学术投稿

基因突变敏感性分子开关检测β地中海贫血基因突变

兰芬;郭紫芬;邓坤龙;廖端芳;李凯

关键词:β地中海贫血, 高保真聚合酶, 硫化修饰引物
摘要:目的:采用高保真DNA聚合酶介导的基因突变敏感性分子开关准确、快速检测β地中海贫血.方法:首先提取正常人血液基因组DNA,根据已知β珠蛋白基因热点突变CD41-42、IVS2-654区域序列,分别设计突变序列扩增引物,利用低保真酶进行引物延伸反应,将其PCR产物克隆到pMD19-T载体,得到β地中海贫血常见的两个突变住点的基因突变克隆:CD41-42、IVS2-654,然后以这两个突变位点为检测靶点,分别设计3'末端与野生型基因住点或突变基因位点配对的引物,硫化磷酸修饰3'末端并偶联高保真DNA聚合酶构成的基因突变敏感性分子开关,对含有相应突变的阳性质粒模板及正常人基因组DNA模板进行引物延伸反应,并通过凝胶成像系统对其进行分析.结果:当引物与模板完全配对时,引物被延伸,有PCR产物:当引物与模板不完全配对时,引物不被延伸,无PCR产物.结论:高保真DNA聚合酶介导的基因突变敏感性分子开关能准确、快速筛查β地中海贫血CD41-42、IVS2-654突变,提示其在单基因遗传病的诊断中具有广阔的应用前景.
实用医学杂志相关文献
  • 肾嫌色细胞癌1例

    患者女,57岁,因右腰部胀痛4 d伴肉眼血尿及尿痛入院.患者有高血压病史.B超示:右肾下极混合性团块.入院后外科检查:腹平软,右腹部可触及一质硬肿块,直径约15 cm,境界欠清,固定,无压痛.查CT示:右肾下极见一大小约13 cm x 12 cm x 10 cm的团块影,边缘有分叶,与周围组织局部界限欠清,其内见液化、出血坏死及钙化,强化不均匀,周围脏器受压,十二指肠及胰腺受压明显,腹膜后未见肿大淋巴结影.

    作者:高福平;魏谨 刊期: 2012年第02期

  • ACEI联合激素治疗肾病综合征疗效及TGF-β1检测的临床意义

    目的:评价血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)辅助激素治疗原发性肾病综合征(PNS)的疗效,同时探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)水平变化的意义.方法:初次确诊为PNS患儿36例,随机分为福辛普利(19例)和强的松组(17例),治疗4周后观察24 h尿蛋白定量、血生化、血脂和高凝指标.同时用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TGF-βl的浓度,分析其临床意义.结果:(1)福辛普利组除外Ccr,差异有统计学意义(P<0.05);血脂明显改善(P<0.05);高凝指标中D-Di明显改善(P<0.05),PT、APTT和Fib无明显变化(P>0.05).(2)治疗前后福辛普利组TGF-βl差异有统计学意义(P<0.05),强的松组无明显差异(P>0.05);两组间差异有统计学意义(P

    作者:孟翠萍;罗武;陈灵 刊期: 2012年第02期

  • 微种植体支抗与J形钩矫治高角安氏Ⅱ类深覆合的疗效对比研究

    高角的安氏Ⅱ类病例如按常规的直丝弓矫治技术程序,治疗结束后会发现虽然咬胎关系不错,但却伴随严重舌倾的上颌前牙,(牙合)平面和下颌平面变陡及下颌的顺时针旋转[1].患者或家属认为他们的侧貌比治疗前还要糟糕.以往解决这个问题的方法是应用Tweed-Merrifield定向力技术的J钩高位牵引.但它需要患者的密切配合.近年来微种植体支抗(即微螺钉)以不依赖患者配合的优势广泛应用于正畸治疗.

