黄晓玲；孙建鸣
目的:构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)复活促进因子A(Resuscitation-promoting factor,ARpfA)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达和纯化.方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfA基因(1 224bp),然后用双内切酶消化后,与同样酶消化的pET32aα(+)载体连接,转入大肠杆菌Top10;阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定.测序正确后,将重组质粒转化到的大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,由盯启动子调控表达了RpfA蛋白;利用His-tag in-gel Stain对表达蛋白进行鉴定,后对目的蛋白进行纯化.结果:双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果与文献报道一致.经SDS-PAGE分析和His-tag in-gel Stain鉴定均发现66ku处有特异性蛋白条带.结论:成功克隆并构建了RpfA基因的重组表达质粒pET32 α(+)-RpfA,并获得了高纯度的重组蛋白,为以后的深入研究奠定了基础.
作者：徐蕾；帖儒修；王爽；王瑜伟；李娜；何永林；蒋仁举 刊期： 2008年第05期
目的:本实验观察32例肺癌患者化疗前后外周循环癌细胞数(CTCs)的动态变化,以寻找新化疗的疗效评判标准.方法:分别于化疗前及化疗1周期后、第3周收集32例肺癌患者外周血标本.同时行胸片或胸部CT扫描,并计算肿瘤的大小.运用实时荧光定量逆录-聚合酶链反应(fqRT-PcR)法定量检测外周血中CK19基因的表达.结果:化疗后CTCs水平显著降低(P=0.000 1).化疗前小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)患者外周血CK19 mRNA水平明显高于非小细胞肺癌(Non-smallcell lung cancer,NSCLC)患者(P=0.041).治疗前后CK19 mRNA测值变化与瘤负荷间存在正相关(P=0.000).结论:在治疗过程中,运用fqRT-PCR法对肺癌患者CTCs进行定量监测是可行的.通过动态检测可及时评价化疗反应,有助于在早期阶段即对患者设计更合理、更有针对性的治疗方案.
作者：王梅；葛明建 刊期： 2008年第05期
目的:探讨不同温度体外循环(Cardiopulmonary bypass,CPB)对兔体感皮层诱发电位(Somatosensory cortical evokedpotential,SCEP)和皮层神经元超微结构的影响.方法:成年新西兰白兔30只,雌雄不拘,体重(2.2±0.5)kg,随机分成3组(n=10),常温组(A组,维持CPB温度36℃～37℃)、浅低温组(B组,维持CPB温度32℃～34℃)和深低温组(C组,维持CPB温度26℃～28℃).维持Hct在20%～25%,建立开胸体外循环模型,转流量逐渐增加至160ml/min;转流2h后,经坐骨神经刺激,记录体感皮层诱发电位;经颈动脉灌注固定液,取顶叶皮层组织行电镜检查.结果:C组潜伏期高于B组,B组潜伏期高于A组,A、B、C 3组间两两相比,P<0.01差异有统计学意义;C组体感皮层诱发电位的波幅值低,A、B、C 3组间波幅值两两相比,P<0.01差异有统计学意义;大脑皮层神经元细胞核肿胀,异染色质凝聚增多,核基质电子密度降低,核周间隙扩大,胞质肿胀.损伤程度3组间区别不明显.结论:体外循环温度越低对大脑皮层神经细胞体感皮层诱发电位的潜伏期和波幅抑制越明显;深低温体外循环对皮层神经元超微结构保护作用不显著.
作者：马建军；闵苏；张光新；魏珂 刊期： 2008年第05期
目的:探讨HIF-1α、VEGF在胃癌组织中的表达及相关性.方法:应用免疫组织化学方法检测84例胃癌组织及癌旁正常组织中HIF-1α、VEGF的表达,并分析它们与临床病理因素的关系及相互间的关系.结果:84例胃癌组织中及癌旁内对照正常胃组织HIF-1α阳性表达分别为60.7%,16.7%(P<0.05).有、无淋巴结转移的癌组织中HIF-1α的表达率分别为79.1%、41.5%(P<0.05),侵润深度分别为粘膜或粘膜下、肌层或浆膜下、穿透浆膜层的癌组织中HIF-1α的表达率分别为29.2%、62.2%、91.3%(P<0.05).未或低分化、中或高分化的癌组织中HIF-1α的表达率分别为76%、54.2%(P>0.05).肿瘤大小≤5cm、>5cm的癌组织中HIF-1α的阳性表达率分别为64.7%、58%(P>0.05).男性为63%,女性为57.9%(P>0.05),<60岁为52.3%,≥60岁为70%(P>0.05). VEGF阳性表达为73.8%(62/84).HIF-1α与VEGF的表达显出相关性,P<0.05.结论:HIF-1α与胃癌的侵润、淋巴结转移有关,并与VEGF的表达具有明显相关性,HIF-1α的作用部分通过VEGF的表达实现.因此可以将HIF-1α作为胃癌患者判断生物学行为及预后的指标之一,也为临床提供靶向治疗的方向.
