学术投稿

鼠抗早孕因子单克隆抗体的制备及鉴定

练玉银;吴晓亮;王家骥;温志锋;聂湘辉

关键词:早孕因子, 单克隆抗体, 鉴定
摘要:目的 制备鼠抗早孕因子(EPF)单克隆抗体,纯化并进行鉴定.方法 用重组EPF免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术获得抗EPF杂交瘤细胞株,注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水型单抗,Protein-G亲和层析纯化后,SDS-PAGE电泳鉴定其纯度,用间接ELISA法测抗体效价,ELISA相加试验测定抗原表位,用Western blotting鉴定其特异性,并进行类及亚类、细胞染色体核型分析.结果 筛选出2株具有较高活性和良好稳定性的分泌抗EPF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其腹水的抗体效价均高于2×10-5,2株单抗均为IgG类IgG1亚类,轻链类型均为κ细胞核型分析符合杂交瘤细胞特征,特异性良好,2株单抗有不同的抗原表位.SDS-PAGE电泳显示纯化后抗体有较高的纯度,Western blotting表明其与EPF抗原有特异结合性.结论 成功制备2株具有较高活性的鼠抗EPF单克隆抗体,为建立检测EPF方法奠定了良好的基础.
中国热带医学杂志相关文献
  • 高分辨熔解曲线分析正常核型成人AML的NPM1基因突变

    目的 研究急性髓细胞白血病(AML)患者核仁磷酸蛋白1(NPM1)基因突变检测方法.方法 应用PCR结合高分辨熔解曲线分析技术(HRM)和毛细管电泳法(CE)检测正常核型的成人AML样本的NPM1基因突变,并与CE法进行比较分析,结果经克隆测序验证.结果 85例AML样本均得到可供分析的NPM1基因突变检测结果,NPM1基因突变阳性19例,其中15例A型突变,4例B型突变,突变阳性率为22.4%.与CE法比较,二者符合率为100.0%(85/85),HRM检测的敏感性和特异性均达到100.0%.结论 应用HRM技术检测NPM1基因突变快速简便,而且敏感,是一项适合临床开展的新方法,可用于临床AML诊断分型、治疗和预后指导.

    作者:周薇;陈建兰;王汉平;应逸;谢健晋;陈晓燕 刊期: 2012年第05期

  • 旋毛虫在小鼠体内的发育及炎性细胞反应的动态观察

    目的 观察旋毛虫感染小鼠后,幼虫在鼠体内的发育、分布及密度上的差异,以及外周血细胞动态变化.方法 在小鼠感染旋毛虫后第21d、28d、35d、42d解剖,观察鼠体各组织内幼虫的发育,分布以及密度.采集血液进行细胞计数.结果 旋毛虫幼虫在鼠体的分布和密度有一定差异,但以膈肌和咬肌中的密度为高.小鼠外周血中性粒细胞及淋巴细胞于第14d后逐渐上升趋势,21d、28d达高峰,后逐渐下降.中性粒细胞比例高于对照组,而淋巴细胞低于对照组.结论 研究结果显示,一定数量旋毛虫幼虫感染适宜于旋毛虫保种,感染旋毛虫小鼠外周血细胞的变化与宿主免疫现象有一定的关系.

    作者:杨树国;钟萍;张光玉;李德奎;程多智 刊期: 2012年第05期

  • 花椒挥发油对豚鼠耳部银屑病样病理改变的疗效

    目的 探讨花椒挥发油外用对豚鼠耳部银屑病样病理改变的治疗作用.方法 5%盐酸普萘洛尔(心得安)软膏外涂豚鼠耳部外侧皮肤,建立银屑病样模型,然后分别以哈西奈德乳膏和花椒挥发油DMSO溶液进行治疗,光镜下观察耳部皮肤病理变化.结果 造模后的组织病理可见角化过度,棘层肥厚,真皮毛细血管扩张充血、水肿,有较明显的炎症细胞浸润.外涂哈西奈德乳膏、20%及5%花椒挥发油DMSO溶液、治疗后,造模处皮损组织病理明显改善,高、低剂量治疗组与造模组比较,Baker评分及炎症细胞浸润数出现下降(F3,6=239.711,630.330;F3,7=81.098,174.545;P<0.05).高剂量治疗组与低剂量治疗组相比,Baker评分及炎症细胞浸润数存在显著差异(F6,7=84.902,216.907; P<0.05).花椒挥发油DMSO溶液外涂未见局部刺激、过敏症状,各组豚鼠主要脏器未发现组织病理学改变.结论 花椒挥发油DMSO溶液外涂可改善心得安诱发的豚鼠耳部银屑病样皮损的病理变化,治疗作用与浓度高低成正相关.