    作者:陈礼芳;陈勇 刊期: 2012年第02期

  • 基因突变敏感性分子开关检测β地中海贫血基因突变

    目的:采用高保真DNA聚合酶介导的基因突变敏感性分子开关准确、快速检测β地中海贫血.方法:首先提取正常人血液基因组DNA,根据已知β珠蛋白基因热点突变CD41-42、IVS2-654区域序列,分别设计突变序列扩增引物,利用低保真酶进行引物延伸反应,将其PCR产物克隆到pMD19-T载体,得到β地中海贫血常见的两个突变住点的基因突变克隆:CD41-42、IVS2-654,然后以这两个突变位点为检测靶点,分别设计3'末端与野生型基因住点或突变基因位点配对的引物,硫化磷酸修饰3'末端并偶联高保真DNA聚合酶构成的基因突变敏感性分子开关,对含有相应突变的阳性质粒模板及正常人基因组DNA模板进行引物延伸反应,并通过凝胶成像系统对其进行分析.结果:当引物与模板完全配对时,引物被延伸,有PCR产物:当引物与模板不完全配对时,引物不被延伸,无PCR产物.结论:高保真DNA聚合酶介导的基因突变敏感性分子开关能准确、快速筛查β地中海贫血CD41-42、IVS2-654突变,提示其在单基因遗传病的诊断中具有广阔的应用前景.

    作者:兰芬;郭紫芬;邓坤龙;廖端芳;李凯 刊期: 2012年第02期

  • c-kit和P13K(P110α)在实验性隐睾精原细胞中的表达

    目的:检测SD大鼠实验性隐睾早期不同时点精原细胞c-kit和H3K(P110α)的表达及其细胞周期的变化,探讨睾丸受热作用旱期,温度对精原细胞增殖的影响.方法:育龄期SD雄性大鼠32只,按随机数字表法分为实验组(n=24)和对照组(n=8).实验组建立隐睾模型,建模后1-3周末三个时点,随机8只取睾丸标本.对照组不干预取睾丸标本.SP免疫组化法观察睾丸形态学变化,非连续性Percoll密度梯度离心结合差速贴壁的方法纯化富集各组精原细胞,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Westemblot)检测各组精原细胞c-kit和P13K的mRNA及蛋白表达:流式细胞仪检测各组精原细胞的细胞周期.结果:对照组c-kit主要表达于精原细胞,而精母细胞、精子细胞有少量表达.实验组生精细胞明显减少,到第3周时仅见单层散在于基膜强表达c-kit的精原细胞,实验组各时点和对照组精原细胞大部分处于G0/G1期,s期及G2/M期均较少,实验组组间及与对照组比较无统计学差异性(P>0.05).结论:实验性隐睾可导致精原细胞的增殖信号增强,但并未诱导精原细胞处于增殖期的细胞增加,即体腔温度对体内精原细胞的增殖影响不大.

    作者:唐修俊;王达利 刊期: 2012年第02期

  • 单次二重滤过血浆置换治疗急性高脂血症性胰腺炎

    目的:分析单次二重滤过血浆置换治疗急性高脂血症性胰腺炎的疗效、安全性以及对病情进展的影响.方法:回顾性分析我院2009年1月至2010年12月住院的急性高脂血症性胰腺炎(非重症)患者16例,分两组,传统治疗组8例只接受内科传统治疗;二重滤过血浆置换组8例在内科传统治疗基础上给予单次二重滤过血浆置换,取置换治疗前后的血样,分别测量白细胞(WBC)、中性粒细胞(NEUT)、白蛋白(ALB)、甘油三酯(TRIG)、总胆固醇(CHOL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(D-LDL),同时观察治疗过程中的不良反应.另观察患者腹痛缓解时间和治愈出院的住院时间.结果:二重滤过血浆置换组治疗后WBC、NEUT、TRIG、CHOL、D-LDL、ALB均有明显下降(P<0.05),其中TRIG平均下降61.1%,CHOL平均下降58.6%,WBC平均下降25.8%;第7天各项指标也均下降(P<0.05),且比传统组下降明显(P<0.05).二重滤过血浆置换组患者腹痛平均缓解时间、平均住院时间均明显较传统治疗组缩短[(2.5±0.3)d vs(4.2±0.5)d,P<0.05;(10±0.6)d vs(13.8±3.8)d,P<0.05)].治疗过程中未发生严重出血、低血压、过敏等副反应.结论:二重滤过血浆置换是治疗急性高脂血症性胰腺炎快速、有效、安全的方法,并且可以减少患者的住院时间.