作者：万美珍；周林艳；袁焱；岳灵萍 刊期： 2008年第05期
目的:研究结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性细胞免疫应答及其对结核分枝杆菌(Mycobacteriun tubetculosisMTB)毒株感染的保护力.方法:Balb/c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,皮内免疫8周后处死小鼠,流式细胞分析仪检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的变化;取小鼠脾淋巴细胞体外培养并用PPD刺激,MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数(SI);ELISA法检测培养上清液中IFN-?;免疫后第8周,用MTB毒株H37Rv经小鼠腹腔注射,4周后处死小鼠,测定小鼠肺脏荷菌量,观察免疫小鼠对MTB抵抗作用.结果:H37Ra免疫小鼠脾脏CD3+T细胞、CD4+T细胞的百分率分别为(41.63±1.68)%、(27.08±0.58)%,显著高于NS对照组(38.34±0.74)%、(24.37±1.60)%(P<0.05). H37Ra免疫组脾脏CD3+T细胞、CD4+T细胞及CD8+T细胞的百分率均不同程度地高于BCG免疫组,但差异无统计学意义.脾淋巴细胞SI和IFN-?水平检测均发现H37Ra免疫组显著高于NS对照组(P<0.05),略高于BCG免疫组.感染4周后H37Ra组小鼠肺脏荷菌量与NS对照组比较下降0.954log10CFU,差异有显著性(P<0.05),与BCG组之间差异均无显著性(P>0.05).结论:H37Ba免疫小鼠后可以诱导产生特异性抗结核的细胞免疫应答,能够抵抗毒株H37Rv的攻击,且免疫效果与BCG相近.
作者：王淑玲；刘来成；卢贤瑜；冯文莉 刊期： 2008年第05期
目的:研究RNA干扰活性蛋白酶受体(Pmtease-activated receptors,PARl)表达以及对人类大肠癌细胞侵袭力的影响.方法:体外化学合成PAR1基因序列特异性双链RNA(dsRNA),在脂质体(Lipid)的介导下转染入人大肠癌Lovo细胞株,荧光倒置显微镜下观察转染效率,应用RT-PCR和Western blot检测PAR1mRNA和蛋白表达,体外实验测定肿瘤细胞穿透matrigel的能力.结果:干扰片段转染组的转染Pgenesil-1-PAR1-siRNA后大肠癌Lovo细胞株的PAR1基因和蛋白的表达被PAR1-siRNA有效沉默,与阴性对照组、空白质粒转染组相比PAR1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05).转染48h后测定大肠癌Lovo细胞的侵袭力明显降低(P<0.01).结论:PAR1-siRNA能有效抑制人大肠癌细胞株PAR1基因和蛋白的表达,降低人大肠癌细胞的侵袭力.
作者：陆信仰；王继见；王亚旭 刊期： 2008年第05期
目的:改进大鼠原位小肠移植(small bowel tansplantation,sBT)的三套管血管吻合技巧.方法:动脉吻合采用供体带肠系膜上动脉(superior mesenteric artery ,SMA)的腹主动脉(Abdominal aorta,AA)段两端与受体的腹主动脉套管吻合,静脉吻合采用供体的肝门静脉(Hepatic portal vein,HPV)与受体左肾静脉套管吻合.结果:60例接受小肠移植的大鼠存活率为93.3%(56/60),整个手术用时1.5～2h,其中动脉吻合用时(4±1)min,静脉吻合用时1min,动、静脉吻合共用时(4±2)min.结论:改进三套管血管吻合技巧既加快了吻合速度,缩短了手术时间,又减少了手术并发症,提高了手术成功率.