    作者:何洋;庞建新;谢果;黄增芳 刊期: 2012年第05期

  • 猴艾滋病模型CD28家族mRNA动态变化及中药干预作用

    目的 观察猴艾滋病毒(SIV)感染猴模型外周血CD28家族免疫共刺激分子mRNA动态变化及中药复方艾可清的干预作用.方法 SIVmac251感染12只恒河猴,分别于感染前、感染后8周每周、给药前(SIV感染第10周)、给药后每4周时间点采集外周静脉血,分离PBMC,以定量PCR检测CD28、ICOS、PD-1、CTLA-4及HLA-DRmRNA. 结果 所观察的4种免疫共刺激分子及免疫活化标志物HLA-DR mRNA量出现了不同程的升高,其中HLA-DRmRNA高峰出现在SIV感染后第2周,而4种免疫共刺激分子mRNA峰值均出现在SIV感染第5周之后.艾可清使ICOS、CD28、PD-1及HLA-DRmRNA量出现不同程度的降低,而对CTLA-4mRNA量无显著影响.结论 SIV感染猴外周血PBMC负性和正性CD28家族免疫共刺激分子mRNA均出现不同程度的升高;艾可清可能通过同时降低正性及负性免疫共刺激分子mRNA表达而减轻艾滋病免疫活化.

    作者:何金洋;符林春;何浩岚;周红艳;张苗苗 刊期: 2012年第05期

  • 不同剂量环磷酰胺诱发NIH小鼠骨髓红细胞微核率的比较

    目的 探讨环磷酰胺(CP)不同剂量、不同取材时间对NIH小鼠骨髓红细胞微核率的影响.方法 对小鼠一次性腹腔注射不同剂量的CP(25、50、100mg/kg· BW)后,于不同时间(给药后12、18、24、36、48、72h)取材股骨制作骨髓涂片,观察CP对NIH小鼠骨髓红细胞微核率的影响.结果 高、中、低3个剂量组的小鼠骨髓红细胞微核率与溶剂对照组相比较,其差异具有统计学意义(P<0.05),且3个剂量组之间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05),并表现出明显的剂量-反应关系;不同取样时间对小鼠骨髓细胞微核率的影响具有统计学意义(P<0.05).本实验室条件下,给NIH小鼠一次性腹腔注射CP后12~48h股骨取材均可取得较高的微核率,其中以24h微核率高.结论 CP作为微核试验的阳性对照其剂量范围为50~100mg/kg·BW,给药后24h取材佳,给药12~48h股骨取材均可获得较高的微核率.

    作者:冯媛瑜;魏莲;陈永忠;王立辉;陈骁熠 刊期: 2012年第05期

  • 鼠抗早孕因子单克隆抗体的制备及鉴定

    目的 制备鼠抗早孕因子(EPF)单克隆抗体,纯化并进行鉴定.方法 用重组EPF免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术获得抗EPF杂交瘤细胞株,注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水型单抗,Protein-G亲和层析纯化后,SDS-PAGE电泳鉴定其纯度,用间接ELISA法测抗体效价,ELISA相加试验测定抗原表位,用Western blotting鉴定其特异性,并进行类及亚类、细胞染色体核型分析.结果 筛选出2株具有较高活性和良好稳定性的分泌抗EPF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其腹水的抗体效价均高于2×10-5,2株单抗均为IgG类IgG1亚类,轻链类型均为κ细胞核型分析符合杂交瘤细胞特征,特异性良好,2株单抗有不同的抗原表位.SDS-PAGE电泳显示纯化后抗体有较高的纯度,Western blotting表明其与EPF抗原有特异结合性.结论 成功制备2株具有较高活性的鼠抗EPF单克隆抗体,为建立检测EPF方法奠定了良好的基础.

