学术投稿

重组腺病毒驱动KDR-CDglyTK融合基因系统对MCF-7细胞及血管内皮细胞的靶向杀伤作用

苏国强;黄宗海;刘志锋;郭爱华;俞金龙;厉周;宋彗娟

关键词:乳腺肿瘤, 血管内皮, 血管内皮生长因子受体启动子, 基因治疗, 腺病毒
摘要:目的探讨腺病毒介导血管内皮生长因子受体(KDR)启动子驱动的CDglyTK融合基因体系对人乳腺癌细胞株MCF-7及血管内皮细胞(ECV304)选择性杀伤作用.方法将质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK在293细胞内包装、扩增后,体外感染表达KDR的MCF-7、ECV304细胞株和对照组不表达KDR的LS174T细胞株,并给予不同浓度的前药5-FC和/或GCV,观察该体系对不同细胞株的杀伤效应及其旁观者效应.并通过流式细胞仪检测前药对瘤细胞周期的影响.结果所得病毒滴度为2.0×1012pfu/ml.3种细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的递增而增加,当感染复数(MOI)为200时,所有细胞株均达约100%感染.以MOI为100的重组体分别感染各细胞株表现出对前药的不同敏感性:表达KDR的MCF-7细胞和ECV304细胞对前药具有较高的敏感性,二者敏感性差异无显著性意义(P=1.00);与前2者相比,不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感(P<0.001).CDglyTK融合基因的疗效优于任一单自杀基因(P<0.001).将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同混合培养,观察到该体系明显的旁观者效应.流式细胞术检测表明该体系抑制MCF-7细胞DNA的合成,表现为G1期细胞比率增多及S期细胞减少(P<0.001).结论KDR基因启动子调控的CDglyTK融合基因体系可选择性杀伤乳腺癌MCF-7细胞及血管内皮细胞.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 柴胡皂甙对癫痫大鼠脑电的影响

    目的观察柴胡皂甙对癫痫大鼠脑电的影响,探讨柴胡皂甙抗癫痫作用.方法用8周龄健康SD大鼠,随机分为6组,正常对照组(A)、癫痫模型组(B)、拉莫三嗪组(C)、柴胡皂甙小剂量组(D)、柴胡皂甙中剂量组(E)和柴胡皂甙大剂量组(F),每组10只.后5组动物用青霉素致痫,在成功造模及用药物治疗后,分别检测脑电图和观察痫性发作行为.结果A组脑电图正常,B组脑电图显示明显癫痫放电,C组和F组癫痫大鼠脑电图恢复正常,D组大鼠脑电图有少量癫痫放电,E组大鼠脑电图基本恢复正常.C、D、E、F组与B组脑电图相比较有显著性差异(P<0.001).结论柴胡皂甙对癫痫大鼠脑电图及痫性发作有明显改善作用.

    作者:黄运生;谢炜;陈宝田 刊期: 2004年第12期

  • 抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞增殖和侵袭力的影响

    目的研究特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞增殖和侵袭能力的影响.方法以脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,分别为CaSKi-R和CaSKi-P.观察细胞的生长状态,测定CaSKi,CaSKi-R和CaSKi-P 3种细胞的生长曲线、软琼脂克隆形成率、细胞侵袭力实验、裸鼠体内致瘤性,以及RT-PCR检测细胞中COX-2、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,同时,免疫组化检测3种细胞COX-2、VEGF抗原表达,分析特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞增殖和侵袭力的影响.结果CaSKi、CaSKi-P细胞生长速率、软琼脂克隆形成率、致瘤性和侵袭力相近,而CaSKi-R细胞的细胞生长速率、软琼脂克隆形成率、致瘤性和侵袭力与以上两种细胞相比却明显降低.RT-PCR检测CaSKi-R细胞的COX-2、VEGF表达水平也低于CaSKi、CaSKi-P细胞的表达.细胞免疫组化测定CaSKi、CaSKi-P和CaSKi-R细胞都有COX-2、VEGF抗原表达,而CaSKi-R细胞的抗原染色程度较弱.结论特异性抗HPV16E6核酶的导入降低了宫颈癌CaSKi细胞的增殖和侵袭表型,可能与宫颈癌CaSKi细胞内COX-2、VEGF的表达水平降低有关.