作者：张国云；钱学华 刊期： 2008年第05期
目的:探讨术前介入化疗对大肠癌Smad4表达的影响.方法:应用免疫组化SP技术对15例经术前介入化疗的进展期大肠癌标本进行Smad4检测,并以18例经全身静脉化疗及21例未经化疗进展期大肠癌作为对照.结果:在3个组中Smad4的表达呈递增趋势(P<0.05),其阳性率为未经化疗的空白对照组19.0%(4/21)、全身静脉化疗组61.1%(11/18)、介入化疗组93.3%(14/15)(P<0.05).结论:术前介入化疗可使进展期大肠癌组织中Smad4表达明显增高,术前介入化疗可作为比全身静脉化疗更为有效的一种治疗进展期大肠癌的辅助化疗手段.
作者：李毅；程勇；张伟 刊期： 2008年第05期
目的:探索缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液(Brain tissue extract of hypoxia-preconditioned mice,BHP)对NGF诱导分化的PC12细胞缺氧耐受性的影响及保护性作用的适合浓度.方法:复制小鼠急性重复缺氧模型,制备BHP,用考马斯亮蓝法定量蛋白.在分化PC12细胞中加入BHP使其蛋白终浓度分别为1.0、10.0、100.0ìg/ml(BHP组).以等蛋白终浓度正常小鼠脑匀浆提取液(Brain tissue extract of normal mice,BN)作为对照组(BN组).同时设置只加PBS的溶剂对照组(PBS组).缺氧(2%O2)培养24、48、72h后,采用回唑盐(MTT)比色法检测各组细胞活力(OD570nm值)和乳酸脱氢酶(LDH)透出率、缺氧72h晚期凋亡率.结果:缺氧24h时,蛋白终浓度为10.0、100.0ìg/ml的BHP组OD570nm值显著高于同浓度BN组和缺氧PBS组,其LDH透出率显著低于同浓度BN组和缺氧PBS组.随缺氧时间延长,其保护作用逐渐减弱.至缺氧72h时,仅蛋白终浓度为100.0ìg/ml的BHP组OD570nm值显著高于同浓度BN组,其LDH透出率、晚期凋亡率均显著低于缺氧PBS组.结论:BHP对分化PC12细胞缺氧耐受性的增强作用有浓度依赖性和时间依赖性,蛋白终浓度为100.0ìg/ml的BHP组保护作用稳定、持久.
作者：李宏；高钰琪 刊期： 2008年第05期
目的:采用经济,简易的方法制备早产儿视网膜病变(Retinopathy of prematurity,ROP)的可量化动物模型.方法:新生鼠仔44只称重随机分为2组,实验组于出生后7d置于75%±1%氧箱内饲养5d然后回到正常空气饲养5d,对照组于正常环境饲养.ADP酶法视网膜铺片了解视网膜血管的改变,组织切片HE染色计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数,免疫组化法观察视网膜各层血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达.结果:持续高浓度氧使鼠仔视网膜血管收缩变窄甚至闭塞,视网膜中央部大片无灌溉区,相对缺氧使视网膜大血管明显扩张、迂曲,大量结构异常的新生血管形成.实验组平均每个切面突破视网膜内界膜的内皮细胞核数为(32.800 0±0.767 8)个,对照组平均为(2.750 0±0.716 4)个,两者比较差异有显著性意义(P<0.01);对照组VEGF染色较实验组减弱.结论:该模型可重复性强、稳定性高、可定量研究.是研究早产儿视网膜病新生血管发生机制及相关治疗的合适模型.
作者：张琴；韦红 刊期： 2008年第05期
目的:探讨产前用地塞米松(Dexamethasone,Dex)对胎鼠肺和肝组织维生素A(Vitarain A,VA)水平的影响.方法:健康清洁级SD大鼠随机分为Dex组和生理盐水(NoHnal saline,Ns)对照组,妊娠第16、17、18d连续3d分别给予药物干预后,第19d剖宫取出胎鼠,测定肺和肝组织VA水平,观察Dex对组织VA水平的影响.结果:(1)胎鼠肺和肝单位组织VA水平Dex组均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),尤以肺单位组织VA水平升高明显(P<0.01).(2)胎鼠肝组织VA总水平两组比较差异无统计学意义(P>0.05),而肺组织VA总水平Dex组仍高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:产前用Dex可以提高胎鼠肺和肝单位组织VA水平,同时提高胎鼠肺组织VA总水平,但对胎鼠肝组织VA总水平无显著影响.