    作者:练玉银;吴晓亮;王家骥;温志锋;聂湘辉 刊期: 2012年第05期

  • PTEN基因外显子片段缺失表达在鼻咽癌中的临床意义

    目的 探讨鼻咽癌组织中PTEN基因外显子片段缺失表达的临床意义.方法 应用RT-pCR检测50例鼻咽癌组织,20例癌旁粘膜组织和15例粘膜慢性炎组织中PTEN基因外显子1-8、5-9和5-8片段,并分析其临床病理意义.结果 鼻咽癌组织中PTEN基因外显子缺失率为64.0%,癌旁粘膜组织中PTEN基因外显子缺失率为40.0%,鼻咽粘膜慢性炎中PTEN基因外显子缺失率为33.3%,差异有统计学意义(x2=6.113,P<0.05).鼻咽癌组织中,外显子1-8、5-8和5-9片段缺失率为32.0%(16/50)、20.0%(10/50)和18.0%(9/50),差异无统计学意义(x2=3.867,P>0.05).PTEN基因外显子片段缺失与鼻咽癌的组织学分型及淋巴结转移相关(P<0.05),与临床分型、患者年龄及性别无关(P>0.05).结论 PTEN基因外显子片段在鼻咽癌中存在异常,PTEN转录水平的异常在鼻咽癌的发生发展中起着重要作用.

    作者:梁艳芳;曾今诚;阮建波;康东平;陈灿;王玲梅;张土明;许卫华 刊期: 2012年第05期

  • 拉沙热现状分析及研究进展

    拉沙热是由单股负链RNA病毒引起的一种传播性极强的急性出血性传染病,主要发生在西非地区,其他欧美国家也有输入性病例的报道,可以引起较高的发病率与死亡率.目前我国国际旅游人群日益增加,尽早发现拉沙病毒感染者,对遏制拉沙热在我国的流行传播具有非常重要的意义.本文主要对拉沙热的流行特点、主要流行区域以及各种检测技术的优缺点进行综述,为拉沙病毒的检测提供技术储备,指导口岸卫生控制.

    作者:徐华;史蕾;徐云庆 刊期: 2012年第05期

  • 侵袭性念珠菌感染者IgA抗体检测的临床意义

    目的 采用ELISA法检测血清中白色念珠菌IgA抗体,评价其肿瘤患者临床应用价值.方法 以ELISA法和1-3-β -D-葡聚糖法对培养阳性确诊患者28例、培养阳性非确诊患者60例和健康体检者30人分别进行检测分析.结果 白色念珠菌培养阳性确诊患者和培养阳性非确诊患者及健康对照者3组ELISA法检测IgA抗体检出率分别为:100.0%(28/28)、3.3%(2/60)和0.0%(0/30); 1-3-β -D-葡聚糖法IgA抗体检出率分别为:100.0% (28/28)、1.7%(1/60)和0.0%(0/30).ELISA法的灵敏度和特异性分别为100.0%和97.8%,与1-3-β -D-葡聚糖法的100.0%和98.9%比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 对怀疑侵袭性念珠菌感染的患者,检测血清中IgA抗体是一种有应用前景的诊断方法.

    作者:叶伟成 刊期: 2012年第05期

  • 上海市嘉定区初治阳性肺结核诊断延误及其影响因素

    目的 了解上海市嘉定区初治阳性肺结核诊断延误情况,分析诊断延误发生的影响因素.方法 采用调查表对2008年2月20日~2010年12月31日在嘉定区中心医院结核病专科门诊确诊的244例初治阳性肺结核患者的社会状况、临床症状和就诊经历进行调查.问卷调查64名内科医生,了解其肺结核相关知识及肺结核病例处理情况.结果 244例患者中107人(43.9%)发生就诊延误,有咳嗽症状的人相对于没有出现咳嗽症状的人更容易发生就诊延误.44人(20.8%)确诊延误,其中29人被误诊,首次就医选择不同医疗机构确诊延误发生率差异有统计学意义(P<0.05).64名内科医生11人(17.2%)认为咳嗽、咳痰超过1个月可能感染肺结核.结论 初治阳性肺结核诊断延误率高,其中就诊延误是诊断延误发生的主要环节,应加大对公众肺结核相关知识宣传力度,降低就诊延误率.同时,要加强医务人员肺结核相关知识培训,减少误诊、诊断延误的发生.