    作者:陈浩雄;陈林;刘日光;傅君舟 刊期: 2012年第02期

  • 非粘性敷料预防晚期肝癌患者压疮的临床研究

    目的:探讨使用非粘性敷料在预防晚期肝癌患者压疮过程中,如何降低压疮发生率的临床研究.方法:根据Braden压疮评分表,自2009年1月到2011年3月我院住院患者,根据随机均衡原则分为对照组和实验组,对照组50例患者采用常规压疮预防措施.实验组48例患者在此基础上采用非粘性敷料外贴皮肤预防压疮,实验结束后比较两组患者压疮发生率.结果:实验组压疮发生率为13%.对照组发生率为32%,实验组压疮发生率明显低于对照组(P<0.05).结论:非粘性敷料在晚期肝癌患者压疮预防过程中,有效减少压疮发生.

    作者:郭细妹 刊期: 2012年第02期

  • 糖尿病患者黄斑色素密度的相关因素分析

    目的:研究糖尿病对黄斑色素密度(macular pigment optical density,MPOD)的影响,以及MPOD与糖化血红蛋白、胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等因素的关系.方法:筛选2008-2009年间就诊于我院眼科的已被确诊的2型糖尿病患者54例,分为两组,2型糖尿痛不伴糖尿病视网膜病变组(NDR)28例,2型糖尿病伴轻度糖尿病视网膜病变组(NPDR)26例,以及非糖尿病健康志愿者组(NC)25倒,所有受试者进行空腹血液检测糖化血红蛋白、胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白,并采用异色闪烁光度测量法测量黄斑色素密度.结果:全部受试者共158只眼的黄斑色素密度均值为0.513±0.128,分别对NC、NDR、NPDR三组中各个组内主导眼和非主导眼的MPOD值进行比较,均P>0.05;分别对三组中主导眼和非主导眼组间的MPOD值分别比较,P值均<0.05;MPOD值与高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、胆固醇和甘油三酯无相关性,均P>0.05;MPOD值与糖化血红蛋白呈负相关,r=-0.622,P<0.05.结论:糖尿病患者的MPOD下降,MPOD值与糖化血红蛋白呈负相关.

    作者:董宁;褚利群;肖林;王冰松;姚晶磊;苏哲 刊期: 2012年第02期

  • 定量组织多普勒技术评价2型糖尿病患者的左室功能

    目的:应用定量组织多普勒技术(QTVI)评价2型糖尿病患者的左室收缩舒张功能,为糖尿病性心肌病的早期预防和诊断提供可靠依据.方法:研究资料分为两组,2型糖尿病患者(DM组)和健康体检人员(NC组)各30例,应用QTVI测量二尖瓣环6个位点的收缩期峰值速度(Sa)、舒张早期峰值速度(Ea)、舒张晚期峰值速度(Aa)、舒张早期与舒张晚期峰值速度比值(Ea/Aa),计算6个位点平均值代表瓣环的整体运动.结果:二尖瓣环运动速度Sa在DM组与NC组之间比较差异无显著性,Ea、Ea/Aa在DM组显著低于NC组.Aa在DM组与NC组之间比较差异均无显著性.结论:QTVI可以敏感、准确地评价2型糖尿病患者的左室功能,糖尿病患者左室舒张功能受损较早,随后才出现左室收缩功能减低.

    作者:潘高云;胡元平;尤利益;朱张茜;徐立新 刊期: 2012年第02期

  • Toll样受体3在呼吸道合胞病毒诱导气道上皮细胞表达胸腺基质淋巴细胞生成素中的作用

    目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染的大鼠气道上皮细胞表达胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)增高与Toll样受体3(TLR3)及TLR4的关系.方法:设计并合成了针对大鼠TLR3和TLR4基因的siRNA,以具有永生化特征的大鼠气道上皮细胞株RTECs(rat tracheae epithelial cells)为细胞模型,通过转染siTLR3及siTLB4至RTECs并下调其TLR3或TLR4的表达.随后观察这些经过siRNA预处理的RTECs在感染RSV后是否仍有高表达TSLP的能力.结果:Real time PCR检测结果显示,与RSV组(4.447±0.764)相比,siTLR3+RSV组TSLP表达明显降低(1.050±0.245),而siTLR4+RSV组TSLP表达无明显改变(3.066±0.585).n=4,P<0.05.结论:RSV感染的大鼠气道上皮细胞表达TSLP的增高与TLR3相关,为进一步研究RSV感染在哮喘发病中的作用机制奠定了基础.

