苏艳新；王立
目的:构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)复活促进因子A(Resuscitation-promoting factor,ARpfA)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化.方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfA基因(1 224bp),然后用双内切酶消化后,与同样酶消化的pET32aα(+)载体连接,转入大肠杆菌Top10;阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定.测序正确后,将重组质粒转化到的大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,由盯启动子调控表达了RpfA蛋白;利用His-tag in-gel Stain对表达蛋白进行鉴定,后对目的蛋白进行纯化.结果:双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果与文献报道一致.经SDS-PAGE分析和His-tag in-gel Stain鉴定均发现66ku处有特异性蛋白条带.结论:成功克隆并构建了RpfA基因的重组表达质粒pET32 α(+)-RpfA,并获得了高纯度的重组蛋白,为以后的深入研究奠定了基础.
作者：徐蕾；帖儒修；王爽；王瑜伟；李娜；何永林；蒋仁举 刊期： 2008年第05期
目的:研究结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性细胞免疫应答及其对结核分枝杆菌(Mycobacteriun tubetculosisMTB)毒株感染的保护力.方法:Balb/c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,皮内免疫8周后处死小鼠,流式细胞分析仪检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的变化;取小鼠脾淋巴细胞体外培养并用PPD刺激,MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数(SI);ELISA法检测培养上清液中IFN-?;免疫后第8周,用MTB毒株H37Rv经小鼠腹腔注射,4周后处死小鼠,测定小鼠肺脏荷菌量,观察免疫小鼠对MTB抵抗作用.结果:H37Ra免疫小鼠脾脏CD3+T细胞、CD4+T细胞的百分率分别为(41.63±1.68)%、(27.08±0.58)%,显著高于NS对照组(38.34±0.74)%、(24.37±1.60)%(P<0.05). H37Ra免疫组脾脏CD3+T细胞、CD4+T细胞及CD8+T细胞的百分率均不同程度地高于BCG免疫组,但差异无统计学意义.脾淋巴细胞SI和IFN-?水平检测均发现H37Ra免疫组显著高于NS对照组(P<0.05),略高于BCG免疫组.感染4周后H37Ra组小鼠肺脏荷菌量与NS对照组比较下降0.954log10CFU,差异有显著性(P<0.05),与BCG组之间差异均无显著性(P>0.05).结论:H37Ba免疫小鼠后可以诱导产生特异性抗结核的细胞免疫应答,能够抵抗毒株H37Rv的攻击,且免疫效果与BCG相近.
作者：王淑玲；刘来成；卢贤瑜；冯文莉 刊期： 2008年第05期
目的:比较测定甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP)的3种不同方法.方法:采用时间分辨荧光免疫分析法(Tim-re-solved fluoroimmuno assay,TRFIA)、放射免疫法(Radio immuno assay,RIA)与酶联免疫吸附法(Enzme linked immunoabsorbentassay,ELISA).分别进行线性、精密度、对比实验比较.结果:3种方法中,TRFIA法线性范围宽;精密度试验中TRFIA法批内为3.3%,批间为4.7%;RIA法批内为5.3%,批间为8.9%;ELISA法批内为10.5%,批间为15.2%.比较试验显示RIA法与TRFIA法的结果相关性比ELISA法与RIA法好.结论:TRFIA法测定AFP优于RIA法和ELISA法.
作者：陈海蔚；伍勇 刊期： 2008年第05期
目的:探讨多西紫杉醇联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor Necrosis Factor-related poptosis-inducing ligand,TRAIL)体外诱导胃癌细胞凋亡的作用及可能机制.方法:采用MTT法检测不同浓度(1、5、10、20、40ìg/ml),不同时间(12、24、36、48h)T多西紫杉醇的抗癌活性并计算其亚毒性剂量.用流式细胞仪检测多西紫杉醇(亚毒性剂量)及TRAIL(200ng/ml)单独及联合应用后SGC7901的凋亡率.RT-PCR法检测DR4,DR5在加药前后的表达.结果:对照组(C组)、亚毒性剂量的多西紫杉醇(P组)、TRAIL(T组)及二者联合(T+P)作用24h后胃癌细胞的凋亡率分别为2.09%、10.65%、7.79%和24.51%,T+P组凋亡率明显升高,与C组、T组、P组两两比较时,差异具有统计学意义(P<0.05):多西紫杉醇处理组DR5表达增加.结论:多西紫杉醇与TRAIL具有协同抗胃癌作用,其机制可能与DR5表达的上调有关.