    作者:刘柯;王莉丽;孙芳;郑燕芳;张积仁 刊期: 2004年第12期

  • 严重烧伤兔早期使用亚胺培南对体内α-肿瘤坏死因子的影响

    目的观察在严重烧伤早期应用亚胺培南对痂下组织液和血浆中TNFα的影响.方法将16只家兔随机分为2组,即烧伤后亚胺培南治疗组和烧伤后生理盐水对照组.2组分别于伤后20 min内静滴100 mg泰能和等量生理盐水,8h/次,共3 d,并补液抗休克.采用ELASA法检测2组痂下组织液和血浆中TNFα的含量.结果家兔烧伤后血浆中TNFα含量较伤前明显增高,伤后16 h达到高峰,并维持较高水平至伤后72 h.在各相同时点,痂下组织液中TNFα分别较血浆中TNFα含量有显著增高.在烧伤早期应用亚胺培南治疗组痂下组织液和血浆中TNFα的水平明显低于对照组.结论严重烧伤早期使用亚胺培南,痂下组织液和血浆中TNFα水平较对照明显降低,提示亚胺培南对TNFα、内毒素释放呈低诱导状态,有利于防止和减轻内毒素血症的发生.

    作者:谭新东;戴飞;王甲汉 刊期: 2004年第12期

  • 7.62 mm手枪弹颅脑火器伤动物模型的建立

    目的建立军用手枪致狗颅脑火器伤的模型.方法选取杂种狗54只,采用我国五四式军用手枪,7.62 mm手枪弹于狗额部眶上突旁,即外眦后1 cm,上1.5 cm处,距头部30 cm处冠状方向射击致狗颅脑火器伤,枪口出弹角度略偏前方眶部约10度角.观测伤后狗的呼吸和脑组织等病理改变.结果21只狗在伤后出现自主呼吸停止,其中9只经抢救呼吸恢复.54只狗中,存活42只伤后2 h生命体征平稳,存活率为77.8%.伤后头颅CT检查示:颅内血肿、积气、脑挫伤并颅内碎骨片存在,颅骨可见进弹孔和出弹孔.组织切片呈现脑挫裂伤、出血等病理改变.结论本实验建立了7.62mm手枪弹火器性颅脑贯通伤动物模型.

    作者:余俐;徐如祥;彭苹;谢培增;朱红胜;王松青 刊期: 2004年第12期

  • 围着床期子宫内膜解偶联蛋白2的表达变化及与不孕的关系

    目的探讨解偶联蛋白2(UCP2)在子宫内膜表达规律、围着床期变化及其与不孕的关系.方法分别应用原位杂交和Western blot检测21例正常子宫内膜,22例不同原因不孕患者分泌期子宫内膜以及7例早孕蜕膜和绒毛UCP2mRNA和蛋白表达.结果子宫内膜组织内存在UCP2蛋白的表达,分泌期子宫内膜UCP2的表达高于增殖期子宫内膜,蜕膜组织UCP2的表达增加明显.在早孕绒毛滋养细胞层也存在UCP2的表达.与其他不孕妇女相比,输卵管积水者分泌期子宫内膜UCP2表达明显增加.结论UCP2可能参与子宫内膜蜕膜化过程,并可能参与胚胎着床调节,UCP2表达显著增加可能是子宫内膜拮抗活性氧族水平过度增高的代偿反应,反映了子宫内膜可能的氧化应激,后者可能是输卵管积水不孕的重要原因之一.