    作者:徐影;王健;乔建瓯 刊期: 2012年第02期

  • 室间隔缺损合并右室流出道狭窄的诊断与外科治疗

    目的:总结室间隔缺损(VSD)合并右室流出道狭窄(RVOTS)的诊断与外科治疗.方法:回顾2000年1月至2010年12月施行VSD合并RVOTS手术治疗76例.结果:全组均治愈,无一例死亡.结论:VSD合并RVOTS术前易漏诊;术中仔细探查、有效疏通,效果良好.

    作者:陈仁伟;周文武;黄鹏;曾德斌;刘剑;罗金文;刘平波 刊期: 2012年第02期

  • 神经生长因子纳米粒透过AD大鼠血脑屏障的实验研究

    目的:制备神经生长因子聚氰基丙烯酸丁酯(nenre growth factor-polybutylcyanoacrylate,NGF-PBCA)纳米粒并评价质量,探讨其在阿尔茨海默病(Akheimer's disease,AD)大鼠体内透过血脑屏障的情况.方法:采用乳化聚合法制备NGF纳米粒并评价质量;Wistar大鼠30只,D-半乳糖和Aβ1-40先后注射实验组大鼠脑室后经Morris水迷宫法鉴定,制备有效AD大鼠模型;实验组静注NGF纳米粒后,Morris水迷宫法检测动物学习记忆能力的变化;ELISA法检测动物脑内NGF含量改变.结果:NGF-PBCA-纳米粒呈圆球形,包封率为83.56%,栽药量为22.87%.与对照组相比,实验组动物找到平台时间明显下降,脑组织内NGF含量显著增加(P<0.01).结论:乳化聚合法制备的NGF纳米粒,可使AD大鼠学习记忆能力损伤程度减轻,可增加外源性NGF通过AD大鼠血脑屏障的数量.

    作者:张莹;张朝东;赵久晗;杨军;徐晓雪 刊期: 2012年第02期

  • 低位转折点法选择PEEP对ARDS患者预后的影响

    目的:比较低位转折点法与FiO2-PEEP递增法选择呼吸末正压(PEEP)对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者预后的影响.方法:选择2009年8月至2011年1月本院ICU及呼吸内科收治的ARDS患者80例随机使用低位转折点法(A组)与FiO2-PEEP递增法(B组)选择PEEP进行机械通气,检测使用上述两种方法的两组病例治疗第1、5、12天氧合指数、细胞因子(IL6、IL8)、中心静脉压(CVP)、平均动脉压(MAP)的变化和治疗期间发生并发症的情况及治疗第5、12天的疗效.结果:两组患者治疗后第1天细胞因子(IL-6、IL-8),第1、5天的氧合指数(PaO2/FiO2)的变化比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后第5、12天两组患者细胞因子(IL-6、IL-8)及第12天氧合指数变化比较差异有统计学意义(P<0.05),采用低位转折点法组对中心静脉压(CVP)、平均动脉压(MAP)影响较小(P<0.05),A组患者并发症例数及平均住院时间较B组低,差异有统计学意义(P<0.01).结论:使用低位转折点法选择PEEP能减少临床并发症,大大降低住院病死率及改善ARDS患者预后.

    作者:黄庆;叶乔冬;吴启兴 刊期: 2012年第02期

  • APACHE Ⅱ评分系统在重度子痫前期/子痫患者预后评估中的应用

    目的:评估急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(acute playsiology and chronic health evaluation Ⅱ,APACHEⅡ)在预测产科重症监护病房中重度子痫前期/子痫患者病情及预后的应用效果.方法:连续观察2002年1月至2008年6月转入广州医学院第三附属医院产科重症监护病房资料完整的重度子痫前期/子痫患者215例,应用APACHEⅡ评分系统对入院24h内患者差变量值进行评分,并追踪比较患者的预后,从而验证APAcHEⅡ评分系统预测重度子痫前期/子痫患者病情严重程度及预后的有效性.结果:215例产科危重患者APACHEⅡ评分范围4-33分,平均(9.29±4.63)分;212例生存者评分为(9.11±4.16)分,3例死亡者评分为(28.00±5.00)分,两者差异有统计学意义(P<0.01).随着APACHEⅡ评分的增高,患者的预测病死率及实际病死率均升高.结论:APACHEⅡ评分系统能在一定程度上评估重度子痫前期/予痫患者的病情严重程度及预测预后,但存在局限性和偏差,需进一步开发一种标准的评估系统.