作者：苏艳新；王立 刊期： 2008年第05期
目的:采用经济,简易的方法制备早产儿视网膜病变(Retinopathy of prematurity,ROP)的可量化动物模型.方法:新生鼠仔44只称重随机分为2组,实验组于出生后7d置于75%±1%氧箱内饲养5d然后回到正常空气饲养5d,对照组于正常环境饲养.ADP酶法视网膜铺片了解视网膜血管的改变,组织切片HE染色计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数,免疫组化法观察视网膜各层血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达.结果:持续高浓度氧使鼠仔视网膜血管收缩变窄甚至闭塞,视网膜中央部大片无灌溉区,相对缺氧使视网膜大血管明显扩张、迂曲,大量结构异常的新生血管形成.实验组平均每个切面突破视网膜内界膜的内皮细胞核数为(32.800 0±0.767 8)个,对照组平均为(2.750 0±0.716 4)个,两者比较差异有显著性意义(P<0.01);对照组VEGF染色较实验组减弱.结论:该模型可重复性强、稳定性高、可定量研究.是研究早产儿视网膜病新生血管发生机制及相关治疗的合适模型.
作者：张琴；韦红 刊期： 2008年第05期
目的:探索缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液(Brain tissue extract of hypoxia-preconditioned mice,BHP)对NGF诱导分化的PC12细胞缺氧耐受性的影响及保护性作用的适合浓度.方法:复制小鼠急性重复缺氧模型,制备BHP,用考马斯亮蓝法定量蛋白.在分化PC12细胞中加入BHP使其蛋白终浓度分别为1.0、10.0、100.0ìg/ml(BHP组).以等蛋白终浓度正常小鼠脑匀浆提取液(Brain tissue extract of normal mice,BN)作为对照组(BN组).同时设置只加PBS的溶剂对照组(PBS组).缺氧(2%O2)培养24、48、72h后,采用回唑盐(MTT)比色法检测各组细胞活力(OD570nm值)和乳酸脱氢酶(LDH)透出率、缺氧72h晚期凋亡率.结果:缺氧24h时,蛋白终浓度为10.0、100.0ìg/ml的BHP组OD570nm值显著高于同浓度BN组和缺氧PBS组,其LDH透出率显著低于同浓度BN组和缺氧PBS组.随缺氧时间延长,其保护作用逐渐减弱.至缺氧72h时,仅蛋白终浓度为100.0ìg/ml的BHP组OD570nm值显著高于同浓度BN组,其LDH透出率、晚期凋亡率均显著低于缺氧PBS组.结论:BHP对分化PC12细胞缺氧耐受性的增强作用有浓度依赖性和时间依赖性,蛋白终浓度为100.0ìg/ml的BHP组保护作用稳定、持久.
作者：李宏；高钰琪 刊期： 2008年第05期
目的:观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的成熟3T3-L1脂肪细胞分泌视黄醛结合蛋白4(Rtinol BindingProtein 4,RBP4)的影响.方法:体外培养3T3-L1细胞,待细胞完全融合后两天进行诱导分化为成熟脂肪细胞,应用不同浓度的重组TNF-α干预,采用放射免疫分析法检测干预后不同时间成熟脂肪细胞RBP4的分泌量.结果:(1)不同浓度TNF-α(0.2、1.0、5.0、10ng/ml)对脂肪细胞RBP4的分泌均有抑制作用,其抑制效应呈剂量依赖性:随着TNF-α浓度的增加,RBP4水平降低越加明显.(2)各实验组随着干预时间延长,RBP4虽有降低之趋势,但组内各时间点差异无统计学差异.(3)二元回归分析提示TNF-α对RBP4有影响.结论:TNF-α能抑制成熟脂肪细胞RBP4的分泌,其抑制效应有剂量依赖性,而与干预时间无关.
作者：未友能；青华；段炼；梅玫；程庆丰；李启富 刊期： 2008年第05期
目的:构建和鉴定卡氏肺孢子(Pneumocystis carinii,Pc)主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,MSG)基因短干扰性RNA(Short interfering RNA,siRNA)表达载体.方法:设计并人工合成针对PC MSG基因的短发夹状(Short hairpin RNA.shRNA)序列并定向克隆到siRNA表达载体pTZU6+1上,采用双酶切后凝胶电泳与DNA测序法进行鉴定.结果:酶切和测序鉴定得到的产物与预期目的基因一致.结论:成功构建卡氏肺孢子主要表面糖蛋白基因siRNA表达载体.