作者：房春晓；陈贻骥；瞿平；刘友红 刊期： 2008年第05期
目的:探讨眶颧骨折继发复视等畸形的有效治疗手段,缩小眶腔的有效方法,重建眶腔的参考标准.方法:术前三维CT眶径测量,术中测量、修复重建后测量对比,按测量值复位扩大的眶腔,使用材料衬垫眶壁,缩小眶容积.结果:术前CT测量值能更准确了解骨折移位及眶腔变化,手术前后测量对比是眶修复重建的重要依据.结论:眼球三维CT眶径测量简便实用,准确性高,术后效果好,对眶颧骨折继发畸形治疗、眶重建、缩小眶腔容积,治疗复视、眼球内陷有指导意义.
作者：邓诚；归来；肖水生；钟大文；何玫；李颖；陈金华 刊期： 2008年第05期
目的:探讨永生化人支气管上皮细胞(HPV-18 immortalized human bronchial epithelial cells,BEP-2D)恶性转化过程中p16基因甲基化改变.方法:选取正常BEP-2D细胞及经过烟草悬凝物处理后的15周(week-15,W-15)、25周(W-25)、38周(W-38)和43周(W-43)的BEP-2D细胞作为研究对象,采用巢式MSP(Nested-methylation-specific PCR,Nested-MSP)检测各细胞株中p16基因的甲基化改变情况.结果:正常BEP-2D细胞p16基因未发生甲基化,而烟草悬凝物处理后的15周、25周、38周和43周的BEP-2D细胞p16基因发生甲基化.结论:p16基因甲基化改变可能发生在肺癌形成的早期,检测p16基因甲基化可以作为肺癌早期辅助诊断的生物标记物之一.
作者：张诚；吴庆琛；李强；朱茂祥；杨陟华；潘秀颉；谢俊豪 刊期： 2008年第05期
目的:探讨兔VX2肺鳞癌模型的建立方法及其生物学特性.方法:自身接种传代保存的VX2肿瘤组织块,移植到健康兔肺内,建立兔肺鳞癌模型.通过肺部X片观察肿瘤生长情况,待其不同时间死亡后进行大体标本肺、心、肝、肾、脑和淋巴结形态学观察.结果:(1)建模成功率为100%.(2)形态学显示肺部肿瘤呈弥漫性分布,大小不等,呈结节样,表面鱼肉样.接种肿瘤6d时除脑组织外,心脏、淋巴结、肝脏和肾脏均见明显的转移瘤,并呈侵润性生长.(3)病理组织学和免疫组化证实为来源于上皮组织的鳞状细胞癌.结论:采用组织块移植法建造兔VX2肿瘤动物模型,不仅具有方法简单、无感染和成瘤率高的特点,而且VX2肿瘤的生物学行为与人类肿瘤相似,恶性程度高,对于大型动物建立肺癌模型具有较高的指导意义.
作者：张会军；王莎莉 刊期： 2008年第05期
目的:研究儿童血铅、血微量元素水平与注意缺陷多动障碍(Attention-deficit/hyperactivity disorder,ADHD)的相关性.方法:分别检测ADHD组和正常对照组儿童的血铅和血微量元素的水平,并对两组血铅、血微量元素水平进行比较.结果:ADHD组儿童血铅水平较正常对照组高,且有显著性差异(P<0.001),但ADHD组儿童血铅水平远低于美国CDC100ìg/L的铅中毒诊断标准.两组儿童血微量元素水平无显著性差异.结论:低水平铅暴露也可能是引起儿童ADHD的原因之一,应重视儿童血铅水平的监测.
作者：谭旭；李廷玉；梅其霞 刊期： 2008年第05期
目的:探讨定量组织速度成像(Quantitative tissue velocity imaging,QTVI)技术在儿童扩张型心肌病(Dilated cardiomy-pathy,DCM)左心收缩功能评价中的应用.方法:DCM患儿15例,分为DCM A组(轻度心衰)和DCM B组(中、重度心衰),健康儿童12例为对照组.同步获取心尖四腔、左室两腔和左室长轴切面的动态三平面组织速度图,分析各组左室基底段和中间段心肌速度曲线.结果:(1)DCM A组、B组左室各节段射血期峰值收缩速度(Peak systolic velocity,Vs)较对照组普遍降低,尤以B组降低更显著(P<0.05),而A组部分节段无显著降低(P>0.05).(2)DCM组共42个节段收缩后收缩(Post-systolic short-ening,PSS)速度高于射血期Vs,其中B组30个(71.43%),A组12个(28.57%).结合应变分析,其中21个节段(50.00%)为等容舒张期主动收缩,11个节段(26.19%)为矛盾运动.结论:利用QTVI技术能准确评价儿童DCM患者左心收缩功能.