    作者:张红霞;刘慧姝;陈敦金 刊期: 2012年第02期

  • 硫酸镁对腹腔镜宫颈癌根治术患者血流动力学和异丙酚维持量的影响

    目的:观察静脉输注硫酸镁对全凭静脉麻醉下腹腔镜宫颈癌根治术患者血流动力学和异丙酚维持量的影响.方法:40例择期腹腔镜宫颈癌根治术患者随机分为硫酸镁(MgSO4)组和生理盐水(NS)组,每组20例.MgSO4组,麻醉诱导前硫酸镁50mg/kg稀释至100mL,15 min内静脉输注,气管插管后持续静脉榆注硫酸镁15 mg/(kg·h)至手术结束.NS组以生理盐水代替硫酸镁.两组麻醉维持均用异丙酚和瑞芬太尼泵注并间断追加维库溴铵,维持BIS值45~55.记录两组术前、气管插管时、切皮、气腹时、气腹后15、30min、1 h、放气后5 min各时点的血压(MAP)、心率和BIS值.监测术前、术毕、术后1 h和24 h血清镁离子浓度.记录两组术中异丙酚的维持用量.结果:两组患者基础血压、基础心率、BIS值和术中相同时点BIS值变化组间比较无统计学意义(P>O.05),但MgSO4组血压、心率在气管插管时、切皮、气腹时、气腹后15 min、30 min、1 h、放气后5 min等时点均低于NS组(P<0.05).MgSO4组异丙酚的维持用量在切皮、气腹时、气腹后15 min、30 min、1 h、放气后5 min等时间点均低于NS组(P<0.05).MgSO4组镁离子浓度在术毕、术后1 h和24 h明显高于NS组(P<0.001).但两组血清镁离子浓度均在安全范围内.结论:硫酸镁能明显抑制围术期的心血管反应和降低术中所需的异丙酚的维持用量.

    作者:杨燕青;何海娟;林仙菊 刊期: 2012年第02期

  • 维持性血液透析患者微炎症与心血管事件关系研究

    目的:探讨维持性血液透析(MHD)患者微炎症与心血管事件的关系.方法:选择40例MHD患者为病例组,40例健康人为对照组,测定对照组空腹和病例组血液透析前静脉血血清hs-CRP、TNF-α、IL-6及检查病例组颈总动脉内壁厚度(IMT)、粥样斑块,记录病例组心血管事件发生情况.结果:病例组37.5%患者hs-CRP升高,hs-CRP、TNF-α、IL-6水平较对照组高(P<0.05).(2)病例组hs-CRP升高者心血管事件发生率高于hs-CRP正常者(P<0.05).(3)病例组颈部动脉有粥样斑块者IMT比无斑块者厚(P<0.05);颈部动脉有粥样斑块者血清hs-CRP、TNF-α明显高于无斑块者(P<0.05).(4)病例组心血管事件发生率为57.5%:MHD患者心血管事件阳性者IMT较阴性者厚(P

    作者:杨桂鲜;吴艳波;王唏;潘丽萍;周巧艳 刊期: 2012年第02期

  • EB病毒-MKK4基因遗传变异的交互作用与鼻咽癌危险性研究

    目的:研究EB病毒感染与MKK4基因遗传变异的交互作用在鼻咽癌发病中的作用.方法:收集鼻咽癌病例和正常对照各500名,采用TAQMAN技术分析MKK4基因遗传变异-1304 T>G与鼻咽癌发病的关联:并分析基因位点与EB病毒感染状态在鼻咽癌发生中的交互作用.结果:相对TT基因型携带者,G变异基因型鼻咽癌的发病风险下降(TG基因型 adjusted OR=0.78,95%CI=0.61-0.94,P=0.02;GG基因型adjusted OR=0.64;95% CI=0.39~0.99;P=0.04),且存在显著的等位基因剂量-效应关联(Ptrend=0.02).进一步交互作用分析发现EB病毒感染状态可改变G变异基因型降低鼻咽癌发病风险的作用(adjustedP交互作用=0.04).结论:MKK4基因遗传变异可降低鼻咽癌的发病风险,但其对鼻咽癌的保护作用受EB病毒感染状态影响,提示EB病毒-MKK4基因交互作用可能是我国南方人群易患鼻咽癌的一个危险因素.

