乐桥良;张捷;许其增;高河元
一、资料与方法憗1. 临床资料:87例慢性HBV感染病人均来自山东省莱芜市中西医结合肝病研究所及山东省立医院肝病中心,其中男51例,女36例;年龄12~60岁,平均(36±12)岁;病理分类:无症状表面抗原携带者(ASC)16例,慢性迁延性肝炎(CPH)26例,慢性活动性肝炎(CAH)45例。30例HBcAg阳性标本及3例正常肝组织标本均由病理科提供。
作者:张业金;赵洪涛;陈煜;郭朋;张爱国 刊期: 2001年第04期
目的证明野生型p53调节肝癌细胞P-糖蛋白(p-glycoprotein, P-gp)表达的设想。方法通过采用脂质体介导转染技术,将野生型p53 cDNA导入一种p53和Rb基因缺失的肝癌细胞株Hep3B。结果经G418筛选获得稳定整合了野生型p53的克隆(wt-p53)和空载体克隆(pNeo);经northern和western印迹鉴定,wt-p53细胞表达p53;p21waf1/cip1蛋白的升高证实wt-p53细胞的p53有转录活性,并致使P-gp表达降低。细胞毒性试验表明:与pNeo细胞相比,wt-p53细胞对阿霉素和丝裂霉素化疗敏感。流式细胞仪显示:wt-p53细胞的阿霉素荧光量为pNeo细胞的13倍。结论在肝癌细胞Hep3B中重建野生型p53的活性由于降低P-gp的表达而对化疗药敏感。
作者:韩雨生;梁力建;黄洁夫;明文玉 刊期: 2001年第04期
一、资料与方法1.病例来源:30例慢性HBV感染者系我院门诊及住院患者。男20例,女10例,其中无症状HBsAg携带者9例(AsC组);慢性乙型肝炎12例(CHB组);慢性重型肝炎9例(CHF组),平均年龄36.4岁(13~58岁)。21例行肝活检。肝炎分级分期按1995年北京传染病与寄生虫病学术会议修定标准。所选病例全部为HBsAg(+)抗-Hbe(+)、及抗-HBc(+)。
作者:戴炜;郭亚兵;杨大国;舒丹;唐蔚;袁静;王召钦 刊期: 2001年第04期
目的探讨一氧化氮(NO)和前列腺素在门静脉高压性胃病(PHG)大鼠胃粘膜灌注中的作用。方法部分结扎大鼠门静脉主干2周后,采用中性红清除率法测定大鼠胃粘膜血流量(GMBF),同时观察门静脉压力(PVP)的变化。结果 PHG组大鼠GMBF和PVP显著高于假手术组(t=3.431、3.312,P<0.01)。低剂量的NO合成酶抑制剂L-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)呈剂量依赖性降低PHG大鼠GMBF,而对假手术组GMBF无明显影响;高剂量的L-NAME(12mg/kg)能非常显著降低PHG和假手术组大鼠GMBF。前列腺素环氧合酶抑制剂消炎痛能明显降低PHG组大鼠GMBF,而对假手术组GMBF无明显影响;预先给消炎痛处理后在假手术组大鼠中,静脉注射低剂量L-NAME(4mg/kg)前后GMBF无明显变化,高剂量L-NAME(12mg/kg)降低大鼠的GMBF与未用消炎痛处理组比无明显变化;预先给消炎痛处理后在PHG组大鼠中,L-NAME剂量(4mg/kg、12mg/kg)依赖性降低大鼠的GMBF与未用消炎痛处理组比无明显改变。结论 NO、前列腺素在调节PHG大鼠的GMBF起重要作用,但两者无协同作用。
作者:乐桥良;张捷;许其增;高河元 刊期: 2001年第04期
目的研究HCV E1蛋白的B-细胞表位。方法将携带HCV E1基因的重组质粒pQE-30- HCVe118在E.coli M15中进行大量诱导、表达;对表达的E1蛋白进行分离、纯化;再以纯化的蛋白捕获HCV 感染者血清中能与HCV E1蛋白特异反应的IgG,以此IgG作为筛选分子,对随机十二肽库进行淘洗,经ELISA筛选噬菌体阳性克隆并测序。结果 HCV E1蛋白获得了高纯度的纯化,这种蛋白可特异地与部分丙型肝炎患者血清发生反应。在获得的10个模拟表位中, 6、2和2个递呈肽分别与HCV E1蛋白的320~336aa、251~263aa和225~248位aa具有大同源性。结论在E1蛋白中存在多个B-细胞表位,320-336位极可能为HCV E1蛋白的优势表位。
作者:曹凤;史宣玲;杜勇;侯利华;季阳;王海涛 刊期: 2001年第04期
我们将人工合成的反义胰岛素样生长因子Ⅱ(insulin-like growth factor-Ⅱ,IGF-Ⅱ)转导入体外培养的HepG2人肝癌细胞内,观察细胞生物学特性的改变,旨在为反义IGF-Ⅱ应用于肝癌的基因治疗提供实验依据。