作者：王莉妮；姚云清；谭燕；唐滢浍；李文桂；马良；陈雅堂 刊期： 2008年第05期
目的:构建LMP-3功能区真核表达重组质粒.方法:设计合成LMP-3活性区引物,应用PCR方法,扩增其基因片段,亚克隆至真核表达质粒pEGFP-N1,终构建重组表达质粒pEGFP-N1-LMP-3,同时进行酶切鉴定和测序.结果:PCR扩增LMP-3基因序列正确,构建的重组表达质粒pEGFP-N1-LMP-3经EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切及测序鉴定正确.结论:成功获得真核表达重组质粒pEGFP-N1-LMP-3,为进一步研究其成骨功能奠定基础.
作者：杨渝勇；倪卫东 刊期： 2008年第05期
目的:比较彩超、DSA、CTA及MRA在检测兔创伤性动脉瘤中的价值.方法:新西兰兔20只,应用显微外科手术建立兔股动脉动脉瘤(Pseudoaneurysm,PA)模型,于术后12d(术后7～11d股部形成搏动性包块)行彩超、DSA、CTA及MRA检查,比较其检查结果,并与尸检结果对照.结果:20只兔16只建模成功,尸检显示11个瘤体伴血栓形成.彩超、DSA、CTA及MRA检查,瘤体显示率均为100%,供养动脉显示率彩超为81.25%(13/16),另3种均为100%,瘤颈显示率分别为81.25%(13/16)、87.5%(14/16)、37.50%(6/16)及31.25%(5/16),血栓显示率分别为81.82%(9/11)、18.18%(2/11)、18.18%(2/11)及36.36%(4/11).结论:在创伤性兔股动脉PA瘤体及供养动脉的显示上,彩超、DSA、CTA及MRA间差异无显著性意义,在瘤颈的显示上,彩超、DSA优于CTA及MRA,在瘤体内附壁血栓的显示上,彩超优于MRA、DSA及CTA.
作者：黄晓玲；孙建鸣 刊期： 2008年第05期
目的:观察RNAi沉默膀胱癌BIU-87细胞磷脂酶C-ε(Phospholipase C epsilon,PLCε)表达后对藏花素(Crocin)抑制人膀胱癌BIU-87细胞增殖作用的影响.方法:将携有siRNA基因的真核表达质粒PGenesil-PLC?转染BIU-87细胞后,分为5组:未转染组、pGenesil-NP阴性质粒组、pGenesil-PLC ε质粒组、Crocin组、pGenesil-PLCε联合Crocin组.MTT法观察不同处理组对BIU-87细胞的生长抑制作用.RT-PCR法检测转染后对PLCε mRNA表达的影响及各处理组PCNA(Proliferating cellnuclear antigen)、CyclinD1 mRNA表达.Western-blot检测PCNA、CyclinD1蛋白表达.结果:RNAi可抑制BIU-87细胞78.06%的PLCεmRNA表达.pGenesil-PLCε联合Crocin组可增强Crocin对BIU-87细胞的生长抑制作用,48h抑制率达45.30%,且与pGenesil-PLCε质粒组和Crocin组相比较有显著性差异(P<0.01).RT-PCR和Western-blot结果显示与RNAi沉默PLCε组比较,RNAi PLC?联合Crocin组明显下调了PCNA、Cyclin D1基因和蛋白的表达(P<0.05);较单独Crocin组比较,RNAiPLC ε联合Crocin组显著降低了PCNA基因和蛋白的表达(P<0.05),降低了Cyclin D1蛋白的表达(P<0.05),Cyclin D1 mRNA表达变化两组间无显著性差异(P>0.05).结论:沉默PLC ?基因可增强Crocin对BIU-87细胞的抑制作用,其机制与进一步下调PCNA、CyclinD1的表达有关.