    作者:张永;陈国勇;石国政;冯燕 刊期: 2012年第05期

  • 左炔诺孕酮宫内缓释系统对增生过长子宫内膜结构的影响

    目的 用组织病理学和电镜检查左炔诺孕酮宫内缓释系统(LNG-IUS)放置前后增生过长子宫内膜局部病理变化,以评估LNG-IUS对子宫内膜增生过长患者的治疗效果.方法 在光镜和电镜观察25例增生过长子宫内膜患者LNG-IUS放置前后子宫内膜组织学和超微结构的变化.结果 放置前子宫内膜超微结构表现为细胞增殖活跃,纤毛细胞增多,上皮细胞微绒毛丰富,细胞突起增多,细胞核大,细胞浆内细胞器丰富.LNG-IUS放置后6个月,光镜下观察子宫内膜明显变薄,子宫内膜腺体数目明显减少,腺腔变小,腺体发育不良,腺上皮呈立方状或低柱状,间质细胞明显蜕膜样变.子宫内膜超微结构表现为细胞变性,增殖明显受到抑制,上皮细胞固缩,纤毛细胞很少,细胞微绒毛明显减少,细胞间隙增宽,细胞核不规则,染色质边聚,内质网扩张,线粒体肿胀,糖原减少.结论 LNG-IUS对于治疗简单型和复杂型子宫内膜增生过长的患者是有效的,组织病理学和超微结构研究均提示子宫内膜增殖受到明显抑制,逆转增生过长的子宫内膜.

    作者:翁梅英;李琳;冯淑英;谢梅青;洪顺家 刊期: 2012年第05期

  • 高原地区2型糖尿病患者微血管病变与血液学相关分析

    目的 探讨高原地区2型糖尿病患者血液学指标水平变化与微血管病变程度关系.方法 在海拔2260m以上青海西宁地区选择137例2型糖尿病患者和82例健康者进行血小板计数(PLT)、血小板平均体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、尿微量白蛋白(U-mAlb)、血清Mg2+及糖化血红蛋白(HbAlc)测定,将两组结果进行比较分析.结果 高原地区2型糖尿病组的HbAlc、PLT、MPV、PDW、U -mAlb、血清Mg2+的浓度显著高于正常对照组(P<0.01).随着HbAlc水平增高,PLT、MPV、PDW、U-mAlb水平随之增高,血清Mg2+有增高的趋势,呈显著正相关(P<0.01).结论 2型糖尿病微血管病变程度与HbAlc的增高有关,血小板参数增高可作为血管及微血管病变的敏感指标,U-mAlb是糖尿病早期肾小球损伤的灵敏指标,微血管病变病情越重血清Mg2+水平越高.

    作者:刘建强 刊期: 2012年第05期

  • 深圳市医务人员艾滋病检测咨询效果分析

    目的 对医疗机构医务人员主动提供艾滋病检测咨询(PITC)项目工作情况进行评价,以期为PITC服务的广范推广提供依据.方法 按照PITC工作指南,在项目科室对就诊者主动提供艾滋病检测和咨询(PITC)服务,并对咨询和检测相关数据进行统计分析和评价.结果 共对74 076名就诊者提供了艾滋病检测和咨询(PITC)服务,提供信息率为112%,其中47.0%(34 784/74 076)就诊者接受了HIV检测,HIV检测率为5.2%,检出阳性者11例,阳性率检出率为0.32%;与基线相比较,提供HIV检测信息率、HIV检测率均显著提高(x2=1456.96,P<0.001;x2=6.33,P<0.05).不同类型医疗机构之间以及不同科室之间医务人员主动提供HIV检测信息率、HIV检测率的差异具有统计学意义(x2=316124,P<0.001; x2=1809.46,P<0.001).结论 PITC取得一定成效,但人群接受度有待进一步提高,在性病门诊等重点科室进行开展此项目效果更为明显.