    作者:刘斌;黄斌;芳杨磊;吕嘉春 刊期: 2012年第02期

  • 彩超观察肝癌经肝动脉栓塞化疗前后门静脉血供的动态变化

    目的:应用彩色多普勒超声观察肝细胞性肝癌(HCC)患者经肝动脉栓塞化疗(TACE)前后门静脉作为肿瘤引流血管及供血血管的动态变化并探讨其临床意义.方法:HCC患者42例,行2次TACE治疗,分别于2次TACE术前及术后7 d行彩超检查.分析不同时间段肿瘤血供方式的变化.结果:首次TACE术前肝癌均有动脉参与供血,以动脉供血并门静脉引流者所占比例大占50%,其次是单纯动脉供血方式占35.7%,动脉与门静脉双重供血者较少占14.3%,但无单纯门静脉供血者;而TACE术后7 d出现5例完全由门静脉供血的肿瘤,占11.9%;双重供血的肿瘤数也显著增加,占47.6%;单纯动脉供血及动脉供血门静脉引流的肿瘤数则显著减少,分别占19.0%、21.4%,差异有统计学意义(P<0.05).第二次TACE前后肝癌血供的变化趋势与首次TACE相似,但变化无统计学意义(P>0.05).结论:经TACE治疗后部分肿瘤内门静脉由TACE术前的引流血管转变为术后的供血血管,门静脉作为HCC供血血管的比例增加.

    作者:郑进方;李龙浩;吴昌雄;张震生;邢贻雷;周开伦;李灼日 刊期: 2012年第02期

  • 宫内抗雄性物质对胎鼠及新生大鼠阴茎组织Bax和Bcl-2表达的影响

    目的:观察宫内抗雄性物质对胎鼠及新生大鼠阴茎组织Bax和Bcl-2基因表达的影响,探讨其与尿道下裂发病机制之间的关系.方法:定期受孕SD大鼠随机分为氟他胺(Flutamide,Flu)组和生理盐水组(对照组),于孕12~16 d每天分别腹部皮下注射Flu/生理盐水100 mg/(kg-d),两组动物均于胚胎19 d及出生后第1、4、7 d各随机取8只,应用反转录-聚合酶链反应技术检测各组阴茎组织Bax和Bcl-2基因的表达.结果:对照组bax基因的表达在孕19 d-生后1 d(GDl9~PNDI)随鼠龄增加表达逐渐增强,至PNDI表达强,以后逐渐减弱.Flu组在GD19-PND4均较对照组表达增强,且在END19和PNDI与对照组相比,差异具有统计学意义.FIu组bcl-2 mRNA表达在GD19-PND7均较对照组强,且在PND4和PND7与对照组相比,差异有统计学意义.结论:宫内抗雄性物质可能通过调控bax/bcl-2基因的表达,引起阴茎组织细胞异常凋亡,尿道板腔化受阻,进而导致尿道下裂的发生.

    作者:罗向阳;王伟 刊期: 2012年第02期

  • 丹参酮与缬沙坦联合治疗高血压肾病疗效观察

    肾损害是高血压病常并发的靶器官损害,微量蛋白尿是高血压肾病的早期表现,降低高血压肾病患者尿微量白蛋白水平是保护肾功能的重要措施之.我们对早期高血压肾病患者给予缬沙坦联合丹参酮ⅡA磺酸钠治疗,现将其疗效及尿微量白蛋白下降情况报告如下.

    作者:杨海燕;占焕平;陈华 刊期: 2012年第02期

实用医学杂志

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主管:广东省卫生厅

主办:广东省医学情报研究所