作者：冀慧莹；吴绮思；郭永灿；吕纯芳；赵培；罗春丽 刊期： 2008年第05期
目的:探讨定量组织速度成像(Quantitative tissue velocity imaging,QTVI)技术在儿童扩张型心肌病(Dilated cardiomy-pathy,DCM)左心收缩功能评价中的应用.方法:DCM患儿15例,分为DCM A组(轻度心衰)和DCM B组(中、重度心衰),健康儿童12例为对照组.同步获取心尖四腔、左室两腔和左室长轴切面的动态三平面组织速度图,分析各组左室基底段和中间段心肌速度曲线.结果:(1)DCM A组、B组左室各节段射血期峰值收缩速度(Peak systolic velocity,Vs)较对照组普遍降低,尤以B组降低更显著(P<0.05),而A组部分节段无显著降低(P>0.05).(2)DCM组共42个节段收缩后收缩(Post-systolic short-ening,PSS)速度高于射血期Vs,其中B组30个(71.43%),A组12个(28.57%).结合应变分析,其中21个节段(50.00%)为等容舒张期主动收缩,11个节段(26.19%)为矛盾运动.结论:利用QTVI技术能准确评价儿童DCM患者左心收缩功能.
作者：熊复；余更生；白永虹；计晓娟；田杰；钱永如 刊期： 2008年第05期
目的:探讨产前用地塞米松(Dexamethasone,Dex)对胎鼠肺和肝组织维生素A(Vitarain A,VA)水平的影响.方法:健康清洁级SD大鼠随机分为Dex组和生理盐水(NoHnal saline,Ns)对照组,妊娠第16、17、18d连续3d分别给予药物干预后,第19d剖宫取出胎鼠,测定肺和肝组织VA水平,观察Dex对组织VA水平的影响.结果:(1)胎鼠肺和肝单位组织VA水平Dex组均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),尤以肺单位组织VA水平升高明显(P<0.01).(2)胎鼠肝组织VA总水平两组比较差异无统计学意义(P>0.05),而肺组织VA总水平Dex组仍高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:产前用Dex可以提高胎鼠肺和肝单位组织VA水平,同时提高胎鼠肺组织VA总水平,但对胎鼠肝组织VA总水平无显著影响.
作者：房春晓；陈贻骥；瞿平；刘友红 刊期： 2008年第05期
目的:探讨无创正压通气在治疗病理产科并发急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)中的作用.方法:回顾性分析中心ICU无创正压通气治疗病理产科并发ALI的病例,共45例.结果:45例无创正压通气治疗,成功44例,占97.8%(44/45);仅1例发展为ARDS,改行有创通气,占222%(1/45).结论:病理产科是ALI发生的高危人群.无创正压通气是治疗病理产科并发ALI的有效手段,抢救成功率高.早期诊断、早期治疗并严密监测向急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distress sysdrome,ARDS)进展是治疗的关键.
作者：徐昉；刘琼；周发春；陈军 刊期： 2008年第05期
目的:制备镀银的医用聚丙烯网片(Polypropylene mesh,PP),并检测其抗菌性.方法:采用银作为抗菌剂,通过酒石酸钾钠作为还原剂的化学液相还原法,制成镀银PP.并分别用纸片扩散法和浸泡法对镀银组(n=10)和对照组(n=10)网片的抗菌性进行定性和定量的对比检测.结果:纸片扩散法(定性):在1d、3d、7d对照组(8mm x 8ram x 0.65mm)抑菌圈均不明显,网眼内还可见有金葡菌菌落附着生长.镀银组(8mm x 8mm x 0.65mm)抑菌圈则较为明显.两组比较有显著性差异(P<0.05).不同时间段两两相比,差异无显著性(P>0.05).浸泡法(定量):60min和120min时,对照组和镀银组比较有显著性差异(P<0.05).240min时对照组和镀银组比较无显著性差异(P>0.05).不同时间段两两相比,差异无显著性(P>0.05).结论:镀银PP具有较为肯定的抗菌性,抗菌性随时间推移无明显变化.
作者：王刚；赵渝；刘明方 刊期： 2008年第05期
目的:研究RNA干扰活性蛋白酶受体(Pmtease-activated receptors,PARl)表达以及对人类大肠癌细胞侵袭力的影响.方法:体外化学合成PAR1基因序列特异性双链RNA(dsRNA),在脂质体(Lipid)的介导下转染入人大肠癌Lovo细胞株,荧光倒置显微镜下观察转染效率,应用RT-PCR和Western blot检测PAR1mRNA和蛋白表达,体外实验测定肿瘤细胞穿透matrigel的能力.结果:干扰片段转染组的转染Pgenesil-1-PAR1-siRNA后大肠癌Lovo细胞株的PAR1基因和蛋白的表达被PAR1-siRNA有效沉默,与阴性对照组、空白质粒转染组相比PAR1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05).转染48h后测定大肠癌Lovo细胞的侵袭力明显降低(P<0.01).结论:PAR1-siRNA能有效抑制人大肠癌细胞株PAR1基因和蛋白的表达,降低人大肠癌细胞的侵袭力.