    作者:罗珍胄;李岚;李真;袁军;杨祖庆;周国茂;田丽闪 刊期: 2012年第05期

  • 一起输入性疟疾疫情的调查及处理

    目的 了解广西玉林市容县外出缅甸挖矿农民工感染疟疾情况,为制定有效的流动人口疟疾管理与监测措施提供参考.方法 对从缅甸挖矿回归的农民工进行流行病学个案调查并采集耳垂血涂片镜检疟原虫.结果 8名从缅甸返回的农民工全部感染疟疾,原虫阳性率为100%,均为恶性疟,在缅甸均服用过抗疟药.结论 在缅甸从事挖矿农民工感染疟疾风险高,对回归的农民工要及时采血镜检和监测,阳性者给予规范治疗.应进一步加强流动人口疟疾监测.

    作者:全信斌;郭发元;林瑞玲;卢耀娟;高耀斌;杨彦 刊期: 2012年第05期

  • 兰索拉唑联合二联抗生素治疗消化性溃疡46例临床分析

    目的 探讨兰索拉唑联合二联抗生素阿莫西林和克拉霉素治疗消化性溃疡的临床效果.方法 选取94例2009年6月~2010年6月收治的消化性溃疡患者,随机分为治疗组和对照组,对照组48例,治疗组46例,对照组患者给予法莫替丁+阿莫西林胶囊+克拉霉素片+麦滋林治疗;治疗组患者给予兰索拉唑+克拉霉素+阿莫西林胶囊+麦滋林治疗,以7d为一疗程,共2个疗程.观察比较两组治疗效果及不良反应的发生率.结果 治疗组总有效率达到97.8%,对照组的总有效率达到87.5%,两组差异具有统计学意义(P<0.05),两组患者均未出现肝肾功能损害现象,不良反应发生率也较低.停药后不良反应的现象均消失.结论 兰索拉唑作为一种新型的质子泵抑制剂,其抑酸效果强大而持久,其配合二联抗生素克拉霉素和阿莫西林治疗消化性溃疡效果显著,比法莫替丁等H2受体疗效更为显著,且用药安全性高,值得借鉴.

    作者:吴健晖;拜明军 刊期: 2012年第05期

  • 海南省2010年麻疹疫苗强化免疫活动AEFI监测与处置

    目的 分析海南省2010年麻疹疫苗强化免疫活动中疑似预防接种异常反应(Adverse Events Following Immunization,以下简称AEFI)监测和与处置情况,为今后大型疫苗强化免疫活动或应急免疫活动预防接种异常反应监测工作提供策略依据.方法 全省建立疑似病例救治绿色通道,所有疑似病例通过全省AEFI监测系统上报,同时送定点医院免费救治,及时进行调查诊断,采用描述性流行病学方法分析AEFI个案数据,评价处置效果.结果 本次强化免疫共监测报告AEFI 573例,报告发生率为7.41/万;一般反应报告发生率为4.70/万,异常反应为1.42/万,偶合症为1.09/万;76.79%AEFI在接种后24h内发生,就诊后24h内报告率达94.07%,报告后48h内调查率达99.65%.86.4%异常反应临床诊断为过敏性皮疹,发生率为1.07/万;其它较严重反应为过敏性紫癜、脓疱疹、热性惊厥、血管性水肿和血小板减少性紫癜,发生率分别为0.03/万、0.03/万、0.02/万、0.01/万和0.01/万.15例严重的AEFI中,异常反应9例,占60%,偶合症4例,不明原因2例;除一例偶合病毒性心肌炎死亡外,其它均治愈或好转.结论 强化免疫活动建立敏感的AEFI监测系统、医疗机构绿色救治通道、及时处置AEFI病例非常关键,针对不明原因的、偶合症的病例需进一步实验室诊断准备,才能保证强化免疫工作的顺利开展.