作者:宁晓燕;杨冬华;杜江;徐重;梁巧明;杨波 刊期: 2001年第04期
目的观察并评价混合人工肝支持系统联合肝移植在救治重型病毒性肝炎(重型肝炎)中的作用与疗效。方法采用自行研制的体外混合人工肝支持系统对8例中晚期重型肝炎患者进行人工肝过渡支持治疗,3~14d后行原位肝移植术。结果 8例重型肝炎患者经混合人工肝支持,肝衰竭得到有效控制,均成功等到肝移植。肝移植后4例存活,存活率为50%,另4例因肺部感染、肝肾综合征等死亡。结论人工肝支持系统与肝移植联合可作为中晚期重型肝炎肝衰竭患者治疗的有效手段。
作者:王英杰;董家鸿;王宇明;王曙光;别平;刘俊;牛润章;何念海;刘国栋;李嘉佳;文红伟;罗宾伟 刊期: 2001年第04期
重型肝炎的救治一直是我国临床医学的重大难题。现结合我们的工作,将有关重型肝炎内科治疗研究进展综述如下,其中部分治疗尚属探索性研究。
作者:王宇明 刊期: 2001年第04期
目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心(C)区和包膜1(E1)区变异与其感染慢性化的关系。方法 10例HCV慢性感染者和2例急性感染者血标本,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HCV的C区羧基端、E1及E2区氨基端片断(1kb),扩增产物进行克隆,以单链构象多态性(SSCP)和异质性双体(HD)分析对每份血清的30个克隆的C/E1区准种(quasispecies)进行筛选,挑选每例标本HCV的优势株与劣势株序列进行测定,并分析推导的氨基酸序列。结果各例患者血清中HCV的C/E1区扩增片段形成的SSCP条带间差异明显,而HD与同源双体之间差距不明显。HCV急性感染者和慢性感染者血清病毒C区无发生变异,后者E1区氨基酸替换率为1.32%, 但功能性氨基酸无改变。结论 HCV的E1区序列变异以准种形式存在,但与免疫逃避可能无关。
作者:陈嵩;刘志;王宇明 刊期: 2001年第04期
乙型肝炎患者自体每日可清除外周血中大量乙型肝炎病毒(HBV)根据近对HBV在人体内动力学研究, HBV的半衰期为26.4h, 病毒存活期为36.6h, 日更新率为48%, 所以控制人体病毒感染的关键在于清除HBV ccc DNA, 抑制病毒复制[1,2]。根据目前研究, 可能通过两种途径清除HBV cccDNA, 即非溶细胞性及溶细胞性, 而且以前者为主[3]。至于其具体途径目前尚不完全了解。但是肝脏及肝细胞在清除HBV ccc DNA过程中具有重要作用是无庸置疑的。
作者:张定凤 刊期: 2001年第04期
作者: 刊期: 2001年第04期
为了对重型病毒性肝炎临床诊断标准重新进行探讨,特将我院1997年至1999年收治的565例重型病毒性肝炎患者的临床主要特点进行分析。
作者:邹正升;陈菊梅;辛绍杰;邢汉前;沈宏辉;李建宇;刘艳萍;李保森 刊期: 2001年第04期
目的研究大黄素抗肝纤维化作用。方法采用40%四氯化碳给大鼠皮下注射制备肝纤维化模型并以小、中和大剂量大黄素(20mg/kg、40mg/kg、和80mg/kg体重)干预,测定肝功能、血清透明质酸、层粘连蛋白及肝组织胶原蛋白,并通过光镜观察肝组织病理变化,免疫组织化学法检测肝组织α-肌蛋白表达。结果大黄素组较模型组:(1)肝功能明显改善:谷氨酸转氨酶及碱性磷酸酶显著降低,总蛋白及白蛋白显著升高;(2)血清透明质酸及层粘连蛋白显著降低;(3)肝组织胶原蛋白含量明显减少;(4)肝组织纤维化程度明显改善;(5)肝组织α-肌动蛋白表达减少。结论大黄素具有抗肝纤维化作用。
作者:展玉涛;魏红山;王志荣;黄新;徐芹芳;李定国;陆汉明 刊期: 2001年第04期
目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对肝瘤细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达的影响。方法将HCV核心基因cDNA插入真核表达载体PBK-CMV的HindⅢ和BamHⅠ位点间,构建重组质粒PBK-HCVc。再将重组质粒PBK-HCVc和空载体分别导入肝癌细胞株HepG2中,G418筛选,RT-PCR、蛋白印迹鉴定HCV核心蛋白表达。免疫组织化学,蛋白印迹检测VEGF蛋白表达;原位杂交,RT-PCR检测VEGF mRNA。结果重组质粒PBK-HCVc在HepG2细胞中有稳定表达;表达HCV核心蛋白的细胞HepG2-C的VEGF在蛋白水平和mRNA水平较转染空载体的细胞HepG2-CMV明显升高。结论 HCV核心蛋白能激活VEGF表达,可能对肝细胞癌的生长具有促进作用。