    作者:付志红;陈士岭;孔令红;李红;陈思梅;邢福祺 刊期: 2004年第12期

  • 肾移植患者下肢深静脉血栓的成因及防治

    目的探讨肾移植患者下肢深静脉血栓的成因及防治.方法总结分析作者医院肾移植术后发生下肢深静脉血栓的38例患者的发病原因、诊断依据、预防措施及治疗效果.结果依据病史、超声确诊的38例患者经及时的治疗,在3~20 d(平均6 d)内,患肢肿胀基本消退,彩色多普勒超声复查示广泛侧枝循环建立.结论肾移植患者有引发下肢深静脉血栓的较多危险因素,彩色多普勒超声是佳诊断措施,规范及时的抗凝、祛聚、溶栓治疗可取得满意效果.对高危患者可采取一定的预防措施.

    作者:于立新;李川江;邓文锋 刊期: 2004年第12期

  • 胰岛素对全血血小板膜P-选择素表达影响的研究

    目的探讨胰岛素对血小板膜P-选择素表达的影响.方法建议全血血小板膜P-选择素表达的流式细胞术(FCM)测定方法,观察健康青年人胰岛素在静止和活化状态下对血小板膜P-选择素表达的影响.结果胰岛素对正常人静息血小板膜P-选择素表达无明显影响;而显著抑制凝血酶、胶原活化的血小板膜P-选择素的上调表达,且该效应呈剂量和时间依赖性.结论胰岛素可抑制活化血小板膜P-选择素的表达.

    作者:彭必友;周艳;董为人;汪吉仪;薛耀明;蔡德鸿 刊期: 2004年第12期

  • 内皮素和降钙素基因相关肽在实验性孕兔急性肺栓塞体内的表达

    目的探讨内皮素和降钙素基因相关肽在实验性孕兔肺栓塞模型血清中含量的变化.方法实验组17只孕兔采用白体血凝块经股静脉注入右心房内,造成肺栓塞模型,对照组10只孕兔注入生理盐水.分别于注栓前、注栓后0、2、4、8h测定血清中内皮素和降钙素基因相关肽含量.结果实验组全部有肺栓塞的病理改变,发生率为100%,实验组的血120浆中内皮素于栓塞后即刻增高至栓塞后6 h,降钙素基因相关肽注栓后即刻降低,注栓后4 h增高并持续至栓塞后8 h,与对照组比较,有显著性差异(P<0.05).结论内皮素和降钙素基因相关肽在实验性孕兔肺栓塞时血清含量会发生显著变化.

    作者:钟梅;崔宝奎;余艳红;黄莉萍;刘宝瑛;宋天蓉 刊期: 2004年第12期

  • 股骨远端逆行交锁钉加骨栓治疗股骨髁粉碎性骨折

    目的评价股骨髁上交锁髓内钉加骨栓治疗股骨远端粉碎骨折的效果.方法应用股骨髁上交锁髓内钉加骨栓治疗股骨髁上髁间粉碎性骨折42例,AO分型均为Cl-2型.术中先将髁间骨块复位拉力钉固定,再将髁上复位逆行穿入髁上交锁髓内钉,髓内钉远端的一枚锁钉用骨栓取代,如数穿入其他锁钉.结果42例患者均得到随访,骨折愈合时间3.5~7.0个月,平均4.6月.膝关节活动范围平均3°~115°.根据Neer膝关节功能评分标准,优≥86分,良≥72分,可≥56分,差<56分.优31例,良10例,优良率91.67%;接受1例(8.3%),差0例.结论采用股骨远端逆行交锁髓内钉加骨栓是治疗股骨髁上及髁间骨折的理想方法.骨栓可有效控制股骨髁间分离,多数患者可通过早期膝关节功能训练达到理想的功能效果.