    作者:曾雪霞;陈少明;莫少雄;何剑;陈碧玉;李俊;潘婷婷;孙莲英 刊期: 2012年第05期

  • Calpain-10基因多态性与黎族2型糖尿病胰岛素抵抗的关系

    目的 研究Calpain-10基因44位点单核苷酸多态性与海南黎族2型糖尿病(T2DM)胰岛素抵抗的关系,探讨Calpain-10与T2DM发病易感性之间的关系.方法 选择海南黎族健康查体者54例为正常对照组,T2DM患者46例为T2DM组.测量所有研究对象的身高、体重、腰围、臀围,计算体重指数(BMI)、腰臀比(WHR).并且空腹抽血测定胰岛素( Fins)、空腹血糖(FPG).用稳态模型方法,计算胰岛素抵抗指数(IRI)及胰岛β细胞功能指数(HBCI).对所有研究对象Calpain-10基因UCSNP-44多态性进行基因分型并计算其优势等位基因频率.结果 ①黎族人正常对照组UCSNP-44 TT基因型占78%,TC型占20%,CC型占2%;T等位基因频率为88%,C等位基因为12%.黎族人T2DM组UCSNP-44TT基因型占76%,TC型占22%,CC型占2%;T等位基因频率为88%,C等位基因为12%.2型糖尿病组与正常对照组比较,UCSNP-44位点等位基因及基因频率差异无统计学意义(P>0.05).按BMI≥25 kg/m2、BMI<25kg/m2分别比较,各组之间也无统计学差异(P>0.05).②T2DM组内UCSNP-44 TI组与TC+CC组BMI及WHR、FPG、FIns、IR、HBCI均无明显差异(P>0.05). 结论 本研究未发现Calpain-10基因UCSNP-44位点变异与T2DM及胰岛素抵抗发病相关,提示Calpain-10基因UCSNP-44并非海南黎族人群中T2DM常见相关发病基因.

    作者:陈小盼;宋钦华;孙胜花;郑海龙;李大伟 刊期: 2012年第05期

  • IL-10基因多态性与麻风易感性研究进展

    白细胞介素-10是具有免疫调节性质的抗炎因子,可抑制细胞免疫和诱导体液免疫,与麻风病易感性相关.IL-10启动子基因多态性可能通过影响转录水平而影响IL-10分泌,与麻风病发病及病情进展相关.现就IL-10启动子基因多态性与麻风病易感性研究作一综述.

    作者:陈小华 刊期: 2012年第05期

  • 中层取水防钉螺拦网的研究

    目的 评价中层取水拦网防止钉螺扩散效果、作用机理和费用-效益.方法 采用现场试验、纵向观察和卫生经济学方法评价中层取水拦网防止钉螺扩散效果,进行防螺原理和费用-效益分析.结果 重复2次中层取水拦网防螺试验结果均表明其拦(防)螺效果达100%.拦网取水口中心流速达0.88~1.00m/s,而拦网上部非过水断面流速为0.10~0.30m/s.现场应用表明在设置拦螺网后目标保护区的灌区渠系未查出钉螺.费用-效益分析表明中层取水拦螺网净效益费用比为1.43.结论 中层取水拦螺网具有显著的防螺效果和优良的效益费用比,完全满足水利要求;其作用机理除中层取水原理外,还与拦网具有的透水性及防螺罩等特殊结构有关.

    作者:黄轶昕;杭德荣;王志坚;李伟;江涛;巢农;朱涛;王跃进;张联恒 刊期: 2012年第05期

  • 深圳市南山区2010~2011年学校面制食品铝污染情况分析

    目的 了解2010~2011年南山区学校食堂面制食品中铝污染状况. 方法 对2010~2011年南山区学校食堂6种面制进行采样,按GB/T 5009.182 ~2003《食品卫生检验方法》处理样品,检测铝含量,卫生评价按GB2760 ~2011《食品添加剂使用标准》进行.结果 2010年南山区学校食堂面制食品中铝的合格率为63.40%;2011年为92.81%,二者有明显统计学差异(x2=11.37,P<0.01).不同种类面制品不同种类面制食品铝含量的差异无统计学意义(P>0.05).结论 面制食品的铝污染根源在于含铝添加剂的使用.

    作者:胡永松;朱凤;李维克 刊期: 2012年第05期

中国热带医学杂志

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主管:国家卫生和计划生育委员会

主办:中华预防医学会;海南疾病预防控制中心