作者：熊复；余更生；白永虹；计晓娟；田杰；钱永如 刊期： 2008年第05期
目的:比较测定甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP)的3种不同方法.方法:采用时间分辨荧光免疫分析法(Tim-re-solved fluoroimmuno assay,TRFIA)、放射免疫法(Radio immuno assay,RIA)与酶联免疫吸附法(Enzme linked immunoabsorbentassay,ELISA).分别进行线性、精密度、对比实验比较.结果:3种方法中,TRFIA法线性范围宽;精密度试验中TRFIA法批内为3.3%,批间为4.7%;RIA法批内为5.3%,批间为8.9%;ELISA法批内为10.5%,批间为15.2%.比较试验显示RIA法与TRFIA法的结果相关性比ELISA法与RIA法好.结论:TRFIA法测定AFP优于RIA法和ELISA法.
作者：陈海蔚；伍勇 刊期： 2008年第05期
目的:讨论、分析心理干预对鼻内镜下脑脊液鼻漏修补术患者依从性的影响.方法:对我院耳鼻咽喉科2004年3月～2007年5月新人院的脑脊液鼻漏患者(共32名)进行随机分组;对实验组(共16名)系统地进行心理评估,并进行心理干预,对对照组(共16名)采用传统性心理指导,比较两组患者对医嘱依从性的差异.结果:实验组患者对医嘱依从性明显高于对照组,平均住院日低于对照组.结论:及时了解患者不同时期的心理反应,针对性的进行心理干预,有利于提高患者对医嘱的依从性,促进漏口早日愈合.
作者：张建容 刊期： 2008年第05期
目的:探讨高强度聚焦超声(High intensity focused ultrasound,HIFU)治疗子宫腺肌瘤的有效性和安全性.方法:16例典型子宫腺肌瘤进行高强度聚焦超声治疗,超声实时监控.以彩超或增强MRI比较治疗前后子宫腺肌瘤体积、血供变化,以及随访治疗前后患者月经、痛经程度和血红蛋白变化来判断治疗效果.结果:高强度聚焦超声治疗子宫腺肌瘤后,子宫腺肌瘤血供明显减少甚至消失,体积缩小明显(57.16%),月经周期和月经期缩短,月经量减少50%,所有患者的痛经症状均完全缓解,Hb水平全部恢复正常,无不可接受的并发症.结论:高强度聚焦超声治疗子宫腺肌瘤具有良好的安全性和有效性.
作者：彭松；周崑；张炼；黎克全；杨炜；金成兵；冉立峰；朱辉；陈文直；王智彪 刊期： 2008年第05期
目的:探索离体大鼠海马脑片培养方法,观察培养脑片的形态变化和细胞反应性.方法:选择生后6～9d的Wistar鼠,分离海马,切成400ìm厚的脑片,转移至带有微孔膜插件的6孔培养板内,人37%的CO2培养箱中进行培养.通过肉眼、倒置相差显微镜观察培养海马脑片的形态学变化;用免疫组化染色检测脑片神经细胞内Fos蛋白表达变化,以判断培养脑片有无对外界伤害性刺激的应激反应能力;用膜片钳技术检测神经细胞的电生理活动,以判断培养海马脑片的活性和生理功能.结果:(1)随着体外培养时间延长,培养脑片内神经细胞数目增多,而脑片明显变薄,至培养4周时厚度约150ìm厚.(2)致癫痫样发作药物匹罗卡品作用于脑片后,导致培养海马脑片CA1区细胞内Fos蛋白表达增高.(3)利用膜片钳技术,在培养1、2、3、4周的4个时点对海马脑片CA1区锥体细胞作全细胞记录,皆记录到细胞电流变化图形.结论:本方法在体外培养的海马脑片至少可存活4周,且具备良好的活性和一定的生理功能.
作者：何志慧；蒋莉；陈恒胜；张晓萍 刊期： 2008年第05期
重庆医科大学学报杂志
主管:重庆市教育委员会
主办：重庆医科大学