    作者:李保良;魏思奇;王建民;谭建文;孙永建;方达刚;孙景福;裴国献 刊期: 2004年第12期

  • 大剂量尿激酶在断肢(指)再植溶栓治疗中的临床应用

    目的研究在断肢(指)再植术中,静脉推注尿激酶防治血管危象的效果.方法1999年9月~2003年10月,对158例断肢(指)再植术中血管缝接后,静推尿激酶60万U;术后小剂量维持用药,每12 h用20万U;术后出现血管危象时,用大剂量100万~150万U尿激酶治疗.用药前后监测D-二聚体、纤维蛋白原、血红蛋白、血小板.结果158例再植术后未出现血管危象117例,有效率74.1%.大剂量尿激酶治疗术后41例血管危象获得解除者37例,仅4例(1例断腕,3例断指)需再次探查,有效率达90.2%.以上结果均高于相关报道.结论在再植术中用中剂量尿激酶溶栓,术后小剂量间隔用药是可行的,可防止血栓形成;一次性大剂量用药能解救术后出现的血管危象,避免再次手术探查,既安全又有效,具有临床实用价值.

    作者:黄潮桐;李敬矿;朱家恺;陆晓强;李庆瑜 刊期: 2004年第12期

  • 深低温停循环下颅内巨大动脉瘤夹闭术的麻醉处理

    多数颅内动脉瘤直径为6~15 mm,可在常规麻醉方法下行夹闭术,少数颅内动脉瘤当瘤体直径大于15 mm时,重要结构被其遮盖,影响视野和手术操作,易引起动脉瘤破裂出血导致死亡.国外已开展深低温停循环辅助下行此类手术,本院99年来行3例深体温停循环下颅内巨大基底动脉瘤夹闭术,现报告如下.

    作者:李宝伟;米卫东 刊期: 2004年第12期

  • 氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织MT3-MMP及TIMP2 mRNA表达的影响

    目的观察糖尿病大鼠肾组织膜3型基质金属蛋白酶(MT3-MMP)及组织2型金属蛋白酶抑制物(TIMP2)mRNA表达的变化及氯沙坦对它们的影响.方法建立糖尿病大鼠模型并将之分为正常对照组(A组)、糖尿病组(B组)、糖尿病+氯沙坦组(C组).饲养18周后取出肾脏以RT-PCR法检测MT3-MMP、TIMP2及TGF-β1 mRNA的表达,电镜观察大鼠肾小球基底膜厚度及系膜基质密度(系膜基质面积/系膜面积),收集24 h尿检测尿白蛋白.结果B组大鼠肾组织MT3-MMP mRNA、TIMP2 mRNA和TGFβ1 mRNA表达以及均显著高于A组,C组显著低于B组,但与A组无显著差异.B组尿白蛋白、基底膜厚度及系膜基质密度显著高于A组,C组均显著低于B组.P<0.05.结论氯沙坦治疗可延缓糖尿病肾病的发生,并可抑制糖尿病大鼠肾组织MT3-MMP及TIMP2 mRNA表达.

    作者:宛霞;黄湖辉;李劲高 刊期: 2004年第12期

  • 姜黄素对模型大鼠肠粘膜炎症因子的调控

    目的炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)肠道粘膜炎症与转录因子核因子-κappaB(NF-κB)密切相关.该研究探索NF-κB抑制剂姜黄素IBD动物模型大鼠大肠粘膜炎症因子调控的机制.筛选IBD的靶向治疗药物.方法建立以5%三硝基苯磺酸(5%TNBS)诱导的肠炎大鼠模型,肠炎的大鼠给予含2 0%的姜黄素饲料,药物阳性对照组给予含0.5%柳氮磺胺吡啶(SASP)的饲料,模型组及阴性对照组给予普通饲料.评价病理组织学评分的变化.应用半定量RT-PCR检测炎症因子mRNA的表达.结果姜黄素改善肠炎模型大鼠病理组织学症象.姜黄素可显著抑制肠炎模型大鼠肠粘膜致炎因子IL-1β mRNA的高表达,同时可显著提高抗炎因子IL 10 mRNA的低表达,抗炎因子IL-4 mRNA在各组均未见表达.结论研究显示,NF-κB抑制剂姜黄素可调控IBD鼠科模型中的炎症因子IL-1β mRNA和IL-10mRNA表达.姜黄素有可能是一种有潜能的IBD的靶向药物.