作者:刘重阳;刘为纹;杨建民;房殿春 刊期: 2001年第04期
目的评估急性肝坏死兔甘氨酸结合对氨基苯甲酸(PABA)转变成马尿酸的代谢能力。方法 30只雄性大耳白兔随机分组成实验组(20只)用D-氨基半乳糖致大耳白兔急性肝坏死,对照组(10只)注射生理盐水。采用高效液相色谱法测定血清中不同时间的对乙酰氨基马尿酸(PAAHA)、对氨基马尿酸(PAHA)和对乙酰氨基苯甲酸(PAABA)的含量。结果实验组与对照组比较,马尿酸的形成明显减少。在不同时间分析马尿酸的代谢率,显示与肝损伤的程度相关,而PABA的乙酰化程度与肝损伤程度无明显相关,在严重急性肝损伤时PAHA的浓度为零。结论甘氨酸结合PABA的代谢率的测定可作为肝功能定量试验和急性肝坏死的灵敏指标。
作者:孙月庭;刘斌剑;万军;涂洪章 刊期: 2001年第04期
目的观察携带人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因的重组腺病毒载体(BB-102)转染BEL-7402、HLE及HuH-7肝癌细胞后p53基因的表达,以及诱导肝癌细胞凋亡,影响肝癌细胞的增殖。方法 BB-102以MOI为50 pfu/细胞感染肝癌细胞系BEL-7402(p53基因为野生型)、HLE及HuH-7(p53基因为突变型)。免疫组织化学法检测BB-102携带的p53基因的表达,TdT法原位检测肝癌细胞的凋亡。结果 BB-102携带的p53基因能在转染了BB-102的肝癌细胞中高效表达。转染BB-102后肝癌细胞生长明显受到抑制;染毒后第4~10d期间,BEL-7402、HLE及HuH-7三株肝癌细胞的平均受抑率分别为58.5%、81.5%及71.1%,其中对p53基因突变的肝癌细胞的抑制程度要大于对p53基因为野生型肝癌细胞的抑制程度。转染BB-102还能诱导肝癌细胞的凋亡。结论 BB-102通过其介导p53基因的表达抑制肝癌细胞的增殖,这为BB-102应用于肝癌的基因治疗提供实验依据。
作者:施明;王福生;刘明旭;张冰;邱兆华;雷周云;Masayoshi Namba;高兰兴;吴祖泽 刊期: 2001年第04期
一、资料与方法1. 自动同步负压装置的结构与原理:本装置包括专用穿刺针和自动同步负压器。专用穿刺针包括双峰外磨套管针和单峰内磨穿刺针,前者用来穿刺皮肤,其结构特征:套管针针孔呈双峰双斜面状,双峰相互对应,针峰峰刃由针孔管壁外侧面磨制,针孔锋刃锐利,针孔口径上、下相等,在套管针内设有穿刺针芯。后者用来穿刺肝脏
作者:谢雨党;陈冬 刊期: 2001年第04期
应用杆状病毒穿梭质粒载体与HBV X表达质粒共转染HepG2细胞,研究HBV X蛋白对杆状病毒载体中的NFκB启动子和增强子反式激活作用,作为进一步杆状病毒载体应用研究的基础。
作者:郭亚兵;杨继雄;杨洁;冯筱榕;梁炽森 刊期: 2001年第04期
我们对肝硬化食管静脉曲张患者进行食管动力和酸反流研究,并探讨其机理。一、资料与方法经胃镜检查证实有食管静脉曲张的肝硬化患者为研究对象,按国内标准根据范围、形态和内径对食管静脉曲张进行分级。肝性脑病、活动性出血和凝血酶原活动度小于30%者除外。符合条件者40例,男31例,女9例,年龄为(43.3±4.6)岁,其中乙型肝炎后肝硬化34例,酒精性肝硬化6例。按Child-Pugh等级分类,A级11例,B级13例,C级16例。AB级两组患者食管静脉曲张程度显著差异(P<0.05),BC级两组无显著差异。健康对照组22例,平均年龄(43.3±4.6)岁,无胃肠道症状和累及食管的全身性疾病。
作者:林向飞;朱启槐;韩清锡 刊期: 2001年第04期
脂质体是基因转导的重要方法,其与日本血凝病毒(hemoagglutinating virus of Japan,HVJ)形成的融合脂质体(fusogenic liposomes,FLs)较传统脂质体在性能上有了很大提高,具有更高的稳定性、安全性和转导效率,制备、使用更加快捷方便。
作者:代文杰;姜洪池 刊期: 2001年第04期