作者：陆信仰；王继见；王亚旭 刊期： 2008年第05期
目的:探讨眶颧骨折继发复视等畸形的有效治疗手段,缩小眶腔的有效方法,重建眶腔的参考标准.方法:术前三维CT眶径测量,术中测量、修复重建后测量对比,按测量值复位扩大的眶腔,使用材料衬垫眶壁,缩小眶容积.结果:术前CT测量值能更准确了解骨折移位及眶腔变化,手术前后测量对比是眶修复重建的重要依据.结论:眼球三维CT眶径测量简便实用,准确性高,术后效果好,对眶颧骨折继发畸形治疗、眶重建、缩小眶腔容积,治疗复视、眼球内陷有指导意义.
作者：邓诚；归来；肖水生；钟大文；何玫；李颖；陈金华 刊期： 2008年第05期
目的:探讨永生化人支气管上皮细胞(HPV-18 immortalized human bronchial epithelial cells,BEP-2D)恶性转化过程中p16基因甲基化改变.方法:选取正常BEP-2D细胞及经过烟草悬凝物处理后的15周(week-15,W-15)、25周(W-25)、38周(W-38)和43周(W-43)的BEP-2D细胞作为研究对象,采用巢式MSP(Nested-methylation-specific PCR,Nested-MSP)检测各细胞株中p16基因的甲基化改变情况.结果:正常BEP-2D细胞p16基因未发生甲基化,而烟草悬凝物处理后的15周、25周、38周和43周的BEP-2D细胞p16基因发生甲基化.结论:p16基因甲基化改变可能发生在肺癌形成的早期,检测p16基因甲基化可以作为肺癌早期辅助诊断的生物标记物之一.
作者：张诚；吴庆琛；李强；朱茂祥；杨陟华；潘秀颉；谢俊豪 刊期： 2008年第05期
目的:研究射频消融(radiofrequency ablation,RFA)联合高频热疗(High freguency hyperthermia,HFH)对兔肝VX2肿瘤侵袭能力的改变.方法:采用RFA和HFH治疗,用移植的方法建立兔肝VX2肿瘤模型,按治疗方法不同随机分为4组:空白组(A组,8只);RAF组(B组,8只);HFH组(C组,8只);RFA+HFH联合治疗组(D组,8只).结果:(1)肿瘤体积:B组、D组肿瘤体积在治疗后第14d明显缩小,B组、D组组内比较(P<0.05),D组缩小明显,D组与B、c组组组间比较有明显差异(P<0.05).A组及c组肿瘤体积继续增大,A组增大显著高于各治疗组(P<0.05).(2)治疗14d后MMP-2、MMP-9、CD34阳性表达:肿瘤中心组织中,各指标阳性表达率在B组、D组中低,在A组高,C组与A组组间比较有明显差异(P<0.05);肿瘤边缘组织中,治疗组的各指标阳性表达率均比与A组低,与A组比较均有明显差异(P<0.05),D组中各指标阳性表达率低,D组与B组、C组比较均有明显差异(P<0.05).结论:RFA,HFH 2种热疗方法均可降低肿瘤的侵袭力,将二者联合运用,降低肿瘤侵袭力的作用更明显.
作者：唐荣；乔正荣；吴华平；张国武 刊期： 2008年第05期
目的:改进大鼠原位小肠移植(small bowel tansplantation,sBT)的三套管血管吻合技巧.方法:动脉吻合采用供体带肠系膜上动脉(superior mesenteric artery ,SMA)的腹主动脉(Abdominal aorta,AA)段两端与受体的腹主动脉套管吻合,静脉吻合采用供体的肝门静脉(Hepatic portal vein,HPV)与受体左肾静脉套管吻合.结果:60例接受小肠移植的大鼠存活率为93.3%(56/60),整个手术用时1.5～2h,其中动脉吻合用时(4±1)min,静脉吻合用时1min,动、静脉吻合共用时(4±2)min.结论:改进三套管血管吻合技巧既加快了吻合速度,缩短了手术时间,又减少了手术并发症,提高了手术成功率.
作者：张国云；钱学华 刊期： 2008年第05期
重庆医科大学学报杂志
主管:重庆市教育委员会
主办：重庆医科大学