    作者:简燕婷;王继德;麦国丰;张亚历;赖卓胜 刊期: 2004年第12期

  • 连续性肾脏替代疗法治疗重症急性肾功能衰竭的临床研究

    目的评价连续性肾脏替代疗法(CRRT)治疗重症急性肾功能衰竭(ARF)的临床应用价值及影响预后的因素.方法回顾分析CRRT治疗(CRRT组)的116例重症ARF患者的临床特点、疾病严重程度及其预后,并与同期行间歇性血液透析(IHD)治疗(IHD组)的102例重症ARF患者相对照.结果(1)CRRT组患者的平均APACHEⅡ评分为27.0±7.5,其中≥29分56例(48%),24~29分36例(31%),<24分24例(21%);而IHD组患者的平均APACHEⅡ评分为21.9±5.2,其中≥29分0例(0%),24~29分44例(43%),<24分58例(57%).CRRT组平均APACHEⅡ评分显著高于IHD组(t=4.769,P=0.000),提示CRRT治疗的患者多为病情危重的重症病例.(2)CRRT组患者治疗后的存活率为37%(43/116),而IHD组为48%(49/102),两组比较无显著性差异(x2=2.678,P=0.101 8);若仅选取APACHEⅡ评分≥24分的危重病人进行比较显示:CRRT组的存活率24%(22/92)显著高于IHD治疗组的9%(4/44)(X2=4.229,P=0.039 7),提示对危重ARF患者,CRRT效果优于传统IHD.(3)对CRRT存活与死亡亚组患者的一般临床资料、疾病的严重程度(用APACHEⅡ评分表示)等因素进行统计学分析,结果显示死亡亚组患者的年龄、病情严重程度以及需要使用机械通气和升压药的百分率明显高于存活亚组(P<0.05).结论(1)CRRT是治疗重症AFR的有效方法之一,特别是对病情危重的ARF患者,疗效明显优于IHD;(2)CRRT治疗重症ARF患者的预后受患者年龄、疾病严重程度的影响;(3)是否需要使用升压药和机械通气等对CRRT治疗患者的预后具有一定的预测作用.

    作者:邵咏红;黄英伟;孔耀中;周立新;林敏娃;肖观清 刊期: 2004年第12期

  • 三七药材指纹图谱的研究

    目的研究三七药材指纹图谱.方法采用反相高效液相方法(HPLC):C18(250.0mm×4.0mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,检测波长203nm.结果建立了三七药材的HPLC指纹图谱.结论该方法简单,重现性好,具可操作性,能用于三七药材的鉴别与评价.

    作者:杨雪梅;刘旭;严轶琛;徐江平 刊期: 2004年第12期

  • 实验室自制恒速灌肠器

    目的实验室制备恒速灌肠器用于测定肛门直肠控制液便的能力,定量评价大便失禁的严重程度.方法运用4个普通灌肠器(各由一个容器和一条与其底部相通连的引出皮管所组成),改变其几何形状和空间结构,重新组合成一个恒速灌肠器.结果实验室制备的恒速灌肠器能够输出足以克服直肠任何阻力的脉冲恒速水流(可以调试为标准速度1ml/s).失禁组水保持试验测定分值为(228.08±215.11)ml,而对照组则为(1434.17±304.50)ml,二组间比较显示有显著性意义(P<0.01).结论由恒速灌肠器提供的脉冲恒速高压水流能够用于肛门直肠控便功能的评估,恒速灌肠法具有客观、即时、定量的优点.

    作者:徐加鹤;李炎冬 刊期: 2004年第12期

  • 超声诊断膀胱结肠瘘1例

    1临床资料患者男,77岁.40 d前无明显诱因出现左下腹隐痛,不向他处放射.在当地医院给予消炎及止痛药治疗后疼痛缓解,随后出现气泡尿、尿液混浊,在当地医院检查发现低钾、低蛋白血症,给予支持疗法并考虑膀胱结肠瘘,行逆行膀胱造影,但未发现有造影剂外溢.1周前每日下午畏寒发热,高体温38℃,逐转入我院治疗.

