮瓣无异常,供区创伤亦较小.胸脐皮瓣血管蒂解剖恒定且血管蒂较长、血管口径较粗、供皮范围较大,是修复四肢大面积软组织缺损的较好皮瓣.

    作者:张杏泉;王少东;范清宇;马保安;李钊 刊期: 2004年第05期

  • 应用根管钉-复合树脂桩核制作烤瓷长桥修复牙列缺损

    目的探讨保留更多残根、扩大桩核范围修复牙列缺损的新方法.方法应用多个预成根管钉-复合树脂桩核,制作烤瓷长桥,对40例牙列缺损的患者进行缺损修复.结果经随访2~4年,有37例修复效果良好,修复成功率达92.5%.结论保留多个残根,应用多个根管钉-复合树脂桩核,联合制作烤瓷长桥,是修复牙列缺损的一种行之有效的方法.

    作者:黄坚 刊期: 2004年第05期

  • 基于WBEM框架的通用医院网络管理技术研究与实现

    基于Web的网络管理系统WBEM是当前的研究方向.本文详细介绍了WBEM的相关标准规范、具体框架实现的技术原理以及已实现的管理模块.

    作者:满强;张海;郭文明 刊期: 2004年第05期

  • 人RHD基因外显子多态性研究

    目的研究人RHD基因外显子多态性,探讨中国人RhD阴性个体遗传学机制.方法用PCR-SSP法检测40例RhD(+)、120例RhD(-)和2例弱D型样本的10个外显子.结果 40例RhD阳性和2例弱D型样本均检出RHD基因的10个外显子,120例RhD阴性样本中28例样本的10个外显子全存在(占23.33%),19例样本10个外显子部分存在(占15.83%),大部分为中间缺失型,73例样本10个外显子全缺失(占60.835%).从120例RhD阴性样本中检出的19例Del型样本均能检出RHD基因的10个外显子.结论 RhD表型阴性个体的RHD基因外显子结构具有多态性,主要表现为RHD基因全缺失、RHD基因部分缺失、RHD基因不缺失3种.

    作者:周华友;兰炯采;王晓珠;王毅;樊红;孟庆宝;龚宏伟 刊期: 2004年第05期

  • 基底神经节区脑损害与汉语失写症关系的研究

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    作者:金梅;刘晓加;陆兵勋;尹文刚 刊期: 2004年第05期

  • 特大面积烧伤伴重度吸入性损伤的救治

    目的总结特大面积烧伤伴重度吸入性损伤的治疗经验.方法回顾分析本科2000~2003年收治的18例特大面积烧伤伴重度吸入性损伤患者的临床资料.结果 18例患者中治愈15例,死亡3例,治愈率83.3%.结论综合运用各项治疗措施,如早期行预防性气管切开,积极气道灌洗、湿化及应用沐舒坦治疗,早期行肺保护性通气、应用生长激素等,可提高此类患者的治愈率.

    作者:邱学文;王甲汉;李志清 刊期: 2004年第05期

  • 白细胞介素-1受体拮抗剂抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的实验研究

    目的观察白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)抑制大鼠高危角膜移植后免疫排斥反应、促进植片存活的作用.方法对40只SD大鼠(40眼)用缝线法诱导角膜新生血管增生,选取其中的30只大鼠(30眼)并随机分为实验Ⅰ、Ⅱ组及对照组Ⅲ组,每组均接受同种异系(Wistar大鼠)供体角膜,行穿透性角膜移植术.实验组于术后第1日起分别滴用50μg/ml的IL-lra滴眼液(Ⅰ组)和1%的CsA滴眼液(Ⅱ组),每日3次.受试动物术后均每日滴用典必殊滴眼液及托品卡胺滴眼液3次,连续14 d.术后比较各组大鼠免疫排斥反应发生的时间,对角膜植片存活情况进行评分,观察其效果.结果两实验组角膜植片平均存活时间分别为(12.00±1.50)d和(10.44±1.13)d,明显高于对照组(8.00±1.25)d,差异有显著性(P<0 01);两实验组间比较,差异亦有显著性(P<0 01).结论 IL-lra可抑制高危角膜移植后的免疫排斥反应,减少新生血管的生成,减轻免疫性炎性反应,延长角膜植片的存活时间.

    作者:周瑾;陆晓和;党森涛;白浪;张永强;徐宁 刊期: 2004年第05期

  • 人胎肺发育不同阶段端粒酶逆转录酶的表达及意义

    目的检测端粒酶逆转录酶(hTERT)在人胎肺发育不同阶段的表达特征,探讨其在胎肺上皮干细胞发育、分化过程中的作用及意义.方法对孕妇自愿捐献的胎龄为10~34周的引产胎儿肺组织,用免疫组织化学技术检测hTERT的表达.结果胎龄10周的肺组织即检测到hTERT的表达,主要表达于正在分支的支气管原始上皮细胞浆内.随着胎肺发育,阳性表达的细胞逐渐向远端呼吸道迁移.到发育晚期,呼吸道上皮hTERT表达较前逐渐减弱,强阳性表达的细胞仅集中在细支气管的基底膜和少数新生肺泡内,在形态上类似基底细胞和Ⅱ型肺泡细胞.结论在人胎肺发育中hTERT的表达可能是肺上皮干细胞或祖细胞维系其未分化状态和自我更新能力的重要标志;对保证支气管上皮和肺泡上皮细胞持续正常分化和再生,维持上皮组织的完整性起着重要的作用.

    作者:孔祥永;安靓;陶少华;陈玥;杜江;封志纯 刊期: 2004年第05期

南方医科大学学报杂志

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