    作者:周华;张鹏 刊期: 2004年第12期

  • 重组腺病毒驱动KDR-CDglyTK融合基因系统对MCF-7细胞及血管内皮细胞的靶向杀伤作用

    目的探讨腺病毒介导血管内皮生长因子受体(KDR)启动子驱动的CDglyTK融合基因体系对人乳腺癌细胞株MCF-7及血管内皮细胞(ECV304)选择性杀伤作用.方法将质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK在293细胞内包装、扩增后,体外感染表达KDR的MCF-7、ECV304细胞株和对照组不表达KDR的LS174T细胞株,并给予不同浓度的前药5-FC和/或GCV,观察该体系对不同细胞株的杀伤效应及其旁观者效应.并通过流式细胞仪检测前药对瘤细胞周期的影响.结果所得病毒滴度为2.0×1012pfu/ml.3种细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的递增而增加,当感染复数(MOI)为200时,所有细胞株均达约100%感染.以MOI为100的重组体分别感染各细胞株表现出对前药的不同敏感性:表达KDR的MCF-7细胞和ECV304细胞对前药具有较高的敏感性,二者敏感性差异无显著性意义(P=1.00);与前2者相比,不表达KDR的LS174T细胞对前药不敏感(P<0.001).CDglyTK融合基因的疗效优于任一单自杀基因(P<0.001).将感染腺病毒的细胞与未感染细胞以不同混合培养,观察到该体系明显的旁观者效应.流式细胞术检测表明该体系抑制MCF-7细胞DNA的合成,表现为G1期细胞比率增多及S期细胞减少(P<0.001).结论KDR基因启动子调控的CDglyTK融合基因体系可选择性杀伤乳腺癌MCF-7细胞及血管内皮细胞.

    作者:苏国强;黄宗海;刘志锋;郭爱华;俞金龙;厉周;宋彗娟 刊期: 2004年第12期

  • 肝门部胆管癌的外科治疗

    目的探讨肝门部胆管癌的诊断方法和外科治疗方式.方法总结和分析102例肝门部胆管癌患者的临床资料.结果探查取活检术21例(20.6%),平均生存72 d;外引流术18例(17.6%),平均生存8.3个月;手术切除加吻合术63例(61.8%),平均生存25.7个月.手术方式包括肝外胆管癌切除、肝方叶切除加肝外胆管癌切除、左半肝切除、尾叶切除加肝外胆管癌切除、肝内胆管一空肠Roux-Y吻合术等.结论术中胆道切断端应行冰冻病理检查.治疗应以手术切除为主,根治性切除术可延长患者生存期和改善生存质量,效果比单纯外引流好,对不能切除病例应设法减轻黄疸.

    作者:刘宇斌;简志祥;刘子贤;区金锐 刊期: 2004年第12期

  • 人血浆中MBL-MASP复合物的纯化与分离

    目的从人血浆中分离纯化甘露聚糖结合凝集素(MBL)和MBL相关丝氨酸蛋白酶(MASP).方法用非活化Sepharose 4B两步亲和层析纯化MBL-MASP复合物,再以Sephacryl S-300柱凝胶过滤将MBL和MASP分离.在纯化MBL-MASP复合物的整个过程中,除凝胶过滤缓冲液外,均加入丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲磺酰氟(PMSF)和金属蛋白酶抑制剂1,10-邻二氮杂菲(1,10-phenanthroline),并控制温度在4℃.结果获得高度纯化的MBL和酶原形式的MASP.SDS-PAGE和Western blotting表明所纯化的MBL相对分子质量为28000和32000肽链构成的功能性多聚体;配体结合测定和酵母菌凝集试验证实所纯化的MBL具有生物学活性.结论建立了一种比较简便的同时分离纯化MBL和MASP酶原的方法.

    作者:陈月;张丽芸;陈政良 刊期: 2004年第12期

南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志

主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学